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Pharmacie 1ere anne Travaux pratiques de chimie analytique

2002-2003

Spectrophotomtrie Colorimtrie
INTRODUCTION ...................................................................................................................... 1 RAPPELS THEORIQUES ........................................................................................................... 2 DEFINITIONS .......................................................................................................................... 3 LOI DE BEER-LAMBERT ......................................................................................................... 5 METHODES DANALYSE SPECTROPHOTOMETRIQUE................................................................ 6 Mthode de ltalon externe ............................................................................................. 6 Mthode de ltalon interne.............................................................................................. 6 Mthode de la droite dtalonnage................................................................................... 7 PARTIE PRATIQUE .................................................................................................................. 8 2+

Dosage spectrophotomtrique du Fe par lorthophnathroline......................................................................................................... 8


Procdure ...................................................................................................................... 8 Rapport ......................................................................................................................... 9

Dtermination de lacide phosphorique dans le coca-cola10


Prparation des solutions ............................................................................................ 10 Dosage colorimtrique................................................................................................ 11 Rapport ....................................................................................................................... 11

Introduction Parmi les nombreuses mthodes instrumentales utilises pour dterminer la concentration dune espce chimique en solution, les mthodes les plus courantes sont celles bases sur la mesure de lintensit dabsorption ou dmission (spectrophotomtrie) dun rayonnement lectromagntique par les espces doser. Les rayonnements les plus souvent utiliss sont lultraviolet (UV), la lumire visible et linfrarouge (IR). Le domaine du visible et de lUV a t abondamment tudi et ce depuis longtemps. Mais sil est indispensable pour une approche exprimentale de la nature de la liaison chimique, il est pauvre en information structurale. Son emploi est de plus en plus rserv lanalyse quantitative via la loi de BeerLambert.

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Domaines spectraux des ondes lectromagntiques Les longueurs dondes des couleurs du spectre de la lumire visible sont indiques dans le schma suivant :
Rouge 650-750 nm

Orange 600-650 nm

Violet 400-450 nm

Jaune 550-600 nm

Bleu 450-500 nm

Vert 500-550 nm

Lorsquun compos met, par exemple, une lumire dont la longueur donde vaut 425 nanomtre (nm), la couleur observe, violette, est la couleur mise. Pour un compos qui absorbe la lumire cette longueur donde, la coloration rsultante est celle obtenue par addition de toutes les couleurs sauf le violet. Lil peroit cette coloration comme tant la complmentaire (cest--dire diamtralement oppose : jaune dans ce cas). Ainsi lion chromate, CrO42- qui absorbe dans le violet, apparat comme jaune. Rappels thoriques Les mthodes spectroscopiques sont des techniques bases sur linteraction entre un photon et un atome ou plus gnralement une molcule. Lnergie du photon est absorbe par une molcule (ou un atome) se trouvant dans son tat fondamental (niveau dnergie le plus bas) et se retrouve alors dans un tat excit dnergie plus leve. Selon lnergie du photon, plusieurs types de processus dexcitation peuvent tre engags. La mcanique quantique nous a appris les sauts dnergies (passage dun tat quantique un autre) sont quantifis.

Etat excit h E h Etat fondamental Absorption Emission

Schma nergtique des phnomnes dabsorption lectronique et dmission de radiation lectromagntique par la matire.
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La diffrence dnergie entre les deux tats, E, est lie la frquence du rayonnement par la relation suivante :

E = h
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o h est la constante de Plank (6.62610-34 Js) et est la frquence de la radiation. Celle-ci est relie la longueur donde et au nombre donde par la relation suivante :

o c est la clrit de la lumire (3108 ms-1). Selon le domaine considr, on utilise par commodit des units diffrentes pour exprimer le rayonnement lectromagntique. En UV on indique la longueur donde en nm alors quen IR on utilisera le nombre donde en cm-1. Labsorption de photons se traduit par des transitions dlectrons engags dans les orbitales molculaires situes la frontire entre les derniers niveaux occups de ltat fondamental et les premiers niveaux non occups des tats excits (transitions vibroniques). Chaque transition est caractrise la fois par sa longueur donde () et par son coefficient dabsorption molaire (). Il existe plusieurs types de transitions, dsigns par la nature (, , d, n, *, *) des orbitales molculaires engages dans le processus dmission. Les principales transitions lectroniques sont les suivantes : - Transition * (UV lointain) - Transition n* (UV) - Transition n* (UV) - Transition * (UV proche) - Transition dd. (Visible) Les transitions d-d sont responsables de la coloration de nombreux complexes. Aprs ltape dabsorption, lnergie capte peut tre restitue soit par un processus non radiatif (chaleur), soit par une mission de photons (fluorescence et phosphorescence). Dfinitions On dfinit comme groupement chromophore, la fonction chimique ou la partie de la molcule qui est responsable dune absorption caractristique. Pour une srie de composs possdant le mme chromophore, la position et lintensit des bandes dabsorption restent sensiblement constantes, sauf sil y a accumulation de plusieurs chromophores proximit les uns des autres. Lorsque les chromophores sont isols, cest--dire spars par au moins deux liaisons simples, on observe uniquement la superposition des effets individuels. La polarit du solvant peut modifier la position, lintensit et la forme des bandes dabsorption des composs en solution. Ces effets sont dfinis comme suit : - Effet hypsochrome : Diminution de la longueur donde. - Effet bathochrome : Augmentation de la longueur donde. - Effet hyperchrome : Augmentation du coefficient dabsorption molaire. - Effet hypochrome : Diminution du coefficient dabsorption molaire. Par exemple, pour la transition n* du carbonyle des ctones, lutilisation dun solvant polaire provoque un effet hypsochrome. Avant absorption, la polarisation de la liaison C-O sera dautant plus stabilis par la prsence dun solvant polaire. Aprs absorption, quand ltat

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excit est atteint, la cage de solvant qui entoure le carbonyle na pas eu le temps de se rorienter pour stabiliser la situation.

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Quelques exemples de bandes dabsorption dans lUV caractristiques de chromophores: Chromophore max max (nm) NH2 (amine) 195 3000 NO2 (nitro) 210 3000 N=O (nitroso) 300 100 C=O (carbonyle) 275 20 Loi de Beer-Lambert Le principe de lutilisation de la spectrophotomtrie pour lanalyse quantitative est bas sur le fait que lintensit dabsorption (ou dmission) est fonction de la concentration de la particule qui absorbe (ou qui met) de la lumire.

I0

L u m i r e in c id e n t e

L u m i r e t r a n s m is e

l C h e m in o p t iq u e

Lorsque dune lumire monochromatique dintensit Io traverse un milieu homogne, lintensit de la lumire mergente I dcrot selon une fonction exponentielle lorsque lpaisseur l du milieu absorbant augmente. Si on tudie principalement des solutions, la loi de Beer fait intervenir les concentrations et sexprime sous la forme suivante :

log

I I

= cl = D

o est le coefficient dextinction molaire (lmol-1cm-1), c est la concentration de la solution (mol-1l), l est le chemin optique (cm). Le rapport

I I

est appel la transmission (aussi


o

appele transmittance et note T), celle-ci est relie la densit optique, D, (aussi appele absorbance ) par la relation :
D = log 1 T

Un spectre dabsorption (ou dmission) prsente la variation de labsorption (ou dmission) en fonction de la longueur donde.

Travaux pratiques de chimie analytique 1er Anne de pharmacie Exemple de spectre dabsorption dans UVvisible. Labsorption est forte pour les longueurs donde comprises entre 300 et 400 nm, mais faible pour les longueurs donde suprieures 500 nm.

300 250 200

/m s

-1 -1

150 100 50 0 300 400 500 600 700 800

/ nm

Mthodes danalyse spectrophotomtrique Mthode de ltalon externe On compare la densit optique (D) dune solution de concentration connue (c) la densit optique (Dx) de concentration inconnue (cx). La loi de Beer-Lambert nous indique que :

D = c l et Dx = c x l
Dx c x l = do , ce qui conduit a cl D

Cx =

Dx c D

On pourrait simplement dterminer la concentration par mesure de la densit optique car

c=

D ; mais ceci suppose que est pralablement connu avec prcision. l

Mthode de ltalon interne Le principe consiste mesurer la densit optique Dx de la solution de concentration cx inconnue et de volume Vx. Dans un second temps , on ajoute un volume v (qui doit tre faible par rapport a Vx) dune solution standard de concentration cs. La densit optique Dxs est alors mesure.
Dx = c x l (1) et Dxs = c xs l (2) La volume rsultant (Vx+ v), contient les moles de la solution inconnue et celles contenues dans le volume ajout de la solution standard, soit Vxcx + vcs. La concentration cxs vaut V c + v c s donc Cxs = x x , en reportant cette expression de cxs dans lquation (2), Vx + v V c + v c s (3) on obtient : Dxs = l x x Vx + v Des quations (1) et (3), on tire lexpression de la concentration inconnue cx :

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cx = cs

Dxs Vx ( D x Dxs )

v D x

Les deux mthodes dcrites ci-dessus supposent que la loi de Beer-Lambert est rigoureusement respecte, ce qui nest pas le cas pour de trs fortes concentrations.

Mthode de la droite dtalonnage Cette mthode consiste mesurer la densit optique des solutions contenant des quantits connues et croissantes de llment doser M. On trace la droite dtalonnage D = f(concentration de M). On dtermine ensuite la densit optique de la solution de concentration inconnue. Cette valeur, porte sur le graphique, permet de dterminer la concentration de la substance inconnue.

Travaux pratiques de chimie analytique 1er Anne de pharmacie Partie Pratique

Dosage spectrophotomtrique du Fe2+ par lortho-phnathroline


Le Fe2+ ragit avec lo-phnanthroline pour former un complexe rouge orang :
N 3 N N N 2+ N Fe N N N

Fe

2+

Lintensit de la coloration est indpendante de lacidit dans la gamme de pH allant de 2 9. La prsence ventuelle de Fe3+ est vite par sa rduction par le chlorure dhydroxylammonium.

Procdure Prparer les solutions suivantes : - O-phnanthroline monohydrate 0.25 %dans leau - Actate de sodium 2M - Chlorure dhydroxylammonium 10% dans leau Pour la courbe dtalonnage, prparer, partir du sel de Mohr - (NH4)2 Fe(SO4)26 H2O une solution 10-3 (solution mre) dans H2SO4 1M. Dans des ballons jaugs de 100 ml numrots de 1 7, mettre les volumes de ractifs indiqus dans la table suivante, et ajuster au trait de jauge.
Solution mre # 1 2 3 4 5 6 7 [ml] 2 3 4 5 6 7 8 Chlorure dhydroxylammoniu m 10% [ml] 10 10 10 10 10 10 10 Actate de sodium 2M [ml] 2 3 4 5 6 7 8 O-phnanthroline [ml] 8 8 8 8 8 8 8 Concentration finale [moll-1] 210-5 310-5 410-5 510-5 610-5 710-5 810-5

Aprs ajustement au trait de jauge, mlanger soigneusement et laisser reposer pendant 5 10 minutes. Entre-temps, prparer la rfrence et linconnue, puis mesurer la densit optique 510 nm par rapport la solution de rfrence. Prparer dans un ballon jaug de 100 ml la solution de rfrence en y versant 10 ml de chlorure dhydroxylammonium 10%, 5 ml de H2SO4 1M, 5 ml dactate de sodium 2M, 8 ml do-phnanthroline 0.25% et ajuster au trait de jauge avec de leau dminralise. Prparer dans un ballon jaug de 100 ml la solution de concentration inconnue en mettant un volume environ 5 ml de celle-ci et autant des autres ractifs que pour la solution de rfrence. Si la densit optique de la solution de concentration inconnue est infrieure la
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Travaux pratiques de chimie analytique 1er Anne de pharmacie solution #2 ou suprieure la solution #6, recommencer en prlevant plus ou moins de la solution de concentration inconnue.

Rapport 1 - Tracer la courbe dtalonnage sur papier millimtr. 2 - Dterminer la concentration en Fe2+ de la solution de concentration inconnue. 3 - Indiquer le coefficient dextinction molaire du complexe 510 nm. 4 - Dfinir le rle de lactate de sodium dans cette manipulation. 5 - Indiquer si la loi de Beer-Lambert est respecte dans la gamme de concentration tudie. Dans le cas contraire, indiquer o elle se situe.

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Dtermination de lacide phosphorique dans le coca-cola


Daprs les fabricants, le cola-coca est compos de sucre, deau, dacide carbonique, de colorant (caramel), dacide minral, de cafine et darmes naturels. Lacide minral est vraisemblablement lacide ortho-phosphorique (H3PO4). Le but de cette manipulation est de dterminer la teneur en acide o-phosphorique de cette boisson. Deux possibilits sapprtent pour cette analyse quantitative : - la titrimtrie par une base forte avec dtection potentiomtrique. La mise en vidence du point dquivalence par un indicateur color est gne par la forte coloration de cette boisson. - le dosage par colorimtrie de lacide o-phosphorique. Cette mthode offre lavantage dune plus grande sensibilit par rapport la titrimtrie. Par consquent, elle ncessite un volume moins grand dchantillon et donc une coloration moins importante qui ne risque pas de gner lanalyse. En milieu acide, lo-phosphate forme avec le Mo(IV) un complexe color jaune :

H3PO4+ 12 (NH4)2MoO4+ 21 H

(NH4)3PO4 .12 MoO3 + 21 NH4 + 12 OH2


(NH4)3PO4 .12 MoO3

Le Mo(IV) dans le phosphomolybdate,

ou sous la forme anionique

, est partiellement rduit en Mo(V) par lacide 1-amino-2-naphtol-4-sulfonique. Il en rsulte un complexe bleu appel bleu de molybdne dont la coloration est due au transfert de charge entre Mo(V) et le Mo(VI). Lacide 1-amino-2-naphtol-4-sulfonique est oxyd en acide 1,2-naphtaquinose-4-sulfonique. Le phosphomolybdate appartient la famille des [Xn+ Mo12O40]-(8-n) htropolymolybdates o X est P(V), As(V), Si(IV),...On voit que ces htroatomes Xn+ constituent une interfrence pour le dosage de PO43-.

PMo12O40-3

Prparation des solutions Solutions de coca-cola A cause dune quantit apprciable dacide carbonique dans le coca-cola, il est impossible de pipetter un volume prcis de cette boisson, cest pourquoi il faut pralablement liminer le CO2. Dans un bcher dau moins 250 ml, mettre 50 ml de coca-cola pour le dgazer pendant 5 10 minutes dans un bain ultra-sons. Attention ! ! ! il y a une forte effervescence au dbut du dgazage, couper le bain ultra-sons si besoin dans les premires minutes. Dans 4 ballons jaugs de 100 ml marqus X2 , X3 , X4 et X5 placer respectivement 2, 3, 4 et 5 ml de coca-cola dgaz et complter au trait de jauge avec de leau dminralise. Solutions standards Prparer deux solutions mres de 10-3 et 10-4 M de PO43- au moyen de Na2HPO412 H2O (358.14 gmol-1). Solution de molybdate Dans un ballon jaug de 250 ml, introduire 50 ml deau dminralise et ajouter sous agitation et lentement 34 ml de H2SO4 98%. Refroidir cette solution la temprature ambiante. En parallle, peser 6.25 g de molybdate dammonium (NH4)6Mo7O244H2O et dissoudre ce sel dans 100 ml deau dminralise. Verser cette solution de molybdate dans le

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Travaux pratiques de chimie analytique 1er Anne de pharmacie ballon contenant la solution dacide sulfurique et complter au trait de jauge avec de leau dminralise. Bien mlanger. Solution rductrice Dans un ballon jaug de 250 ml, dissoudre 25.7 g de Na2S2O5 dans environ 60 ml deau dminralise. Ajouter 12.8 g de Na2SO410 H2O et 0.47 g dacide 1-amino-2-naphtol-4sulfonique et complter au trait de jauge avec de leau dminralise. Laisser agiter pendant 3 heures puis filtrer et garder la solution au froid. Une demi-heure avant le dosage, remettre temprature ambiante la solution et conserver au froid aprs usage.

Dosage colorimtrique Dans 10 tubes gradus de 10 ml numrots de 1 10, ajouter les ractifs selon les quantits indiqus dans le tableau suivant et complter 10 ml avec de leau dminralise. Bien mlanger et laisser la coloration se dvelopper pendant 15 minutes. Rgler le zro (D ou E = 0, T = 100) du colorimtre au moyen du blanc (tube #1).
Solut de PO43- Coca-cola Solut de Molybdate Solut rductrice Densit optique [ml] [ml] [ml] [ml] (D) 10-4 M 1 5 (X5) 0.4 blanc 2 2.5 1 0.4 3 5.0 1 0.4 4 7.5 1 0.4 -3 10 M 5 1.0 1 0.4 6 1.5 1 0.4 7 5 (X2) 1 0.4 8 5 (X3) 1 0.4 9 5 (X4) 1 0.4 10 5 (X5) 1 0.4 # 1 - Etablir la courbe dtalonnage avec les solutions #2 #6 o D = f([PO43-]) pour = 400 nm. 2 - Mesurer la densit optique des solutions #7 #10.

Rapport 1 - Dterminer la concentration totale en phosphate dans les solutions #7 #10 et en dduire la concentration totale en phosphate dans le coca-cola. 2 - Connaissant le pH du coca-cola (2.46) et sa concentration totale en phosphate, dterminer la concentration des diffrentes espces o-phosphates dans le coca-cola et leur valeur relative (en %). Constante acido-basique de H3PO4 : pka1 = 2.2, pka2 = 7.2, pka3 = 12.4. 3 - Calculer le pH dune solution aqueuse de H3PO4 de concentration gale celle que vous avez trouv par colorimtrie. 4 - Sachant que la solubilit du CO2 dans leau est de 1.45 gl-1, calculer le pH dune solution aqueuse sature de CO2. Constante acido-basique de H2CO3 : pka1 = 6.32, pka2 = 10.22. 5 - Sur la base des rsultats aux questions prcdentes et de la valeur du pH exprimentale, indiquer si lacidit de H2CO3 contribue de faon significative lacidit du coca-cola. Peuton supposer la prsence dun acide autre que H3PO4 ?

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