CROMOSOMAS HUMANOS: CARIOTIPO, MICROSCOPIA

1. Defina los siguientes conceptos Sitios frgiles : Los sitios frgiles comunes se definen como regiones del cromosoma eucariota con tendencia a sufrir fracturas o quiebres frente a sustancias inductoras adicionadas al medio de cultivo linfocitario como la 5azacitidina. Actualmente en humanos y animales domsticos las regiones de fragilidad cromosmica han sido correlacionadas con heredopatologas diversas (sndrome de retardo mental, paraqueratosis hereditaria, sndrome de calvicie en terneros, alteraciones de la fertilidad). Heteromorfismos cromosmicos: Una variante morfolgica normal o una variante en tincin de un cromosoma. Par de cromosomas homlogos que muestran alguna diferencia en forma o tamao. Heterocromatina constitutiva : Muy condensada dentro de las clulas del cuerpo. A esta cromatina pertenece la mayora de los brazos de los cromosomas acrocentricos y los sectores que poseen ADN satlite. Fragmento minuto acntrico: Fragmento que resulta de dos roturas en un mismo cromosoma, en el que los fragmentos terminales se unen y excluyen al segmento separador (delecin intersticial). El fragmento que se elimina carece de centrmero, por lo que se denomina acntrico Polimorfismo de los satlites: Son estructuras que tienen una propiedad especial, este polimorfismo de satlites se encuentra en los cromosomas acrocntricos: 13, 14, 15, 21 y 22 se tien mediante bandeo NOR y Q. Polimorfismo del cromosoma Y: Es la porcin no recombinable del cromosoma humano Y. El mantenimiento de extendidas caractersticas de haplotipos de particulares regiones. Estos revelan trazos de migraciones de colonizacin de los humanos anatmicamente modernos en el continente euroasitico. Gaps

La replicacin del ADN ocurre durante la interfase. La sntesis tiene lugar durante una parte limitada, denominada periodo S o sintetico, que a su vez es precedido por dos espacios (GAPS) o periodos de la interfase (G1 y G2) en los que no hay sntesis de ADN. Endoreduplicacin Existe una variante de la mitosis que no incluye la divisin celular. El proceso, que se denomina endomitosis o endoreduplicacin, produce clulas con copias del mismo cromosoma en el mismo ncleo. Las clulas generadas por la endomitosis se llaman endoploides.

2. Mencione la importancia del uso de los siguientes reactivos en los cultivos celulares para obtener cromosomas in vitro. Hidrxido de Bario En el bandeo C, con un tratamiento con cido clorhdrico (HCl), Hidrxido de Bario (Ba(OH)2) y desnaturalizacin al calor se sueltan todas las protenas asociadas al ADN excepto las ms empaquetadas. Este bandeo es muy til cuando se sospechan daos en las zonas centromricas como inversiones pericntricas y para la bsqueda de polimorfismos de heterocromatina de los cromosomas autosmicos 1, 9,16 y la parte distal del brazo largo del cromosoma Y. Bromodeoxiuridina (BrdU) Ayuda a evidenciar las zonas de replicacin tarda como zonas claras. Para tal fin se utilizan reactivos afines a la Timina como la Bromodesoxiuridina; la cual es un reactivo anlogo de la timina que desplaza dicha base en la sntesis del ADN Mostaza de quinacrina En el bandeo Q se usa mostaza de quinacrina (un tinte de acridina que se une al ADN por intercalacin o por unin inica externa) y estimulando los cromosomas con una luz ultravioleta, se ponen de manifiesto bandas fluorescentes de idntico patrn al de las bandas G excepto en las zonas heterocromticas de los cromosomas 1, 9 y 16,en los satlites de los acrocntricos y en la porcin distal del cromosoma Y, que dan una tincin variable. Metrotexato

La exposicin a metrotexato da lugar a una acumulacin de clulas que tienen copias adicionales del gen DHER. Las copias pueden ser transportadas como ristras extracromosomicas, en forma de cromosomas diminutos dobles, o pueden integrarse en el genoma en el sitio de uno de los alelos DHFR. Diepoxibutano (DEB) Ayuda a ver las rupturas cromosmicas en cultivo de linfocitos.

3. Explique cual es el fundamento y para que se usan las tcnicas y marcadores moleculares. PCR: Reaccin en cadena de la polimerasa, conocida como PCR por sus siglas en ingls (Polymerase Chain Reaction), es una tcnica de biologa molecular desarrollada en 1986 por Kary Mullis, cuyo objetivo es obtener un gran nmero de copias de un fragmento de ADN particular, partiendo de un mnimo; en teora basta partir de una nica copia de ese fragmento original, o molde. Esta tcnica sirve para amplificar un fragmento de ADN; su utilidad es que, tras la amplificacin, resulta mucho ms fcil identificar con una muy alta probabilidad virus o bacterias causantes de una enfermedad, identificar personas (cadveres) o hacer investigacin cientfica sobre el ADN amplificado. Estos usos derivados de la amplificacin han hecho que se convierta en una tcnica muy extendida, con el consiguiente abaratamiento del equipo necesario para llevarla a cabo. RFLP:

En biologa molecular, el trmino polimorfismo de longitud de los fragmentos de restriccin o RFLP, (comnmente pronunciado "RIF-labios") se refiere a una diferencia entre dos o ms muestras de homlogos molculas de ADN derivados de las diferentes ubicaciones de sitios de restriccin, y una tcnica de laboratorio relacionados por el cual estos segmentos pueden ser distinguidos. In RFLP analysis the DNA sample is broken into pieces (digested) by restriction enzymes and the resulting restriction fragments are separated according to their lengths by gel electrophoresis . En el anlisis de RFLP de la muestra de ADN se rompe en pedazos (digerida) por las enzimas de restriccin y los fragmentos de restriccin resultantes son separados en funcin de su longitud por electroforesis en gel. Although now largely obsolete, RFLP analysis was the first DNA profiling technique inexpensive enough to see widespread application. Aunque ahora en

gran medida obsoleta, el anlisis de RFLP es el ADN primera perfiles tcnica de bajo costo lo suficiente para ver una amplia aplicacin. In addition to genetic fingerprinting, RFLP was an important tool in genome mapping , localization of genes for genetic disorders , determination of risk for disease, and paternity testing . Adems de la caracterizacin gentica, RFLP es una herramienta importante en la cartografa del genoma, la localizacin de los genes de trastornos genticos, la determinacin del riesgo para la enfermedad, y la prueba de paternidad.

SSR SSR (Short Sequence Repeat) o STR (Short Tandem Repeat) por sus siglas en ingls, denominados microsatlites en castellano, son secuencias de ADN en las que un fragmento (cuyo tamao va desde uno hasta seis nucletidos) se repite de manera consecutiva. La variacin en el nmero de repeticiones crea diferentes alelos los cuales se distinguen entre s por la longitud total del fragmento. Generalmente se encuentran en zonas no codificantes del DNA. Son neutros, codominantes y poseen una alta tasa de mutacin, lo que los hace muy polimrficos. A pesar de esto, la variabilidad que presentan til para su uso como marcadores moleculares, es respecto al nmero de repeticiones, no de la secuencia repetida. Son utilizados como marcadores moleculares en una gran variedad de aplicaciones en el campo de la gentica como parentescos y estudios de poblaciones. ALFP:

Tcnica de AFLP, siglas en ingles de Amplified Fragment Length Polymorphism, consiste en la combinacin de los mtodos de PCR y anlisis de fragmentos de restriccin, con el fin de detectar polimorfismos debidos a modificaciones en la secuencia de ADN que comprende los sitios de corte de las enzimas de restriccin. Este cambio se percibe como un patrn diferente, en nmero y tamao, de bandas generadas.

SOUTHERN BLOT

Southern blot, hibridacin Southern o, simplemente, Southern, es un mtodo de biologa molecular que permite detectar la presencia de una secuencia de ADN en una mezcla compleja de este cido nucleico. Para ello, emplea la tcnica de electroforesis en gel de agarosa con el fin de separar en base a la longitud de los fragmentos de ADN y, despus,

una transferencia a una membrana en la cual se efecta la hibridacin de la sonda. []Su nombre procede del apellido de su inventor, un bilogo ingls llamado Edwin Southern.

FISH La Hibridizacin in situ con Fluorescencia ( FISH ) es una nueva tecnologa de Citogentica Molecular que utiliza fragmentos de ADN (llamados sondas) para detectar o confirmar anomalas gnicas o cromosmicas que generalmente estn ms all del poder de resolucin de la Citogentica Clsica de rutina, brindando resultados de 3 a 5 das. MICROARRAYS Un chip de ADN (del ingls DNA microarrays) es una superficie slida a la cual se unen una serie de fragmentos de ADN. Las superficies empleadas para fijar el ADN son muy variables y pueden ser vidrio, plstico e incluso chips de silicio. Los arreglos de ADN son utilizadas para averiguar la expresin de genes, monitorizndose los niveles de miles de ellos de forma simultanea. La tecnologa del chip de ADN es un desarrollo de una tcnica muy usada en biologa molecular, el Southern blot. Con esta tecnologa podemos observar de forma casi instantnea la presencia de todos los genes del genoma de un organismo. De tal forma que suelen ser utilizados para identificar genes que producen ciertas enfermedades mediante la comparacin de los niveles de expresin entre clulas sanas y clulas que estn desarrollando ciertos tipos de enfermedades.