OPERACIONES BASICAS EN EL LABORATORIO DE QUIMICA INTRODUCCION

Esta publicacin tiene como objetivo dar a conocer cules son las operaciones ms comunes en el laboratorio as como sus posibilidades y, en algunos casos, las nuevas tendencias en el modo de trabajar. Paralelamente, ser muy importante la adquisicin, por parte del alumnado, de buenos hbitos de trabajo en el laboratorio de manera que se utilicen como pauta para poder desarrollar correctamente los experimentos prcticos que se le exigirn en cursos superiores. Las personas que trabajen en el laboratorio deben utilizar material muy diverso, diseado cada uno para una funcin especfica y poder alcanzar un objetivo concreto. El progreso de la tcnica estos ltimos aos ha hecho que en los laboratorios existan nuevos recursos que hacen el trabajo del qumico ms fcil y rpido. No obstante, la utilizacin de material clsico como son las balanzas, embudos, probetas, pipetas, etc., es imprescindible tanto en la sntesis de productos qumicos como durante la preparacin de la muestra para introducirla en un aparato. As pues, el primer objetivo ser el conocimiento de este material, sus nombres y la aplicacin o aplicaciones que tienen diferentes versiones de un mismo utillaje segn el tipo de trabajo que se deba realizar. Una vez conocido el material de laboratorio el siguiente objetivo ser ver como se utiliza este material en lo que podramos denominar operaciones bsicas de laboratorio. En esta fase, el alumnado debe aprender la manera correcta de trabajar y conocer los problemas que pueden surgir en la manipulacin de los diferentes aparatos, as como su mantenimiento. Las principales operaciones bsicas de laboratorio que trataremos se recogen en la siguiente lista:

Centrifugacin o Fundamentos de la tcnica El mejor mtodo para separar un slido insoluble de un lquido es la filtracin. Tambin se puede utilizar la tcnica de decantacin si el slido se deposita fcilmente por gravedad en el fondo del recipiente (sedimentacin), o si permanece en la superficie del lquido (flotacin). Un slido sedimenta o flota dependiendo de su densidad respecto a la del lquido. En otras palabras, el slido experimenta una fuerza ascendente debida al empuje que el lquido ejerce sobre ste, cuya magnitud es igual a la del peso del lquido desplazado por el slido (principio de Arqumedes). El slido sedimentar si esta fuerza es inferior a la fuerza que la gravedad ejerce sobre el slido; en caso contrario, flotar. Si las partculas son muy pequeas, los procesos de sedimentacin o flotacin pueden ser extremadamente lentos debido, por un lado, a la resistencia al avance de las partculas provocada por la friccin que se establece entre stas y las del lquido, y, por otro, a los movimientos aleatorios de las partculas inducidos por las turbulencias trmicas que se generan en el seno del lquido (difusin). En estos casos, hay que recurrir a la centrifugacin para separarlas. La centrifugacin es una tcnica de separacin que se utiliza para aislar o concentrar partculas suspendidas en un lquido aprovechando la diferente velocidad de desplazamiento segn su forma, tamao o peso al ser sometidas a una fuerza centrfuga. La fuerza centrfuga es la que se ejerce sobre un cuerpo cuando ste gira alrededor de un eje. Esta fuerza, cuya magnitud es directamente proporcional a la masa del cuerpo, el radio de giro y la velocidad de giro (o angular), es perpendicular al eje y tiende a alejar el cuerpo del mismo. La fuerza centrfuga puede acelerar el proceso de sedimentacin de partculas que

tienen tendencia a hacerlo espontneamente (densidad superior a la del lquido), o en aquellas que tienden a flotar (densidad inferior a la del lquido). En este sentido, la tecnologa actual permite llegar a fuerzas de centenares de miles de veces la fuerza de la gravedad (1g es aproximadamente la fuerza centrfuga generada por un rotor de 25 cm de radio girando a una revolucin por Segundo).

Tipos de centrifugacin La centrifugacin se puede llevar a cabo a escala preparativa o escala analtica. La primera se utiliza para aislar partculas para su aprovechamiento posterior y la segunda permite determinar propiedades fsicas como la velocidad de sedimentacin o el peso molecular. La centrifugacin preparativa se utiliza para separar partculas segn la velocidad de sedimentacin (centrifugacin diferencial), la masa (centrifugacin zonal) o la densidad (centrifugacin isopcnica). En el primer caso se obtiene un lquido sobrenadante y un materioal sedimentado. En los otros dos casos las patculas se distribuyen en fracciones de diferentes densidades de un fluido lquido (centrifugacin mediante un gradiente de densidades). Las partculas se pueden separar en funcin de la velocidad de sedimentacin (centrifugacin diferencial), la masa (centrifugacin zonal) o la densidad (centrifugacin isopcnica). La centrifugacin zonal y la centrifugacin isopcnica constituyen ejemplos de centrifugacin mediante un gradiente de densidades. Hay diferentes tipos de centrfugas segn el rango de velocidades de giro:

A. Centrfugas de baja velocidad, de sobremesa o clnicas. De pequeo tamao y sin refrigeracin. Alcanzan una velocidad mxima de 5000 rpm. Son tiles para la separacin de partculas grandes como clulas o precipitados de sales insolubles.

Las centrfugas micrfugas son una variante de las anteriores que permiten llegar a velocidades de ms de 10.000 rpm, Los volmenes de trabajo son muy pequeos. Son tiles en el campo de la biologa molecular.

B. Centrfugas de alta velocidad. Alcanzan velocidades de entre 18.000 y 25.000 rpm. Son refrigeradas y algunas tienen sistema de vaco para evitar el calentamiento del rotor a causa del rozamiento con el aire. Son tiles en la separacin de fracciones celulares, pero insuficientes para la separacin de ribosomas, virus o macromolculas en general.

C. Ultracentrfugas. Superan las 50.000 rpm, por lo que tienen sistemas auxiliares de refrigeracin i de alto vaco. Hay ultracentrfugas analticas que permiten la obtencin de datos precisos de propiedades de sedimentacin (coeficientes de sedimentacin, pesos moleculares), y preparativas, tiles para aislar partculas de bajo coeficiente de sedimentacin (microsomas, virus, macromolculas).

11.2.1 Centrifugacin diferencial Es el proceso que tiene como resultado la obtencin de un sobrenadante y un material sedimentado. 11.2.2 Centrifugacin mediante un gradiente de densidades: Este tipo de centrifugacin es un proceso mediante el cual las partculas se distribuyen en fracciones de diferentes densidades de un fluido lquido. El mtodo es un poco ms elaborado que la centrifugacin diferencial, no obstante presenta ventajas que compensan el trabajo aadido. La tcnica permite la separacin de varios o todos los componentes de la muestra y la realizacin de medidas analticas. El mtodo de gradiente de densidades implica la utilizacin de un soporte fluido cuya densidad aumenta desde la zona superior a la inferior. El gradiente se consigue con un soluto preferiblemente de baja masa molecular, de tal manera que la muestra a analizar pueda ser suspendida en la solucin resultante. Como solutos se utilizan la sacarosa, polisacridos sintticos, derivados yodados del cido benzoico, o sales de metales alcalinos pesados como el rubidio o el cesio, entre otros. La muestra se deposita en la parte superior del gradiente como una fina banda y, tras centrifugar, la separacin de los componentes de la muestra se presenta como diferentes bandas o zonas que pueden ser separadas (o fraccionadas). Hay dos variantes de este mtodo, la centrifugacin zonal y la centrifugacin isopcnica: 11.2.2.1 Centrifugacin zonal En la centrifugacin zonal la muestra a analizar se deposita en la parte superior de un gradiente de densidades previamente formado. A causa de la fuerza centrfuga las partculas se mueven a velocidades que dependen de la masa y sedimentan en diferentes zonas del gradiente. La densidad mxima del gradiente no ha de exceder a la de las partculas a separar.

11.2.2.2 Centrifugacin isopcnica La centrifugacin isopcnica separa les partculas en un gradiente de densidades en funcin de la densidad de las mismas. Las partculas se mueven en el gradiente hasta que llegan a un punto donde la densidad de stas i la del gradiente son idnticas (de aqu el nombre de isopcnico). En este caso, es condicin fundamental que la densidad mxima del gradiente final ha de exceder siempre a la densidad de las partculas. Por este motivo la sedimentacin final no se produce si se controlan las condiciones de centrifugacin, ya que las partculas flotan sobre un "colchn" de material que posee una densidad superior a la de stas. Esta tcnica se utiliza, por ejemplo, para separar partculas similares en tamao pero de diferente densidad. En este sentido, la centrifugacin isopcnica es un mtodo adecuado para separar cidos nucleicos o diferentes orgnulos celulares.

Aplicacin Utillaje/material Montaje Procedimiento Riesgos y normas de seguridad Cristalizacin Cromatografa de columna Cromatografa en capa fina Desecacin Destilacin Evaporacin hasta sequedad Extraccin Filtracin con filtro de pliegues Filtracin al vaco Pesada Precipitacin Utilizacin de un reflujo Utilizacin del mechero Bunsen Punto de fusin Recristalizacin Utilizacin del rotoevaporador

o o o o o

Consideraremos que si el alumnado aprende correctamente estas operaciones bsicas estar preparado para el desarrollo de manera provechosa de las prcticas de las materias que se le impartirn posteriormente y que, lgicamente, presentarn un mayor grado de dificultad. Otro punto que se pretende abordar es el que se relaciona con la seguridad en el laboratorio. Es evidente que en cualquier laboratorio qumico se trabaja con sustancias que son peligrosas para la seguridad personal y de los dems. De la experiencia del profesorado que ha impartido las prcticas de laboratorio se desprende que siempre hay, como mnimo, un accidente (o incidente) en cualquier grupo de prcticas, especialmente en los primeros cursos. As pues, se debe ensear y mentalizar al alumnado sobre estos peligros y cul es la manera de evitarlos. Como ejemplo, es necesario destacar la prohibicin estricta que los alumnos y los profesores estn en el laboratorio sin gafas de seguridad. Se debe hacer incidencia en el conocimiento del nivel de peligrosidad de las substancias qumicas ms comunes y de la manera de actuar rpidamente en caso de accidente. No obstante, no solo la peligrosidad en el laboratorio deriva de la existencia

de productos qumicos txicos. El trabajo de laboratorio comporta intrnsecamente la manipulacin de aparatos y material diversos, fros y calientes. Uno de los materiales ms comunes en el laboratorio es el vidrio. Se trata de un material duro pero frgil, y se debe conocer su comportamiento, tanto en fro como en caliente, con la finalidad de conservarlo y de que no se rompa. La conservacin y el cuidado del material de vidrio es muy importante ya que, en caso contrario, se puede romper y, adems de razones econmicas, puede provocar cortes y se puede verter su contenido, lo que es muy peligroso por los daos que puede causar. Otra faceta acerca de la seguridad en el laboratorio en la que se debe incidir es en la existencia de material a alta temperatura. La manipulacin de mecheros Bunsen, agitadores con calentamiento o mantas calefactoras comporta un riesgo de quemaduras muy grande, que deben ser tratadas de inmediato ya que, en caso contrario, provocan ampollas en la piel muy molestas y que tardan muchos das en curarse. De todo lo que se ha mencionado anteriormente se deriva la necesidad de dar unos conocimientos bsicos de primeros auxilios en el laboratorio, que se tienen que exponer en forma de normas concretas y de actuacin rpida. En la pgina web del Ministerio de Trabajo y Asuntos Sociales se encuentra informacin referida a la NTP 464: Prevencin del riesgo en el laboratorio qumico: operaciones bsicas. Otro de los aspectos en el que la docencia de la qumica tiene que ser ms crtica es en el tratamiento de residuos que se obtienen de toda reaccin qumica, y se debe ser consciente de la responsabilidad en este tema. Lo ms correcto es crear un hbito, desde el primer da sobre qu se puede tirar, cmo y dnde. El ltimo objetivo importante que se pretende abordar es el que el alumnado adquiera el hbito de recoger en una libreta todas las actividades realizadas en el laboratorio. Este hbito es muy importante porque es el nico modo de recoger todos y cada uno de los pasos que se han seguido, las cantidades utilizadas, las incidencias y cualquier hecho que se haya observado fuera de lo previsto. El diario de laboratorio es fundamental, tanto en un trabajo de investigacin, como en uno que se centre en trabajos rutinarios. Es el nico lugar donde encontraremos los datos que a posteriori podremos estudiar en caso de que los resultados no sean los esperados. A partir de estos datos podremos reproducir el trabajo hecho o lograr averiguar dnde se ha producido un error.