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Chaperones moleculares en el plegamiento de protenas y proteostasis La mayora de las protenas deben plegarse en estructuras tridimensionales definidos para tener

actividad funcional. Pero en el entorno celular, las protenas recin sintetizadas estn en gran riesgo de plegamiento aberrante y agregacin, formacin de especies potencialmente txicas. Para evitar estos peligros, las clulas de invertir en una red compleja de las chaperonas moleculares, que utilizan mecanismos ingeniosos para evitar la agregacin y promover plegamiento eficiente. Debido a las molculas de protena son muy dinmicas, se requiere vigilancia constante acompaante para asegurar la homeostasis de protenas (proteostasis). Los avances recientes sugieren que una disminucin relacionada con la edad en la capacidad de proteostasis permite la manifestacin de diversas enfermedades de agregacin de protenas, incluyendo la enfermedad de Alzheimer y enfermedad de Parkinson. Las intervenciones en estos y otros numerosos estados patolgicos pueden surgir de una comprensin detallada de las vas que subyacen mantenimiento proteoma. Las protenas son las macromolculas biolgicas ms verstiles y estructuralmente compleja. Estn involucrados en casi todos los procesos biolgicos. Las clulas de mamfero expresan tpicamente en exceso de 10.000 especies diferentes de protenas, que son sintetizadas en los ribosomas como cadenas lineales de hasta varios miles de aminocidos. Para funcionar, estas cadenas deben plegarse generalmente en su "estado natural", un conjunto de unos pocos estrechamente relacionada con las estructuras tridimensionales. Cmo se logra esto y cmo las clulas garantizar la integridad conformacional de su proteoma en vista de los desafos agudas y crnicas constituyen

uno de los problemas ms fundamentales y clnicamente significativo en la biologa. Central de este problema es que las protenas deben conservar la flexibilidad conformacional para funcionar, por lo que son slo marginalmente termodinmicamente estables en su entorno fisiolgico. Una fraccin sustancial de todas las protenas en clulas eucariotas (20-30 % del total en clulas de mamfero) incluso parece ser inherentemente carente de cualquier estructura tridimensional ordenada y adoptar conformaciones plegadas slo despus de la interaccin con parejas de unin. El comportamiento aberrante de algunas de estas protenas metaestables, tales como tau y - sinuclena, puede dar lugar a la formacin de agregados fibrilares que estn asociados con la demencia y la enfermedad de Parkinson. Por lo tanto, el control de calidad de la protena y el mantenimiento de la homeostasis del proteoma (conocido como proteostasis) son cruciales para la salud celular y del organismo. Proteostasis se consigue mediante una red integrada de varios cientos de protenas, incluyendo, lo ms prominente, chaperones moleculares y sus reguladores, que ayudan en la de novo de plegado o replegado, y el sistema de la ubiquitina - proteasoma (UPS) y el sistema de la autofagia, que median la eliminacin oportuna irreversible de las protenas mal plegadas y agregadas. Las deficiencias en proteostasis se han mostrado para facilitar de la tipo manifestacin 2, la o la progresin perifrica, de numerosas de enfermedades, tales como la neurodegeneracin y la demencia, la diabetes amiloidosis enfermedad almacenamiento lisosomal, la fibrosis qustica, el cncer y la enfermedad cardiovascular. Un factor de riesgo importante para muchas de estas enfermedades es la edad avanzada. De hecho, los estudios en organismos modelo indican que el envejecimiento est ligada a una disminucin gradual en la capacidad celular proteostasis. Aqu se discuten los ltimos conocimientos en los mecanismos de

chaperona asistida por el plegamiento de protenas y el mantenimiento proteoma. Nos centramos en cmo las protenas utilizan la maquinaria acompaante para navegar con xito el complejo panorama de plegado energa en el ambiente celular lleno de gente. La comprensin de estas reacciones ser guiar futuros esfuerzos para definir la red proteostasis como un objetivo para la intervencin farmacolgica en enfermedades de plegamiento de la protena aberrante. Papel fundamental de las chaperonas moleculares Muchas protenas pequeas replegamiento despus de su eliminacin del desnaturalizante in vitro, en ausencia de otros componentes o una fuente de energa. Esto significa que la secuencia de amino-cido, codificada en el ADN, contiene toda la informacin necesaria para especificar la estructura tridimensional de una protena 1. Sin embargo, la investigacin en el ltimo par de dcadas se ha establecido firmemente que en el entorno celular, muchas protenas necesitan chaperones moleculares que se pliegan de manera eficiente y en un plazo de tiempo biolgicamente relevante. Por qu es necesario este nivel adicional de complejidad? Aunque las pequeas protenas pueden plegarse a velocidades muy rpidas (de microsegundos), en soluciones tampn diluidas,, protenas multidominio ms grandes pueden tardar minutos en horas a plegarse, e incluso a menudo no llegan a sus estados nativos in vitro. El plegado de tales protenas se hace considerablemente ms difcil in vivo, debido a que el entorno celular es muy lleno, con protenas citoslicas que alcanzan concentraciones totales de 300-400 gl-1. Los efectos de volumen excluidos resultantes, a pesar de la mejora de las interacciones funcionales entre macromolculas, tambin aumentan fuertemente la tendencia de las protenas no nativas y estructuralmente flexible para aadir. Parece probable, por lo tanto, que el requisito fundamental para los chaperones moleculares surgi muy temprano en la evolucin de las

clulas densamente aglomeradas, debido a la necesidad de minimizar la agregacin de protenas durante el plegado y mantener las protenas en estados solubles, sin embargo, conformacionalmente dinmicos. Por otra parte, como a menudo mutaciones alteran la capacidad de una protena para adoptar un pliegue, se deduce que el sistema chaperona proporciona un tampn fundamental, lo que permite la evolucin de nuevas funciones de las protenas y los rasgos fenotpicos. Algunos conceptos bsicos sobre el plegamiento de las protenas y cmo se puede ir mal Debido a que el nmero de posibles conformaciones de una cadena de protena puede adoptar es muy grande, reacciones plegables son muy complejas y heterogneas, basndose en la cooperacin de muchos dbiles, las interacciones no covalentes. En el caso de las protenas solubles, fuerzas hidrofbicas son particularmente importantes en la conduccin de colapso de la cadena y el enterramiento de residuos de aminocidos no polares en el interior de la protena (vase la ref. 13 para una discusin de la membrana de plegamiento de protenas). Se ha logrado un progreso considerable en los ltimos aos en la comprensin de estas reacciones a travs de experimentos biofsicos y anlisis terico de 1,2. En el modelo actual, se cree que las cadenas polipeptdicas para explorar superficies de energa potencial en forma de embudo a medida que avanzan, a lo largo de varias rutas cuestan abajo, hacia la estructura nativa (fig. 1). Colapso de la cadena y el incremento progresivo en el nmero de interacciones nativas restringen rpidamente el espacio conformacional que necesita ser buscado en ruta hacia el estado nativo. Sin embargo, la superficie de energa libre que debe ser navegado es a menudo resistente, lo que significa que las molculas deben cruzar las barreras cinticas sustanciales durante el plegado. Como consecuencia de ello, los estados parcialmente plegados pueden ser transitoriamente

poblados como especies cinticamente atrapados. Tales intermedios de plegamiento son la regla para las protenas de ms de 100 aminocidos ( 90 % de todas las protenas en una clula), que tienen una fuerte tendencia a sufrir colapso hidrofbico rpida en conformaciones globulares compactas 2. El colapso podra traducirse bien en glbulos desorganizados que carecen de contactos especficos y retener gran entropa configuracional o intermedios que pueden ser estabilizados por interacciones no nativas (estados mal plegados). En el primer caso, la bsqueda de contactos nativos cruciales dentro del glbulo se limitar la velocidad de plegado, mientras que en este ltimo, la rotura de los contactos no nativos puede ser limitante de la velocidad 1 (fig. 1). La propensin de las protenas para rellenar los intermedios globulares con un alto grado de flexibilidad puede aumentar ms grandes, con pliegues de dominio topolgicamente ms complejas que estn estabilizadas por muchas interacciones de largo alcance (por ejemplo, / arquitecturas de dominio). Dichas protenas son a menudo altamente dependiente acompaante. Estados parcialmente plegados o mal plegadas son problemticos debido a que tienden a agregarse en una manera dependiente de la concentracin (Fig. 1). Esto es debido al hecho de que estas formas tpicamente exponen residuos y regiones del esqueleto del polipptido no estructurada de aminocidos hidrfobos al disolvente - caractersticas que se entierran en el estado nativo. Como plegable intermolecular, la agregacin es impulsado en gran medida por fuerzas hidrofbicas y principalmente los resultados en estructuras amorfas (Fig. 1). Alternativamente, los agregados fibrilares llamados amiloide pueden formar, definida por - filamentos que corren perpendiculares al eje largo de fibrillas (estructura en cruz ). Aunque muchas protenas pueden adoptar estas estructuras altamente ordenadas, termodinmicamente estables bajo condiciones en vitro, la formacin de estos agregados en

vivo est fuertemente limitado por la maquinaria chaperona, lo que sugiere que pueden llegar a ser ms generalizada bajo estrs o cuando el control de calidad de la protena no. Es importante destacar que la formacin de agregados fibrilares suele ir acompaada de la formacin de estados oligomricos solubles, que se cree que tienen un papel clave en las enfermedades de plegamiento aberrante (Fig. 1). La toxicidad de estas formas menos ordenadas y bastante heterognea se ha sugerido que se correlaciona con la exposicin de superficies hidrfobas, pegajosas y accesible estructura de pptido - columna vertebral que an no est integrado en un ncleo transversal estable. Los oligmeros solubles deben someterse a una considerable reordenamiento a las fibrillas de formulario, el estado final termodinmico del proceso de agregacin, y por lo tanto pueden ser comparables a los intermedios cinticamente atrapados en el plegamiento (Fig. 1). Cabe destacar que algunos eptopos estructurales comunes se han detectado en los oligmeros prefibrillar de diferentes polipptidos, pero, cmo estas caractersticas estn relacionadas con la toxicidad an no se entiende. Esta informacin es una necesidad urgente de desarrollar tratamientos para los numerosos estados patolgicos asociados con la agregacin de protenas. Las principales clases de chaperonas Se define un chapern molecular como cualquier protena que interacta o estabiliza o ayuda a otra protena para adquirir su conformacin funcionalmente activa, sin estar presente en su estructura final. Existen varias clases diferentes de chaperones estructuralmente no relacionados en las clulas, formando caminos y redes de cooperacin. Los miembros de estas familias de protenas son a menudo conocidos como protenas de estrs o protenas de choque trmico (HSP), ya que son regulados hasta en condiciones de estrs en el que las concentraciones de agregacin propensos aumento intermedios plegables. Los chaperones se clasifican generalmente de acuerdo a su peso molecular (HSP40, HSP60, HSP70,

HSP90, Hsp100 y los pequeos HSP). Estn involucrados en una multitud de funciones proteoma - mantenimiento, incluyendo de novo de plegado, el replegamiento de las protenas de estrs desnaturalizados, de ensamblaje oligomrico, el trfico de protenas y la asistencia en la degradacin proteoltica. Los acompaantes que participan en trminos generales en el plegamiento de protenas de novo y replegamiento, tales como los Hsp70s, HSP90s y la chaperoninas (HSP60s), son mquinas moleculares de mltiples componentes que promueven plegable travs de la ATP - y el cofactor - regulado ciclos de liberacin y de unin. Por lo general reconocen cadenas laterales de aminocidos hidrfobos expuestos por protenas no nativas y pueden cooperar funcionalmente con chaperonas ATP - independientes, tales como las pequeas HSP, que funcionan como 'holdases', agregacin de almacenamiento en bfer. En el mecanismo dependiente de ATP de accin chaperona, de novo de plegado y replegado de protenas se promueve a travs de particionamiento cintica (Fig. 2). Unin (o reconsolidacin) a las regiones hidrfobas de una protena no nativa transitoriamente bloques de agregacin Chaperona; ATP - liberacin desencadenada permite el plegado de proceder. Es importante destacar que, a pesar de los Hsp70s y las chaperoninas tanto operan por este mecanismo bsico, que se diferencian fundamentalmente en que la primera liberacin (como todos los otros chaperonas dependientes de ATP) la protena sustrato para el plegado en solucin a granel, mientras que las chaperoninas cilndricas permiten el plegado de un solo molculas de protenas en el interior de una jaula. Los dos sistemas actan secuencialmente, mediante el cual HSP70 interacta aguas arriba con polipptidos nacientes y recin sintetizada y la funcin chaperoninas aguas abajo en el final de plegado de las protenas que no llegan a estado nativo por el ciclismo en solo HSP70 20,21 (figuras 2 y 3). En las siguientes secciones, se utilizar la HSP70, HSP90 chaperonina y modelos para ilustrar los mecanismos

bsicos de las principales mquinas de plegamiento de protenas citoslicas. Chaperonas especfica del cliente que funcionan aguas abajo de plegado en la mediacin del ensamblaje de complejos oligomricos no se discuten (vase, por ejemplo, refs 22 y 23). El sistema de HSP70 El expresan constitutivamente (HSC70, tambin conocido como HSPA8) y formas inducibles por estrs de HSP70 son actores centrales en el plegamiento de protenas y el control proteostasis. El aumento de los niveles de HSP70 tambin ha demostrado ser eficaz en la prevencin de la agregacin de protenas txicas en modelos de enfermedad. El ciclo de reaccin dependiente de ATP de HSP70 se regula por chaperonas de la HSP40 (tambin conocido como DnaJ) de la familia y los factores de cambio de nucletidos. Algunos de estos factores tambin estn involucrados en la vinculacin de las funciones de acompaante con el SAI y la autofagia para la eliminacin de las protenas mal plegadas. Encuadernacin y la liberacin por la HSP70 se logra a travs del acoplamiento alostrico de un dominio de pase AT amino - terminal conservado con un dominio de unin al pptido carboxi-terminal, este ltimo consiste en un subdominio - sndwich y un segmento de tapa - helicoidal (Fig. 2). El - reconoce segmentos largos, siete residuos enriquecidos en aminocidos hidrofbicos, preferentemente cuando estn enmarcadas por residuos de carga positiva. Tales segmentos se producen en promedio cada 50-100 aminocidos en las protenas, y la exposicin de estos fragmentos se correlaciona con la propensin de agregacin de la protena. La tapa - helicoidal y un cambio conformacional en el dominio - sndwich regulan el estado afinidad por el pptido de una manera dependiente de ATP. En el estado de ATP de ruedas, la tapa adopta una conformacin abierta, lo que resulta en lo alto de las tasas y tarifas de descuento para el pptido. La hidrlisis de ATP a ADP est fuertemente acelerada por HSP40, que conduce a cierre de la

tapa y de unin del pptido estable (baja en los precios y tarifas de descanso para el sustrato peptdico) (fig. 2). HSP40 tambin interacta directamente con desplegada polipptidos y puede reclutar a los sustratos de protena HSP70. Despus de la hidrlisis de ATP, un factor de intercambio de nucletidos - se une al dominio pase AT de la HSP70 y cataliza el intercambio de ADP - ATP, lo que resulta en la apertura de la tapa y la liberacin de sustrato. Lanzamiento permite que las molculas de rpido plegado para enterrar residuos hidrofbicos, mientras que las molculas que necesitan ms que unos pocos segundos para el plegado se vuelva a enlazar a la HSP70, evitando as la agregacin. Unin HSP70 tambin pueden resultar en la remodelacin conformacional, tal vez la eliminacin de las barreras cinticas para el proceso de plegado. Las protenas que son incapaces de particin de trayectorias de rpido plegado despus de ciclismo HSP70 pueden ser transferidas en el medio especializado de la jaula chaperonina para el plegado. Entre ellas se encuentran varias protenas esenciales, tales como actinas tubulinas, que se enfrentan a altas barreras energticas en el plegamiento y son completamente incapaces de llegar a sus estados nativos espontneamente, incluso en solucin diluida in vitro. Las chaperoninas Chaperoninas son grandes complejos doble timbre de 800-900 kDa que funcionan por todo el mundo encierra protenas sustrato hasta 60 kDa para el plegado. Grupo I chaperoninas (tambin conocido como HSP60s en eucariotas y GroEL en bacterias) tienen anillos de siete miembros en bacterias, mitocondrias y cloroplastos, y funcionalmente cooperar con HSP10 (protenas GroES en bacterias), que forman la tapa de la jaula plegable. El grupo de chaperoninas II en arqueas (thermosome) y el citosol eucaritico (TRiC, tambin conocido como AAC) por lo general tienen anillos de ocho miembros. Son independientes de HSP10 factores. El sistema GroEL-GroES chaperonina de Escherichia coli ha sido

estudiado ms extensivamente (fig. 3). GroEL interacta con al menos 250 diferentes protenas citoslicas. La mayora de ellos tienen entre 20 y 50 kDa en tamao y tienen complejo / o + topologas de dominio, como el barril TIM 33 veces. Estas protenas se estabilizan por muchas interacciones de largo alcance y se cree que rellenar flexibles, plegables intermedios cinticamente atrapados exponiendo superficies hidrfobas. Los dominios apicales de las presentes residuos de aminocidos hidrfobos GroEL para la unin en el centro del anillo sustrato. Plegado subsiguiente depende de encapsulacin global de sustrato por GroES (fig. 3). GroES de unin de ATP es regulado y se asocia con un cambio conformacional marcada de GroEL que conduce a la formacin de una jaula con una pared altamente hidrfilo, neta - cargado negativamente interior. Protena encapsulada es libre de doblar en este ambiente durante 10 segundos - el tiempo necesario para la hidrlisis de ATP en el anillo de GroES - enlazado (anillo cis). Sustrato protena sale de la jaula despus de GroES disociacin, que se desencadena por alostricamente ATP vinculante en el ring frente (anillo trans). Sustrato an no doblado vuelve a enlazar rpidamente a GroEL para nuevos intentos de plegado. Encerrando desplegada protena, una molcula a la vez, evita la interrupcin de plegado por la agregacin o (re) unin a chaperonas aguas arriba. Adems, un efecto de confinamiento estrico probablemente modula el paisaje plegado - energa. Aunque las funciones de chaperonina como un dispositivo de prevencin pasiva - agregacin para algunas protenas, encapsulacin tambin pueden acelerar plegado sustancialmente. Esta aceleracin de la frecuencia puede ser debido al confinamiento estrico, entrpicamente desestabilizar derrumb intermediarios de plegamiento pero flexibles, y promoviendo su conversin a ms compactos conformaciones, nativo. Como se muestra recientemente, el efecto de la jaula plegable puede ser comparable a la funcin de los enlaces disulfuro en la restriccin de espacio

conformacional en el plegamiento de las protenas secretoras. Adems, repite curso de los acontecimientos en la unin y los ciclos sucesivos de liberacin se han sugerido para revertir mal plegadas, estados cinticamente atrapados que se estabilizan por interacciones no nativas. Por lo tanto, las chaperoninas puede ser capaz de suprimir las barreras entrpicas y entlpico en escarpadas paisajes de energa libre de plegado (Fig. 1). TRiC, el II chaperonina grupo en el citosol eucaritico, consta de ocho subunidades paralogous por anillo. Todos II chaperoninas grupo se desvan de GroEL en que sus dominios apicales contienen protuberancias en forma de dedo, que actan como un iris -como, integrado en la tapa y reemplazar la funcin de GroES. Estos segmentos se abren y cierran en un ciclo de protena - encapsulacin dependiente de ATP, similar en principio a la de GroEL - GroES44. Sin embargo, el ciclo de reaccin TRiC es mucho ms lento que el de GroEL, probablemente proporcionar un perodo de encapsulacin de protenas y el plegamiento en la jaula sustancialmente ms largo. TRiC interacta con aproximadamente el 10 % de las protenas citoslicas recin sintetizados, incluyendo la actina y la tubulinas. Curiosamente, TRIC tambin funciona en la prevencin de la acumulacin de agregados txicos de protena de la enfermedad de Huntington. El sistema de HSP90 HSP90 formas de un concentrador proteostasis que controla numerosos importantes vas de sealizacin en las clulas eucariotas. Estas funciones pleiotrpicos incluyen, entre otros la progresin del ciclo celular, mantenimiento de los telmeros, la apoptosis, la transduccin de seales mittico, el transporte de vesculas mediada, la inmunidad innata y la degradacin de protenas especficas. De hecho, se cree que la evolucin y el mantenimiento de estas redes funcionales a depender de la capacidad de HSP90 para amortiguar los efectos de las mutaciones

estructuralmente desestabilizadores en los complejos de protenas subyacentes, permitiendo de ese modo la adquisicin de nuevos rasgos. HSP90 funciones aguas abajo de HSP70 en la maduracin estructural y la regulacin conformacional de numerosas molculas de transduccin de seales, tales como quinasas y los receptores de esteroides. Adems, coopera en este proceso con varios reguladores y compaeros de acompaantes, muchos de los cuales utilizan la repeticin tetratricopeptide (TPR) dominios de atracar en HSP90. Por ejemplo, el HOP protena TPR proporciona un vnculo directo entre la HSP70 y HSP90, permitiendo transfer el sustrato. Aunque el mecanismo por el cual la HSP90 y sus cofactores mediar cambios conformacionales en protenas sustrato an no se entiende, las estructuras cristalinas de los ltimos HSP90s de larga duracin proporcionan informacin largamente esperada. HSP90 funciona como un dmero de subunidades que se ensamblan por sus dominios C-terminales. Un dominio N-terminal se une e hidroliza ATP y se une al dominio C -terminal mediante un dominio medio (Fig. 4). El dominio medio participa en la unin al sustrato e interacta con el AHA1 co - chaperona. Similar a otros chaperones, la HSP90 dmero se somete a un ciclo de reaccin ATP - accionado que est acompaada por una considerable reorganizacin estructural (fig. 4). La unin del ATP conduce a la dimerizacin de los dominios N-terminales, formando abrazadera molecular HSP90. Esto resulta en una compactacin del dmero HSP90, en el que los monmeros individuales se entrelazan una con otra. Despus de la hidrlisis, los dominios pase AT se disocian y las HSP90 monmeros diferentes N- terminales. Varios cofactores regulan este ciclo: Cdc37, que ofrece ciertos sustratos de quinasa para HSP90, inhibe la actividad de pase AT, y HOP inhibe la dimerizacin N-terminal. AHA1 estimula la hidrlisis de ATP, mientras que p23 se estabiliza la forma dimerizada de HSP90 antes de la hidrlisis de ATP. Estos factores se cree que ajustar las propiedades cinticas del

ciclo para lograr ciertas transiciones conformacionales en sustratos de HSP90 - enlazados, as como su liberacin a partir de la HSP90. Cmo HSP90 recluta diferentes tipos de protenas sustrato con la ayuda de diversos co- chaperonas sigue siendo enigmtica. HSP90 parece tener varias regiones de interaccin sustrato y la fuerza de unin parece estar fuertemente influenciada por la flexibilidad estructural del sustrato, en lnea con la funcin propuesta de la HSP90 como un condensador evolutiva en la proteccin de variantes de protenas mutadas de la degradacin. Debido a varios sustratos de HSP90 son quinasas con papeles bien documentados en el desarrollo del tumor, la inhibicin de HSP90 con frmacos tales como geldanamicina ha surgido como una estrategia prometedora para el tratamiento de ciertos tipos de cncer. Estos frmacos inhiben especficamente la funcin de pase AT de la HSP90. Probablemente sern tiles no slo en la terapia del cncer, sino tambin en el tratamiento de enfermedades virales, debido a el hecho de que varios virus patgenos secuestrar el sistema de HSP90 y lo utilizan para ensamblaje de la cpsida. Sin embargo, la inhibicin global de la HSP90 es probable que resulte en una alteracin marcada de circuitos celulares, y sera deseable encontrar maneras de inhibir slo aspectos especficos de la funcin de HSP90. De ribosoma a la protena plegada La sntesis vectorial de polipptidos en el ribosoma tiene importantes implicaciones en el proceso de plegado que se entienden slo en parte. Las preguntas claves se refieren a la fase en la que la cadena naciente comienza a plegarse y la medida en que el proceso de traduccin modula el paisaje de energa libre de plegado. Al abordar estas cuestiones, es til considerar primero, las protenas de un solo dominio pequeos, que tienden a plegarse de forma espontnea in vitro. El proceso de traduccin para tales protenas parece aumentar el riesgo de mal plegamiento y la agregacin considerablemente, debido a que un polipptido naciente

incompleta no es capaz de plegarse en una conformacin nativa estable y la concentracin local de las cadenas nacientes en el contexto de poli ribosomas es muy alta. Adems, el canal de salida de la subunidad ribosmica grande, que es de 100 de largo, pero en la mayora de 20 de ancho, es desfavorable para doblar ms all de -hlices y pequeos elementos terciarios que pueden comenzar a formar cerca de la salida del tnel; se por lo tanto evita que las C-terminal de residuos de aminocidos de la cadena de participar en interacciones de largo alcance que son necesarios para cooperativa dominio plegado. Como consecuencia, puede ocurrir slo despus de plegamiento productivo de la protena completa ha surgido del ribosoma. Debido a que la traduccin es relativamente lento ( 4-20 aminocidos s - 1), cadenas nacientes estn expuestos en estados parcialmente plegados, sensibles a la agregacin durante perodos de tiempo considerables. Por otra parte, los contactos intracatenarios no nativos formados durante la traduccin o interacciones con la superficie ribosmico altamente cargado podran retrasar plegado despus de la finalizacin de la sntesis. Por estas razones, se cree que las cadenas nacientes de interactuar co traduccional con chaperones ribosomas determinada, que inhiben su plegamiento prematuro (mal) y mantener la cadena naciente en un estado no agregado, plegable competente (Fig. 5). Por ejemplo, el factor de activacin bacteriana se une a la pequea titina I 27 cadena ( 120 aminocidos) a lo largo de traduccin, presumiblemente retrasar colapso de la cadena hasta que el dominio - sndwich completo ha surgido del ribosoma y est disponible para plegado. Por otra parte, la agregacin de cadenas nacientes se desfavorecido por el densamente poblado, pseudohelical disposicin de los ribosomas en los complejos polyribosome - una organizacin que maximiza la distancia entre los sitios de salida de la cadena naciente en ribosomes65 adyacente. Aunque las protenas de un solo dominio alcanzarn su estado nativo

despus de la traduccin, las protenas multidominio pueden someterse a dominio sabia plegable co -traduccional, como plegar independientemente unidades estructurales ( 50-300 aminocidos de longitud) emerge de forma secuencial desde el ribosoma. Este proceso evita el contacto entre dominios no nativos, suavizando as el paisaje plegado - energa para las grandes protenas. Secuencial dominio plegado durante la traduccin, que es altamente eficiente en ribosomas eucariticos, probablemente promueve la evolucin explosiva de protenas multidominio complejas en eucariotas. Se cree plegable Co -traduccional que ser ayudado por la velocidad de elongacin ms lento de los ribosomas eucariotas ( 4 aminocidos s - 1 en eucariotas frente a 20 aminocidos s - 1 en las bacterias) y, como resultado de diversas adaptaciones de la maquinaria de plegado. Por ejemplo, los ribosomas eucariotas se unen los complejos especializados chaperona HSP70 (Fig. 5) y la unin y liberacin de la HSC70 cannica de las cadenas nacientes pueden coordinarse con velocidad de desplazamiento con el fin de apoyar plegable dominio se refiere. El eucariota chaperonina TRiC es reclutado para cadenas nacientes por HSC70 (ref. 69) y otros factores de aguas arriba, tales como pre plegado, permitiendo de plegado co -traduccional. Por otra parte, el ajuste de plegado co-translacional puede conseguirse por traslacin haciendo una pausa en los codones raros. En general, la traduccin y la chaperona maquinaria eucariota han sido altamente optimizados a travs de la evolucin, asegurando plegado eficiente para la mayor parte de las protenas recin sintetizada.. El chapern vas de operar en el retculo endoplasmtico (ER) siguen los principios de organizacin anlogos, pero maquinaria especializada se utiliza en la formacin de disulfuro - bono y la glicosilacin de muchas protenas secretoras. Mantenimiento proteoma y la red proteostasis Aunque en general se acepta que no se requiere la maquinaria

acompaante de plegado de protenas inicial, slo estamos empezando a apreciar la medida en que muchas protenas dependen de la asistencia macromolecular largo de su vida celular para mantener o recuperar sus conformaciones funcionalmente activas. En comparacin con los procariotas, los proteomas de clulas eucariotas son altamente complejo, que comprende un nmero mucho mayor y la diversidad de las protenas multidominio. En el entorno celular dinmico, estas protenas se enfrentan constantemente a numerosos retos a sus estados plegados ; son el resultado de modificaciones post -traduccionales (fosforilacin y acetilacin), los cambios en la fisiologa celular y alteraciones en la composicin y la concentracin de ligandos de molculas pequeas que pueden influir en protenas estabilidad. Por otra parte, el 20-30% de todas las protenas en clulas de mamfero son intrnsecamente no estructurada, macromolculas es o decir, definidos que slo pueden despus de adoptar de la conformaciones unin Tales a otras protenas tridimensionales

superficies

membrana.

probablemente necesitan ayuda para evitar interacciones aberrantes y de agregacin, en particular cuando se incrementa su concentracin y no se encuentran en complejos con molculas asociadas. Estas consideraciones ayudan a explicar por qu las clulas tienen que invertir en una amplia red de factores, que comprende protenas 800 en las clulas humanas ( 200 acompaantes y compaeros de chaperones y 600 UPS y componentes autofagia), que cooperan para mantener la integridad conformacional del proteoma y proporcionar la adaptacin a los cambios en el medio ambiente. Esta red proteostasis integra componentes generales y especializados chaperonas para plegamiento de la protena y el trfico con la maquinaria para la desagregacin y la degradacin proteoltica de las protenas mal plegadas (irreversiblemente el SAI y el sistema de la autofagia) (Fig. 6). La notable complejidad del sistema se deriva de la expansin, en los organismos multicelulares, de la

diversidad de los componentes reguladores para los sistemas de chaperonas principales (HSP70 y HSP90) y de los factores de acoplamiento funcionalmente estas chaperonas con el SAI y el sistema de la autofagia. Por ejemplo, diversos cofactores HSP70, tales como el athanogeno BCL2 - asociado (BAG) y ciertas protenas de la familia HSP40s, contienen dominios de tipo ubiquitina o ubiquitina interactuando. El cofactor HSP70 y HSP90 conocido como carboxilo terminal de la protena Hsp70 de interaccin (CHIP) tiene actividad ubiquitina ligasa E3 y canales ciertas protenas mutantes o daado hacia la degradacin proteasomal. En particular, CHIP es slo uno de varios cientos de ligasas E3 diferentes, lo que refleja la enorme importancia de las vas proteolticas para proteostasis y la regulacin celular. Curiosamente, mientras que la eliminacin de especies de protenas mal plegadas por el SAI requiere que estas molculas se mantienen en un estado no agregado por chaperones, se cree que la eliminacin de la autofagia para involucrar mecanismos activos para obligar a esas molculas en grande, presumiblemente menos txicos, agregados. Estas inclusiones son a menudo depositadas en sitios subcelulares especficos cerca del centro organizador de microtbulos, conocidos como agregados. La red proteostasis est regulada por varias vas de sealizacin interconectadas, algunas de las cuales son la tensin de respuesta y garantizar que el plegamiento de protenas celulares y / o degradacin est adaptada para evitar la acumulacin de mal plegada y especies propensas a la agregacin (Fig. 6). Estas vas incluyen la respuesta al estrs citoslica y la respuesta de la protena desplegada de las vas de ER y mitocondrias, as como de sealizacin que controlan la biognesis de ribosomas y la capacidad de traslacin (Cuadro 1). Cmo las aportaciones de las diferentes ramas estn coordinadas y afinado es slo parcialmente entendida, pero la capacidad proteostasis y capacidad de respuesta al estrs puede variar considerablemente en diferentes tipos de

clulas. Colapso Proteostasis en el envejecimiento y la enfermedad La acumulacin de protenas mal plegadas y/u oxidada en las clulas durante el envejecimiento es un reto para el sistema proteostasis y eventualmente resulta en la deposicin de los agregados, como se muestra en organismos modelo tales como Caenorhabditis elegans y Drosophila. La incapacidad de las clulas para restaurar proteostasis normal puede resultar en la enfermedad, e incluso en la muerte celular. En efecto, numerosas enfermedades son ahora reconocidos para ser asociado con el plegamiento de protenas aberrante y por lo general se clasifican como de prdida de funcin o las enfermedades de ganancia de funcin txica, aunque los estados patolgicos especficos a menudo muestran elementos de ambos grupos. Los primeros son generalmente causados por mutaciones hereditarias e incluyen numerosos trastornos como la fibrosis qustica, enfermedades de depsito lisosomal y la deficiencia de 1 - antitripsina. Este ltimo, trastornos de ganancia de funcin, incluye la diabetes tipo 2 y las principales enfermedades neurodegenerativas (enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, esclerosis lateral amiotrfica y la enfermedad de Alzheimer) y son ya sea espordica o causada por mutaciones que hacen que las protenas especficas ms de agregacin propensos. Estas enfermedades ganancia de funcin son tpicamente relacionada con la edad y son causadas por la acumulacin de amiloide o amiloide como agregados de la protena de la enfermedad. Una posible explicacin para la aparicin tarda de estas enfermedades es provista por la evidencia reciente de los organismos modelo que las vas de sealizacin que regulan proteostasis se integran con los mecanismos genticos y epigenticos que controlan la longevidad (Cuadro 1). Por lo tanto, la disminucin relacionada con la edad en proteostasis y especficamente en la incapacidad para regular al alza chaperones en respuesta a las presiones de conformacin

desencadenara manifestacin de la enfermedad y a su vez, acelerar el colapso proteostasis. Aunque el principio de funcionamiento txicos en estos trastornos est lejos de ser comprendido, est surgiendo un consenso que los agregados oligomricos solubles, que pueden ser 'en - va "o" fuera de ruta' hacia la formacin de fibrillas, son las especies citotxicos primarios (Fig. 1). Una hiptesis destacada sugiere que estos oligmeros exponen a superficies hidrfobas promiscuas que pueden mediar interacciones aberrantes con varias otras protenas o con las membranas celulares. En apoyo de esta propuesta, un estudio reciente de la protemica en clulas humanas mostraron que ciertas protenas metaestables se dirigen preferentemente por tales interacciones, lo que resulta en su co - agregacin con la enfermedad amiloidognica protena. Las protenas co - agregacin en general son grandes en tamao y se enriquecen en regiones intrnsecamente no estructurados, las propiedades que se acoplan con un alto grado de funcionalidad. En consecuencia, tienden a ocupar posiciones de cubo esenciales en redes de protenas celulares, incluyendo la regulacin de la transcripcin, la traduccin y el mantenimiento de la arquitectura celular, lo que sugiere que su secuestro por los agregados amiloides resultados en la toxicidad multifactorial. Una manifestacin interesante de este mecanismo de toxicidad es la reciente demostracin de que la agregacin de p53 mutante puede ejercer potencial oncognico dominante por el secuestro de p53 de tipo salvaje en los compaeros de los agregados, lo que resulta en una prdida completa de la funcin de p53. Toxicidad agregada puede ser agravado por la incapacidad de las clulas afectadas para responder adecuadamente a estmulos de estrs. Esto es consistente con la evidencia reciente de que las especies de protenas aberrante plegadas pueden interferir con las funciones Proteostasis centrales, incluyendo el plegamiento de protenas y los mecanismos de

aclaramiento. En particular, la sobreexpresin de los miembros del sistema de HSP70 se ha demostrado que inhiben la formacin de oligmeros txicos y para prevenir la formacin de agregados de amiloide de la enfermedad de diferentes protenas. En el caso de las protenas de poliglutaminas - repeticin, la cual causa la enfermedad de Huntington y varios trastornos neurodegenerativos relacionados, HSP70 coopera con la chaperonina TRiC para evitar la acumulacin de oligmeros potencialmente txicos, que es una reminiscencia de la cooperacin funcional entre estos sistemas de chaperonas en protenas de novo plegado. Sobre la base de estos hallazgos, la regulacin al alza de la funcin chaperona farmacolgica promete abrir nuevas estrategias para el tratamiento de numerosos estados patolgicos asociados con el plegamiento aberrante y la agregacin. Experimentos de prueba de principio que utilizan compuestos de molculas pequeas para aumentar la sntesis de acompaante y reequilibrar proteostasis (por ejemplo, mediante la activacin de choque trmico factor de transcripcin - 1 (vas HSF- 1) - regulados) ya han demostrado su eficacia en la prdida de la funcin y modelos de enfermedad de ganancia de funcin txica. Del mismo modo, recientemente identificado activadores del proteasoma 94 tienen el potencial de acelerar la liquidacin de especies de protenas txicas, particularmente cuando se aplica en combinacin con la regulacin positiva chaperona. A diferencia de los frmacos convencionales, tales " reguladores Proteostasis ' no sera especfica de la enfermedad o de la protena especfica, por lo que puede ser aplicable a todo un grupo de enfermedades relacionadas - un nuevo concepto en la prctica mdica. Pronstico Estudios realizados durante las ltimas dos dcadas han proporcionado una visin fascinante de la mecnica de la chaperona asistida por el

plegamiento de protenas, pero todava hay grandes lagunas en nuestra comprensin de cmo las vas de plegado en la clula se diferencian de los estudiados en el tubo de ensayo. El progreso se ve frenada por el problema de que los mtodos biofsicos sofisticados utilizados para caracterizar intermediarios de plegamiento in vitro no son fcilmente transferibles a la situacin in vivo. Mayor potencial de innovacin tanto, se puede esperar de la evolucin de las tcnicas de imagen avanzadas, con el tiempo que nos permite monitorear los cambios conformacionales en una sola cadena polipeptdica como se desprende de los ribosomas, lleva a cabo su funcin biolgica y es finalmente degradado en la clula viva. Mucha investigacin tambin se estimula por el concepto emergente de que las chaperonas moleculares funcionan como el elemento central de una red celular mucho ms grande de control de proteostasis, que comprende, adems, la maquinaria de la biognesis de protenas, as como el SAI y el sistema de la autofagia. Desentraar el complejo circuito de regulacin de esta red y entender por qu pierde su agarre durante el envejecimiento plantear un reto importante en los prximos aos. La solucin de este problema requerir un amplio enfoque de biologa de sistemas basndose en una combinacin de perfiles de ribosoma, protemica cuantitativa y modelado computacional. Cmo reaccionan las clulas al estrs conformacional o deficiencia proteostasis a nivel proteoma est claro. Las preguntas clave incluyen la determinacin de cmo ciertos aberrante plegamiento de protenas agregadas en especies txicas, mientras que otros se degradan, cmo la composicin de los cambios proteosoma durante el envejecimiento, lo que la firma de un proteoma juvenil es, y cmo podemos encontrar maneras de mantener por ms tiempo de lo que edad. Para abordar estas y otras cuestiones relacionadas no slo ofrece grandes oportunidades para la intervencin de numerosas enfermedades actualmente incurables, sino tambin con el tiempo revelar la relacin fundamentalmente importante entre

proteostasis y longevidad.

Figura 1 | Conflicto de reacciones de plegamiento de protenas y agregados. Esquema de la superficie en forma de embudo de energa libre que las protenas explorar a medida que avanzan hacia el estado nativo (verde) mediante la formacin de contactos intramoleculares (modificado de referencias 19 y 95). La robustez de los resultados paisaje de energa libre en la acumulacin de conformaciones cinticamente atrapadas que necesitan para atravesar barreras de energa libre favorable para llegar a una ruta cuesta abajo. In vivo, estos pasos pueden ser acelerados por chaperones. Cuando varias molculas se pliegan simultneamente en el mismo compartimento, la superficie de energa libre de plegado puede solaparse con la de la agregacin intermolecular, dando como resultado la formacin de agregados amorfos, oligmeros txicos o fibrillas amiloides ordenado (rojo). Agregacin fibrilar se produce normalmente por polimerizacin dependiente de la nucleacin. Se puede iniciar a partir de intermedios de poblacin durante el plegamiento de novo o despus de la desestabilizacin del estado nativo (estados parcialmente plegadas) y, normalmente, es impedido por chaperonas moleculares. Figura 2 | El ciclo chaperona HSP70.HSP70 cambia entre alta y baja afinidad para los estados desplegado y parcialmente plegado de protenas de unin a ATP y la hidrlisis. Desplegada y sustrato parcialmente plegada (cadena naciente o protena de estrs - desnaturalizado), la exposicin de segmentos peptdicos hidrfobos, se entrega a ATP determinada HSP70 (abierto; baja afinidad por el sustrato con alta en las tasas de y fuera de tasas) por uno de varios cofactores HSP40. La

hidrlisis de ATP, que se acelera por HSP40, resultados en cierre de la tapa un - helicoidal del dominio de unin al pptido (amarillo) y la unin fuerte de sustrato por HSP70 (cerrado; alta afinidad con baja en las tasas de y fuera de las tasas). La disociacin de ADP catalizada por uno de varios factores de intercambio de nucletidos (NEF) se requiere para el reciclaje. La apertura de la tapa un - helicoidal, inducida por la unin del ATP, los resultados en la liberacin de sustrato. Plegable se promueve la agregacin y se evita cuando tanto la tasa de plegado constante (Kfold) es mayor que la constante de asociacin (Kon) para la unin de chaperona (o reconsolidacin) de los estados parcialmente plegados, y Kon es mayor que por la asociacin intermolecular de orden superior agregacin tasa constante K agg (Kfold> K en > Kagg) (particin cintica). Para las protenas mal plegadas que pueblan estados, Kon puede ser mayor que K veces (K = K veces en > Kagg). Estas protenas se estabilizan por HSP70 en un estado no agregado, sino que requieren la transferencia en la jaula chaperonina para el plegado. Despus de la tensin conformacional, K agg puede llegar a ser ms rpido que Kon, y la agregacin se produce (Kagg > Kon = Kfold), a menos que la expresin chapern es inducida a travs de la va de respuesta al estrs. Estructuras en esta figura se refieren a la protena Data Bank (PDB) la adhesin cdigos 1DKG, 1DKZ, 2KHO y 2QXL. Pi, fosfato inorgnico. Figura 3 | plegable en el chaperonina cage.Substrate GroEL.GroES unin a GroEL (tras el cambio de HSP70) puede resultar en desarrollo local de 42. La unin del ATP a continuacin, desencadena una reordenacin conformacional de los dominios apicales GroEL. Esto es seguido por la unin de GroES (formando el complejo cis) y la encapsulacin sustrato para el plegado. Al mismo tiempo, ADP y GroES se disocian de lo contrario anillo de GroEL (trans), lo que permite la liberacin del sustrato que haba sido encerrado en el antiguo complejo cis 32 (omitido de la figura por simplicidad). El nuevo sustrato permanece

encapsulado, libre de doblar, durante el tiempo necesario para hidrolizar los siete molculas de ATP en el complejo cis recin formado ( 10 s). La unin de ATP y GroES al anillo trans provoca la apertura del complejo cis. Un simtrica GroEL - (GroES) 2 complejo puede formar transitoriamente. Modelo estructural se basa en 1AON adhesin AP. Figura 4 | ciclo de pase AT de un sistema HSP90.En sentido horario desde la parte superior izquierda, la unin del ATP al pase del dominio AT N-terminal (ND) de la apo-HSP90 induce un cambio conformacional y el cierre de la tapa de la ATP en la ND. Despus de cierre de la tapa, el NDs dimerize, formando la HSP90 dmero cerrado (abrazadera molecular) con subunidades retorcidos. Esta conformacin metaestable se compromete a la hidrlisis de ATP. Despus de la hidrlisis, la END se disocian. La molcula de sustrato inactivo interacta principalmente con el dominio medio (MD) y se conformacionalmente activa como HSP90 procede a travs de la al ciclo de Pase. Los cofactores Cdc37, salto, AHA1 y p23 acelerar o ralentizar determinadas etapas del ciclo. Estructuras relacionadas con adhesiones AP 2IOQ, 2O1U, 2CG9 y 2O1V. CD, C -terminal AT Pase dominio.

Figura 5 | Organizacin de las vas de acompaantes en las bacterias citosol. Bacteria a la (izquierda) y eucariotas (derecha), chaperones esa funcin en la estabilizacin de polipptidos nacientes en los ribosomas y en el inicio de plegado cooperar con la maquinaria que acta aguas abajo en la realizacin de plegado. El nmero de sustratos que interactan se indica como un porcentaje del proteoma total. La primera categora incluye factores de chaperonas que se unen en estrecha proximidad con el sitio de salida del polipptido ribosmico, tales como el factor desencadenante (TF) en bacterias y complejos HSP70 especializados

(complejo ribosoma-asociado (Rac) en Saccharomyces cerevisiae, MPP11 y HSP70L1 en clulas de mamfero) y de la naciente cadena asociada al complejo (NAC) en eucariotas). Estas chaperonas se unen segmentos de cadena hidrfobos. Los miembros no ribosomas determinada de la funcin como chaperones de segundo nivel para las cadenas nacientes ya la familia HSP70 (DnaK en bacterias y en eucariotas HSC70), co-mediacin o plegado despus de la traduccin. Tambin distribuyen subconjuntos de protenas chaperonas de aguas abajo, tales como la chaperoninas (GroEL en bacterias y en eucariotas TRIC) y HSP9052. Substrato de transferencia HSC70 a la HSP90 se promueve por el HOP protena de acoplamiento. La flecha indica que la va no est bien establecida. Estructuras relacionadas con adhesiones AP 1DKG, 1DKZ, 2KHO, 1W26, 3IYF, 2AVY, 2AW4, 1FXK, 3LKX, 2IOQ, 2QWR y 1NLT. N, protena nativa; GrpE, GrpE protenas, ARNm, ARN mensajero, PFD, pre plegado. La figura 6 | destino de protenas en la red proteostasis.

Figura 5. Un ejemplo de la Hsc70 modelo vinculante y la hidrlisis de ATP en serie para el desmontaje de las jaulas clatrina destacando la secuencia de eventos en una sola triskelion. 1: Auxilin tiene una alta afinidad para las piernas triskelion que forman parte de una jaula de clatrina y se une a una estequiometria de uno por triskelion. 2: Un Hsc70: complejo de ATP se une a la clatrina: complejo auxilin. 3: La interaccin entre el dominio J y Hsc70 de auxilin estimula la hidrlisis de ATP e induce un cambio conformacional en Hsc70, aumentando su afinidad por clatrina. 4: reposiciona Auxilin, y una segunda Hsc70: ATP sea contratado a la clatrina: complejo auxilin. 5: El segundo interacta con Hsc70 de auxilin J dominio, el ATP se hidroliza, y el resultante Hsc70: complejo de ADP se une fuertemente a la clatrina. Despus de la hidrlisis, la auxilin reposiciona de nuevo, y la tercera Hsc70: El ATP se une a la clatrina: complejo auxilin. 6: La hidrlisis de los terceros resultados de ATP en una dbil interaccin entre el triskelion (Hsc70: ADP) 3 complejo y la jaula. El paso limitante de la velocidad es el desmontaje de triskelia que conduce al colapso de la jaula. 7: El Hsc70: ADP complejo tiene una alta afinidad por el triskelia liberado y permanece unida, mientras que la afinidad de triskelia (Hsc70: ADP) 3 para auxilin es baja; la auxilin previamente consolidado es libre ahora para volver a enlazar la jaula de una manera cataltica (8).