Organizao do genoma humano O genoma humano constitudo por aproximadamente 3 bilhes de pares de nucleotdeos, distribudos em 24 cromossomos, 22 autossomos e nos

s cromossomos sexuais X e Y. Destes 3 bilhes apenas 3% representado por a genes e 97% por sequencias no-codificantes no so transcritas para molculas de RNA (AMABIS & MARTHOS). Essas sequencias no-codificadoras aparentemente no tem funo direta e podem apresentar alguns trechos correspondentes a genes que ao longo da evoluo deixaram de ter funo. A ideia de mapear o genoma levantou desde o princpio uma srie de controvrsias. Para muitos pesquisadores tratava-se na poca de um projeto irrealizvel. Para outros no havia sentido em mapear o genoma, pois as informaes obtidas seriam desencontradas e no valeriam o esforo. Por outro lado, alguns pesquisadores viram naquela oportunidade a chance de transformar a biologia (e mais especificamente a gentica) em Big Science, com direito a financiamentos gigantescos e divulgao ampla. O projeto foi lanado nos EUA quatro anos depois, patrocinado pelo NIH (National Institutue of Health) e pelo DOE (Department of Energy). A proposta era mapear todo o patrimnio gentico do homem. Em seguida laboratrios da Europa, do Japo e da Austrlia uniram-se ao projeto. Surgiu ento um organismo de coordenao internacional chamado HUGO (Human Genome Organization), para sintonizar o trabalho e organizar o conhecimento adquirido em um banco de dados centralizado, o Genome Database. Seu presidente do HUGO, H. Van Ommen, afirmou em 1998 que a misso do HUGO era facilitar e coordenar a iniciativa global de mapear, sequenciar e analisar funcionalmente o genoma humano e promover a aplicao destes conhecimentos ao melhoramento da sade humana. Na fase final de sua primeira misso o HUGO assume seu prximo papel para a disseminao das anlises funcionais do genoma e o fornecimento de diretrizes responsveis para as aplicaes e implicaes do genoma. Anexados ao PGH existem vrios outros projetos genomas de organismos experimentais, como da mosca das frutas (Drosophila melanogaster) - j terminado, do camundongo (Mus musculus) e de um nematide de vida livre (Caenorhabditis elegans), entre vrios outros. Estes projetos servem de auxlio para o mapeamento de genes humanos. Alm disso uma srie de instrumentos e tcnicas, como PCR (Reao em Cadeia da Polimerase), YAC (Cromossomos Artificiais de Levedura), ABI (Seqenciadores automticos) CA repeats (repeties de dinucleotdeos utilizadas como marcadores de localizao gnica), etc foram desenvolvidos a partir de necessidades do PGH e hoje so disponveis para laboratrios de pesquisa e diagnstico no envolvidos diretamente no mapeamento de genes. Os objetivos do PGH em sade envolvem a melhoria e simplificao dos mtodos de diagnstico de doenas genticas, otimizao das teraputicas para essas doenas e preveno de doenas multifatoriais. Para Pena (1992) a problemtica ELSI vai convergir na interao de trs elementos: os pesquisadores que geram o novo conhecimento, a comunidade empresarial que transforma este conhecimento em produtos e a populao que vai absorver e incorporar os novos conhecimentos em sua viso de mundo e suas prticas sociais, alm de consumir os novos produtos. Nesse sentido Clotet

(1995) alerta para a responsabilidade cientfica, uma vez que os: cientistas devem imaginar as consequncias morais da aplicao comercial de testes genticos.

Mitose A mitose ou diviso indireta ocorre nas clulas somticas da maior dos organismos, sendo tambm designada por diviso celular somtica. atravs desse processo que se verifica o crescimento dos pluricelulares. Ela consiste na diviso de urna clula em duas, ocorrendo uma diviso longitudinal dos cromossomos, que se distribuem equitativamente s clulas filhas, permanecendo, assim, constante o nmero de cromossomos por clula. As divises do ncleo e citoplasma, na mitose, so denominadas cariocinese e citocinese, respectivamente. A clula em mitose apresenta uma figura mittica constituda das partes cromtica e acromtica. A primeira compreende os cromossomos e nuclolos, e a segunda o centro celular e fuso fibrilar. A mitose pode ser subdividida em cinco fases: primeira fase prometfase, metfase, anfase e telfase. Interfase O perodo que separa duas divises consecutivas denominado terfase. Nesse perodo os cromossomos so pouco perceptveis, sendo, porm, observveis suas regies heterocromticas. Aps a duplicao do ADN, que ocorre na interfase, cada cromossomo mittico constitudo de dois filamentos denominados cromonemas, unidos pelo centrmero. O nuclolo ou nuclolos so ainda facilmente visveis Prfase Ao iniciar-se a prfase os cromossomos, que j so duplos, apresentamse como filamentos delgados, espiralados longitudinalmente, e bem perceptveis. Durante a prfase, os crornossomos sofrem encurralamento e espessamento. Eles distribuem-se por todo o ncleo, mantendo certo afastamento entre si. Observa-se que o nuclolo ou nuclolos vo se tornando cada vez menos perceptveis. O centrolo divide-se deslocando-se os dois resultantes para plos opostos. Surge ao redor de cada centrolo o ster, e entre os centrolos organiza-se um conjunto de filamentos de origem citoplasmtica, que constitui o fuso central. Nos vegetais geralmente falta o centro celular, sendo a mitose anastral, enquanto que nos animais e plantas com centro celular a mitose astral ou anfiastral. Os cromossomos iniciam um movimento para a periferia do ncleo, iniciando-se a prometfase. Prometfase Caracteriza-se pela desintegrao da membrana nuclear, com exceo de certos protozorios e algumas formas mais elevadas, onde a mitose intranuclear. Na prometfase o nuclolo desaparece, os cromossomos espiralizam-se e separam-se longitudinalmente. Apesar da replicao do ADN j ter ocorrido na interfase, os filamentos somente se afastam na prometfase. Cada cromossomo fica constitudo por duas cromtides presas entre si na regio do centrmero. Nessa fase de diviso os cromossomos convergem para a regio equatorial da clula.

Metfase A metfase compreende o perodo entre o final do movimento de convergncia dos cromossomos para o equador da clula e o incio do movimento de divergncia dos mesmos para os plos. O fuso constitudo de microtbulos, denominando-se fibras cromossmicas ou fibras do manto as que vo do centro celular ao cromossomo e fibras continuas as que vo de um plo a outro, sem estarem ligadas aos centrmeros. Os cromossomos dispem-se nas fibras pela regio do centrmero formando a placa equatorial equidistante dos dois plos. Nas clulas animais os cromossomos distribuem-se em forma radial na periferia do fuso, enquanto que nas clulas vegetais se dispem irregularmente ocupando todo o plano equatorial. Observou-se que em ambos os casos podem aparecer situaes intermedirias. Geralmente, quando existem cromossomos pequenos, estes se localizam preferencialmente no interior e os maiores ficam , geralmente, na periferia. Anfase Os centrmeros dividem-se simultaneamente em todos os cromossomos e os resultados repelem-se, iniciando-se a separao das cromtides pelas suas partes proximais, em relao ao centrmero. O deslocamento das cromtides autnomo e depende do afastamento entre as constries primrias. Como resultado desse movimento, as cromtides ascendem em direo aos plos at mais ou menos 2/3 desse percurso. Quando o movimento autnomo das cromtides se interrompe, o fuso comea a se modificar. Sua regio central entre os centrmeros, segundo alguns autores, se distenderia impelindo as cromtides para os plos, completando assim a separao entre as mesmas que recebem, ento, o nome de cromossomos. Essa parte mediana do fuso que se distenderia, conhecida como corpo impulsor. A separao das cromtides por distenso do fuso no , admitida por vrios autores. Os termos cromonema, cromtide e cromossomo utilizados para designar fases diferentes da duplicao. Quando ocorre duplicao do material cromossmico os filamentos filhos continuam aparentando um nico filamento. Nessa fase esses filamentos filhos so conhecidos como cromonemas. Quando os cromonemas se separam longitudinalmente, mas ainda continuam presos por um nico centrmero, eles so denominados cromtides quando, finalmente o centrmero se divide longitudinalmente e as duas cromtides se separam ficando independentes, elas passam a ser designadas como cromossomos. Telfase Quando os dois grupos de cromossomos filhos alcanam os plos, desaparece o fuso fibrilar. medida que desaparecem as calotas do fuso, forma-se nova membrana nuclear ao redor de cada lote cromossmico Os cromossomos descondensam-se, desespiralizam-se e em consequncia, distendem-se aumentando o comprimento. Ao fim da telfase os cromossomos hidratam-se novamente e tornam-se pouco perceptveis. Os nuclolos reaparecem em regies heterocromticas especficas dos assim chamados cromossomos nucleolares. Essas regies organizadoras dos nuclolos

localizam-se em constries secundrias, frequentemente nos cromossomos que possuem satlites. Ocorre diviso do citoplasma e distribuio dos seus componentes como condrioma e complexo de Golgi para as clulas filhas. A diviso do citoplasma processa-se diferentemente em clulas animais e vegetais. Nas primeiras, o citoplasma estrangula-se na regio equatorial, separando-se finalmente as duas clulas filhas. Nas clulas vegetais as fibras do fuso desfazem-se progressivamente do centro para as margens, permanecendo uma placa celular onde se forma a membrana celular. No fim da mitose, o centro celular de cada clula torna-se menor ficando o ster progressivamente imperceptvel. O tempo necessrio para que se processe uma mitose muito varivel, dependendo do organismo. A prfase a etapa mais demorada, a prometfase, metfase e anfase so etapas curtas e a telfase uma etapa demorada, mas em geral no maior que a prfase. Os cromossomos ocorrem soa pares nas clulas somticas. Na espcie humana nas clulas somticas se espera encontrar 23 pares de cromossomos. A verificao do nmero e da forma dos cromossomos de um indivduo feita pela montagem do seu caritipo, a partir de imagens obtidas de clulas em mitose, na metfase. neste momento que os cromossomos atingem seu mximo grau de condensao. Existem indivduos que apresentam nmero anormal de cromossomos em seu caritipo. A causa das alteraes no nmero de cromossomos de um indivduo est no processo de meiose, na formao dos gametas. Podem ocorrer pequenas falhas no momento da separao das cromtides-irms. Diz-se que ocorre uma no-disjuno dos cromossomos gerando as anomalias cromossmicas. As anomalias cromossmicas tanto podem ser numricas quanto estruturais, podendo envolver um ou mais autossomos, cromossomos sexuais, ou ambos, simultaneamente. O tipo mais comum de anomalias clinicamente significante a aneuploidia, um nmero anormal de cromossomo devido a um cromossomo extra ou falta de um deles que est associada a uma m formao fsica, mentais ou ambas. As consequncias fenotpicas de uma anomalia cromossmica dependem da sua natureza especfica, do desequilbrio resultante das partes envolvidas no genoma dos genes especficos contidos ou afetados pela anomalia e da sua probabilidade de sua transmisso para a prxima gerao. A previso de tais resultados podem se constituir em um enorme desafio para a consulta gentica, particularmente em um contexto pr-natal. Um complemento cromossmico com qualquer nmero de cromossomos que no seja 46 denominado heteroplide. Um mltiplo exato do nmero haplides de cromossomos (n) denominado euplide e qualquer outro nmero de cromossomos denominado aneuplide. A aneuploidia a alterao mais comum ocorrendo em pelo menos 5% de todas as gestaes conhecidas. A maioria dos pacientes aneuplides tanto apresenta trissomia quanto, menos frequentemente, monossomia. Tanto a trissomia quanto a monossomia apresentam graves consequncias fenotpicas.

Oncogentica O cncer pode ser definido como crescimento tecidual resultante do desequilbrio entre proliferao celular e apoptose, ou morte celular programada. Esse desequilbrio secundrio a uma srie de alteraes genticas ou epigenticas, a maioria delas de natureza somtica (adquirida). As clulas neoplsicas esto inseridas num microambiente que inclui outras clulas, a matriz extracelular e os elementos do estroma, tais como vasos e nervos. A comunicao entre duas ou mais clulas mediada por molculas que atuam em clulas-alvo localizadas distncia (comunicao endcrina) ou na sua vizinhana (comunicao parcrina); em alguns casos, a mesma clula a emissora e a receptora do sinal bioqumico (comunicao autcrina). Alm dos processos extracelulares de comunicao, inmeros processos intracelulares coletivamente denominados transduo de sinal - ou vias de sinalizao so desencadeados pela interao entre molculas mensageiras (os chamados ligantes) e receptores especficos localizados na clula-alvo. Esses receptores podem estar localizados na membrana celular no caso de ligantes hidroflicos como glicoprotenas e catecolaminas , ou ento no interior da clula no caso de ligantes lipoflicos como esterides e retinides. Evidentemente, existem casos em que a alterao gentica determinante de natureza germinativa, mas estima-se que isso ocorra em apenas 5 a 10% dos tumores. Algumas das anomalias genticas do cncer envolvem cromossomos inteiros ou partes dos mesmos, levando a alteraes cromossmicas, numricas ou estruturais, detectveis pela citogentica ou por FISH (fluorescent in situ hybridization). Outras alteraes so detectveis apenas no nvel do seqenciamento de genes, sendo elas as mutaes e delees. Alm disso, vem ficando claro que os fenmenos epigenticos aqueles em que a seqncia de bases nitrogenadas no est alterada so muito importantes em oncologia; entre eles, os mais importantes so a metilao e a modificao da acetilao de histonas. Alguns dos genes alterados esto envolvidos em funes fundamentais homeostase celular. Tais funes incluem, por exemplo, o controle do ciclo celular, a transduo de sinal, a reparao do dano ao DNA e as relaes entre a clula neoplsica e as clulas vizinhas ou a matriz extracelular. De maneira simplificada, pode-se dividir os genes associados ao cncer em trs grupos: (1) oncogenes, quando o aumento da funo est associada com neoplasias; (2) genes supressores de tumores, quando o que se encontra no cncer a diminuio de funo ou deleo gnica; e (3) genes de reparo do DNA, cuja ausncia ou reduo de funo se associa com determinados tipos de cncer. Diversos processos de transduo de sinal so caracterizados pela adio de fosfato a substratos proticos ou lipdicos, sendo essa reao catalizada por enzimas denominadas quinases. As quinases que fosforilam protenas em resduos especficos do aminocido tirosina so denominadas tirosina-quinases. Existem ainda as serina/treonina-quinases e as quinases de lipdeos. J foram descritas cerca de 500 quinases relacionadas a processos de transduo de sinal. Da mesma forma, cerca de 130 fosfatases so conhecidas; as fosfatases catalizam a remoo dos grupamentos fosfato inseridos pelas quinases. Muito importantes em oncologia so os receptores de membrana com

atividade intrnseca de tirosina-quinase. Existem atualmente cerca de 60 receptores desse tipo, agrupados em cerca de 20 famlias. As mais importantes so as famlias do EGFR (epidermal growth factor receptor ), do VEGFR (vascular endothelial growth factor receptor ), do PDGFR (platelet-derived growth factor receptor) e do c-Kit (o receptor para o stem cell factor). O mecanismo genrico de funcionamento dos receptores de membrana semelhante: aps a interao entre a poro extracelular do receptor e seu respectivo ligante, ocorre dimerizao do receptor, mudanas na sua conformao estrutural, auto-fosforilao em resduos de tirosina localizados na sua poro intracelular e ativao de vias intracelulares de transduo de sinal. Entre as vias intracelulares mais importantes est a via das quinases ativadas por mitgenos (mitogen-activated protein kinases, ou MAP-quinases) (Figura via das MAP-quinases). Outras vias importantes so as da PI-3quinase(phosphatidylinositol 3-kinase) e a via denominada Jak/STAT (Janus kinase/signal transducer and activator of transcription ). Caractersticas dessas vias de transduo incluem a conversa-cruzada entre muitas delas, a existncia de diversos mecanismos de ativao ou inibio de algumas molculas e a redundncia de alguns processos. Em virtude de sua expresso gnica ou protica aumentada, muitos dos receptores com atividade intrnseca de tirosina-quinase podem ser classificadas como oncogenes. Assim, diversas estratgias teraputicas para inibir a funo desses receptores vm sendo pesquisadas. Entre elas, as mais importantes so a utilizao de anticorpos monoclonais contra sua poro extracelular e a utilizao de inibidores especficos de sua atividade de tirosinaquinase. Alm das tirosina-quinases dos receptores, existem diversas tirosinaquinases solveis, tais como BCR-ABL (a protena quimrica produzida pelo gene que resulta da translocao 9, 22 na leucemia mielide crnica), Src e Jak, entre outras. Em sua fase inicial, um tumor slido composto por clulas neoplsicas que obtm seus nutrientes e fatores de crescimento por difuso a partir dos tecidos adjacentes. Focos tumorais maiores que 1 a 2 mm em dimetro necessitam de um suprimento sanguneo garantido, para que continuem a crescer. Para isso, as clulas tumorais passam a produzir fatores de crescimento (p.ex., VEGF, FGF e outros) que promovem a formao de novos vasos, num processo denominado angiognese. A angiognese, essencial ao crescimento tumoral, tambm importante para que o tumor possa ganhar acesso circulao e causar metstases. O fenmeno da angiognese apresenta diversos aspectos que vm sendo mais bem compreendidos, possibilitando a descoberta de novas drogas que tm por finalidade bloquear a formao de novos vasos, levando assim reduo do suprimento sanguneo ao tumor. Entre as tcnicas de biologia molecular empregadas no dia-a-dia do diagnstico do cncer esto a imuno-histoqumica e a tcnica de FISH (fluorescent in situ hybridization). A imuno-histoqumica baseada no reconhecimento de protenas especficas, presentes no tecido tumoral, por meio do uso de anticorpos monoclonais contra essas protenas. Isso permite, por exemplo, a deteco da expresso tecidual de receptores e enzimas de

interesse em espcimes tumorais. Diferentemente da imuno-histoqumica, que detecta a expresso tecidual de uma protena de interesse, a tcnica de FISH detecta alteraes no nvel do gene de interesse no prprio DNA nuclear de clulas tumorais. Tais alteraes genticas incluem translocaes ( o caso, por exemplo, das translocaes 9;22, na leucemia mielide crnica, e 15;17, na leucemia promieloctica aguda) e a amplificao gnica (que ocorre, por exemplo, no caso do gene HER-2, localizado no cromossomo 17). Outras tcnicas para diagnstico molecular, mais utilizadas em pesquisa bsica, tambm podero ser incorporadas na prtica clnica, permitindo a avaliao diagnstica ou prognstica em oncologia. Uma dessas tcnicas, conhecida comomicroarrays, permite quantificar o nvel de expresso gnica em espcimes tumorais, sendo sua grande vantagem a possibilidade de estudar, num nico exame, o nvel de expresso de milhares de genes de interesse. Uma das aplicaes dos microarrays seria no campo da farmacogenmica, que poderia permitir a seleo de pacientes com maior probabilidade de resposta a determinados tratamentos, de acordo com as caractersticas genticas de seus tumores. A variabilidade de resposta dos indivduos aos medicamentos a base dos princpios que suportam a farmacogentica. Enquanto os estudos clnicos procuram definir a janela teraputica, e a dose do medicamento normalmente baseada na dose mxima tolerada, a farmacogentica procura adaptar o tratamento com a dose mnima eficaz segundo as caractersticas do indivduo. A variao de resposta tumoral desejada e a toxicidade tolerada pelos tecidos normais podem ser explicadas por variaes genticas comuns (polimorfismos) presentes nos genes responsveis por absoro, transporte, distribuio, metabolismo (bioativao e inativao) e eliminao dos frmacos, bem como nos genes que regulam as funes celulares, como o ciclo celular e a capacidade de reparo aos danos do DNA. As variaes genticas potencialmente modulam a disponibilidade do agente teraputico nas clulas normais e tumorais do indivduo.