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Estas deducciones se realizaron a partir de: 1. la estructura primaria del ADN 2. La regularidad qumica de la molcula de ADN: Chargaff observando una variada gama de ADN de diferentes organismos estableci que: La cantidad total de nucletidos pirimidinicos (T+C) es siempre igual a la cantidad total de nucletidos puricos (A+G) La cantidad de T es siempre igual a la cantidad de A y la cantidad de G es siempre igual a la cantidad de C. La cantidad de A + T no es necesariamente igual a la cantidad de G + C.
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Estirpe S muerta por calor + ratn: ratn sobrevive Estirpe S muerta por calor + Estirpe L + ratn: ratn muerto
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EXPERIMENTO DE AVERY, MacLEOD Y McCARTY (1944): Separaron los distintos tipos de molculas que se encuentran en las clulas de la estirpe S muertas por calor y estudiaron cul de ellos inducia la formacin de colonias lisas (letal) al ser aadido a clulas rugosas vivas (estirpe L no letal) Polisacridos + clulas rugosas: clulas rugosas Clulas de estirpe Lpidos + clulas rugosas: clulas rugosas S muertas por calor ARN + clulas rugosas: clulas rugosas Protenas + clulas rugosas: clulas rugosas ADN + clulas rugosas: CLULAS LISAS (LETALES) EXPERIMENTO DE HERSHEY Y CHASE (1952): Emplean dos tipos de virus T2. En uno de ellos, las protenas de la cubierta estn marcadas con azufre radiactivo, ausente de ADN. En el otro, el ADN esta marcado con fsforo radiactivo, ausente de las protenas. Solo el fosforo es inyectado dentro de la E. coli, demostrando que el agente necesario para la produccin de nuevos virus es el ADN.
Duplicacin
ADN transcripcin ARNm Transcripcin inversa traduccin Protena
El Dogma central funciona en la inmensa mayora de los organismos. Sin embargo, el estudio de ciertos tipos de virus permiti encontrar algunas excepciones muy significativas: Ciertos tipos de virus son capaces de cerrar su ciclo vital sin utilizar el ADN, sino mediante un proceso de copia de su molcula de ARN a otra complementaria a la primera, y as sucesivamente. Este proceso se denomina replicacin, por analoga al que se produce en el ADN. La constatacin de este fenmeno, aunque parezca un detalle menor, dio soporte a la hiptesis conocida como Mundo de ARN, que sostiene que las primeras molculas informativas que aparecieron a lo largo del proceso de evolucin biolgica fueron de ARN, mientras que el ADN sera algo as como un mecanismo de copia de seguridad, derivado del ARN. Los retrovirus, grupo al que pertenece el virus que produce el SIDA, o los de las verrugas, poseen tambin ARN como molcula informativa pero, a diferencia del resto de los virus de ARN, cuando infectan una clula utilizan una protena especfica para copiar su ARN en ADN. Este proceso se denomina retrotranscripcin.
puricas y pirimidinicas (A=T; G=C) permite que cada cadena sirva de molde para una cadena complementaria. Esta duplicacin es semiconservativa ya que cada molcula nueva de ADN est formada por una cadena vieja (molde) y una nueva. Este modelo de duplicacin explica fcilmente como la informacin es transportada de una clula a otra. Las posibilidades de error en el momento de la duplicacin son muy pequeas. En la sntesis de ADN participan enzimas ADN polimerasa, que adiciona a un pequeo segmento preexistente de ARN llamado primer, cebador o iniciador los nucletidos complementarios a cada banda molde de ADN. La enzima primasa es la encargada de formar los fragmentos de ARN cebadores. La sntesis avanza en 5- 3mediante la sntesis continua en una banda llamada cadena lder y discontinua en la otra cadena llamada cadena retrasada, en esta se producen fragmentos de Okazaki, para los cuales cada fragmento necesita su propio cebador y posteriormente estos fragmentos son reunidos entre s, por medio de la ADN ligasa, formando una banda intacta. El gen es una regin de ADN capaz de transcribirse en una molcula de ARN funcional, adems este ARN debe producirse en el momento y lugar correcto durante el desarrollo del organismo, slo entonces podemos decir que el gen es realmente funcional. Para que esto ocurra un extremo del gen contiene una regin reguladora, es decir un segmento de ADN con una secuencia especifica de nucletidos que le permitan recibir y responder a seales de otras partes del genoma o del ambiente celular. Estas seales de activacin son protenas reguladoras que se unen a la regin reguladora del gen e inician la transcripcin de la regin adyacente que tiene capacidad para formar ARN. En el otro extremo del gen existe una regin encargada de terminar la transcripcin. Muchos genes eucariticos contienen misteriosos segmentos de ADN llamados intrones, que se encuentran intercalados en la regin transcrita del gen. Los intrones no contienen informacin para la formacin del producto gnico correspondiente. Se transcribe junto con las regiones codificantes llamadas exones pero luego son eliminados del transcrito inicia. Puesto que la correcta secuencia de nucletidos de los intrones y de la regin reguladora son necesarias para generar el transcrito del tamao adecuado y en el momento y lugar correctos, los intrones junto con las regiones codificantes y las secuencias reguladoras deben ser consideradas como parte de la unidad funcional completa, es decir como parte del gen.
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Tipos de ARN
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ARN INFORMATIVO: para la mayora de los genes el ARN es slo un intermediario en la sntesis del producto final, que es una protena. ARNm: Para las clulas procariotas el ARN producto de la transcripcin tal como es, es el ARNm. En las clulas eucariotas el ARN que resulta del proceso de transcripcin es el pre-ARNm, el cual debe sufrir una modificacin de los extremos 5y 3y la eliminacin de los intrones para obtener el ARNm verdadero. ARN FUNCIONAL: es un tipo de ARN que ejecuta directamente sus propias funciones, nunca se traduce a protenas. ARNt: funcionan como transportadores, transportan los aminocidos hasta el ARNm de cualquier gen que determine una protena. ARNr: estn presenten en los ribosomas, y actan en la traduccin del ARNm de cualquier gen que determine una protena. ARNsn (nucleares pequeos): estn implicados en el procesamiento de los pre-ARNm a ARNm en el ncleo de las clulas eucariotas. Forman junto con otras subunidades proteicas un complejo macromolecular designado partcula ribonucleoproteica pequea (PRNsn) ARNsc (citoplasmtico pequeo): est involucrado en el transporte de protenas dentro de las clulas eucariticas.
Procariotas: la secuencia terminadora corresponde a una 40pb que finalizan en un tramo rico en GC seguido de una serie de 6 o ms A en la cadena molde. Las secuencias GC correspondientes del ARN se disponen de modo que el transcrito establece enlaces complementarios consigo mismo en esa regin. La regin de ARN de cadena doble resultante se denomina lazo tipo horquilla. Junto a esta regin se encuentra la serie terminal de U correspondiente a los residuos de A del ADN molde. Eucariotas: en primer lugar, durante la transcripcin se aade una caperuza constituida por un residuo 7 metilguanosina al extremo 5del transcrito. Luego se realiza la elongacin igual que en procariotas. A continuacin una enzima reconoce la secuencia AAUAAA y corta el ARN 20 bases aguas abajo. En ese momento se produce la adicin al extremo 3cortado de una cola de 150 200 residuos de A denominada cola poli (A). Seguidamente, un paso de maduracin elimina cualquier intrn del transcrito, convirtiendo el pre-ARNm en ARNm maduro. Para la mayora de los genes eucariticos, los transcritos portadores de caperuza y cola poli (A) se acortan mediante la eliminacin de intrones internos antes de ser transportados al citoplasma. El pre ARNm se procesa mediante una serie de reacciones de corte y empalme, eliminando los intrones y empalmando los exones (regiones informativas) produciendo un ARN cuya secuencia es exactamente colineal a la secuencia de la protena. Las regiones donde comienzan y terminan los intrones vienen dadas por una secuencia de nucletidos que son reconocidas por partculas ribonucleoproteicas pequeas (PRNsn), las cuales catalizan las reacciones de corte y empalme, se realiza la escisin del intrn y la unin de los exones, dando lugar al ARNm maduro.
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CODIGO GENETICO
El cdigo gentico es el conjunto de normas por las que la informacin codificada en el material gentico (secuencias de ADN o ARN) se traduce en protenas (secuencias de aminocidos) en las clulas vivas. El cdigo define la relacin entre secuencias de tres nucletidos, llamadas codones, y aminocidos. Un codn se corresponde con un aminocido especfico. El ARN se basa en transportar un mensaje del ADN a la molcula correspondiente La secuencia del material gentico se compone de cuatro bases nitrogenadas distintas: adenina (A), uracilo (U), guanina (G) y citosina (C) en el ARN. Solo hay 4 nucletidos mientras que hay 20 aminocidos, si cada nucletido le correspondiera un aminocido solo se podran sintetizar 4 aminocidos. Si se toman combinaciones de 2 nucletidos se tendran (4)2 = 16 combinaciones posibles, lo cual tampoco es suficiente. Al hacer combinaciones de tres nucletidos se tiene que se pueden hacer (4) 3=64 combinaciones posibles, estos tripletes son conocidos tambin como codones. Con 64 tripletes diferentes posibles y solo 20 aminocidos existe obviamente cierta redundancia, de hecho en muchos casos las dos primeras bases de un triplete son suficientes para especificar un aminocido dado. Tres de los tripletes no codifican ningn aminocido y son conocidos como tripletes sin sentido o tripletes de parada. Estos tripletes ocasionan la terminacin de la cadena polipeptdica. Otro triplete, el que codifica la metionina acta como seal de iniciacin para la sntesis proteica. Otra propiedad del cdigo gentico es la universalidad, es decir, una tripleta o codn especfico va a producir siempre el mismo aminocido tanto en una bacteria, un virus, un bovino o un humano.
RIBOSOMAS
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Son organoides complejos utilizados en la sntesis de protenas (polipptidos), se encuentran en el citoplasma, RER, cloroplastos y mitocondrias. Cloroplastos: componente normal de las clulas eucariotas fotosintticas. El ribosoma presenta dos sub unidades
Clula Eucario ta Procari ota Sub unidades Gran Peque de a 60S 50S 40S 30S 70S Tamao ensamblado 80S Tipos de ARN Grande 28S (4718 bases) 5,8S (160 bases) + protena 23S (2904 bases) 5S (120 bases) + protena Pequea 18S + protena 16S (1542 protena bases) +
POLISOMAS: conjunto de ribosomas agrupados y asociados a un ARN mensajero donde cada ribosoma sintetiza de manera independiente un nico polipptido. Eucariotas: pequeos (8 ribosomas por ARN aprox), porque cada molcula de ARNm lleva exclusivamente el mensaje de un solo gen. ARN monocistronico: traduccin de un solo gen. Mltiples copias de una cadena polipeptdica. Procariotas: grandes (decenas de ribosomas), porque una misma molcula de ARNm puede llevar, uno a continuacin de otro, el mensaje de varios genes para su correspondiente protena. ARN policistrnico: traduccin de diferentes genes. Diferentes cadenas polipeptdicas. Sitios del ribosoma: Presenta dos sitios que cubren parte de ambas sub unidades. El sitio A es el punto de entrada para un aminoacil tARN (un ARNt portador de un solo aminocido) el peptidil tARN, portador de la cadena polipeptdica creciente se une al sitio P. cada aminocido nuevo se aade por transferencia de la cadena creciente al nuevo aminoacil tARN.
Elongacin:
Entrada de ARNt cargado al sitio A. Translocacin de la cadena polipeptdica del P a A. (enzima peptidil transferasa). Liberacin del ARNt descargado del sitio P. Translocacin del ribosoma ubicndose ARNt con la cadena polipeptdica en el sitio P. Terminacin: con el peptidil tARN ocupando el sitio P, los factores de liberacin, en respuesta a la presencia de los codones de terminacin, se unen al sitio A. El polipptido se libera del sitio P, y las dos subunidades de los ribosomas se disocian Modificacin post sntesis de protena:
Modificaciones de los extremos amino y carboxilo Modificacin de la longitud del pptido por perdida especifica de aminocidos. Modificacin de aminocidos mediante la adicin de grupos especficos: grupos fosfatos, carboxlicos, metilos. Formacin de protenas multimricas. Procesamiento por lipoprotenas. Adicin de grupos prostticos Unin de cadenas laterales glucdicas. Adicin de grupos isoprenilos.
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1. Regulacin de la transcripcin en Procariotas: 1.1 Control negativo: debido a que la unin de la protena represora al operador inhibe la transcripcin de los genes estructurales. Inducible: porque debe estar presente el inductor para activar el sistema y poder realizarse la transcripcin de los genes estructurales. OPERON LACTOSA: Control negativo inducible Gen Regulador I: produce la protena represora, la cual se une al operador impidiendo la transcripcin. Operador O: secuencia de ADN a la cual se une la protena represora. Promotor P: secuencia de ADN a la cual se une la ARN polimerasa para iniciar la transcripcin de los genes estructurales. Genes estructurales Z, Y, A: el gen Z produce la B-galactosidasa, el gen Y produce la permeasa y el gen A produce la transacetilasa. Lactosa (Inductor): su presencia activa la transcripcin de los 3 genes estructurales, ya que se une a la protena represora inactivndola. Mutaciones: I-: produce un represor inactivo q no se puede unir al operador Is: afecta la regin de unin de la protena represora al inductor, por lo que no se puede unir.
Oc: no permite la unin de la protena represora al operador. Z-, Y-, A-: genes que no pueden producir las enzimas respectivas. I+ es dominante en posicin Trans. Oc es dominante en posicin Cis OPERON TRIPTFANO: es control negativo Reprimible.
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CONTROL POSITIVO INDUCIBLE: Opern lactosa en presencia de glucosa. Glucosa presente = poco AMPc. Sin lactosa. NO HAY TRANSCRIPCION. Glucosa presente = poco AMPc. Con lactosa: Hay transcripcin, pero poca. No hay glucosa = mucho AMPc. Con lactosa: Hay mucha transcripcin. AMPc se una al CAP, las cuales se unen al promotor activando el Opern lactosa. Incrementando la sntesis de ARNm. 2. Regulacin de la actividad de la enzima: Inhibicin del producto final: muchas de las rutas metablicas que tienen lugar en la clula son inhibidas por metabolitos que controlan la actividad enzimtica. Ej.: ATP inhibe la actividad de la fosfofructoquinasa. EUCARIOTAS: 1. Regulacin en el ADN: 1.1 Conformacin y estructura del ADN a. Compactacin diferencial de la cromatina: Heterocromatina y eucromatina b. Acetilacin de las histonas: cromosomas x inactivos en hembras: Histonas H4 tienen bajo nivel de acetilacin c. Metilacin de residuos o bases nitrogenadas: la metilacin puede inhibir la transcripcin de los genes al interferir en la capacidad de los factores de transcripcin para reconocer los sitios de unin al ADN o alterando las conformaciones del ADN dificultando la polimerizacin de la ARN polimerasa. 1. 2. Modificacin del nmero y estructura de los genes a. Eliminacin total o parcial de genes: los glbulos rojos son un caso extremo donde una vez sintetizadas las protenas estructurales y funcionales, la eliminacin del ncleo produce una clula incapaz de sintetizar cualquier otra protena. b. Genes en tndem: implica la presencia de mltiples copias de un gen que aumentan la capacidad de produccin de la protena requerida en grandes cantidades. Ej.: las histonas 2. Regulacin de la transcripcin: 2.1 Molculas reguladoras: a. Regulacin en cis: Promotor mnimo: sitio de unin de la ARN polimerasa Secuencias proximales: Intensificadores: secuencias de ADN que aumentan la tasa de transcripcin Silenciadores: secuencias que inhiben la transcripcin. b. Regulacin en trans: Activador: protenas que se unen a los intensificadores Represor: protenas que se unen a los silenciadores
Factores transcripcionales basales: se unen a la secuencia proximal son necesarios para que ocurra la transcripcin. Factores transcripcionales histoespecficos: su accin est limitada en diferentes tejidos o tipos celulares. Protenas de unin al ADN. 2.2 Hormonas: son sustancias endgenas que activan la transcripcin. Se producen en un tipo celular y viajan a travs del torrente sanguneo y ejercen su funcin en otro tipo de clula, pero solo interaccionan con las clulas que contienen sus receptores. a. Provocan que el ADN se desacople de las histonas permitiendo que la ARN polimerasa inicie la transcripcin. b. Actan como inductor por inactivacin de una protena represora c. Unin directa a una secuencia de ADN, facilitando la unin de la ARN polimerasa o de un factor de transcripcin d. Activando la protena efectora de manera que el complejo se una a un sitio del ADN y estimule la unin de la ARN polimerasa. e. Fijndose a una protena ya unida al ADN y formando un complejo activo que estimule la unin de la ARN polimerasa. 2.3 Herencia epigentica: Comprende un grupo de alteraciones heredables que no modifican el ADN a. Paramutacin: Alelos paramutables sufren cambios irreversibles tras haber estado presentes en el mismo genoma los alelos paramutagnicos. b. Impronta parental: el gen solo se expresa si se hereda del padre (impronta materna) o de la madre (impronta paterna). Es como si la copia del gen que deriva del otro padre fuera inactivada. Est asociado a grupos metilo (CH3-) extra en ciertas bases del ADN de los genes sometidos a impronta. 3. Regulacin post transcripcional: 3.1 En el transporte del ARN al citoplasma 3.2 Procesamiento del ARN: comprende las diferentes formas de escisin y unin de los segmentos de ARNm que dan lugar a diferentes cadenas polipeptdicas. 4. Regulacin de la traduccin: 4.1 Controlando el inicio de la traduccin 4.2 Alterando la vida del ARNm 4.3 Cambiando la tasa total de la traduccin. 5. Regulacin post traduccin: 5.1 Formacin de poli protenas. 6. Diferenciacin celular 7. Determinacin celular.
Procariot as Regulacin de la transcripcin Inducibl e Reprimi ble Inducibl e Opern Lac Opern Triptfano Opern Lac Glucosa= AMPc+CAP
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Control -
Control +
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Represin por catabolito Regulacin Enzimtica Inhibicin producto final Conformacin y estructura del ADN Regulacin del ADN Modificacin del numero y estructura de los genes Molecular reguladora CIS/TRANS Regulacin de la transcripcin Eucariot as Regulacin Post Transcripcional Regulacin Traduccin Regulacin post traduccin Determinacin celular Diferenciacin celular Hormonas Herencia Epigentica En el transporte de ARN al citoplasma Procesamiento del ARN Controlando el inicio de la traduccin Alterando la vida del ARNm Cambiando la tasa total de traduccin Formacin de poli protenas Para mutacin Impronta gentica Compactacin diferencial del ADN Acetilacin de histonas Metilacin de residuos de desoxicitocina Eliminacin total o parcial de genes Genes en tndem
MUTACIONES
Cambio en el genotipo o en la constitucin cromosmica de un individuo que generalmente afecta su fenotipo. Se produce un cambio en el material gentico, es una fuerza que produce variabilidad, permite adaptacin y evolucin. CLASIFICACION: 1. SEGN LA CAUSA DE MUTACION: ESPONTANEAS INDUCIDAS: Agente mutagnicos qumicos (anlogos de bases, acridinas, acido nitroso, compuestos alquilantes, etc.). Agentes mutagnicos fsicos: Radiaciones ionizantes (rayos X, ,,), Radiaciones no ionizantes (LUV, Temperatura) 2. SEGN LA CELULA AFECTADA: MUTACIONES SOMATICAS MUTACIONES GERMINALES O GAMETICAS 3. SEGN LA NATURALEZA DEL CAMBIO: MUTACIONES CROMOSOMICAS MUTACIONES GENICAS O PUNTUALES: son alteraciones en la secuencia de ADN, modifican la informacin gentica. Alelo de un gen cambio a otro distinto. Se caracterizan por: Perdida de la funcin o aparicin de una funcin. Ocurren al azar, en cualquier momento, individuo o clula. Modifican la estructura del ADN Se puede analizar los procesos biolgicos a travs de mutaciones. Pueden ser desde imperceptibles hasta letales.
Pueden ocurrir por cambios tautomricos en las bases nitrogenadas: la molcula cambia segn la posicin que presentan sus tomos. Normal se une A con T y G con C Grupo cetonico = grupo enolico G y T (ceto) = G* y T* (enol) y se unen G* con T, T* con G Grupo amino = grupo imino A y C (amino) = A* y C* (imino) y se unen A* con C, C* con A Por efecto de agentes qumicos o fsicos. Acido nitroso desanimacin de Adenina = Hipoxantina (H) y se une H con C. Citosina = Uracilo (U) y se une con A Adicin de 5 bromuracilo (BU) = reemplaza a T y se aparea con G Adicin o deficiencia de bases: Incorporacin o eliminacin de una base nitrogenada que trae como consecuencia un corrimiento de la secuencia, modifica los aa y/o altera la seal de parada. Reversin de las mutaciones: nueva mutacin en el mismo par de bases que mut, que restituye la secuencia original de bases en el ADN. Supresin de la mutacin: mutacin que restituye el fenotipo original normal, aunque el cambio de bases original permanece.
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