INTRODUCCION: El microscopio (de micro-, pequeo, y scopio, observar) es un instrumento que permite observar objetos que son demasiado

pequeos para ser vistos a simple vista. El tipo ms comn y el primero que se invent es el microscopio ptico. Se trata de un instrumento ptico que contiene una o varias lentes que permiten obtener una imagen aumentada del objeto y que funciona por refraccin. La ciencia que investiga los objetos pequeos utilizando este instrumento se llama microscopa. En general, cualquier microscopio requiere los siguientes elementos: una fuente (como un haz de fotones o de electrones), una muestra sobre la que acta dicha fuente, un receptor de la informacin proporcionada por la interaccin de la fuente con la muestra, y un procesador de esta informacin (en general, un ordenador) Tipos de microscopios Microscopio ptico Un microscopio ptico es un microscopio basado en lentes pticas. Tambin se le conoce como microscopio de luz, microscopio fotnico (que utiliza luz o "fotones") o microscopio de campo claro. El desarrollo de este aparato suele asociarse con los trabajos de Anton van Leeuwenhoek. Los microscopios de Leeuwenhoek constaban de una nica lente pequea y convexa, montada sobre una plancha, con un mecanismo para sujetar el material que se iba a examinar (la muestra o espcimen). Este uso de una nica lente convexa se conoce como microscopio simple, en el que se incluye la lupa, entre otros aparatos pticos. Microscopio ptico. Descripcin: A) ocular, B) objetivo, C) portador del objeto, D) lentes de la iluminacin, E) sujecin del objeto, F) espejo de la iluminacin Partes del microscopio ptico y sus funciones 1 * Ocular: lente situada cerca del ojo del observador. Capta y amplia la imagen formada en los objetivos. 2 * Objetivo: lente situada cerca de la preparacin. Ampla la imagen de sta, lo que significa que es muy importante este elemento del microscopio, es un elemento vital que permite ver a travs de los oculares 3 * Condensador: lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparacin. 4 * Diafragma: regula la cantidad de luz que entra en el condensador. 5 * Foco: dirige los rayos luminosos hacia el condensador. 6 * Tubo: es una cmara oscura unida al brazo mediante una cremallera. 7 * Revlver: Es un sistema que coge los objetivos, y que rota para utilizar un objetivo u otro. 8 * Tornillos macro y micromtrico: Son tornillos de enfoque, mueven la platina hacia arriba y hacia abajo. El macromtrico lo hace de forma rpida y el micromtrico de forma lenta. Llevan

incorporado un mando de bloqueo que fija la platina a una determinada altura. 9 * Platina: Es una plataforma horizontal con un orificio central, sobre el que se coloca la preparacin, que permite el paso de los rayos procedentes de la fuente de iluminacin situada por debajo. Dos pinzas sirven para retener el portaobjetos sobre la platina y un sistema de cremallera guiado por dos tornillos de desplazamiento permite mover la preparacin de delante hacia atrs o de izquierda a derecha y viceversa. Microscopio simple Un microscopio simple es aquel que solo utiliza un lente de aumento. El ejemplo ms clsico es la lupa. El microscopio ptico estndar utiliza dos sistemas de lentes alineados. El objeto por observar se coloca entre el foco y la superficie de la lente, lo que determina la formacin de una imagen virtual, derecha y mayor cuanto mayor sea el poder diptrico del lente y cuanto ms alejado est el punto prximo de la visin ntida del sujeto. El holands Anton Van Leeuwenhoek construy microscopios muy eficaces basados en una sola lente. Esos microscopios no padecan las aberraciones que limitaban tanto la eficacia de los primeros microscopios compuestos, como los empleados por Robert Hooke, y producan una ampliacin de hasta 300 veces; gracias a ellos Leeuwenhoek fue capaz incluso de describir por primera vez las bacterias. Microscopio compuesto Un microscopio compuesto es un microscopio ptico que tiene ms de una lente de objetivo, una de estas lentes es de 1000x. Los microscopios compuestos se utilizan especialmente para examinar objetos transparentes, o cortados en lminas tan finas que se transparentan. Se emplea para aumentar o ampliar las imgenes de objetos y organismos no visibles a simple vista. El microscopio ptico comn est conformado por tres sistemas: * El sistema mecnico est constituido por una serie de piezas en las que van instaladas las lentes, que permiten el movimiento para el enfoque. * El sistema ptico comprende un conjunto de lentes, dispuestas de tal manera que producen el aumento de las imgenes que se observan a travs de ellas. * El sistema de iluminacin comprende las partes del microscopio que reflejan, transmiten y regulan la cantidad de luz necesaria para efectuar la observacin a travs del microscopio.

Microscopio de luz ultravioleta Microscopio de luz ultravioleta La imagen en el microscopio de luz ultravioleta depende de la absorcin de esa luz por las molculas de la muestra. La fuente de luz ultravioleta tiene una longitud de onda de 200 nm, por lo tanto puede alcanzar una resolucin de 100 nm. La microscopia ultravioleta no es muy diferente del funcionamiento de un espectrofotmetro pero sus resultados son registrados en fotografas. La muestra no se puede observar directamente a travs del ocular porque la luz ultravioleta puede daar la retina. El mtodo sirve para detectar

cidos nucleicos, protenas que contienen determinados aminocidos. Mediante longitudes de ondas especficas para la iluminacin se puede obtener mediciones espectrofotomtricas para cuantificar el DNA y el RNA de cada clula. El microscopio de luz ultravioleta utiliza el rango ultravioleta del espectro luminoso en lugar del rango visible, bien para aumentar la resolucin con una longitud de onda menor o para mejorar el detalle absorbiendo selectivamente distintas longitudes de onda de la banda ultravioleta. Dado que el vidrio no transmite las longitudes de onda ms cortas de la luz ultravioleta, los elementos pticos de estos microscopios estn hechos con cuarzo, fluorita o sistemas de espejos aluminizados. Adems, dado que la radiacin ultravioleta es invisible, la imagen se muestra con fosforescencia (vase Luminiscencia), en fotografa o con un escner electrnico. El microscopio de luz ultravioleta se utiliza en la investigacin cientfica. Microscopio de fluorescencia El microscopio de fluorescencia es una variacin del microscopio de luz ultravioleta en el que los objetos son iluminados por rayos de una determinada longitud de onda. La imagen observada es el resultado de la radiacin electromagntica emitida por las molculas que han absorbido la excitacin primaria y reemitido una luz con mayor longitud de onda. Para dejar pasar slo la emisin secundaria deseada, se deben colocar filtros apropiados debajo del condensador y encima del objetivo. Se usa para detectar sustancias con autofluorescencia (vitamina A) o sustancias marcadas con fluorocromos Fluorescencia y microscopio El fenmeno de la fluorescencia se produce cuando un electrn de un tomo absorbe toda la energa de una determinada longitud de onda de la luz, saltando a otros orbitales. Es una situacin inestable durante la cual se emite la mayor parte de la energa que se ha absorbido (con mayor longitud de onda) y vuelve a desplazarse a su orbital. Aprovechando este fenmeno, se han creado los fluorocromos. Para utilizarlos necesitamos una bombilla que emita luz ultravioleta y luz visible. Para excitar el flurocromo necesitamos un filtro de excitacin que seleccione la longitud de onda que excita nuestro flurocromo. Los ms comunes son el DAPI que tie el ncleo de las clulas y el GFP. El microscopio de fluorescencia Olympus BX61, acoplado con una cmara digital.

Microscopio petrogrfico El microscopio petrogrfico o de polarizacin se utiliza para identificar y estimar cuantitativamente los componentes minerales de las rocas gneas y las rocas metamrficas. Cuenta con un prisma de Nicol u otro tipo de dispositivo para polarizar la luz que pasa a travs del espcimen examinado (vase ptica: Polarizacin de la luz). Otro prisma Nicol o analizador que determina la polarizacin de la luz que ha pasado a travs del espcimen. El microscopio tiene un soporte giratorio que

indica el cambio de polarizacin acusado por el espcimen. Microscopio petrogrfico antiguo del Museo Geominero de Madrid Microscopio de campo oscuro El microscopio de campo oscuro utiliza un haz enfocado de luz muy intensa en forma de un cono hueco concentrado sobre el espcimen. El objeto iluminado dispersa la luz y se hace as visible contra el fondo oscuro que tiene detrs, como las partculas de polvo iluminadas por un rayo de sol que se cuela en una habitacin cerrada. Por ello las porciones transparentes del espcimen quedan oscuras, mientras que las superficies y partculas se ven brillantes, por la luz que reciben y dispersan en todas las direcciones, incluida la del eje ptico que conecta el espcimen con la pupila del observador. Esta forma de iluminacin se utiliza para analizar elementos biolgicos transparentes y sin pigmentar, invisibles con iluminacin normal, sin fijar la muestra, es decir, sin matarla. Tambin es bastante utilizado en la observacin de muestras metalogrficas para la observacin de detalles en superficies con alta reflectancia. El objetivo recibe la luz dispersa o refractada por las estructuras del espcimen. Para lograrlo, el microscopio de campo oscuro est equipado con un condensador especial que ilumina la muestra con luz fuerte indirecta. En consecuencia el campo visual se observa detrs de la muestra como un fondo oscuro sobre el cual aparecen pequeas partculas brillantes de la muestra que reflejan parte de la luz hacia el objetivo. El efecto es similar a las partculas de polvo que se ven en el haz de luz emanado de un proyector de diapositivas en una habitacin oscura. La luz reflejada por las partculas de polvo llegan hasta la retina del ojo, lo que las hace visibles. La luz dispersa permite incluso distinguir partculas ms pequeas que el poder separador del sistema ptico usado por transparencia. Los condensadores que se emplean en Microscopa de campo oscuro son de dos tipos: del tipo paraboloide (tiene una superficie espejada), y los del tipo cardioide, con dos superficies espejadas. El empleo de uno u otro es indistinto, mediante cualquiera de ambos, la luz no incide directamente en el objetivo (este es el objetivo de estos condensadores), sino que incide con una apertura numrica mayor al del objetivo Ammonia tepida, un foraminfero, en microscopa de fondo oscuro. Los tenues seudpodos se ven claros, por la luz que dispersan, contra el fondo oscuro

Microscopio de contraste de fases El microscopio de contraste de fases permite observar clulas sin colorear y resulta especialmente til para clulas vivas. Este aprovecha las pequeas diferencias de los ndices de refraccin en las distintas partes de una clula y en distintas partes de una muestra de tejido. La luz que pasa por regiones de mayor ndice de refraccin experimenta una deflexin y queda fuera de fase con respecto al haz principal de ondas de luz que pasaron la muestra. Aparea otras longitudes de onda fuera de fase por medio de una serie de anillos pticos del objetivo y del condensador, anula la amplitud de la porcin fuera de fase inicial del haz de luz y produce un contraste til sobre la imagen. Las partes oscuras de la imagen corresponden a las porciones densas del espcimen; las

partes claras de la imagen corresponden a porciones menos densas. Por lo tanto estos microscopios se utilizan para observar clulas vivas, tejidos vivos y cortes semifinos no coloreados. Dos modificaciones del microscopio de fase son el microscopio de interferencia y el microscopio de interferencia diferencial. Microscopio de luz polarizada Los microscopios de luz polarizada son microscopios a los que se les han aadido dos polarizadores (uno entre el condensador y la muestra y el otro entre la muestra y el observador),el material que se usa para ello es un cristal de cuarzo y un cristal de Nicol dejando pasar nicamente la luz que vibra en un nico plano (luz polarizada). Algunos compuestos inorgnicos responden al efecto de la luz, stos tienen un alto grado de orientacin molecular (sustancias anistropas), que hace que la luz que lo atraviesa pueda hacerlo en determinados planos vibratorios atmicos. El prisma de Nicol permite el paso de luz en un solo plano, as el cuarzo gira la posicin de polarizacin, facilitando la identificacin de sustancias que extinguen la luz. Al fenmeno de extincin de luz causado por estos planos atmicos y orientaciones moleculares se llama birrefringencia. Este tipo de microscopio se usa para poder identificar mejor sustancias cristalinas o fibrosas (como el citoesqueleto), sustancia amiloide, asbesto, colgeno, cristales de uratos, queratina, slice, y otras de origen exgeno. Microscopio confocal El microscopio confocal es un microscopio que emplea una tcnica ptica de imagen para incrementar el contraste y/o reconstruir imgenes tridimensionales utilizando un "pinhole" espacial (colimador de orificio delimitante) para eliminar la luz desenfocada o destellos de la lente en especmenes que son ms gruesos que el plano focal.[1] Esta tcnica ha ido adquiriendo cada vez mayor popularidad entre las comunidades cientfica e industrial. Se aplica tpicamente en las ciencias de la vida y en la inspeccin de semiconductores. Existen tres tipos de microscopios confocales disponibles comercialmente: El Microscopio confocal lser de barrido, el microscopio confocal de disco giratorio (disco de Nipkow) y microscopios de matriz programable,(Programmable Array Microscope, PAM). La microscopa confocal de barrido por lser produce un mayor rendimiento en la calidad de la imagen que los de disco o PAM, pero la tasa de frames era muy lenta (menos de tres frames/segundo) hasta hace poco. Los microscopios de disco pueden lograr velocidades compatibles con la creacin de videos un rasgo deseable para observaciones dinmicas, campo pueden ser las imgenes de clulas vivas. La microscopa confocal lser de barrido actualmente ha sido mejorada para obtener tasas superiores a las del video (60 frames/segundo) utilizando MEMS basados en espejos de barrido.

Microscopio electrnico Un microscopio electrnico es aqul que utiliza electrones en lugar de fotones o luz visible para formar imgenes de objetos diminutos. Los microscopios electrnicos permiten alcanzar una capacidad de aumento muy superior a los microscopios convencionales (hasta 2 aumentos comparados con los de los mejores microscopios pticos) debido a que la longitud de onda de los electrones es mucho menor que la de los fotones "visibles".

El primer microscopio electrnico fue diseado por Ernst Ruska, Max Knoll y Jhener entre 1925 y 1930, quines se basaron en los estudios de Louis-Victor de Broglie acerca de las propiedades ondulatorias de los electrones. Un microscopio electrnico, como el de la imagen, funciona con un haz de electrones generados por un can electrnico, acelerados por un alto voltaje y focalizados por medio de lentes magnticas (todo ello al alto vaco ya que los electrones son absorbidos por el aire). Los electrones atraviesan la muestra (debidamente deshidratada) y la amplificacin se produce por un conjunto de lentes magnticas que forman una imagen sobre una placa fotogrfica o sobre una pantalla sensible al impacto de los electrones que transfiere la imagen formada a la pantalla de un ordenador. Los microscopios electrnicos slo se pueden ver en blanco y negro, puesto que no utilizan la luz, pero se le pueden dar colores en el ordenador. Como se puede apreciar, su funcionamiento es semejante a un monitor monocromtico. Microscopio electrnico. Microscopio electrnico de transmisin Un microscopio electrnico de transmisin (TEM, por sus siglas en ingls, o MET, en espaol) es un microscopio que utiliza un haz de electrones para visualizar un objeto, debido a que la potencia amplificadora de un microscopio ptico est limitada por la longitud de onda de la luz visible. Lo caracterstico de este microscopio es el uso de una muestra ultrafina y que la imagen se obtenga de los electrones que atraviesan la muestra. Estructura Debido a que los electrones tienen una longitud de onda mucho menor que la de la luz visible, pueden mostrar estructuras mucho ms pequeas. Las partes principales de un microscopio electrnico son: * Can de electrones, que emite los electrones que chocan o atraviesan el espcimen (dependiendo que tipo de microscopio electrnico es), creando una imagen aumentada. * Lentes magnticas para crear campos que dirigen y enfocan el haz de electrones, ya que las lentes convencionales utilizadas en los microscopios pticos no funcionan con los electrones. * Sistema de vaco es una parte muy importante del microscopio electrnico. Debido a que los electrones pueden ser desviados por las molculas del aire, se debe hacer un vaco casi total en el interior de un microscopio de estas caractersticas. * Placa fotogrfica o pantalla fluorescente que se coloca detrs del objeto a visualizar para registrar la imagen aumentada. * Sistema de registro que muestra la imagen que producen los electrones, que suele ser una computadora. El microscopio electrnico de transmisin emite un haz de electrones dirigido hacia el objeto que se desea aumentar. Una parte de los electrones rebotan o son absorbidos por el objeto y otros lo atraviesan formando una imagen aumentada de la muestra. Microscopio electrnico de barrido El Microscopio electrnico de barrido o SEM (Scanning Electron Microscopy), es aquel que utiliza

un haz de electrones en lugar de un haz de luz para formar una imagen. Tiene una gran profundidad de campo, la cual permite que se enfoque a la vez una gran parte de la muestra. Tambin produce imgenes de alta resolucin, que significa que caractersticas espacialmente cercanas en la muestra pueden ser examinadas a una alta magnificacin. La preparacin de las muestras es relativamente fcil pues la mayora de SEMs slo requieren que estas sean conductoras. En el microscopio electrnico de barrido la muestra es recubierta con una capa de carbon o una capa delgada de un metal como el oro para darle propiedades conductoras a la muestra. Posteriormente es barrida con los electrones acelerados que viajan a traves del can. Un detector mide la cantidad de electrones enviados que arroja la intensidad de la zona de muestra, siendo capaz de mostrar figuras en tres dimensiones, proyectados en una imagen de TV o una imagen digital. Su resolucin est entre 3 y 20 nm, dependiendo del microscopio. Inventado en 1931 por Ernst Ruska, permite una aproximacin profunda al mundo atmico. Permite obtener imgenes de gran resolucin en materiales ptreos, metlicos y orgnicos. La luz se sustituye por un haz de electrones, las lentes por electroimanes y las muestras se hacen conductoras metalizando su superficie. Microscopio electrnico de barrido.

Microscopio de iones en campo La microscopa de iones en campo (FIM) es una tcnica analtica empleada en ciencia de materiales. El microscopio de iones en campo es una variedad de microscopio que puede ser usado para visualizar la ordenacin de los tomos que forman la superficie de la punta afilada de una aguja de metal. Fue la primera tcnica con la que se consigui resolver espacialmente tomos individuales. La tcnica fue desarrollada por Erwin Mller. En 1951 se publicaron por primera vez imgenes de estructuras atmicas de tungsteno en la revista Zeitschrift fr Physik. En la FIM, se produce una aguja de metal afilada y se coloca en una cmara de ultra alto vaco, que despus se llena con un gas visualizador tal como el helio o el nen. La aguja se enfra hasta alcanzar temperaturas criognicas (20-100 K). Luego se aplica un voltaje positivo que va de 5.000 a 10.000 voltios sobre la punta. Los tomos de gas absorbidos por la punta se ven ionizados por el fuerte campo elctrico que existe en las proximidades de ella. La curvatura de la superficie cercana a la punta provoca una magnetizacin natural; los iones son repelidos bruscamente en direccin perpendicular a la superficie (un efecto de "proyeccin de punto"). Se coloca un detector de modo que pueda recoger esos iones repelidos; y la imagen formada por todos los iones repelidos puede tener la resolucin suficiente como para mostrar tomos individuales en la superficie de la punta. Al contrario que los microscopios convencionales, donde la resolucin espacial se ve limitada por la longitud de onda de las partculas empleadas en la visualizacin, el microscopio basado en FIM funciona por proyeccin y alcanza resoluciones atmicas, con una magnificacin aproximada de unos pocos millones de aumentos. Microscopio de sonda de barrido

Un microscopio de sonda de barrido (tambin llamado SPM por sus siglas en ingls Scanning Probe Microscopy) es aquel que tiene el transmisor en la parte exequimal del lente (Objetivo 4x). Este microscopio utiliza una sonda que recorre la superficie del objeto a estudiar. Su uso en investigaciones cientficas es el de regular la imagen mediante un barrido de electrones haciendo que la imagen aumente (10.000.000 nm). Microscopio de efecto tnel El microscopio de efecto tnel (Scanning Tunneling Microscope STM)o microscopio ciego es un poderoso instrumento que permite visualizar superficies a escala del tomo. Microscopio de fuerza atmica El Microscopio de fuerza atmica (AFM, de sus siglas en ingls Atomic Force Microscope) es un instrumento mecano-ptico capaz de detectar fuerzas del orden de los piconewtons. Al rastrear una muestra, es capaz de registrar continuamente su topografa mediante una sonda o punta afilada de forma piramidal o cnica. La sonda va acoplada a un listn o palanca microscpica muy flexible de slo unos 200 m. El microscopio de fuerza atmica ha sido esencial en el desarrollo de la nanotecnologa, para la caracterizacin y visualizacin de muestras a dimensiones nanomtricas. Microscopio virtual El proyecto Microscopio Virtual es una iniciativa supervisada por la Universidad Rutgers para realizar micromorfologa y estudiar el comportamiento de pequeos organismos, realizando estudios en lnea. El servidor est localizado en el norte de los Estados Unidos y las imgenes son tomadas desde la Antrtica y el Mar Bltico.