CYTOSQUELETTE: TRANSPORT VIRAL et ALTERATIONS VIRO-lNDUITES

d'aprs le cours de Pierre-Emmanuel CECCALDI, Unit de la Rage, Institut Pasteur.

INTRODUCTION
Le cytosquelette est un rseau complexe de filaments protiques s'tendant dans tout le cytoplasme, et organisant celui-ci, permettant aux cellules eucaryotes de s'adapter une grande varit de changements morphologiques, d'effectuer des mouvements coordonns. Le cytosquelette est constitu de trois types de filaments protiques: les microfilaments d'actine (7 9 nm de diamtre), les microtubules (25 nm de diamtre) et les filaments intermdiaires (10 nm de diamtre). Aprs quelques rappels sur ces structures, nous verrons dans ce cours le rle des diffrents lments du cytosquelette dans le cycle viral, plus spcialement dans les phnomnes de transport viral, avant d'envisager diffrents exemples d'altration du cytosquelette observs lors de l'infection d'une cellule par un virus.

I- LES MICROFILAMENTS D'ACTINE

L'actine est la protine intracellulaire prpondrante dans la cellule eucaryote, et reprsente, selon les types cellulaires, de 1 10% de la quantit totale des protines cellulaires, pour une concentration dans le cytosol de l'ordre du millimolaire. Cette protine de taille moyenne (375 acides amins) se prsente dans la cellule soit sous forme de monomre globulaire (actine G) soit sous forme de polymre (actine F). Le microfilament d'actine F, d'un diamtre de 7 9 nm, est une structure polaire, avec une extrmit croissance rapide (appele "+") et une extrmit croissance lente ("-"). La polymrisation de l'actine G en micro filaments d'actine F est amorce par l'ajout d'ions Mg2+, K + ou Na+, selon un processus rversible, l'actine F se dpolymrisant quand on abaisse la force ionique de la solution. Dans la cellule, il existe un quilibre dynamique entre la forme monomrique (G) d'actine et la forme filamenteuse (F), le passage de l'actine G l'actine F tant rgul par des protines associes l'actine, en rponse diffrents stimuli.

Le rseau d'actine est localis d'une part juste sous la membrane plasmique, o il constitue un maillage bi-dimensionnel associ la membrane, et au sein de la cellule, o il constitue un rseau tridimensionnel confrant un aspect glatineux au cytosol. De nombreuses protines interagissant avec l'actine ont t identifies: elles sont impliques dans des fonctions aussi diverses que la consolidation des filaments (ex: tropomyosine), la formation de faisceaux de filaments ou "bundles" (ex: fimbrine), la fragmentation des filaments (ex: gelsoline), lemouvement des vsicules sur les filaments (ex: myosine II) ou encore l'ancrage des filaments la membrane plasmique (ex: spectrine). Tous ces jeux de protines liant l'actine peuvent agir de faon cooprative pour engendrer les mouvements de la surface cellulaire, la phagocytose et la locomotion cellulaire.

II- LES MICROTUBULES

Les microtubules sont des tubes creux, de 24 nm de diamtre, constitus de 13 protofilaments de tubuline, chaque molcule de tubuline tant un htrodimre d' et de -tubuline.

Dans les cellules animales, les microtubules se dpolymrisent et se repolymrisent continuellement, constituant un rseau dynamique (nergie fournie par le GTP) polaris qui irradie du centrosome vers la priphrie. Comme dans le cas de l'actine, des protines peuvent, selon les types cellulaires, exercer une stabilisation des microtubules. Ces protines, appeles MAP ("Microtubule Associated Protein"), sont capables de stabiliser les microtubules en des localisations prcises du cytoplasme; ainsi, dans les neurones, la protine

MAP2 est prsente dans les dendrites et le corps cellulaire, mais absente de l'axone, o sont trouves certaines formes de protine Tau, suggrant un rle des MAPs dans la compartimentation cytoplasmique et l'orientation slective des microtubules. Le rseau microtubulaire intervient particulirement dans la mobilit intra- et extra-cellulaire, dans la morphologie et la division cellulaire par deux mcanismes distincts: d'une part l'assemblage et le dsassemblage des microtubules permettent la migration d'un "cargo" li l'une des extrmits; d'autre part, les microtubules peuvent constituer de vritables rails, sur lesquels des moteurs molculaires, ayant li un cargo, peuvent se dplacer.

Ainsi des molcules de la famille des kinsines permettent le transport du ple ngatif au ple positif du microtubule (transport antrograde, c'est--dire du centre de la cellule vers la priphrie), tandis que la dynine permet un transport du ple positif vers le ple ngatif (transport rtrograde, c'est--dire de la priphrie vers le centre cellulaire).

III- LES FILAMENTS INTERMEDIAIRES

Ce sont des fibres de 10 nm de diamtre, rparties dans la cellule selon une distribution similaire celle des microtubules, c'est--dire concentrs autour du noyau et irradiant vers la priphrie de la cellule.

Les filaments intermdiaires sont regroups selon 5 classes de protines: kratines de type acide, kratines de type basique, vimentine et apparents (ex : desmine, glial fibrillary acidic protein..), neurofilaments et lamines (dans le noyau). A l'inverse des microfilaments d'actine et des microtubules, les filaments intermdiaires ne prsentent pas de polarit, et donc n'interviennent pas dans le transport directionnel. Ils interviennent surtout dans le maintien de la morphologie cellulaire, dans la rsistance aux stress mcaniques et dans le maintien d'une cohsion entre les cellules (ex: pithlium) via l'ancrage aux desmosomes et

plaques d'adhrence.

IV- ROLE DU CYTOSQUELETTE DANS LE TRANSPORT VIRAL De la priphrie vers le centre de la cellule : transport rtrograde
Les virus pntrent dans la cellule par fusion de leur enveloppe virale avec la membrane plasmique ou, dans le cas d'endocytose rcepteur-dpendante, par libration de la capside virale partir de l'endosome. Pour beaucoup de virus, les tapes prcoces de transport impliquent le rseau d'actine (ex: vaccine, VIH). Mais le transport vers le centre cellulaire (et pour nombre de virus, vers le noyau) implique l'utilisation du rseau microtubulaire. De nombreux virus utilisent dans ce cadre un transport rtrograde le long des microtubules, impliquant la dynine cytoplasmique. Ceci a pu tre dmontr initialement pour le virus herpes simplex 1 (HSV -1), notamment par des expriences de dpolymrisation de microtubules, de co-localisation en immunocytochimie ou de vido-microscopie. Sur un modle d'axone gant de calmar, Bearer et al. ont pu valuer la vitesse d'un tel transport, 2.2 mm/sec., ce qui est compatible avec le transport rtrograde mdi par la dynine. Diffrentes approches ont montr l'implication des protines du tgument du virus dans l'interaction avec la dynine. Ces donnes ont t confortes par la dcouverte, pour d'autres virus, de protines virales capables d'interagir avec une sous-unit de la dynine, comme par exemple l'interaction de la phosphoprotine du virus rabique avec la sous-unit LC8 de la dynine (Jacob et al., 2000). La sous-unit LC8 de la dynine est galement implique dans le transport du virus ASFV (African Swine Fever Virus) (Alonso et al., 2001).

Du centre de la cellule vers la priphrie : transport antrograde

Ce type de transport est requis pour la libration des virions no-forms. Il n'est pas indispensable dans le cas de virus librs par lyse cellulaire. En revanche, dans le cas de bourgeonnement viral la membrane plasmique, le rseau microtubulaire sera utilis, par l'intermdiaire de moteurs du transport antrograde de la famille des kinsines. Ainsi, il a t dmontr que le virus HSV -1 utilisait le rseau microtubulaire dans les stades tardifs de l'infection pour sa libration la priphrie du neurone (Miranda-Saskena, 2000). De mme, le rtrovirus MuL V (Murine Leukemia Virus), est capable, par l'intermdiaire de la protine structurale de capside Gag, de se lier un moteur de type kinsine (KIF4) pour tre achemin du centrosome vers la priphrie (Kim et al., 1998). Ce rle de la protine Gag a galement t dmontr pour les virus HIV et SIV, pour un transport le long des microtubules, avant de faire intervenir le rseau d'actine au voisinage de la membrane plasmique pour permettre le bourgeonnement. Dans un tel contexte, le transport dpendant des microtubules concernerait plutt le transport sur de longues distances dans la cellule, tandis que le rseau d'actine interviendrait dans les transports sur de courtes distances, notamment en ce qui concerne les phases de bourgeonnement viral. Un cas singulier est cependant fourni par le virus de la vaccine, qui est capable d'tre propuls par de vritables "comtes" d'actine, en utilisant la polymrisation de cette dernire (Wolffe et al., 1997), l'instar de ce qui a t observ pour des bactries intra-cellulaires telle Listeria ou Shigella, mais pourrait galement utiliser le rseau microtubulaire pour tre transport vers la priphrie (Hollinshead et al., 2001). Pour rsumer :

Reprsentation schmatique des diffrentes tapes du transport viral intra-cellulaire

V- ALTERATIONS VIRO-INDUlTES DU CYTOSQUELETTE

Outre les effets du cytosquelette dans le cycle viral, notamment dans le transport viral, l'infection d'une cellule par un virus peut se traduire par une altration du cytosquelette. Quelques exemples de telles altrations sont:

Altrations du cytosquelette d'actine

Des cellules de neuroblastome d'origine murine infectes par le virus rabique montrent une baisse de marquage de l'actine F (marquage la phallodine couple la rhodamine). Ces modifications ne sont pas dues une action directe sur la polymrisation de l'actine G en actine F (spectroscopie de fluorescence) mais une action de la nuclocapside rabique sur le compactage des fibres d'actines en faisceaux (bundles) par des molcules neuronales telle la synapsine 1 (vido-microscopie) (Ceccaldi et al., 1997). Un autre exemple d'altration du rseau d'actine concerne une action directe de l'infection sur la polymrisation de l'actine: l'infection par le cytomgalovirus est capable de dsorganiser le cytosquelette d'actine par dpolymrisation des microfilaments d'actine (Jones, 1986). Altrations du rseau microtubulaire. Les microtubules sont une cible pour de nombreux virus; un des exemples les mieux tudis est l'infection par le virus de la vaccine. Ce dernier est capable d'altrer les fonctions du centrosome, provoquant une rorganisation du rseau microtubulaire (Ploubidou et al., 2000).

Image en microscopie fluorescence (Ploubidou & Way,2001) a- Microtubule de cellules non infectes b- Actine de cellules non infectes c- Microtubule de cellules infectes par le virus de la Vaccine d- Actine de cellules infectes par le virus de la vaccine

Altrations des filaments intermdiaires

L'infection de cellules en culture par le virus simien SV 40 provoque, au bout de 36 48 heures, une baisse dramatique de la synthse de vimentine, en parallle avec une dsorganisation du rseau des filaments intermdiaires (Ben-Ze'ev, 1984), sans altration du rseau de microtubules et d'actine.

BIBLIOGRAPHIE:
Revues rcentes sur les interactions virus-cytosquelette : Ploubidou & Way, Viral transport and the cytoskeleton ; CurT. Opin. Cell Biol., 2001 ; 13 ; 97-105 Lecellier et al., Le cytosquelette et les virus, ou comment se dplacer dans une cellule ; Virologie (janvier 2002). Transport viral: Alonso et al., J. Virol., 2001, 75, 9819-9827 Bearer et al., Proc. Nat! Acad. Sci. USA, 2000, 97, 8146-8150 Hollinshead et al., J. Cell Biol., 2001, 154, 389-402 Jacob et al., J. Virol., 2000, 74, 10217-10222 Kim et al., J. Virol., 1998, 72, 6898-6901 Miranda-Saksena et al., J. Virol., 2000, 74, 1827-1839 Wolffe et al., J. Virol., 1997,71,3904-3915 Altrations viro-induites du cytosquelette: Ben-Ze'ev, Mol. Cell. Biol., 1984, 4 Ceccaldi et al., J. Gen. Virol., 1997,78,2831-2835 Jones et al., Eur. J. Cell Biol., 1986,41,304-312 Ploubidou et al., EMBO J., 2000, 19, 3932-3944