Vous êtes sur la page 1sur 4

Paillasse Biochimie POS No: 1

LABORATOIRE DE LHPITAL PROTESTANT DE NGAOUNDR

PROCEDURE OPERATIONELLE STANDART (POS) DU DOSAGE QUANTITATIF DE LHEMOGLOBINE GLYQUEE(HBA1C) PRESENTE DANS LE SANG SELON LANALYSEUR DCA 2000+ SYSTEMS

Date

de

conception: 2/07/2013 Version: 1

I.

INTRODUCTION ET INTERET DU DOSAGE DE LHB A1c

Lhmoglobine A1c rsulte de la glycation non enzymatique de lextrmit N-terminale de la chane- de lhmoglobine Ao. Le taux dhmoglobine A1c est proportionnel au taux de glucose sanguin sur une priode denvirons 2 mois. De ce fait, lhmoglobine A1c est considre comme un indicateur de la glycmie moyenne quotidienne. II. OBJECTIF DE CETTE POS

Ce document sinscrit dans le cadre des recommandations des normes ISO 15 189 et prsente une mthode convenable, quantitative pour assurer une mesure prcise du pourcentage sanguin dhmoglobine glyque (HBA1c) en utilisant lanalyseur DCA 2000+. III. PRINCIPES DU DOSAGE:

La concentration spcifique en hmoglobine A1c et la concentration en hmoglobine totale sont mesures sparment. Le rapport est exprim sous forme de pourcentage de lhmoglobine A1c.10 Tous les ractifs intervenant dans ces deux ractions sont contenus dans la cartouche de ractif delhmoglobineA1c (figure 1 Pour le dosage de lhmoglobine totale, on utilise le ferricyanure de potassium pour oxyder lhmoglobine de lchantillon en mthmoglobine. La mthmoglobine se fixe alors au thiocyanate et forme un complexe associant thiocyanate et mthmoglobine. Cest Ce complexe color qui est mesur. Laugmentation de lintensit de la coloration 531nm est Proportionnelle la concentration en hmoglobine totale dans lchantillon. Pour le dosage spcifiquedelHbA1c, on utilise une mthode dinhibition de lagglutination sur latex. Un agglutinant provoque lagglutination au latex recouvert dun anticorps monoclonal de souris spcifique de lHbA1c. Cette raction dagglutination entrane une diffusion de la lumire plus importante, qui se traduit par une augmentation de labsorbance 531nm. Les molcules dHbA1c prsentes dans lchantillon de sang total entrent alors en comptition pour se fixer sur les sites de liaison des complexes anticorps-latex dont le nombre est limit, entranant ainsi une inhibition de lagglutination et une diminution de la diffusion de la lumire. Cette diminution peut tre mesure. Elle correspond une diminution de labsorbance 531nm. La concentration en HbA1cest alors quantifie laide dune courbe dtalonnage de labsorbance tablie par rapport la concentration en HbA1c. % HbA1c = [HbA1c] / [Hmoglobine Totale] X 100 Le dosage de lhmoglobine HBAc1 ne peut tre effectu que par tout technicien de laboratoire autoriss le faire.

Page 1 sur 4

Paillasse Biochimie POS No: 1

IV. -

V.

MATERIEL NECESSAIRE : Les cartouches de ractif : Les cartouches de ractif peuvent tre conserves pendant trois mois temprature ambiante jusqu la date de premption .Notez sur le carton demballage la date laquelle vous les avez places temprature ambiante.). conserver le stock de cartouches au rfrigrateur. La carte dtalonnage supports de tube capillaire en verre (Les supports de tube capillaire non utiliss peuvent tre conservs et utiliss avec un autre lot de cartouches de ractif. Chaque support de tube capillaire est conditionn sparment dans un emballage-coque) les tubes EDTA/hparin/citrat. Le papier absorbant. PROCEDURE OPERATIONELLE:

Echantillon: Lchantillon de sang peut tre obtenu par prlvement sur le bout du doigt ou par prise de sang veineux. Cependant, cette procdure donne les tapes de lanalyse faites grce au sang veineux. ETAPES 1 ACTION -Allumer lanalyseur DCA 2000 + en appuyant sur la touche ON et le laisser se rchauffer pendant 1-8 minutes. - READY: SCAN BAR CODE saffiche lcran, et lon entend un bip lorsque lappareil est prt scanner. Prlever le sang sur anticoagulant EDTA ou citrate ou hparine. Si un nouveau kit est mis en utilisation pour la premire fois, activer ltalonnage de lappareil laide de la carte dtalonnage. Sinon passer ltape 4. Activation de lEtalonnage : scanner le code barre de la carte dtalonnage lorsque lappareil de demande. Apres le scan, un bip signifie que lappareil sest talonn avec succs. Linstrument peut stocker deux talonnages pour le dosage HbA1c DCA. Chaque talonnage correspond un numro de lot diffrent. -Enlever la cartouche de ractif de son contenant en dchirant lune des 3 extrmits dlimites. NB : NE PAS TOUCHER LA ZONE Optical Window POUR EVITER LOBTENTION DES RESULTATS ERRONES. -Dcouper un support de tube capillaire a utiliser laide dun ciseau. -Pour Assigner un numro au patient, presser la touche MENU/NEXT , jusqu ce que SET SEQUENCE NUMBER saffiche lcran. -Presser la touche UP ou DOWN pour choisir les chiffres au-dessus du curseur. Presser NEXT pour slectionner le 2nd ou 3e chiffre -Presser ENTER pour sauvegarder le numro du patient entr. -Presser ESCAPE pour revenir lanalyse. -Presser NEXT pour repartir menu SCAN BAR CODE . -Enlever le tube capillaire de son contenant, - le remplir de lchantillon sanguin en vitant quun excs de sang ne touche la partie plastique du tube capillaire. NB : Si ncessaire, essuyer lexcs de sang laide dun papier absorbant, en vitant que le papier ne touche louverture du tube capillaire. - Important : lorsque le tube capillaire est rempli avec lchantillon sanguin, lanalyse doit dmarrer dans les 5minutes qui suivent. Insrer soigneusement le support de tube capillaire dans la cartouche de ractif jusqu ce que le support de tube capillaire pntre compltement. Scanner le code-barres de la cartouche de ractif (contenant le numro de lot et le nom de Page 2 sur 4

2 3

7 8

Paillasse Biochimie POS No: 1 lanalyse). Pour se faire : - insrer la cartouche de ractif dans le dtecteur de code-barres en le tenant de sorte que le code barre soit orient vers la droite. -Rapidement (en moins dune seconde), glisser la cartouche du haut vers le bas en passant par le point indiquant le dtecteur. -lon entend un bip, signifiant que le scan sest droul avec succs. -Si lon nentend aucun bip, rpter la procdure. Si lon nentend toujours pas de bip, se rfrer la section 5 Troubleshooting du manuel de lutilisateur (operating manual) Ds laffichage de LOAD CARTRIDGE/ PULL TAB/CLOSE DOOR], soulever louverture du compartiment de la cartouche - Tenir la cartouche de telle sorte que le code barre soit orient vers la droite - Insrer la cartouche dans le compartiment jusqu laudition/sensation dun lger claquement. - Dun mouvement ralenti, lent et continu, tirer la bande plastique hors de la cartouche de ractif. - Refermer le compartiment cartouche et liminer la bande en plastic prcdemment retire. 5 secondes Aprs le chargement de la cartouche de ractif dans lanalyseur DCA, lon entend un bip, et le dosage commence. Patienter 6 minutes pour laffichage du rsultat. -Pour interrompre le dosage nimporte quel moment, presser ESCAPE. -Ds laffichage CANCEL TEST. presser ENTER avant 15 secondes. -Eliminer la cartouche de ractif. Une fois le dosage termin, lon entend un bip, et le rsultat saffiche. -Noter le rsultat dans un registre de control qualit quotidien avant de retirer la cartouche de ractif Retirer la cartouche de ractif en ouvrant le compartiment cartouche -Pousser et maintenir bas le bouton situ la droite du compartiment. -Maintenir ce bouton press et pousser la barre plastique (sur la cartouche) vers la droite pour dbloquer la cartouche. -Tirer la cartouche hors du compartiment et lliminer suivant les normes dlimination des dchets en vigueur lhpital.

10 11

12

13

VI.

VII.

INTERFERENCES Des affections comme lanmie hmolytique, la polycythmie et les tats Homozygotes Hubs et HFC peuvent entrainer lobtention des rsultats HbA1c infrieurs ceux escompts. La bilirubine (jusqu une concentration de 20 mg/dl), Le facteur rhumatode (jusquau titrede1:5120), Les triglycrides (jusqu une concentration de1347mg/dl) et les antidiabtiques habituels (Diabinese, Orinase, Tolinase, Micronase, Dymelor et leglyzipide prescrits dans leurs concentration normale) ninterfrent pas avec le dosage. Les chantillons de sang prsentant une lipmie trs leve, stocks depuis trs longtemps ou congels, ne doivent pas tre analyss laide de cette mthode. PRESENTATION DU RESULTAT les rsultats danalyse affichs ne ncessitent aucun calcul supplmentaire. Les concentrations en HbA1c sont comprises dans la plage de mesures comprise entre 2,5 % 14,0 % dHbA1c. Lanalyse est linaire dans cette plage de rsultats. En cas daffichage de rsultats < 2.5 % ou bien > 14 % ; Signalez que le rsultat est infrieur 2,5% ou bien > 14 % dHbA1c. Ne pas recommencer le dosage en utilisant un volume daliquote de lchantillon plus ou moins dilu Page 3 sur 4

Paillasse Biochimie POS No: 1 VIII.

Noter la valeur du rsultat dans le carnet du patient et dans les registre appropries du laboratoire. VALEURS MORMALES

Selon la mthode de dosage utilise, le taux dHbA1c est approximativement compris entre 3 et 6 % chez les sujets non diabtiques, entre 6 et 8 % chez les patients dont le diabte est quilibr et peut atteindre 20 % ou plus si le diabte est mal quilibr. IX. INTERPRETATION

Le mdecin prescripteur de LHB A1c sera responsable de linterprtation des rsultats, selon ltat Clinique du patient au moment de lexamen. X. LIMITES DE LA METHODE

Le dosage de lHbA1c DCA donne des rsultats exacts et prcis relatifs lhmoglobine totale pour une plage de mesure comprise entre7et 24g/dl. La majorit des patients ont un taux dhmoglobine compris dans cet intervalle. Cependant, les patients souffrant danmies svres peuvent prsenter des concentrations en hmoglobine infrieures 7g/dl, alors que les patients souffrant de polycythmie peuvent prsenter des concentrations en hmoglobinesuprieures24g/dl. Chez ces patients, les concentrations en hmoglobine HbA1c doivent tre dtermines par un autre principe de dosage si elles se situent en dehors de la plage de mesure acceptable. XI. REFERENCES

Bayer Corporation, DCA 2000 Analyzer Operators Manual, 1994, Elkhart, IN. Bayer Corporation, DCA 2000 Hemoglobin A1c Reagent Kit Package Insert, Revised 12/96, Elkhart, IN. Bayer Corporation, DCA 2000 Quality Control Kit Package Insert, Revised 4/1998, Elkhart, IN. Knowles, B. J., Haigh, W. B., Michaud, G. C., and Marchesi, V.T. A monoclonal antibody-Based immunoassay for haemoglobin A1c.Diabetes 35(1986):Suppl.94A
Concu par : Revisee par : Nom Titre SIGNATURE DATE

Page 4 sur 4