Facultad de Farmacia. Universidad de Granada Departamento de Qumica Fsica.

Prctica 1
DETERMINACIN ESPECTROFOTOMTRICA DE UNA MEZCLA DE SUSTANCIAS

Objetivo de la prctica:
Determinar las concentraciones de vitamina B2 y B12 en una mezcla de ambas, utilizando un mtodo espectrofotomtrico.

Fundamentos tericos

La ley ms importante sobre la absorcin de radiacin electromagntica en disoluciones, es la de Beer

A=abc

Siendo:

P0
b

Ps

P0= Potencia de la radiacin incidente Ps= Potencia de la radiacin a la salida b= espesor de la cubeta que contiene a la muestra

- log = - log T = A P0

Ps

=abc

Ps / P0 = Transmitancia A = Absorbancia (adimensional) a = absortividad molar (L . mol-1. cm-1 )

c = concentracin molar (moles/L)

A = - log T = - log ( T.100/100) = - log T% + 2 ;

A = 2 log T%

Determinacin de a:
1.- Registro del espectro de la sustancia ( A frente a la longitud de onda, )

Longitud de onda (nm) 2.- Seleccin de la longitud de onda mxima ( max) en el espectrofotmetro

3.- Preparacin de disoluciones patrn de concentraciones conocidas. 4.- Medida de la Absorbancia (A) de cada disolucin de concentracin conocida a la longitud de onda seleccionada ( max)

Concentracin C1 C2 C2 C3 C4 C5

Absorbancia (A) A1 A2 A3 A4 A5 A6

5.- Representacin de A (absorbancia) frente a C (concentracin). A y2 6.- Trazar la recta que mejor se ajuste a los datos experimentales. Si pasa por el origen se cumple la ley de Beer y1 y la pendiente ser a.b (absortividad . espesor de la cubeta).

x1

x2

Nota: Para determinar la pendiente por el mtodo grfico, se toman dos puntos de la recta (no experimentales): (y2 ,x2) e (y1 , x1) y se plantea la siguiente expresin

Pendiente =

y2 y1 x2 x1

Anlisis de mezclas
Amezcla = Acomponente 1 + Acomponente 2+ Acomponente 3+ ....
1.- Se escogen tantas max como componentes tenga la mezcla.
A

445 nm

550 nm

Longitud de onda (nm) En nuestro caso sern dos: 445 nm (mximo de la vitamina B2) y 550 nm (mximo de la vitamina B12)

2.- Se determinan las absortividades molares de cada vitamina mediante la ley de Beer, a las 2 max seleccionadas:

a a

445 B2 550 B2

;a

445 B12

;a

550 B12

= 0 (No absorbe a esa )

Se establece el sistema de ecuaciones:

550 mezcla

=a

550 B2

b cB 2 + a

550 B12

b cB12 = a

550 B12

b cB12

445 445 445 Amezcla = aB b c + a B2 B12 b c B12 2

Calculamos cB2 y cB12

Mtodo experimental

Esquema de un espectrofotmetro de haz simple.

Lmpara W

Rendijas

Red Detector Muestra

Indicador

Espectrofotmetros:

Spectro 23

SP-2100P+

El manejo de cada uno de ellos se indica a continuacin.

Manejo del SP-2100P+

Encender el espectrofotmetro pulsando el botn rojo.

Seleccionar la longitud de onda mediante las flechas. El modo de medida (transmitancia o absorbancia) con el botn MODE.

Abrir la tapa del portamuestras Colocar las cubetas de la referencia y la muestra en los lugares sealados. Entre R y S1 se encuentra el obturador (en esa posicin intermedia, la transmitancia debe ser 0%)

Muestra Referencia

Cuando la radiacin atraviesa la referencia, debemos ajustar al 100 %T. Para ello, pulsar el botn que indica 100%T.

Tirar suavemente del mando externo

Cuando la radiacin incida sobre el obturador, la transmitancia debe ser del 0 %. De no ser as, la fijaremos pulsando el botn 0%T

Si seguimos tirando del mando externo, la radiacin incide sobre la muestra y podremos leer el valor de transmitancia.

Si deseamos el valor de absorbancia, pulsaremos el botn MODE

Manejo del Spectro 23

Encender el espectrofotmetro

Seleccionar Absorbance pulsando A

T / C F,

Ajustar la longitud de onda mediante el mando adecuado.

Abrir la tapa del receptculo que contiene los portacubetas.

Colocar la referencia en el camino de la radiacin.

Introducimos la muestra en el portacubetas adecuado. Cerrar la tapa.

Pulsar en 0 de A, 100% T (corresponde a la referencia)

Cuando la referencia es atravesada por la radiacin, el valor de Absorbancia debe ser 0.000

Con la tapa cerrada y tirando del mando suavemente, la muestra queda colocada en la trayectoria de la radiacin.

Efectuar la medida de absorbancia

Mtodo experimental

Partiremos de dos disoluciones de las vitaminas B2 y B12:

1) Disolucin madre (DM) de vitamina B2 que contiene 0030 g disueltos en 1 L de agua (peso molecular de la vitamina B2 = 3764 g/mol). 2) Disolucin madre de vitamina B12 que contiene 0150 g disueltos en 1 L de agua (peso molecular de la vitamina B12 = 13554 g/mol).

Material
Clulas de vidrio de 1 cm de espesor

Tubos de ensayo

2 Pipetas graduadas de 10 ml

Disoluciones de Vitamina B2 y B12

1.- Registrar los espectros visibles de cada una de las disoluciones anteriores (vitamina B2 y vitamina B12) y calcular la longitud de onda a la cual presentan el mximo de absorcin.

max B2 = 445 nm max B12 = 550 nm

2 - Preparar 9 disoluciones de vitamina B2, tomando 1,2,3,4,5,6,7,8,9 ml de la disolucin madre de vitamina B2 (0,030 g/L)

completando hasta 10 ml con agua destilada.

Concentracin de la disolucin madre (DM) de vitamina B2 : 0,030 g/L Expresada en molaridad sera: ( 0,030 g/L) / (376,4 g/mol) = 7.97 10-5 M donde 376,4 g/mol es el peso molecular de la vitamina B2 . Concentracin en cada tubo: VDM . CDM = VFinal . CFinal Tubo 1 (1 mL) 1. 7,97 .10-5 = 10 . C1 Tubo 1 (2 mL) 2. 7,97 .10-5 = 10 . C2 Tubo 1 (3 mL) 3. 7,97 .10-5 = 10 . C3 Tubo 1 (4 mL) 4. 7,97 .10-5 = 10 . C4 Tubo 1 (5 mL) 5. 7,97 .10-5 = 10 . C5 Tubo 1 (6 mL) 6. 7,97 .10-5 = 10 . C6 Tubo 1 (7 mL) 7. 7,97 .10-5 = 10 . C7 Tubo 1 (8 mL) 8. 7,97 .10-5 = 10 . C8 Tubo 1 (9 mL) 9. 7,97 .10-5 = 10 . C9 C1 = 7,97 .10-6 M C2 = 1,59 .10-5 M C3 = 2,39 .10-5 M C4 = 3,19 .10-5 M C5 = 3,99 .10-5 M C6 = 4,78 .10-5 M C7 = 5,58 .10-5 M C8 = 6,38 .10-5 M C9 = 7,17 .10-5 M

Es decir, basta multiplicar la concentracin del tubo 1 por: 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 y 9.

4.- Medir la absorbancia de cada uno de estos tubos a la longitud de onda del mximo: 445 nm. La vitamina B2 no absorbe a 550 nm.
Vitamina B2 c (mol/L) 7,97E-06 1,59E-05 2,39E-05 3,19E-05 3,99E-05 4,78E-05 5,58E-05 6,38E-05 7,17E-05 A(=445 nm)

5.- Construir una curva de calibrado para la longitud de onda de 445 nm, representando A (absorbancia) en ordenadas frente a concentracin en moles/L , en abscisas .
1,600 1,400 1,200 1,000 0,800 0,600 0,400 0,200 0,000 0,00E + 00

2,00E -05

4,00E -05 c (m o l/L )

6,00E -05

8,00E -05

6.- Comprobar el cumplimiento de la Ley de Beer y calcular la absortividad molar de la vitamina B2 , por el mtodo grfico y por el mtodo de los mnimos cuadrados, a dicha longitud de onda.

a445B2 = .. L. mol-1.cm-1

7.- Preparar 9 disoluciones de vitamina B12, tomando 1,2,3,4,5,6,7,8,9 ml de la disolucin madre (DM) de vitamina B12 (0,150 g/l)

completando hasta 10 ml con agua destilada.

Concentracin de la disolucin madre (DM) de vitamina B12 : 0,150 g/L Expresada en molaridad sera: ( 0,150 g/L) / (1355,4 g/mol) = 1,107 10-4 M donde 376,4 g/mol es el peso molecular de la vitamina B12 . Concentracin en cada tubo: VDM . CDM = VFinal . CFinal Tubo 1 (1 mL) 1. 1,107 .10-4 = 10 . C1 Tubo 1 (2 mL) 2. 1,107 .10-4 = 10 . C2 Tubo 1 (3 mL) 3. 1,107 .10-4 = 10 . C3 Tubo 1 (4 mL) 4. 1,107 .10-4 = 10 . C4 Tubo 1 (5 mL) 5. 1,107 .10-4 = 10 . C5 Tubo 1 (6 mL) 6. 1,107 .10-4 = 10 . C6 Tubo 1 (7 mL) 7. 1,107 .10-4 = 10 . C7 Tubo 1 (8 mL) 8. 1,107 .10-4 = 10 . C8 Tubo 1 (9 mL) 9. 1,107 .10-4 = 10 . C9 C1 = 1,11 .10-5 M C2 = 2,21 .10-5 M C3 = 3,32 .10-5 M C4 = 4,43 .10-5 M C5 = 5,54 .10-5 M C6 = 6,64 .10-5 M C7 = 7,75 .10-5 M C8 = 8,86 .10-5 M C9 = 9,96 .10-5 M

Es decir, basta multiplicar la concentracin del tubo 1 por: 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 y 9.

8.- Mediremos las absorbancias a 445 y 550 nm de las disoluciones de B12.

Vitamina B12 c (mol/L)

1,11 .10-5 2,21 .10-5 3,32 .10-5 4,43 .10-5 5,54 .10-5 6,64 .10-5 7,75 .10-5 8,86 .10-5 9,96 .10-5

A(=445 nm)

A( = 550 nm)

9.- Construir las curvas de calibrado para la longitudes de onda de 445 y 550 nm, representando A (absorbancia) en ordenadas frente a concentracin en moles/L , en abscisas .

Vitamina B12

10.- Comprobar el cumplimiento de la Ley de Beer y calcular la absortividad molar de la vitamina B12 , por el mtodo grfico y por el mtodo de los mnimos cuadrados, a las dos longitudes de onda (445 y 550 nm).

a445B12 = .. L. mol-1.cm-1 a445B12 = .. L. mol-1.cm-1

Valoracin simultnea de una mezcla de vitaminas B2 y B12

Mezclar x ml de vitamina B2 con y ml de vitamina B12 . Medir la absorbancia de la mezcla a las longitudes de onda de 445 nm y 550 nm. Plantear el sistema de dos ecuaciones con dos incgnitas, indicado en los fundamentos tericos. Calcular las concentraciones de ambas vitaminas en la mezcla problema.