Comunicado 65 Tcnico

Bag, RS

ISSN 1982-5382

Dezembro, 2008

Mtodo para classificar bovinos resistentes infeco por Babesia bovis

Magda Vieira Benavides1 Gizele Lima de S2 Ana Maria Sastre Sacco3

A babesiose bovina uma enfermidade caracterizada por prostrao, febre, ictercia, anemia hemoltica, presena ou no de hemoglobinria, sintomatologia nervosa e freqentemente morte. causada por parasitos do gnero Babesia, hemoprotozorios que so transmitidos por carrapatos, sendo identificada e descrita em vrias regies do mundo onde h criao de bovinos com condies climticas adequadas ao desenvolvimento do carrapato, ou seja, reas geogrficas entre os paralelos 32N e 32S. No Brasil, as espcies responsveis pela babesiose bovina so Babesia bovis e Babesia bigemina e so transmitidas pelo carrapato comum dos bovinos, o Rhipicephalus (Boophilus) microplus. A Babesia, junto com o Anaplasma, faz parte do complexo tristeza parasitria bovina. Apesar da presena quase que constante do carrapato em todo o Brasil, a babesiose tem maior importncia em determinadas regies onde o clima varivel ao longo do ano com estaes climticas bem definidas e nem sempre favorveis ao desenvolvimento constante do carrapato vetor, conseqentemente ocorrendo babesiose. Esse quadro normalmente ocorre nas fronteiras sul e oeste do Rio Grande do Sul, onde existem bacias leiteiras utilizando gado europeu, muitas vezes importados de pases livres de carrapato. Atualmente, a pecuria de corte fora do Rio Grande do Sul, a fim de aumentar a produtividade que consistia essencialmente na criao de gado zebuno, est sofrendo transformaes tais como: mudanas no manejo dos campos (introduo de grandes reas de agricultura e de pastagens cultivadas) e dos animais (cruzamentos industriais com introduo de raas europias onde s havia zebunos, aumento da densidade populacional de bovinos) que alteram de maneira importante a estabilidade que era mantida com relao sanidade do rebanho. A importncia econmica da babesiose no desenvolvimento da pecuria determinada por muitos fatores, dentre os quais perdas por mortes, menor produo de carne e leite em animais doentes ou em recuperao, custos com quarentenas, tratamentos, manejos especiais, abortos e menor fertilidade temporria nos touros resultante da febre (LOMBARDO, 1976; McCOSKER, 1981). Segundo estudos realizados no Brasil, Argentina e Uruguai, os produtores apontam os carrapatos e a Tristeza Parasitria Bovina (TPB) como dos maiores problemas sanitrios dos rebanhos (MADRUGA et al., 1986; SPTH; MANGOLD, 1986), sendo que a babesiose provoca perdas de 23 a 45% no ganho de peso dos animais (SOLARI et al., 1992). A grande limitao no controle do problema TPB se encontra no fato de que os mtodos de preveno (pr-imunizao e vacinas atenuadas) consistem de imunizao atravs da infeco, ou seja, inoculao do agente vivo atravs de sangue, o que alm de apresentar risco de doena, tambm pode disseminar outros agentes etiolgicos, podendo trazer srias conseqncias sanitrias aos rebanhos.

A resistncia de indivduos frente s infeces provocadas por parasitos tem sido sugerida como possvel alternativa para amenizar o problema. H evidncias de que a caracterstica de resistncia seja transmitida de gerao em gerao, e por isso de interesse no estudo de doenas veterinrias de alta mortalidade e morbidade. At que sejam conhecidos e validados resultados de marcadores genticos que indiquem que bovinos so mais resistentes babesiose atravs do DNA, mtodos de identificao experimentais so importantes para pesquisas na rea da babesiose bovina. Atualmente, a nica possibilidade de identificao dos fentipos (resistente, intermedirio e suscetvel) em animais atravs da exposio dos bovinos ao parasito, o que ocorre de forma descontrolada quando h surtos de babesiose. Como os trabalhos de pesquisa devem ser realizados sob condies controladas e com segurana, foi desenvolvida uma metodologia atravs da inoculao de B. bovis em bovinos. Portanto, o objetivo deste trabalho descrever a metodologia de desafio para a identificao de bovinos resistentes ou suscetveis primoinfeco por B. bovis para fins experimentais. Os fentipos resistente, intermedirio e suscetvel esto relacionados rapidez e durao da resposta imune do bovino frente a B. bovis. Uma rpida ativao do sistema imune ser benfica ao hospedeiro, no entanto o prolongamento desta resposta pode, por outro lado, prejudicar o bovino, podendo lev-lo a bito. O principal rgo responsvel pela imunidade frente babesiose o bao, devido a interao de clulas esplnicas tais como macrfagos e linfcitos no desenvolvimento de mecanismos que visam a remoo do parasito no organismo hospedeiro. Alm disso, os macrfagos secretam fatores txicos (NO e O2) e molculas chamadas citocinas (IFN, IL12, IL18 e TNF) que regulam a resposta inflamatria. Tais fatores e molculas tambm so responsveis pela patologia clnica, uma vez que, durante a resposta imune, as hemcias, tanto parasitadas como sadias, acabam sendo danificadas.

Metodologia
1. Cepas. As cepas virulentas de B. bovis so mantidas em nitrognio lquido e sua reativao realizada em terneiro sensvel e esplenectomizado. A terminologia sensvel significa que o animal nunca teve contato direto com o carrapato vetor. Como o bao participa ativamente da resposta infeco por B. bovis necessria a remoo do rgo para que a infeco seja efetiva. O terneiro infectado com cepa virulenta de B. bovis e quando este apresentar parasitemia, o sangue parasitado deste animal inoculado em bovinos sensveis experimentais (inculo de 1 x 107 de hemcias parasitadas via subcutnea).

Magda Vieira Benavides - Zootecnista, Dr., Pesquisadora da Embrapa Pecuria Sul, Bag/RS, mbenavid@cppsul.embrapa.br Gizele Lima de S - Biloga, gezelha@hotmail.com Ana Maria Sastre Sacco - Veterinria, Dr., Pesquisadora da Embrapa Pecuria Sul, Bag/RS, anasacco@cppsul.embrapa.br

Mtodo para classificar bovinos resistentes infeco por Babesia bovis

2. Animais. essencial que os animais doadores (terneiros esplenectomizados) sejam livres de outras enfermidades para que no ocorra a inoculao de outros patgenos nos animais receptores e sensveis, caso contrrio podero reagir inoculao, uma vez que j possuem imunidade contra o inculo. tambm imprescindvel que os animais receptores sejam sensveis. Caso contrrio, a identificao dos fentipos no ser confivel, uma vez que reaes em animais j infectados mascaram a resposta do indivduo, podendo classific-lo como resistente quando na realidade esta resistncia poder ser devida imunidade adquirida nas possveis infeces anteriores. 3. Monitoramento. Antes da inoculao com B. bovis, so realizadas trs coletas nos doadores e receptores para a determinao de temperatura retal e volume globular, e uma coleta de sangue com anti-coagulante para a determinao parasitemia e sangue sem anti-coagulante para sorologia antiB. bovis, anti-B. bigemina e anti-Anaplasma marginale. O objetivo destas coletas pr-desafio determinar os parmetros normais de temperatura e de volume globular e obter a confirmao de negativa de parasitemia e de sorologia para B. bovis para os doadores e receptores. No desafio, o aumento de temperatura retal e a queda de volume globular so calculados como porcentagem em relao aos parmetros normais. O monitoramento do desafio realizado do 4o. ao 30o. dia ps-inoculao e neste perodo so realizadas coletas dirias para a determinao de temperatura retal, volume globular e parasitemia. 4. Critrios de classificao em fentipos. Atravs do desafio so distinguidas trs categorias de animais quanto a resposta frente ao desafio: (1) animais resistentes (ou refratrios) infeco por Babesia bovis: animais com queda de volume globular de at 21,5%, leve parasitemia (deteco de presena do parasito) e sem necessidade de tratamento veterinrio especfico para babesiose; (2) animais de fentipo intermedirio: bovinos com queda de volume globular de >21,5%, parasitemia e sem necessidade de tratamento veterinrio especfico para babesiose, e (3) animais de fentipo suscetveis: animais com queda de volume globular de >21,5%, parasitemia e com necessidade de tratamento veterinrio especfico para babesiose. Dentre os parmetros observados, a queda de volume globular est estreitamente associada com os fentipos de resistente, intermedirio e suscetvel. A deciso de tratamento deve estar baseada em quedas contnuas e bruscas de volume globular, nmero de dias com parasitemia positiva e alteraes comportamentais como apatia, perda de condio corporal e alteraes nervosas. A necessidade de tratamento veterinrio especfico o nico critrio usado para classificar um indivduo como suscetvel. Os animais de fentipo intermedirio apresentaram uma resposta imune mais eficiente, que os permitiu reestabelecer seus parmetros normais sem a necessidade de tratamento veterinrio especfico. A correta classificao dos animais em fentipos somente possvel quando observada a resposta primria, objetivo principal da metodologia. Tambm imprescindvel a manuteno de potreiros de isolamento, reas livres do carrapato vetor Rhipicephalus (Boophilus) microplus para a manuteno dos animais sensveis. Note-se que em nenhum momento usado desafio com carrapato, uma vez que seria difcil quantificar a carga parasitria destes animais em relao a B. bovis. A Figura 1 mostra os passos das etapas do desafio e a Tabela 1 mostra os resultados obtidos em 240 bovinos que foram classificados em trs fentipos (resistentes, intermedirios e suscetveis) conforme suas reaes ps-inoculao.

A principal vantagem desta metodologia a possibilidade de monitorar cuidadosamente e classificar bovinos em funo de sua resposta frente infeco por B. bovis para fins experimentais. Isto no era possvel antes a menos que ocorressem surtos de babesiose nos rebanhos, o que seria extremamente perigoso uma vez que em surtos de campo no so conhecidos os inculos e a possibilidade de bito de animais seria extremamente alta. No entanto, no desnecessrio ressaltar que esta metodologia experimental e no adequada a trabalhos de campo. Com esta metodologia de monitoramento da primo-inoculao dos hospedeiros possvel classificar bovinos como resistentes, intermedirios e sensveis infeco por B. bovis. necessrio esclarecer que esta metodologia experimental e no se destina a uso indiscriminado como forma de selecionar animais por meio de fentipos mas sim de selecion-los quando obtivermos marcadores moleculares associados resistncia frente B. bovis. A seleo de animais mais resistentes babesiose por meio de marcadores moleculares no pretende superar completamente as limitaes atuais impostas pela babesiose, no entanto, permitir que produtores rurais das mais diversas regies endmicas, beneficirios diretos dos resultados desta pesquisa, reduzam perdas produtivas e mortalidade nos seus rebanhos. Tambm, um menor nmero de tratamentos veterinrios resultar em produtos de origem animal mais saudveis e menor custo de produo.

Referncias
BENAVIDES, M. V.; SACCO, A. M. S. Differential Bos taurus cattle response to Babesia bovis infection. Veterinary Parasitology, Amsterdam, v. 150, n. 1-2, p. 54-64, Nov. 2007. LOMBARDO, R. A. Socioeconomic importance of the tick problem in the Americas. Pan American Health Organization Scientific Publication, v. 316, p. 79-89, 1976. McCOSKER, P. J. The global importance of babesiosis. In: RISTIC, M.; KREIER, J. P. Babesiosis. New York: Academic Press, 1981. p. 1-24. SOLARI, M. A.; NARI, A.; CARDOZO, H. Impact of Babesia bovis and Babesia bigemina on the production of beef cattle in Uruguay. Memrias do Instituto Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, v. 87, p. 143-149, 1992. Supplement III. SPTH, E. J. A.; MANGOLD, A. J. Algunas caracteristicas de produccion y sanidad de rodeos de ganado bovino de carne en el Sudeste de Salta y norte de Tucumn. Revista Argentina de Produccin Animal, Buenos Aires, v. 6, n. 1-2, p. 101-112, 1986.

Comunicado Tcnico, 65

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Presidente: Alexandre Varella Secretrio-Executivo: Ana Maria Sastre Sacco Membros: Eduardo Salomoni, Eliara Freire Quincozes, Graciela Olivella Oliveira, Joo Batista Beltro Marques, Magda Vieira Benavides, Naylor Bastiani Perez. Superviso editorial: Comit Local de Publicaes - Embrapa Pecuria Sul Reviso de texto: Comit Local de Publicaes - Embrapa Pecuria Sul Tratamento das ilustraes: Kellen Pohlmann Editorao eletrnica: Kellen Pohlmann

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