The Wessex School Depto.

Ciencias, Tecnologa y Matemtica

Integrantes:

Consuelo Ojeda Valentina Saldia Carolina Muoz

Curso: 2em B Profesora: Maam Karina Seplveda Profesor asistente: Sir. Juan Labraa

Fecha de entrega: mircoles 24 de abril del 2013

Introduccin

Podemos definir a la clula como la unidad morfolgica y funcional de todo ser vivo. De hecho, la clula es el elemento de menor tamao que puede considerarse vivo. Como tal posee una membrana de fosfolpidos con permeabilidad selectiva que mantiene un medio interno altamente ordenado y diferenciado del medio externo en cuanto a su composicin, sujeta a control homeosttico, la cual consiste en biomolculas y algunos metales y electrolitos. La estructura se automantiene activamente mediante el metabolismo, asegurndose la coordinacin de todos los elementos celulares y su perpetuacin por replicacin a travs de un genoma codificado por cidos nucleicos. El cido desoxirribonucleico (polmero de unidades menores denominados nucletidos) junto con el cido ribonucleico, constituye el dogma de la biologa molecular, que se descubrieron en el ncleo de la clula. El ADN es una macromolcula que constituye el principal material gentico de los seres vivos. Contiene la informacin para la conformacin y funcionamiento de los organismos. Dentro de la estructura del ADN, las bases nitrogenadas, son las que codifican la informacin gentica, debido a que su secuencia es la descifrada por los ribosomas y convertida en molculas qumicas. Estructuralmente la molcula de ADN se presenta en forma de dos cadenas helicoidales enrolladas alrededor de un mismo eje. (Imaginario); las cadenas estn unidas entre s, a travs de puentes de hidrogeno, por las bases que hacen pares. Los apareamientos son siempre adenina-timina y citocina- guanina. El ADN contiene la informacin gentica usada en el desarrollo y funcionamiento de los organismos vivos conocidos y algunos virus, siendo el responsable de su transmisin hereditaria; es decir, es la base de la herencia. Para poder comprender como funciona y se compone el ADN nos hemos fijado los siguientes objetivos que a continuacin detallamos, los cuales estn en concordancia con las experiencias de laboratorio.

Objetivos Determinar a travs de las experiencias de laboratorios si es posible extraer ADN de una mezcla homognea de fruta. Visualizar el ADN de la fruta mezclado con sustancias tales como: NaCl, alcohol y detergente lquido. Identificar filamentos de ADN.

Marco terico Hace 60 aos, nadie saba que el cido desoxirribonucleico, o ADN, es la molcula que contiene el diseo de todas las formas de vida en la tierra. Ahora sabemos que las instrucciones moleculares del ADN dirigen la vida de todas las clulas de un organismo y confieren a cada una sus caractersticas especiales. El ADN tambin permite a los organismos, o a las clulas de un organismo, transmitir informacin con precisin de una generacin a la siguiente. El descubrimiento de cmo el ADN contiene el diseo de la vida es uno de los mayores logros de la biologa del siglo XX. A fines del siglo XlX, los cientficos descubrieron que la informacin gentica existe en unidades discretas a las que llamaron genes. Sin embargo, realmente no saban que un gen es una secuencia del ADN que constituye la unidad funcional para la transmisin de los caracteres hereditarios. Saban nicamente que los genes determinan muchas de las diferencias heredadas entre individuos dentro de una especie. Por ejemplo, el gen del color de las flores determina s las rosas sern rojas, rosadas, amarillas o blancas. En la dcada de 1940 cuando el bioqumico Erwin Chargaff de la universidad de Columbia analiz las cantidades de las cuatro bases del ADN de organismos tan diversos como las bacterias, erizos de mar, peces y humanos, encontr una curiosa regularidad: el ADN de cuaquier especie contiene cantidades iguales de adenina y timida, as como cantidades iguales de guanina y cotosina. Esta regularidad , a menudo conocida como regla de Chargaff, sin duda es significativa, pero casi pasara otra dcada antes de que alguien descubriera lo que significa en relacin con la estructura del ADN. Determinar la estructura de cualqueir molcula biolgica no es tarea sencilla an para los cientficos de la actualidad. No obstante, a fines de la dcada de 1940, varios de ellos comenzaron a investigar la estructura de ADN. Los cientficos britnicos Maurice Wilkins y Rosalind Franklin emplearon la difraccin por rayos X para estudiar la molcula de ADN. Bombardearon cristales de ADN purificado con rayos X y registraron la forma en que estos rebotaban contra las molculas de

ADN. Como se observa, el patrn de la difraccin resultante no da una imagen directa de la estructura del ADN. Sin embargo, expertos como Wilkins y Franklin obtuvieron mucha informacin acerca del ADN a partir de este patrn. Se logr determinar primero que una molcula de ADN es larga y delagada, con un dimetro uniforme de 2 nanmetros (2 mil millonsimas de metro). En segundo lugar, el ADN es helicoidal ; es decir, est retorcido como un sacacorchos. Tercero, la molcula de ADN consiste en subunidades que se repiten. Los datos qumicos y de difraccin de rayos X no brindaron informacin sufiente para trabajar sobre la estructura del ADN, as que se necesitaba de algunas buenas especulaciones. Al combinar los datos obtenidos por Wilkins y Franklin con el conocimiento sobre las complejas mleculas orgnicas se unen, as como la intuicin de que los objetos biolgicos importantes vienen en pares, James Watson y Francis Crick propusieron un modelo para la estructura del ADN

El modelo de la doble hlice de Watson y Crick ha supuesto un hito en la historia de la Biologa. Sugirieron que la molcula de ADN consiste en dos cadenas formadas de polmeros de nucletidos de ADN enlazados. Dentro de cada cadena de ADN, el

grupo de fosfato de un nucletido se enlaza con el azcar del nucletido siguiente en la misma cadena. Este en enlace produce un esqueleto de azcares y fosfatos. Todos los nucletidos sobresalen de este esqueleto de azcares y fosfatos. Todos los nucletidos dentro de una sola cadena de ADN estn orientados en la misma direccin. Por consiguiente, los dos extremos de una cadena de ADN difieren; un extremo tiene un azcar libre o no enlazado, y el otro tiene un fosfato libre o no enlazado . Watson y Crick propusieron que las dos cadenas de ADN se mantenan unidas por puentes de hidrgeno que se forman entre bases sobresalientes de las dos cadenas individuales de ADN. Estos enlaces confieren el ADN una estructura semejante a una escalera, con los esqueletos de azcares fosfato hacia afuera (formando los postes de la escalera) y las bases nitrogenadas hacia dentro (formando los peldaos). Sin embargo, las cadenas de ADN no son rectas, sino que estn enrolladas una alrededor de la otra formando una doble hlice que se asemeja a una escalera que se retuerce a lo largo, como una escalera caracol. Adems de enrrollarse una alrededor de la otra en la doble hlice, las dos cadenas del ADN estn orientadas en sentidos opuestos, es decir son antiparalelas. Los seres vivos estn formados por mnimas unidades llamadas clulas. Todas las funciones qumicas y fisiolgicas bsicas, por ejemplo, la reparacin, el crecimiento, el movimiento, la inmunidad, la comunicacin, y la digestin, ocurren al interior de la clula. Uno de los objetivos primordiales de la clula es su reproduccin y duplicacin del material gentico, dnde reside el material gentico y es el Ncleo Celular. ste corresponde a una estructura propia de las clulas eucariontes, tanto animales como vegetales, que almacena en su interior el material gentico.

Con los avances de la microscopa se pudo descubrir la estructura interna del ncleo, donde se aprecia la envoltura nuclear o carioteca, la cual posee una doble membrana, una externa y otra interna. Esta doble membrana se funde en algunos lugares donde se forman los poros nucleares, los que permiten el transporte

Los seres vivos estn formados por mnimas unidades llamadas clulas. Todas las funciones qumicas y fisiolgicas bsicas, por ejemplo, la reparacin, el crecimiento, el movimiento, la inmunidad, la comunicacin, y la digestin, ocurren al interior de la clula. Uno de los objetivos primordiales de la clula es su reproduccin y duplicacin del material gentico, dnde reside el material gentico y es el Ncleo Celular. ste corresponde a una estructura propia de las clulas eucariontes, tanto animales como vegetales, que almacena en su interior el material gentico. Con los avances de la microscopa se pudo descubrir la estructura interna del ncleo, donde se aprecia la envoltura nuclear o carioteca, la cual posee una doble membrana, una externa y otra interna. Esta doble membrana se funde en algunos lugares donde se forman los poros nucleares, los que permiten el transporte de materiales entre el ncleo y el citoplasma. Al interior del ncleo se encuentra una matriz denominada cariolinfa, que est compuesta por agua, nutrientes y material gentico. No cabe duda que los componentes esenciales del ncleo corresponden a las molculas que contienen la informacin gentica: la cromatina, que es una asociacin de protenas y ADN y el nuclolo, que participa en la sntesis de los ribosomas. Podemos encontrar dos tipos de cromatina, una es la EUCROMATINA, que es menos compactada y que est en mayor cantidad cuando la clula est en etapa de Interfase o estado de no divisin y la HETEROCROMATINA, que es la ms compactada.

El ADN se encuentra dentro del ncleo y se define como un polmero de monmeros y cada monmero se denomina nucletido, el cual est compuesto por un grupo fosfato (P), un azcar desoxirribosa (D) y una base nitrogenada, que puede ser una de las siguientes posibilidades: adenina(A), timina (T), citosina(C), guanina (G). Un polmero es un compuesto formado por muchas unidades simples conectadas entre s, como si fuera un largo tren formado por vagones. En los organismos vivos, el ADN se presenta como una doble cadena de nucletidos, en la que las dos hebras estn unidas entre s por unas conexiones denominadas puentes de hidrgeno. La unin de las bases se realiza mediante puentes de hidrgeno, y este apareamiento est condicionado qumicamente de forma que la adenina (A) slo se puede unir con la timina (T) y la guanina (G) con la citosina (C). Muchos cientficos tuvieron dificultad para pensar en el ADN como portador de la informacin gentica, considerando las mltiples caractersticas de un solo organismo. Cmo es posible que el color de las plumas de un ave, el tamao y la forma de pico, su destreza para construir nidos, su canto y capacidad para migrar estn determinados por una molcula compuesta por no ms de cuatro partes sencillas? La respuesta es que no es importante en nmero de diferentes subunidades, sino su secuencia. Dentro de una cadena de ADN, los cuatro tipos de bases pueden disponerse en cualquier orden, y esta secuencia es lo que codifica la informacin gentica. Un organismo tiene millones de nucletidos

(como las bacterias) o miles de millones de estos (como las plantas y los animales), las molculas de ADN codifican una gran cantidad de informacin. Desde luego, un gen debe tener las bases correctas en la secuencia adecuada. Por ejemplo todos los mamferos normales tienen una secuencia de ADN que codifica la protena miostatina funcional, la cual limita el crecimiento muscular. El ganado de la raza Belgian Blue tiene una mutacin que cambia un gen normal por uno disparatado que ya no codifica una protena funcional, as que sus msculos se desarrollan exageradamente. En la dcada de 1850, el patlogo austriaco Rudolf Virchow se percat de que todas las clulas proviene de clulas (preexistente) Todos los billones clulas de tu cuerpo son descendientes (comnmente llamadas clulas hijas) de otras clulas, que proceden de cuando eras un vulo fecundado. Es ms, casi todas las clulas de tu cuerpo contiene la misma informacin gentica, que es igual a la que haba en el vulo fecundado. Para lograr esto, las clulas se reproducen por medio de un proceso complejo en el cual una clula madre se divide por la mitad, formando as dos clulas hijas cada clula hija recibe una copia perfecta de la informacin gentica de la clula madre. En consecuencia, en una etapa temprana de la divisin celular, la clula madre debe sintetizar dos copias exactas de su ADN, por medio de un proceso llamado duplicacin del ADN (tambin conocido como replicacin del ADN). Muchas clulas en un humano adulto nunca se dividen, por consiguiente no duplica su ADN. En la mayora de los millones de clulas que si se dividen, de manera irreversible, el inicio de la duplicidad del ADN compromete a la clula a dividirse. Si una clula intentara duplicar su ADN, sin contar con suficiente materia energa para completar el proceso, podra morir. Por eso, el momento de la duplicacin se regula de forma cuidadosa, asegurando as que la duplicacin del ADN no comience a menos que la clula est lista para dividirse. Estos controles aseguran tambin que el ADN de la clula se replique exactamente una vez antes de cada divisin celular.

Para que la informacin que contiene el ADN pueda ser utilizada por la maquinaria celular, debe copiarse en primer lugar en unos trenes de nucletidos, ms cortos y con unas unidades diferentes, llamados ARN. Las molculas de ARN se copian exactamente del ADN mediante un proceso denominado transcripcin. Una vez procesadas en el ncleo celular, las molculas de ARN pueden salir al citoplasma para su utilizacin posterior. La informacin contenida en el ARN se interpreta usando el cdigo gentico, que especifica la secuencia de los aminocidos de las protenas, segn una correspondencia de un triplete de nucletidos (codn) para cada aminocido. Esto es, la informacin gentica (esencialmente: qu protenas se van a producir en cada momento del ciclo de vida de una clula) se halla codificada en las secuencias de nucletidos del ADN y debe traducirse para poder funcionar. Tal traduccin se realiza usando el cdigo gentico a modo de diccionario. El diccionario "secuencia de nucletido-secuencia de aminocidos" permite el ensamblado de largas cadenas de aminocidos (las protenas) en el citoplasma de la clula.

Las secuencias de ADN que constituyen la unidad fundamental, fsica y funcional de la herencia se denominan genes. Cada gen contiene una parte que se transcribe a ARN y otra que se encarga de definir cundo y dnde deben expresarse. La informacin contenida en los genes (gentica) se emplea para generar ARN y protenas, que son los componentes bsicos de las clulas, los "ladrillos" que se utilizan para la construccin de los orgnulos u organelos celulares, entre otras funciones.

Dentro de las clulas, el ADN est organizado en estructuras llamadas cromosomas que, durante el ciclo celular, se duplican antes de que la clula se divida. Los organismos eucariotas (por ejemplo, animales, plantas, y hongos) almacenan la mayor parte de su ADN dentro del ncleo celular y una mnima parte en elementos celulares llamados mitocondrias, y en los plastos y los centros organizadores de microtbulos o centrolos, en caso de tenerlos; los organismos procariotas (bacterias y arqueas) lo almacenan en el citoplasma de la clula, y, por ltimo, los virus ADN lo hacen en el interior de la cpsida de naturaleza proteica. Existen multitud de protenas, como por ejemplo las histonas y los factores de transcripcin, que se unen al ADN dotndolo de una estructura tridimensional determinada y regulando su expresin. Los factores de transcripcin reconocen secuencias reguladoras del ADN y especifican la pauta de transcripcin de los genes. El material gentico completo de una dotacin cromosmica se denomina genoma y, con pequeas variaciones, es caracterstico de cada especie.

Los cromosomas, se reconocen segn su estructura, la cual consiste en el centrmero, telmero y cromtidas. Estos tienen una forma caracterstica, segn la posicin del centrmero se pueden clasificar en metacntricos, submetracntricos acrocntricos y telocntricos.

Cada especie posee un nmero de cromosomas determinado, que no tiene relacin con el nivel de complejidad evolutiva de un organismo. En el caso del ser humano son 46 cromosomas. El juego completo de cromosomas de una clula, ordenado por tamao y nmero, se denomina cariotipo, es decir el Cariotipo es un mapa que representa los cromosomas organizados en pares homlogos. Las principales caractersticas de nuestros cromosomas que emergen del anlisis del cariotipo son: Un ser humano diploide, formado por la unin de dos gametos (haploide) posee dos juegos de cromosomas. Uno es aportado por la madre (23 cromosomas) y el otro por el padre (23), completando as la dotacin humana de 46 cromosomas. A cada par de cromosomas del doble juego se le conoce como cromosomas homlogos. Estos comparten morfologa y tamao y sus genes estn dispuestos en igual orden y codifican las mismas caractersticas.

De los pares homlogos, hay 22 pares de cromosomas autosmicos y 1 par de cromosomas sexuales. Estos son los que definen el sexo del individuo. Existen dos tipos de cromosomas sexuales: cromosoma X y el cromosoma Y; los cuales contienen una reducida cantidad de genes en comparacin con los autosmicos y poseen distinto tamao y forma. En la fecundacin, la pareja de cromosomas sexuales se une y define el sexo (XX=mujer y XY=hombre).

La mayora de los seres vivos poseen en sus clulas dos juegos de cromosomas, heredados cada uno de sus progenitores. Se les denomina clulas diploides, debido a que representan el material gentico total de la especie y se simboliza como 2n.En cuanto a los gametos, estas se conocen como clulas haploides, porque poseen la mitad de la informacin gentica de la especie y se simboliza como n .Al producirse la fecundacin, los cromosomas homlogos de cada progenitor se encuentra y se recupera la dotacin total de la especie.

Los organismos presentan caractersticas que comparten con su especie, aunque existe diversidad, estas caractersticas se denomina Fenotipo, que pueden ser morfolgicas, funcionales y conductuales. Las caractersticas pueden ser visibles o no perceptibles visualmente. La mayora de las caractersticas fenotpicas tienen origen hereditario, conocido como genotipo. El genotipo depende adems de factores ambientales que pueden activar o inhibir su expresin. Se puede decir que el fenotipo es igual al genotipo ms la influencia ambiental. Partiendo de la base que toda clula proviene de otra, nos encontramos con el concepto de Ciclo Celular que posee tres etapas fundamentales: Interfase, donde la clula se prepara para su posterior divisin. La mitosis que permitir la divisin del material gentico previamente replicado y la Citocinesis donde se separa la clula dando origen a dos clulas nuevas idnticas a las originales.

El ciclo celular es la secuencia de actividades que ocurren de una divisin celular a la siguiente. Cuando una clula se divide tiene que transmitir a sus descendientes la informacin gentica (ADN) y los dems componentes celulares que necesitan, como mitocondrias, ribosomas y retculo endoplasmtico. La reproduccin en la cual se forman descendientes a partir de un solo progenitor, sin la intervencin de los gametos de dos progenitores se denomina reproduccin asexual. Los organismos unicelulares, incluyendo los Paramecium de los estanques y la levadura que hace que el pan se expanda se reproducen asexualmentepor divisin celular (cada ciclo celular produce dos nuevos organismos a partir de cada clula preexistente). No obstante, la reproduccin asexual no se restringe a los organismos unicelulares. Durante la vida tambin se vive la reproduccin asexual, o al menos las clulas lo han hecho. Desde la concepcin un solo vulo fertilizado, mediante divisin celular (reproduccin asexual) ha producido billones de clulas en el cuerpo y cotidianamentelas clulas siguen dividindose en diferentes rganos como la piel y los intestinos. Los organismos multicelulares tambin se reproducen asexualmente. Muchas plantas y hongos se reproducen tanto sexual como asexualmente. Dentro del nivel celular podemos distinguir, sin embargo, dos grupos muy diferentes de clulas: las clulas procariotas o procariticas y las clulas eucariotas o eucariticas (palabras derivadas del gr. carion: ncleo). Las clulas eucariotas son las que tienen ncleo verdadero (es decir, con membrana que lo rodea) mientras que las procariotas presentan un ncleo primitivo (sin una membrana que lo diferencie claramente del resto de la clula). La diferencia entre ambos tipos de clulas ha servido para determinar un reino de seres vivos que denominamos mneras, del que forman parte organismos uni o pluricelulares con clulas procariotas. Los otros reinos (protistas, metafitas y metazoos) estn formados por individuos con clulas eucariotas Las clulas eucarinticas como las procarinticas tienen ciclos celulares que incluyen crecimiento, duplicacin de ADN y divisin celular. Como las diferencias

estructurales y funcionales entre estos dos tipos de clulas, los ciclos celulares de los procariotas y los eucariotas diefieren considerablemente. Las principales diferencias entre clulas procariotas y eucariotas aparecen reflejadas en la siguiente tabla: Clula Procariota No tienen ncleo. El ADN esta condensado en una regin del citoplasma denominada Nucleoide. No de distinguen nuclolos. El ADN es una sola molcula circular de doble hlice que aunque puede estar asociada a protenas, no forma Nucleosoma. Este ADN equivale a un nico cromosoma. Adems presentan plsmidos, pequeos ADN circulares de doble hebra. El ARN no presenta maduracin. La transcripcin y la traduccin se realizan en el mismo lugar. No hay mitosis. El citoplasma se divide por biparticin. La reproduccin es de tipo asexual. Puede haber fenmenos de parasexualidad (intercambio de material gentico). El ncleo se divide por mitosis o por meiosis. El citoplasma se divide por bitarcion, esporulacin, gemacin o pluriparticion. La meiosis, que genera gametos o meiosperas, permite la reproduccin sexual. A continuacin podemos observar un esquema que nos grafica cada una de las etapas del ciclo celular: El ADN es lineal y de doble hlice y esta asociado a histonas formando nucleosomas. Cada fibra de ADN al condensarse de forma un cromosoma. Adems hay ADN circular doble en los cloroplastos y en las mitocondrias. El pre ARN experimenta maduracin. La transcripcin se realiza en el ncleo y la traduccin en el citoplasma. Clula Eucariota Si tienen ncleo y dentro de l uno o ms nuclolos.

Una vez completado el proceso de interfase, la clula est lista para dividirse por Mitosis y repartir su material gentico obteniendo clulas idnticas a la original. La importancia de la mitosis para los organismos pluricelulares est en los procesos de desarrollo, crecimiento y regeranacin de tejidos. Para los unicelulares, la mitosis constituye un mecanismo de reproduccin, puesto que da origen a nuevos individuos. Todos los procesos celulares poseen mecanismos de control que son regulados por diversos factores, principalmente por protenas que se sintetizan a partir de genes especficos. El ciclo celular presenta puntos clave donde controla los procesos celulares para iniciar o no una divisin. En cada punto de control se verifica la informacin de la clula, lo que pone en marcha o retrasa la siguiente fase. La regulacin del ciclo celular est a cargo de protenas de genes especficos como los protooncogenes y los genes supresores de tumores. A continuacin podemos observar un cuadro resumen de la Mitosis y sus respectivas etapas.

Otra forma de divisin celular es la Meiosis, que permite la formacin de clulas sexuales con la mitad de la informacin gentica de la clula que se divide. A partir de una clula diploide se obtienen cuatro clulas haploides, debido a dos divisiones sucesivas (meiosis I y meiosis II) con una sola duplicacin de material gentico. La meiosis es un proceso de divisin celular relevante para la formacin de gametos en los individuos que se reproducen sexualmente, ya que permite la reduccin del material gentico y es una fuente de variabilidad para los descendientes.

Despus de la meiosis I se obtienen dos clulas haploides. Cada una contiene un cromosoma doble de cada par de cromosomas homlogos, con porciones de ADN intercambiadas. Finalizada la meiosis, las clulas reproductivas no solo tienen la mitad del material gentico de la especie, sino tambin son distintas unas de otras debido a procesos de variabilidad propios de esta divisin conocidos como entrecruzamiento y la permutacin cromosmica.

La importancia de la meiosis es la formacin de gametos y variacin gentica .Esta divisin es fundamental para los organismos que se reproducen sexualmente, debido a que a travs de la unin de estas clulas en la fecundacin se restablece el nmero de la especie con la contribucin de cada uno de los progenitores. En el ciclo vital del ser humano existen rganos especializados en la formacin de gametos, estos son las gnadas, donde se encuentran las clulas diploides que pueden dividirse por meiosis y formar clulas haploides, los gametos. Al unirse un gameto femenino con uno masculino en la fecundacin, se restablecen ambos juegos de homlogos y la diploida de la especie (2n, 46 cromosomas). La reproduccin sexual permite generar nuevas combinaciones genticas debido a tres mecanismos, dos de los cuales se desarrollan en la meiosis: crossing-over en la profase I, donde se da el intercambio de la informacin gentica entre las cromtidas de los cromosomas homlogos y la permutacin cromosmica, que se produce en la metafase I. Este ltimo mecanismo tiene como consecuencia una distribucin independiente o azarosa de los cromosomas homlogos en la anafase I, donde cada gameto recibe un cromosoma de cada uno de los 23 pares de homlogos, pero de cualquiera de los progenitores, lo que aade an ms combinaciones. Adems la fecundacin que es la unin entre los dos gametos que producen los progenitores en forma independiente es al azar.

A continuacin un esquema que logra explicar resumidamente el proceso de la meiosis.

Diseo experimental a. Mtodo Tomar un pltano, una naranja o un limn, pero que sea blanda. Triturar por 15 a 20 segundos cuidando de no romper el ADN. Agregar 20ml de detergente en un vaso precipitado de 100ml. Agregar dos porciones de sal con la esptula al vaso precipitado hasta los 80 ml Revolver con una bagueta de vidrio sin generar espuma en el vaso precipitado durante 5 minutos Verter el contenido obtenido a otro vaso precipitado que contiene la mezcla homognea de fruta. Agitar cuidadosamente durante 10 minutos. Usar la toalla de papel como sistema de filtracin y filtrar el contenido del vaso precipitado Tomar la mezcla ya filtrada y agregarla a un tubo de ensayo Agregar la mezcla al tubo de ensayo que contiene el alcohol a baja temperatura. Dejar reposar el tubo de ensayo en un recipiente con hielo por 5 minutos Observar y con una varilla de vidrio extraer una porcin de ADN obtenido.

b.

Materiales Frutas: pltano, limn, naranja 3 vasos precipitados Gradilla Bagueta de vidrio Sistema de filtracin(toalla nova) NaCl Detergente lquido Hielo a baja temperatura Cuchara Alcohol Cpsula de Petri Piseta Agua destilada Licuadora Cronometro Embudo

c. Variables Independiente: ADN de la fruta Dependiente: Visualizacin del ADN

Resultados

a. Experimento con mezcla homognea de naranja

b. Homogenado de limn

c. Experimento con Homogenado de pltano

De acuerdo a los experimentos realizados obtuvimos los siguientes resultados: Criterio Facilidad del filtrado Limn Rpida Pltano Lenta (necesito de un segundo filtrado) Mas ntida Mayor Naranja Media

Visualizacin ADN Cantidad de filamentos

Difusa Menor

Visible Media

Interpretacin de los resultados Tras los experimentos realizados logramos obtener la visualizacin del ADN de una forma distinta para cada una de las frutas utilizadas, dependiendo principalmente de la cantidad de cromosomas de cada tejido vegetal utilizados en el laboratorio. Llegando a tener diferencias de importante envergadura en la observacin del ADN.

Al experimentar con el macerado de limn notamos que el periodo de filtracin fue menor que en el resto de los casos, debido a la poca densidad de ste. A medida que iba avanzado el tiempo de reposo de la mezcla en baja temperatura, la visualizacin del ADN iba mejorando, llegando a la formacin de una nubosidad en el tubo de ensayo, lo que sera el material gentico.

Para el caso del pltano la filtracin fue mucho ms lenta, tardando casi el doble de las dems frutas debido a su gran densidad, necesitando la repeticin del proceso de filtrado cambiando la toalla nova y agregando ms agua desoxigenada a la mezcla. Una vez ya terminado el reposo del homogenado a baja temperatura, se pudo visualizar ntidamente el ADN, siendo capaces incluso de tomarlo fcilmente sin romperlo.

La tercera experiencia de intento de extraccin del ADN de la naranja, no dio un buen resultado pues no se puedo visualizar con claridad. Creemos que esto se debe al movimiento continuo de la mezcla durante su periodo de reposo. Tras este problema se intent repetir el procedimiento de espera de la mezcla a baja temperatura, logrando finalmente la visualizacin nublosa del ADN, pero gracias a su pigmentacin se lo logro ver su hebra fcilmente.

Preguntas de anlisis a. Cul es la funcin del detergente? El detergente que utilizamos en la primera etapa junto con la licuadora forma esta mezcla homognea en la cual se rompe la membrana celular, debido a que ste destruye la membrana celular y disuelve los lpidos (fosfolpidos) y las protenas de las clulas. Una vez destruida la membrana celular se permite la salida del ADN. El detergente forma luego complejos con estos lpidos y protenas permitiendo su eliminacin de la solucin por medio de la filtracin en la toalla de papel.

b. En cada una de las muestras Se encuentra la misma cantidad de ADN o hay diferencias? Observamos que en cada una de las muestras de los diferentes grupos fueron distintas, esto se debe a que: Cada tejido vegetal posee distinta cantidad de nmeros de cromosomas, por otro lado las medidas y cantidades utilizadas no fueron iguales para todos, debido a la densidad del filtrado. Adems influye el grado de maduracin de las frutas utilizadas.

c. Cul es la funcin del alcohol? Por qu tiene que estar a baja temperatura? La funcin del alcohol es aglutinar o precipitar el ADN, ya que este es insoluble en el alcohol y hace que precipite en la interfase entre el alcohol y el agua. Al aglutinarse el ADN, ste se separa de otros componentes celulares, se disuelven azucares y protenas y se forman partculas macroscpicas visibles. Utilizando el alcohol se puede observar filamentos de ADN. El alcohol se utiliza tambin para limpiar el ADN y para que sea visible. El alcohol tiene que estar a baja temperatura para permitir que precipite el ADN.

d. Qu otras tcnicas se utilizan hoy en da para extraer y/o visualizar el ADN? a) La reaccin en cadena de la polimerasa Ms conocida como PCR, es una tcnica que permite replicar entre cientos de miles y millones de veces, en el transcurrir de pocas horas e in vitro, pequeas cantidades de ADN. Uno de los aportes fundamentales de esta metodologa a la investigacin bsica en biologa molecular consiste, precisamente, en la rapidez y eficiencia mediante las cuales se realiza una tarea que antes requera largas y tediosas ornadas. El producto que se obtiene al finalizar la reaccin -una gran cantidad de un fragmento gnico con alto grado de pureza- favorece la tarea de los investigadores empeados en ampliar nuestros conocimientos sobre la estructura y funcin de los genes. Por su alta sensibilidad, esta tcnica permite identificar un gen a partir de un solo cabello, una clula somtica o un espermatozoide. Ha facilitado, y en muchos casos hecho posible, la tarea de identificacin de personas, por ejemplo de hijos de desaparecidos, mediante el anlisis de muestras del nio y de su abuela materna. Este mtodo usado en la actualidad por el servicio mdico legal ha colaborado en la identificacin de personas emblemticas como es el caso de Jorge Matute Johns y detenidos desaparecidos. b) La electroforesis en gel Es una tcnica sencilla empleada de forma rutinaria en laboratorio para separar molculas biolgicas especialmente ADN, ARN y protenas. La electroforesis es una tcnica habitual en el laboratorio clnico. Permite separar especies qumicas (cidos nucleicos o protenas) a lo largo de un campo elctrico en funcin de su tamao y de su carga elctrica. Los cidos nucleicos, ADN y ARN, tienen por naturaleza carga negativa. Si ponemos fragmentos del ADN extrado de una muestra biolgica sobre un soporte poroso (gel) y aplicamos un campo elctrico, se producir la migracin diferencial de los fragmentos a travs de los poros de la matriz. La tincin del gel con bromuro de etidio, que es una sustancia fluorescente que se intercala en la molcula de ADN, y la exposicin con luz ultravioleta, permite observar el resultado de sta migracin. Por ejemplo se puede usar para comparar muestras de individuo sano frente a individuo enfermo c) La Desproteinizacin se logra en general agitando la mezcla con un volumen de fenol. El fenol (o alternativamente cloroformo) es un desnaturalizador activo de protenas que suprime la solubilidad de las protenas en la preparacin y las precipita. Puesto que el fenol y la solucin salina amortiguadora no se mezclan, solo se requiere centrifugar la suspensin para separar las bases, permaneciendo el DNA (y el RNA) en la solucin dentro de la fase acuosa de arriba y la protena presente como un precipitado concentrado en la interfase. La fase acuosa se retira del tubo y se somete a ciclos repetidos de agitacin con fenol y centrifugacin hasta agotar

toda la protena de la solucin. Aadiendo etanol fro. El etanol fro forma una capa arriba de la solucin acuosa del DNA, el cual, se enrolla sobre una varilla de vidrio conforme sale de la solucin. En la interfase el RNA sale de la solucin salina. En contraste, el RNA sale de la solucin como precipitados que se asienta en el fondo del vaso. Luego de este primer paso de purificacin, se disuelve el DNA y se trata con ribonucleasa mediante tratamiento con una proteasa. Enseguida se quita la proteasa por desproteinizacin con fenol y se vuelve a precipitar el DNA.

d) El salting out es una tcnica de extraccin de protenas que consiste en concentrar la fase liquida tanto como sea requerido para que las protenas se precipiten, lo que se produce es que al solubilizar la sal, esta se rodea de agua, limitando las moleculas que solubilizan a las protenas, logrando que al final, no haya moleculas disponibles de agua precipitando las protenas. La caracterstica que deben de tener la fase liquida es que sea polar para poder disolver la sal.

e) la extraccin de DNA de sangre perifrica con Bromuro de Cetiltrimetilamonio (CTAB) es considerada por muchos la una tcnica que rene los requisitos fundamentales para purificacin del DNA, ya que sirve para amplificacin por PCR, mostrando una pureza muy alta del material que separa.

f) Una enzima de restriccin (o endonucleasas de restriccin) son enzimas que se unen a molculas de DNA de doble cadena y lo fragmentan en sitios especficos de acuerdo a secuencias nucleotdicas reconocidas por cada una en forma particular. Para utilizar una enzima de restriccin es muy importante verificar las condiciones de reaccin especificas como pH y concentracin de sales (proporcionadas por el amortiguador de digestin) El mecanismo de corte de DNA se realiza a travs del ruptura de 2 enlaces fosfodiester en la doble hebra, lo que da lugar a dos extremos de DNA. stos pueden ser romos (cuando los enlaces rotos coinciden) o Cohesivos/escalonados. Uno de los campos en los que el uso de enzimas de restriccin ha tenido mayor implicacin ha sido el diagnstico de enfermedades genticas relacionadas con cambios en la secuencia del ADN, ya sean mutaciones puntuales, inserciones o deleciones de fragmentos.

Conclusin En este laboratorio podemos concluir que el ADN no solo se puede encontrar en bacterias, virus y animales, sino que tambin en tejidos vegetales ya que son todos seres vivos y por lo tanto, todos tienen rasgos genticos propios de su especie. El ADN es la base de la vida como una huella gentica. Descubrimos que la cadena de ADN suba desde el fondo hasta la superficie del lquido en forma de hebras. En los tres experimentos (naranja, pltano y limn) se pudo observar el ADN. Sin embargo en el del pltano fue donde se visualiz de manera ms ntida el cido nucleico (ADN) en s. Concluimos que no hay que agitar la mezcla porque puede ocurrir que las hebras de ADN se rompan y la visualizacin de la cadena sea difusa o inexistente como ocurri en el caso de la naranja, por lo que deducimos la importancia vital del cuidado con el cual debe ser llevado a cabo el procedimiento. Tambin experimentamos y analizamos los distintos efectos que tienen productos cotidianos, como detergente, alcohol, y sal sobre los tejidos de ADN (pltano, naranja y limn). Podemos inferir que para lograr la extraccin del ADN debemos pasar por diferentes etapas, para empezar se tiene que romper la pared celular y la membrana plasmtica, para poder acceder al ncleo de la clula, para luego dar paso al rompimiento de la membrana nuclear para dejar libre el ADN, por ltimo hay que proteger el ADN de enzimas que puedan disminuirlo y para visualizarlo hay que hacer que se precipite en alcohol. El alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solucin acuosa. La sal evita la unin de las protenas del ADN, es importante mencionar el papel fundamental de la aplicacin de NaCl, que nos permiti deshidratar la clula (plasmlisis) quedando en un medio hipertnico que nos ayud obtener una mejor visualizacin del ADN. El cido desoxirribonucleico o ADN es la molcula que guarda el cdigo gentico de todas las clulas. Sin importar, que el organismo sea multicelular o unicelular, eucariota o procariota todos tienen el ADN como vehculo de su cdigo gentico. Finalmente podemos concluir que el ADN es sumamente importante para la vida, ya que todos los organismos vivos estn formados por clulas y a su vez, en stas est el material gentico de todos los organismos. Gracias a este laboratorio logramos llegar a nuestro objetivo principal, el cual era lograr observar filamentos de ADN.

Linkografia http://www.slideshare.net/jochoa/4-procariotas-vs-eucariotas-1719471 http://www.profesorenlinea.cl/Ciencias/Genetica.htm http://www.profesorenlinea.cl/Ciencias/Codigo_genetico.html http://pendientedemigracion.ucm.es/info/genetica/grupod/mitosis/mitosis.htm http://dnaprofile.com.mx/informacion-prueba-de-paternidad-adn.php

Bibliografa Apuntes cuaderno Biologa 2 Medio Wessex 2013

Biologa, Teresa Audesirk- Gerald Audesirk-Bruce Byers, 2012, Biologa 2 medio, editorial Pearson, 1era edicin.

Biologa, Jorge Alvarado Lpez-Manuel Bustos Villagrn-Manuel Cortes Cortes- David Santibez Gmez, 2011, biologa 2 medio texto del estudiante, editorial: ediciones SM, 1era edicin.