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Nota: Los contenidos del siguiente RESUMEN tienen como funcin servir como GUA para los alumnos.

Los temas deben ser completados con lo dicho en clase y con la Bibliografa recomendada por la ctedra.

Enzimas
Michaelianas
Protenas con estructura globular terciaria. Poseen un sitio activo que es donde se introduce el sustrato y donde es catalizada la reaccin. Las enzimas son especficas para los sustratos. ste se une al sitio activo REVERSIBLMENTE a travs de interacciones de tipo intermolecular (dbiles). Caractersticas del Grfico Velocidad en funcin de la concentracin de Sustrato: stos grficos representan una situacin en la cual hay una cantidad determinada de enzima y se va aumentando la concentracin de sustrato. Para cada concentracin de sustrato, se mide la Velocidad de reaccin. Fjense que en ste grfico, la velocidad de reaccin va aumentando proporcionalmente a medida que aumenta la concentracin de sustrato, y llega un momento en el que la pendiente empieza a disminuir hasta hasta el punto en que la velocidad se hace constante. se es el punto de saturacin. Por ms que se aumente la concentracin de sustrato, las enzimas no pueden actuar ms rpido que su velocidad mxima (todos los sitios activos estn ocupados). En stos grficos, se define tambin la Km, que es la concentracin de sustrato que corresponde a la mitad de la velocidad mxima, y es una medida de la afinidad de la enzima por el sustrato. A mayor afinidad, menor Km (porque hace falta una MENOR concentracin de sustrato para alcanzar la mitad del punto de saturacin de la enzima). Inhibidores Hay dos tipos de inhibidores para las enzimas: Irreversibles: Se unen de forma covalente a la enzima e inhiben la actividad enzimtica PERMANENTEMENTE. Reversibles: Se unen con uniones dbiles, que se pueden romper (por eso es que son reversibles: el inhibidor se une, y luego puede separarse). Hay 2 tipos: Competitivos: Se unen en el SITIO ACTIVO impidiendo la unin del sustrato. En el grfico se observa que aumenta la Km (o sea, es como si disminuyera la afinidad de la enzima por el sustrato) dado que parte de los sitios activos estn ocupados por el inhibidor. Pero an as, la velocidad mxima se mantiene constante (porque si aumento mucho la concentracin del sustrato, llega un punto en el que la cantidad de inhibidor es muy pequea con respecto a la cantidad de sustrato, y el efecto se revierte).

No Competitivos: En ste caso, el inhibidor se une a un sitio diferente del sitio activo, impidiendo que la enzima acte (ya sea porque cambia la conformacin de la misma o porque altera de alguna manera su capacidad cataltica). La afinidad de la enzima por el sustrato no cambia (Km constante) ya que ste puede seguirse uniendo a la enzima. Lo que s cambia es la velocidad mxima (porque en todo momento, es como si hubiera una menor concentracin de enzimas actuando, ya que algunas de ellas estn unidas al inhibidor). sta inhibicin NO SE REVIERTE por agregado de sustrato:

Alostricas
Protenas con estructura globular cuaternaria. Poseen ms de una subunidad globular, cada una con un sitio activo (vale lo mismo que para el sitio activo de las enzimas michaelianas) y un sitio alostrico (donde se introducen distintos moduladores alostricos cuya funcin es la de modificar la actividad de la enzima segn las necesidades de la clula). Caractersticas del Grfico Velocidad en funcin de la concentracin de Sustrato: En el caso de las enzimas alostricas, no se define Km. Si se define la velocidad mxima, que es el punto de saturacin de la enzima, donde la velocidad se mantiene constante (todos los sitios activos ocupados y la enzima est trabajando a su mxima velocidad). Otra caracterstica de las enzimas alostricas es el efecto cooperativo: stas enzimas poseen ms de un sitio activo, y a medida que se van ocupando los sitios, la protena cambia su conformacin haciendo que los otros sitios activos queden ms expuestos y sea ms fcil para el siguiente sustrato unirse. (A medida que se van uniendo los sustratos a los sitios activos, aumenta la afinidad de la enzima por el siguiente sustrato). Esto se puede observar en la curva de velocidad en funcin de la concentracin de sustrato, que tiene forma sigmoidea (forma de S): A bajas concentraciones de sustrato la enzima no acta tan bien como lo hace a altas concentraciones (comprenlo con el grfico se michaelianas, si los superponen se van a dar cuenta que a bajas [S] la enzima alostrica acta a menor velocidad que la michaeliana). Moduladores: LOS INHIBIDORES LOS VEMOS SOLO PARA ENZIMAS MICHAELIANAS. PARA ENZIMAS ALOSTRICAS LO QUE VEMOS ES EL EFECTO DE MODULADORES ALOSTRICOS. La diferencia es que un modulador alostrico es una sustancia que se encuentra normalmente en la clula y es una de las estrategias utilizadas normalmente para regular la actividad de las enzimas. En cambio un inhibidos es una sustancia exgena (que viene de afuera de la clula) y que inhibe el funcionamiento de las enzimas. Las actividad de las enzimas Alostricas puede ser REGULADA por la clula. Esto se logra por la unin de moduladores alostricos positivos (aumentan la actividad) o negativos (disminuyen la actividad) que se unen en los sitios alostricos de la enzima.

El grfico cambiara de la siguiente manera:


Fjense que la velocidad mxima no vara. Lo que vara es la afinidad de la enzima por el sustrato. El modulador negativo (azul) disminuye la afinidad de la enzima por el sustrato de manera que hace falta ms cantidad de sustrato para alcanzar la misma velocidad que se alcanzaba sin modulador (negro). Lo contrario ocurre con el modulador positivo (rojo). A bajas concentraciones de sustrato se alcanza mayor velocidad que sin el modulador. [Los moduladores no alteran la forma de la curva y el efecto cooperativo se mantiene].

Las enzimas alostricas suelen encontrarse al principio de vas metablicas (que son reacciones enzimticas encadenadas en las cuales el producto de una reaccin es el sustrato de la siguiente reaccin: Hay dos mecanismos de regulacin de la actividad: Feed-Back (o inhibicin por producto final): Lo que ocurre es que cuando se acumula uno de los ltimos productos de la va metablica (D), ste acta como un modulador negativo sobre la enzima alostrica 1 (E1), disminuyendo su velocidad. De sta forma, cuando se acumula Den la clula, ste acta disminuyendo la velocidad de su propia sntesis.

Activacin por Precursor: En ste caso, el primer sustrato acta como modulador positivo de la enzima 1 (E1). Entonces, cuando se acumula dicho sustrato en la clula, se une al sitio alostrico de E1 aumentando su actividad (aumenta la velocidad en que A se consume para formar B en la reaccin catalizada por la enzima 1). Efectos del pH, y de la temperatura Los efectos del pH y de la temperatura sobre la actividad enzimtica son vlidos para ambos tipos de enzimas. (Los grficos de Velocidad en funcin de la temperatura o del pH estn en la gua de Actividades). Temperatura: Se observa que la actividad aumenta a medida que aumenta la temperatura, porque la velocidad de la mayora de las reacciones qumicas aumenta con la temperatura (porque aumenta el movimiento trmico de las molculas y la probabilidad de choque entre ellas para que se produzca la reaccin). En el caso de las reacciones enzimticas, esto ocurre hasta que se llega a los 37 grados (esto es aproximado para las enzimas que actan a nivel fisiolgico en animales de sangre caliente). sta es la temperatura ptima de la enzima (la temperatura a la que acta de manera ptima). A temperaturas mayores, la enzima, como cualquier protena, comienza a sufrir los efectos de la temperatura: se rompen las uniones dbiles que mantienen las estructuras cuaternaria, terciaria y secundaria (desnaturalizacin), perdindose por ende la actividad biolgica de la protena (en ste caso la actividad biolgica es la capacidad de catalizar reacciones qumicas especficas). pH: Dada las caractersticas de las protenas y de los aminocidos, el pH puede o no afectar a la estructura de las mismas. Las variaciones de pH pueden alterar las cargas positivas o negativas de los aminocidos, alterando las interacciones entre ellos que son responsables de la ESTRUCTURA GLOBULAR (terciaria o cuaternaria) que adopta la protena. Si la estructura globular se altera (desnaturalizacin) se pierde la actividad biolgica de la enzima. Estrategias para regular la actividad enzimtica en las clulas:

Moduladores alostricos: Mecanismos de Feed-Back y Activacin por Precursor mencionados arriba. Se usan
como estrategia para mantener la homeostasis en la clula, y poder derivar los sustratos a distintas vas metablicas segn sean necesarios. Recuerden el ejemplo que les d en clase: teniendo en cuenta las vas esquematizadas arriba, si A es la glucosa y D es el ATP, la va metablica esquematizada sera la respiracin celular. Cuando en la clula se acumula glucosa, esta activa la va de la respiracin porque es un modulador alostrico positivo de la E1 (entonces todas las reacciones de la va se aceleran, porque la actividad de la primera enzima es mayor). Pero cuando se acumula mucho ATP, este inhibe a la E1, de manera tal que la va de la respiracin se frene. Entonces la glucosa puede ser utilizada para otra cosa, por ejemplo, para sintetizar polisacridos de reserva (Glucgeno o Almidn) a travs de otra va metablica.

Modificaciones covalentes: Por medio de la unin COVALENTE de ciertos grupos (por ejemplo el grupo fosfato)
se puede activar o desactivar una enzima. Entonces, cuando la clula necesita que una enzima determinada acte la puede activar (ya sea adicionndole o quitndole el grupo fosfato, segn la enzima) y viceversa. Vale aclarar que, dichas modificaciones, dado que conllevan la formacin o ruptura de enlaces covalentes, SON REACCIONES QUMICAS QUE ESTN CATALIZADAS POR OTRAS ENZIMAS.

Protelisis: Muchas veces, las enzimas son sintetizadas en una clula pero tienen que cumplir su funcin en otro
lugar (ejemplo: enzimas pancreticas son sintetizadas por clulas del pncreas pero actan en el intestino). Entonces, se sintetizan en una forma inactiva ZIMGENO. En los zimgenos, a la estructura primaria de la protena le sobra una porcin. Cuando el zimgeno llega al lugar donde debe actuar, hay enzimas que cortan sa porcin sobrante de la cadena polipeptdica y de sta manera lo activan.

Regulacin de la expresin: El mecanismo a largo plazo para regular la actividad enzimtica es la induccin o
represin de su sntesis. Esto se logra a nivel gentico: Las protenas son sintetizadas gracias a que el ADN copia a ARN una porcin de la informacin que lleva almacenada. Luego, el ARN lleva dicha informacin desde el ncleo hasta el citoplasma, y sa informacin se traduce y se sintetiza la protena.

La induccin o la represin acelera o inhibe el proceso EN EL ADN, induciendo o reprimiendo el copiado de la informacin. En definitiva, lo que se est regulando es la cantidad de enzimas presentes en la clula (En los mecanismos anteriormente mencionados, se regulaba la actividad de las enzimas que ya estaban presentes en la clula).