Manual de Laboratorio D Ebioquimica

Dary Luz Mendoza Meza. Q.F.
, MsC | Manual de Laboratorio 1
Manual de Laboratorio
Bioqumica
DARY LUZ MENDOZA MEZA Qumica Farmacutica. Universidad del Atlntico. Magster en Ciencias Bioqumica. Universidad Nacional. Docente de Panta de la Universidad del Atlntico. E-mail: darymendoza@mail.uniatlantico.edu.co
BARRANQUILLA COLOMBIA 2012
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INTRODUCCIN AL LABORATORIO DE BIOQUMICA
La bioqumica es el estudio de la qumica de los organismos vivos. Incluye el anlisis cualitativo y cuantitativo de los elementos, iones, molculas y macromolculas presentes en los distintos tejidos y fluidos orgnicos; as como, la biosntesis de estructuras supramoleculares, las bases moleculares de la herencia y el metabolismo.
La bioqumica moderna es un rea de investigacin dinmica, que se nutre del desarrollo tecnolgico, para generar conocimiento en los distintos campos de las ciencias bsicas; algunas de sus reas ms excitantes son: la enzimologa, la sealizacin celular, la expresin gnica, el desarrollo metablico y la evolucin molecular. Teniendo en cuenta el gran rea de influencia del conocimiento bioqumico para el profesional de la qumica, y el papel fundamental que la experimentacin cumple en su aprendizaje, el estudiante necesita contar con
todas las herramientas posibles que le permita apropiarse de ese conocimiento e integrarlo al rea profesional.
El presente texto tiene como propsito servir de gua al estudiante para el desarrollo del curso de Bioqumica. A travs de las prcticas propuestas se
espera que el estudiante compruebe los postulados y teoras de la bioqumica bsica, al tiempo que los aplica a su rea disciplinar. Al trabajar con muestras problemas se fortalecen las competencias investigativas del educando, toda vez que se le permite aplicar el mtodo cientfico. La presentacin de informes en forma de artculo cientfico promueve la consulta de bibliografa especializada, fortalece los procesos de lectura y escritura, as como el anlisis y discusin de resultados. El manual presenta un anexo sobre normas de bioseguridad para el trabajo en el laboratorio, de utilidad tanto para los estudiantes como para los docentes y personal de esta en permanente contacto con material de laboratorio. Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | Manual de Laboratorio 3
REGLAS GENERALES DE LABORATORIO
Para ingresar al laboratorio: 1. Revise los antecedentes conceptuales y el protocolo de trabajo experimental correspondiente a la sesin previa al inicio de la misma.
2. Llegue puntualmente a la sesin. Es sumamente importante aprovechar el tiempo disponible para el trabajo en el laboratorio. Si llega tarde, reportarse inmediatamente con el profesor responsable.
3. Use zapatos cerrados, de piso y con suela antideslizante. Use pantaln largo o falda mediana de fibra natural. Retrese todos los accesorios personales que puedan comprender riesgo de accidentes mecnicos, qumicos o por fuego, como son anillos, pulseras, collares y sombreros. Evite usar mangas largas y anchas, en caso de usarla cbrala y sujtela completamente con las mangas de la bata. Evite el uso de lentes de contacto, use anteojos. Mantenga las uas recortadas y limpias.
4. Use la bata cerrada durante toda la sesin, los guantes y respirador en caso necesario.
5. Porte el cuaderno de anotaciones de laboratorio. Este debe contener la informacin sobre los reactivos y los clculos para preparar las soluciones que sern empleadas en la sesin. Asimismo incorpore el protocolo del trabajo experimental y la lista de seguridad.
6. Recoja con prontitud el material y los equipos para el trabajo correspondiente. Se debe revisar el estado de la mesa de trabajo, del material y de los equipos recibidos. Informe cualquier falla o irregularidad al profesor o al tcnico de Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | Manual de Laboratorio 4
laboratorio correspondiente.
6. El material se debe lavar y secar antes de ser usado. Consulte con el profesor o el tcnico de laboratorio la existencia de los reactivos a utilizar.
Para permanecer en el laboratorio: 1. Siga las medidas de seguridad necesarias con los equipos, materiales y reactivos de la sesin para prevenir accidentes. Recuerde avisar al profesor sobre posibles alergias producidas por algn reactivo o alguna otra situacin que pueda poner en peligro su salud (por ejemplo, alumnas en estado de embarazo).
2. Tome slo las cantidades de reactivos necesarios para el trabajo experimental y colquelas en material de vidrio limpio y seco.
3. Etiquete y rotule todos los recipientes donde coloque los reactivos, productos y residuos. Siga las medidas de contingencia y mitigacin en caso de accidente.
4. Mantenga solo el material requerido para la sesin sobre la mesa de trabajo. Los frascos de reactivos deben permanecer en las campanas. Los dems objetos personales o innecesarios deben guardarse o colocarse lejos del rea de trabajo.
5. No ingiera alimentos o bebidas en el interior del laboratorio a menos que lo indique el protocolo.
6. No fume en el interior del laboratorio. Todas las fuentes de fuego o calor deben ser controladas.
7. No reciba visitas en el interior del laboratorio. Evite las distracciones, as puede evitar accidentes. Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | Manual de Laboratorio 5
8. Informe al profesor responsable cuando le sea necesario salir del laboratorio durante la sesin. Reprtese al reincorporarse.
Al concluir la sesin: 1. Disponga de los residuos y de los reactivos no utilizados de la manera indicada por las normas.
2. Lave el material y devulvalo limpio y seco. Retire las etiquetas de los materiales que contenan reactivos, productos o residuos. Realice la entrega en orden y esperando su turno.
3. Deje limpio y seco el lugar de trabajo. Coloque los bancos junto a las mesas de trabajo.
4. Antes de salir del laboratorio retrese la bata y dems equipo de seguridad y gurdelo en una bolsa de plstico exclusiva para este uso. Los filtros del respirador se guardan en un recipiente hermtico. La bata debe lavarse al final de cada sesin.
PREPARACION DE LOS INFORMES DE LA PRCTICA.

Los informes deben ser presentados en forma de artculo cientfico y deber cumplir con los siguientes parmetros:
Ttulo. El ttulo del artculo no debe exceder 120 caracteres sin incluir espacios. Se debe sugerir un ttulo breve para el encabezamiento de las pginas.
Resumen. El resumen incluye el objetivo central del trabajo, resultados y conclusiones. Mximo 400 palabras. Debe aparecer en espaol e ingls. Palabras clave: Mximo 5 y usando palabras estndar internacionalmente aceptadas.
El cuerpo del informe: Debe contener: introduccin, objetivos, hiptesis (si lo dispone el profesor), materiales y mtodos, resultados, discusin y conclusiones, agradecimientos y bibliografa.
A continuacin se describen cada una de las partes del cuerpo del informe:
Introduccin: Indica los fundamentos tericos que sustenta el informe. Se deben citar cada uno de los conceptos expresados.
Objetivos: Hace referencia a los propsitos de la prctica, desde el punto de vista de la formacin acadmica.
Materiales y mtodos: Describe claramente los mtodos, equipos y procedimientos para permitir a los observadores repetir el experimento.
Resultados: Hace referencia a los logros obtenidos en la prctica. Estos se deben presentar en la misma secuencia en que se present la metodologa. Los resultados se pueden presentar en tablas, graficas y/o figuras. No repita en el texto los datos de las tablas o ilustraciones.
Discusin y/o conclusiones: Consiste en la interpretacin de los resultados con Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | Manual de Laboratorio 7
base en una critica cientfica, utilizando como herramienta trabajos publicados previamente que correspondan al tema de estudio en la prctica. En esta parte del informe el estudiante puede resaltar los logros alcanzados con la prctica, las competencias adquiridas y los avances logrados en el conocimiento del tema.
En cuanto a la forma del texto, este se deben presentar en tamao carta, a doble espacio, incluyendo tablas. Figuras con sus leyendas y bibliografa. Justifique mrgenes de 3 centmetros en los cuatro lados. Use letra itlica solamente para nombres cientficos y vocablos en otro idioma.
1. Numere a partir de la segunda hoja. 2. Los ttulos de las secciones deben ir al margen izquierdo y con mayscula sostenida. 3. Los ttulos terciarios deben ir en negrilla y solamente la primera letra en mayscula. 4. Cite cada figura y tabla en el texto de acuerdo con un orden numrico, por ejemplo (Fig. 4) o (Figs. 4 y 5) o (Tabla. 1.). 5. Si emplea abreviaciones, defnalas. 6. Para las unidades de medida use el sistema mtrico decimal, excepto en citas textuales, y no utilice puntos despus de cada abreviatura (g, mm, m, km, l, etc.). Cuando no van seguidos de unidades, los nmeros enteros hasta diez se escriben con la palabra (uno, dos, diez) y mayores de diez con nmeros (11, 12, 102). Cuando los nmeros van seguidos de unidad se escriben nmeros (1 cm, 10 km).
Las referencias bibliogrficas en el texto se escriben as : Un autor: Lozano (1995) o (Lozano, 1995). Dos autores: Lozano y Barrera (1994) o (Lozano y Barrera, 1994). Mas de dos autores: Lozano et al. (1993) o (Lozano et al., 1993). Cuando se trata de varias referencias en el texto se deben citar en orden Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | Manual de Laboratorio 8
cronolgico. Cada referencia citada en el texto debe aparecer en la bibliografa y viceversa.
Tablas. Las tablas numeradas consecutivamente, deben ir inmediatamente despus de ser citadas, con un ttulo conciso en la parte inferior.
Figuras. Las Fotografas, esquemas, grficas, mapas, etc., deben ir numeradas consecutivamente, inmediatamente despus de ser citadas, con un ttulo y
descripcin en la parte inferior. Las estructuras qumicas deben realizarse en el programa ACD/ChemSketch y las frmulas en el editor de ecuaciones de Microsoft Word. Bibliografa. Se debe anotar el apellido y las iniciales del nombre de todos los autores. Ordene la bibliografa alfabticamente, comenzando por el apellido del primer autor.
NORMAS DE BIOSEGURIDAD
Las normas de Seguridad en Laboratorios destinados a la docencia son un conjunto de medidas preventivas destinadas a proteger la salud de los docentes, estudiantes y personas que all laboran, frente a los riesgos propios derivados de su actividad, con el objetivo de evitar accidentes y contaminaciones tanto dentro de su mbito de trabajo, como hacia el exterior.
Las reglas bsicas aqu indicadas son un conjunto de prcticas de sentido comn realizadas en forma rutinaria. El elemento clave es la actitud pro activa hacia la seguridad y la informacin que permita reconocer y combatir los riesgos presentes en el laboratorio. Ser fundamental la realizacin meticulosa de cada tcnica, pues ninguna medida, ni siquiera un equipo excelente puede sustituir el orden y el cuidado con que se trabaja. Inicialmente se realizar una breve descripcin de los tipos de riesgo que normalmente existen en el laboratorio.
1. Riesgo Qumico: es aquel susceptible de ser producido por una exposicin no controlada a agentes qumicos. Entenderemos por agente qumico cualquier sustancia que pueda afectarnos directa o indirectamente (aunque no estemos efectuando nosotros mismos las tareas). Una sustancia qumica puede afectarnos a travs de tres (3) vas: inhalatoria (respiracin esta es, con muchsima diferencia, la principal), ingestin (por la boca), drmica (a travs de la piel).
2. Riesgo Mecnico: es aquel que puede producir lesiones corporales tales como cortes, abrasiones, punciones, contusiones, golpes por objetos desprendidos o proyectados, atrapamientos, aplastamientos, quemaduras, etc Tambin se incluyen los riesgos de explosin derivables de accidentes vinculados a Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | 10
instalaciones a presin.
3. Riesgo Elctrico: Susceptible de ser producido por instalaciones elctricas, partes de las mismas, y cualquier dispositivo elctrico bajo tensin, con potencial de dao suficiente para producir fenmenos de electrocucin y quemaduras.
4. Riesgo Biolgico: Puede ser producido por una exposicin no controlada a agentes biolgicos. Entenderemos por agente biolgico cualquier microorganismo (microbio), cultivo celular o endoparsito humano capaz de producir enfermedades, infecciones, alergias o toxicidad.
En el laboratorio de bioqumica el riego ms comn es el qumico, seguido por el riesgo mecnico, a continuacin se presenta las normas de seguridad a tener en cuenta en este laboratorio.
1. Normas Generales:
En el laboratorio no estar permitido fumar, comer ni beber. Tampoco se almacenar comida o bebida alguna en frigorficos situados en el mismo. Se deber leer la etiqueta y consultar la ficha de datos de seguridad de los productos antes de su utilizacin. No se utilizar ningn reactivo al cual le falte la etiqueta del frasco. Se debern etiquetar adecuadamente los frascos y recipientes a los que se haya trasvasado algn producto o donde se hayan preparado mezclas, identificando su contenido, a quin pertenece y la informacin sobre su peligrosidad (reproducir etiquetado original).
Se debern seguir los procedimientos y protocolos de trabajo establecidos para las tareas que se va a realizar. Se utilizarn siempre vitrinas de gases o cmaras de extraccin de gases para todas aquellas operaciones en las que se manipula sustancias muy txicas, Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | 11
carcingenas,
teratgenas,
mutgenos
y alrgenas,
para
aquellas
operaciones que generen vapores o que incluyan manipulacin de sustancias voltiles. Se trabajar siempre con los sistemas de extraccin y renovacin mecnica de aire conectados. Se utilizarn siempre los equipos de proteccin individual que se requieran (consultar procedimientos o protocolos de trabajo): como mnimo proteccin ocular (gafas /pantallas faciales) y guantes tipo ltex. Se deber asegurar la desconexin de equipos, agua, y especialmente de gas al finalizar las actividades. No se trabajar NUNCA solo en el laboratorio o taller (BAJO NINGN CONCEPTO). Nunca se efectuar actividad alguna no autorizada o no supervisada convenientemente. En el laboratorio deber utilizar siempre bata, en taller la ropa de trabajo. Se llevar el pelo siempre recogido, y no se llevar pulseras, colgantes, mangas anchas, bufandas, etc., prendas sueltas, sandalias u otro tipo de calzado que deje el pie al descubierto. Se mantendr el mximo orden y limpieza posibles dentro del laboratorio o del taller (tanto a nivel de comportamiento personal, como a nivel material). La siguiente relacin siempre se verifica.
DESORDEN = POCA SEGURIDAD.

2. Precauciones especficas: A. Manipulacin del vidrio. Muchos de los accidentes de laboratorio se producen por cortes y quemaduras con vidrio, que se pueden prevenir siguiendo unas reglas simples: Nunca fuerce un tubo de vidrio, ya que, en caso de ruptura, los cortes pueden Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | 12
ser graves. Para insertar tubos de vidrio en tapones humedezca el tubo y el agujero con agua o silicona y protjase las manos con trapos. El vidrio caliente debe de dejarse apartado encima de una plancha o similar hasta que se enfre. Desafortunadamente, el vidrio caliente no se distingue del fro; si tiene duda, usa unas pinzas o tenazas. No use nunca equipo de vidrio que est agrietado o roto. Deposite el material de vidrio roto en un contenedor para vidrio, no en una papelera.
B. Manipulacin de productos qumicos.
Los productos qumicos pueden ser peligrosos por sus propiedades txicas, corrosivas, inflamables o explosivas. (Ver anexo I). Muchos reactivos, particularmente los disolventes orgnicos, arden en presencia de una llama. Otros pueden descomponer explosivamente con el calor. Si usas un mechero Bunsen, u otra fuente intensa de calor, aleja del mechero los botes de reactivos qumicos. No caliente nunca lquidos inflamables con un mechero. Cierre la llave del mechero y la de paso de gas cuando no lo use.
No inhale los vapores de productos qumicos. Trabaje en una vitrina extractora siempre que use sustancias voltiles. Si an as se produjera una concentracin excesiva de vapores en el laboratorio, abra inmediatamente las ventanas. Si en alguna ocasin tiene que oler una sustancia, la forma apropiada de hacerlo es dirigir un poco del vapor hacia la nariz. No acerque la nariz para inhalar directamente del tubo de ensayo.
Est terminantemente prohibido pipetear reactivos directamente con la boca. Use siempre un dispositivo especial para pipetear lquidos. Un posible peligro de envenenamiento, frecuentemente olvidado, es a travs de la piel. Evite el contacto de productos qumicos con la piel, especialmente de los que sean txicos o corrosivos, usando guantes de un slo uso. Lvese las manos a menudo. Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | 13
Como norma general, lea siempre detenidamente la etiqueta de seguridad de los reactivos que vaya a usar. Las botellas de reactivos contienen pictogramas y frases que informan sobre su peligrosidad, uso correcto y las medidas a tomar en caso de ingestin, inhalacin, etc. Algunos aparatos pueden contener informacin del mismo tipo. Lee siempre detenidamente esta informacin y ten en cuenta las especificaciones que se sealan en ella.
C. Transporte de reactivos. No transporte innecesariamente los reactivos de un sitio a otro del laboratorio. Las botellas se transportan siempre cogindolas por el fondo, nunca del tapn.
D. Calentamiento de lquidos. No caliente nunca un recipiente totalmente cerrado. Dirige siempre la boca del recipiente en direccin contraria a ti mismo y a las dems personas cercanas.
E. En cuanto a la manipulacin del vidrio: Protege tus manos al introducir los tubos de vidrio en los tapones. Atencin: el vidrio caliente no se distingue del fro. No use vidrio agrietado.
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3. Protecciones individuales y colectivas frente al riesgo qumico. La principal va de entrada de contaminantes qumicos al organismo es la inhalatoria: a este aspecto, debe preponderar la utilizacin de proteccin colectiva sobre la proteccin individual, utilizndose siempre que sea posible los dispositivos tipo vitrina de gases, y sistemas de extraccin y renovacin de la atmsfera de trabajo en el laboratorio o taller. Trate de adaptar sus actividades para poder emplear este tipo de proteccin colectiva, restringiendo al mnimo la necesidad de utilizacin de Equipos de Proteccin Individual (mascaras de gases) siempre que ello sea posible (no siempre lo ser: seguramente en algunas operaciones ser imprescindible su utilizacin, por ejemplo: durante operaciones de fumigacin, trasvase de reactivos concentrados, sobreproteccin ante manipulacin de sustancias extremadamente nocivas). Otras protecciones que siempre deber utilizar cuando realice operaciones con sustancias qumicas son la proteccin ocular (gafas, pantallas faciales) y la proteccin drmica (guantes, cremas y barreras protectoras). Operaciones comunes en el laboratorio qumico: Algunas operaciones de laboratorios tales como las separaciones y extracciones plantean algunos peligros especficos y, por consiguiente, tienen reglas especficas que se deben observar.
Las principales son:
No empezar una extraccin hasta que la solucin de la cual se va a extraer, est a una temperatura inferior al punto de ebullicin del solvente de extraccin.
Si se utiliza un solvente voltil, se debe agitar suavemente el embudo de decantacin, destapada para permitir un mezclado leve. Tapar el embudo, invertir e inmediatamente abrir la llave. Hacer esto con el tapn en direccin opuesta al cuerpo. Cerrar luego la llave; agitar y volverlo a abrir con el embudo invertido. Repita este procedimiento hasta descargar el exceso de presin. No Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | 15
apuntar la salida del embudo hacia un compaero de trabajo ni hacia un mechero. Siempre colocar los embudos en un soporte de tamao adecuado con un recipiente en la parte inferior para recoger probables derrames. Si fuese necesario emplear un embudo grande, no usar tapones de vidrio sino de tefln. No se debe destilar teres, si no est seguro de que estn libres de perxido. Verificar la posible presencia de perxido con una varilla indicadora para este compuesto. Si el examen da resultado positivo, filtrar el lquido contaminado pasndolo por almina las veces que sea necesario. Cuando el peroxido ha sido eliminado totalmente descartar rpidamente la almina en los recipientes destinados para residuos slidos.
Cuando van a armarse equipos, deber tener en cuenta las siguientes consideraciones generales: Mantener limpio el lugar de trabajo. Tener solamente lo necesario para trabajar. Utilizar solamente los elementos que se recomiendan para el trabajo a realizarse. Elegir recipientes del tamao adecuado. Por lo menos un 20% de su volumen debe quedar libre. Evitar el uso de tapones. Usar siempre uniones esmeriladas, engrasadas. Examinar el estado de los materiales de vidrio. Observar que estn libres de tensiones. Debajo del vaso de reaccin, colocar un recipiente que pueda contener su volumen en caso de derrame. Asegurar los condensadores con las agarraderas correspondientes. Asegurar bien las mangueras de agua. Emplear, preferentemente, agitadores magnticos. Asegurarse de que se
encuentren correctamente alineados con los recipientes para evitar su desplazamiento. Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | 16
Armar, todo el aparato, libre de tensiones. Al armar equipos sobre bases, arcos de metal o trpodes, asegurarse de que el centro de gravedad del sistema est sobre la base y no hacia un costado.
Verificar el armado correcto de un equipo antes de empezar el trabajo. Prever un venteo para los productos que van a ser calentados. Antes de calentar un liquido, colocar esferas de vidrio o material poroso. Siempre que sea posible, usar calentadores elctricos en lugar de mecheros.
Armar siempre los equipos bajo una campana.
Las tareas que se realizan bajo campana son, por lo general, las que presentan el mayor peligro; como: Antes de iniciar una tarea bajo campana, hay que asegurarse de que el sistema de extraccin funciona correctamente como as tambin de que la mesada se encuentre limpia y que la puerta de la campana cierre bien. No debe haber sobre la campana ninguna clase de producto inflamable. Llevar a la campana solamente el material necesario para trabajar. Debe evitarse colocar el rostro de la campana. Mantener el cierre de la puerta con la menos abertura posible. Si se detiene el sistema de extraccin de la campana, interrumpir inmediatamente el trabajo y cerrar al mximo la puerta. Slo se ha de reiniciar el trabajo tras haber dejado transcurrir por lo menos cinco minutos despus de que el sistema de extraccin haya arrancado nuevamente. En caso de incendio dentro de la campana, cortar el suministro de gas y desconectar los equipos elctricos que se encuentren dentro de sta. por lo que se deben tomar algunas precauciones especiales,
Si se van a efectuar operaciones con vaco, se debern tomar las siguientes precauciones: Abrir en forma lenta los sistemas que estn al vaco, para evitar implosiones. Cuando se va a trabajar con equipos que estn al vaco, hacerlo dentro de una Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | 17
campana o con una campana protectora. Al desarmar un equipo que estuvo trabajando al vaco. Primero asegurarse de que se restableci la presin atmosfrica. Respetar tambin las indicaciones anteriores cuando se usen desecadores. Verificar el estado de las trampas antes de emplear una bomba de vaco. Si se realiza una destilacin al vaco, enfriar el equipo antes de permitir la entrada de aire. Si se van a efectuar operaciones con presin, se debern tomar las siguientes precauciones: Usar, obligatoriamente, protector facial, gafas protectoras y guantes de cuero cuando se trabaje con equipos a presin. Si se van a efectuar operaciones con vapor, se debern tomar las siguientes precauciones:
a) Si se realiza una destilacin por arrastre de vapor, evitar que el vapor circule a velocidades altas en el condensador. b) Evite el sobrellenado del baln mediante un calentamiento lento para prevenir condensaciones excesivas.
El termmetro es, quiz, el instrumento que ms se usa en un laboratorio. Su empleo correcto puede evitar errores en el trabajo, y por consiguiente percances. Tener en cuenta lo siguiente: Antes de usar un termmetro deber verificarse su precisin. Si debe controlarse la temperatura de un recipiente a travs de un corcho o un tapn de caucho (mediante una perforacin), recomendaciones para perforar los tapones: a) Verificar que el sacabocado est afilado. b) Proteger las manos contra cortaduras. c) Afirmar el tapn entre el pulgar y e ndice asentndolo sobre una madera Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | 18 seguir las siguientes
no sostenerlo sobre la palma de la mano. d) Perforar siempre desde ambos todos hasta el centro rotando el tapn para lograr un corte perpendicular. e) Si el tapn es de caucho, lubricar el perforador con agua o glicerina.
4. Seguridad en equipos de uso comn del laboratorio.
A. Centrfugas: 1) Balancear por pesada las cargas. Asegrese que los pivotes estn correctamente ubicados. 2) No abra la centrfuga hasta que est completamente detenida. 3) Primero apague o desenchufe, luego acte en el interior de la misma. 4) Use recipientes especficamente diseados para centrfugas. Respete las velocidades mximas indicadas por el fabricante para cada material.
B) Equipos de Secado: No colocar productos voltiles de temperatura de inflamacin inferior a 75C, en hornos elctricos. Para secar productos voltiles, usar vapor o baos de agua caliente. Si, inevitablemente, deben usarse calentadores elctricos para productos no voltiles, mantenerlos por debajo de los 230C.
C) Mezcladores- Homogenizadores: Los utilizados para solventes inflamables deben ser antiexplosin. Con voltiles o txicos adems, usarlos bajo campana. No sostener jarros y recipientes con las manos durante el funcionamiento.
D. Equipos Elctricos: Leer cuidadosamente las instrucciones y las normas operativas antes de usar cualquier equipo o instrumento de laboratorio y asegurarse de que funciones correctamente. No poner en funcionamiento un equipo elctrico cuyas conexiones se encuentren en mal estado o que no est puesto a tierra. Si fuese necesario conservar productos qumicos inflamables a bajas temperaturas, estos debern colocarse en refrigeradores especialmente diseados para tal fin. Use calzado protector con suela aislada cuando se van a usar equipos elctricos o electrnicos. Asegrese de que las manos estn bien secas. Siempre que se usen equipos elctricos productores de altas temperaturas (chispas, resistencias, arcos voltaicos, etc.), asegrese de que no haya productos qumicos inflamables en las cercanas. Recuerde que existe el peligro de quemaduras cuando se trabaja con equipos que emplean polmero caliente. Usar siempre delantal y guantes de cuero o de otro material resistente al calor y protector facial.
E. Radiaciones perjudiciales: Radiaciones no ionizantes: Si se van a usar equipos productores de radiaciones no ionizantes, no deben descubrirse las fuentes de rayos ultravioletas ni infrarrojos (UV IR) ya que estos rayos pueden producir lesiones en los ojos y en la piel. Radiaciones Ionizantes: Estas son mucho ms peligrosas que las anteriores aunque los aparatos de laboratorio que las producen son pocos.
5. Qu hacer en caso de accidente: Primeros auxilios Fuego en el laboratorio.
Evacuar el laboratorio, por pequeo que sea el fuego, por la salida principal o por la salida de emergencia si no es posible por la principal. Avise a todos los compaeros de trabajo sin que se extienda el pnico y conservando siempre la calma. Fuegos pequeos: Si el fuego es pequeo y localizado, apguelo utilizando un extintor adecuado, arena, o cubriendo el fuego con un recipiente de tamao adecuado que lo ahogue. Retirad los productos qumicos inflamables que estn cerca del fuego. No utilice nunca agua para extinguir un fuego provocado por la inflamacin de un disolvente. Fuegos grandes: Aisl el fuego. Utilice los extintores adecuados. Si el fuego no se puede controlar rpidamente, avise al servicio de extincin de incendios y evacue el edificio. Fuego en el cuerpo:
Si se te incendia la ropa, pida inmediatamente ayuda. Estrese en el suelo y ruede sobre si mismo para apagar las llamas. No corra ni intentes llegar a la ducha de seguridad si no est muy cerca de usted. Es su responsabilidad ayudar a alguien que se est quemando. Cbrale con una manta antifuego, condzcale hasta la ducha de seguridad, si est cerca, o hgale rodar por el suelo. No utilice nunca un extintor sobre una persona. Una vez apagado el fuego, mantenga a la persona tendida, procurando que no coja fro, nunca intentaremos despegar trozos de ropa adheridos a la piel abrasada. Si el accidentado no ha perdido el conocimiento, es muy conveniente darle a beber un vaso de agua con un poco de bicarbonato sdico y una pizca de sal; esta medida intenta compensar la prdida de lquidos a travs de la quemadura. y proporcinale asistencia mdica.
Quemaduras:
Las pequeas quemaduras de primer grado, producidas por material caliente, baos, placas o mantas calefactoras, etc., se trataran lavando la zona afectada con chorro de agua fra o incluso en un cubo con agua y hielo durante 10-15 minutos. Se puede aplicar compresa y crema para aliviar el ardor y la tirantez de la piel. Las quemaduras ms graves requieren atencin mdica inmediata. No utilice pomada grasa y espesa en las quemaduras graves. Limtese a colocar una gasa gruesa por encima, que le asle del aire. Cortes:
Los cortes producidos por la rotura de material de cristal son un riesgo comn en el laboratorio. Estos cortes se tienen que lavar bien, con abundante agua corriente, durante 10 minutos como mnimo. Observe y elimine la existencia de fragmentos de cristal, en este caso se retira con gasa y pinzas. Si son pequeos y dejan de sangrar en poco tiempo, lvelos con agua y jabn y tpelos con una venda o apsito adecuados. Si son grandes y no paran de sangrar, colqueles una apsito en la herida, aplicando una presin firme, enviando lo ms urgente posible a una asistencia mdica inmediata. Derrame de lquidos inflamables, productos txicos o corrosivos:
En este caso, interrumpa el trabajo. Informe al tcnico de laboratorio y al docente de lo ocurrido y solicite ayuda inmediata para limpiar totalmente el lugar. Asegrese de que se ha corregido totalmente el problema. Derrame de productos qumicos sobre la piel:
Los productos qumicos que se hayan vertido sobre la piel han de ser lavados inmediatamente con agua corriente abundante, como mnimo durante 15 minutos. Las duchas de seguridad instaladas en los laboratorios sern utilizadas en aquellos casos en que la zona afectada del cuerpo sea grande y no sea suficiente Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | 22
el lavado en un fregadero. Es necesario sacar toda la ropa contaminada a la persona afectada lo antes posible mientras est bajo la ducha. Recuerde que la rapidez en el lavado es muy importante para reducir la gravedad y la extensin de la herida. Proporcione asistencia mdica a la persona afectada. Actuacin en caso de producirse corrosiones en la piel:
Por cidos. Corte lo ms rpidamente posible la ropa. Lave con agua corriente abundante la zona afectada. Neutralice la acidez con bicarbonato de sodio durante 15-20 minutos. Saque el exceso de pasta formada, seque y cubra la parte afectada con linimento leo-calcareo o parecido. Por lcalis. Lave la zona afectada con agua corriente abundante y aclrela con una disolucin saturada de cido brico o con una disolucin de cido actico al 1%. Seque y cubra la zona afectada con una pomada de cido tnico. Actuacin en caso de producirse corrosiones en los ojos.
En este caso el tiempo es esencial (menos de 10 segundos). Cuanto antes se lave el ojo, menos grave ser el dao producido. Lave los dos ojos con agua corriente abundante durante 15 minutos como mnimo en una ducha de ojos, y, si no hay, con un frasco para lavar los ojos. Es necesario mantener los ojos abiertos con la ayuda de los dedos para facilitar el lavado debajo de los prpados. No frote nunca los ojos. Es necesario recibir asistencia mdica, por leve e insignificante que parezca la lesin. Actuacin en caso de ingestin de productos qumicos.
Ante un posible envenenamiento de cualquier tipo, comunquelo inmediatamente al profesor. Antes de cualquier actuacin concreta pide asistencia mdica. Si el paciente est inconsciente, pngalo en posicin inclinada, con la cabeza de lado, y chale la lengua hacia fuera. Si est consciente, mantngalo apoyado. Tpelo con una manta para que no tenga fro. Preprese para PRCTICARLE la respiracin Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | 23
boca a boca. No lo deje slo. No provoques el vmito si el producto ingerido es corrosivo. Cualquiera que sea el producto ingerido, dale a beber un litro de agua para que as la concentracin del txico sea menor. Provoque el vmito para expulsar el txico dndole a beber un vaso de agua tibia con bicarbonato o sal. A excepcin de cuando el txico sea de tipo de cidos fuertes, de lcalis fuertes o de derivados del petrleo, la accin corrosiva sobre el esfago hace que las lesiones que provocan se produzcan durante el vmito. Actuacin en caso de inhalacin de productos qumicos.
Conduzca inmediatamente la persona afectada a un sitio con aire fresco. Requiere asistencia mdica lo antes posible. Al primer sntoma de dificultad respiratoria, inicie la respiracin artificial boca a boca. El oxgeno se ha de administrar nicamente por personal entrenado. Continu la respiracin artificial hasta que el medico lo aconseje. Trate de identificar el vapor txico. Si se trata de un gas, utilice el tipo adecuado de mscara para gases durante el tiempo que dure el rescate del accidentado. Si la mscara disponible no es la adecuada, ser necesario aguantarse la respiracin el mximo posible mientras se est en contacto con los vapores txicos.
RECUERDE
1. Ante cualquier duda, consulte con el profesor. 2. Infrmese Familiarcese con los elementos de seguridad del laboratorio (extintores, lavaojos, duchas, salidas, etc.). Lea atentamente las instrucciones antes de hacer un experimento. No olvide leer las etiquetas de seguridad de reactivos y aparatos. 3. Proteja sus ojos Utilice las gafas de seguridad. No use lentes de contacto. Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | 24
4. Use la vestimenta apropiada. Lleve guantes, bata y gafas de proteccin. Cuidado con los tejidos sintticos. Use batas de algodn.
5. Aplique las normas sobre eliminacin de residuos 1) Deposite en contenedores especiales y debidamente sealizados: el vidrio roto y los reactivos txicos, nocivos o dainos para el medio ambiente. 2) En ningn caso se arrojarn residuos slidos al fregadero. 6. Al retirarse del laboratorio, Interrumpir los servicios que no quedan en uso, por ejemplo agua, electricidad, gas, vapor, etc. No dejar equipos operando sin la debida autorizacin. Cerrar puertas y ventanas.
FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS PROGRAMA DE QUMICA PRCTICA 1. RECONOCIMIENTO DE CARBOHIDRATOS

Tiempo de la prctica: 2 horas. FUNDAMENTO TEORICO
Los glcidos son molculas muy importantes en la produccin de energa celular. Uno de los azucares de mejor caracterizado es el mono-sacrido glucosa (C6H12O6). Esta molcula al ser oxidada por las clulas aporta energa y carbono necesario para la sntesis de otras macromolculas como las protenas, lpidos, cidos nucleicos y otros carbohidratos, como el glicgeno. Otros carbohidratos importantes en la nutricin humana son los monosacridos fructosa, galactosa y manosa; los disacridos, maltosa (formado por dos unidades de glucosa), sacarosa (formado por una glucosa y una fructosa) y lactosa (formado por la glucosa y la galactosa). Estos hacen parte de una gran variedad de compuestos y estructuras como determinantes antignicos, glucoprotenas, glucolpidos y antibiticos; de aqu la importancia de su estudio en bioqumica.
Los carbohidratos estn formados, estructuralmente, por una cadena de carbonos polihidroxilados unidos a una funcin carbonlica (aldehdo o cetona). Los mtodos para el anlisis cualitativo y cuantitativo de los carbohidratos se fundamentan en las propiedades qumicas de estos grupos, tales como:
1) Enolizacin: Consiste en la formacin de un intermediario inestable que contiene un doble enlace y un OH en el mismo carbono y se forma, por ejemplo en los carbohidratos, durante la isomerizacin de los monosacridos glucosa, fructosa y manosa en presencia de una base diluida.
Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | FACULTAD DE CIENCIAS 26 BSICAS
2) Mutarrotacin: Hace referencia a la propiedad que presentan las formas hemiacetlicas y cetlicas de los azcares libres para formar el azcar de cadena abierta.
3) Oxidacin: Los carbohidratos que presentan grupos aldehdos libres o potencialmente libres en las formas hemiacetlicas cclicas tienen la capacidad de actuar como agentes reductores, esto quiere decir que su grupo aldehdo es oxidado fcilmente a un cido carboxlico a pH neutro por accin de enzimas y/o agentes oxidantes. Esta propiedad permite su identificacin y cuantificacin en diversas soluciones de origen biolgico.
Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 1. RECONOCIMIENTO 27 DE CARBOHIDRATOS
No obstante, existen tres productos de oxidacin de monocasaridos entre los que se encuentra el anterior (tipo enzimtica) de los cuales mostraremos la representacin general del extremo, que es donde se diferencian, as:
4) Reduccin: El grupo carbonilo de los monosacridos puede reducirse a la funcin alcohlica mediante mtodos enzimticos y no enzimticos.
5) Deshidratacin: En presencia de cidos no oxidantes, los carbohidratos experimentan deshidratacin y forman furfural o hidroximetilfurfural. La reaccin implica que el monosacrido se condense con aminas aromticas o fenoles, se produce una coloracin intensa que permite su identificacin o cuantificacin.
Las siguientes pruebas permiten reconocer las funciones aldehdo y cetona de los carbohidratos en el laboratorio:
Ensayo de Molisch: Se utiliza cido sulfrico para obtener el furfural o un derivado del mismo el cual se reconoce con -naftol en metanol los cuales forman un compuesto de coloracin prpura-violeta. No obstante algunos carbohidratos complejos pueden dar ensayo negativo, especialmente los insolubles en agua.
Prueba de Azcares Reductores: Los azucares reductores son aquellos capaces de reducir (es decir, disminuir su nmero de oxidacin) a ciertos compuestos o complejos como el Cu+2 a Cu2O. Entre las pruebas se encuentran la de Tollens, Fehling y Benedict.
Reactivo de Fehling: Al igual que Benedict contiene un ion cprico en medio alcalino, la cual en presencia de azucares reductores da un precipitado de Cu 2O.
Prueba de Seliwanoff: Se basa en la conversin de la cetosa a hidroximetil furfural y su posterior condensacin con resorcinol con la formacin posterior de complejos coloreados.
Test de Brady (formacin de Osazonas): Los monosacridos reaccionan con la 2,4 Dinitrofenilhidrazina en medio cido, formando complejos insolubles de color amarillo, naranjo o rojo, denominadas Osazonas.
Test de Bial: Se caracteriza por la presentacin, mediante condensacin, de un producto de color azulado originado por la reaccin del furfural, derivado de la pentosa, en su reaccin con HCl y el orcinol.
Prueba de yodo-Almidn: El reactivo consiste en una solucin de Yodo y yoduro de potasio, la cual en contacto con la amilosa (esta junto con la amilpectina son los componentes del almidn) toma una coloracin azul, debido a la acomodacin intramolecular del yodo en la amilosa. OBJETIVOS
Qu el estudiante: 1. Reconozca las propiedades fisicoqumicas de los carbohidratos que permiten su determinacin cualitativa. 2. Relacione sus propiedades fisicoqumicas con su funcin biolgica. 3. Aprenda algunos procedimientos comunes para cuantificar carbohidratos en el laboratorio.
MATERIALES Y REACTIVOS
8 Tubos de ensayo de 7 mL (por grupo). 3 Pipetas graduadas de 5, 1 y 0,1 mL (por grupo) 1 Gradilla para tubos de ensayo (por grupo) 1 Pinzas de madera (por grupo). 1 Bao de agua con termostato. 1 Beacker de 250 mL (por grupo). 1 Pipeteador (por grupo). Frasco Lavador Glucosa al 5 %p/v. Almidn 5 %p/v.
Sacarosa 5 %p/v. Resorcinol cido sulfrico cido clorhdrico AL 20%. Alcohol etlico 95%. Metanol. Nitrato de plata (AgNO3) 5% Hidrxido de amono (NH4OH) 2M. Reactivo de Benedict Reactivo de Felhing A y B. Agua Destilada Papel indicador de pH universal. Solucin de lugol: Yoduro potsico (KI) al 2%; Yodato potsico (KIO3) al 4%. Reactivo enzimtico de Glucosa oxidasa Espectrofotometro visible. Celdas de vidrio.
PROCEDIMIENTO
Primera parte: Hidrlisis de la sacarosa. 1) Coloque en un tubo de ensaye 3 mL de una disolucin de sacarosa al 5%, agregue 0.5 mL cido clorhdrico al 20 % y caliente en bao mara durante 10 minutos. 2) Enfre la disolucin y neutralice con cuidado y lentamente con NaOH al 2% usando cinta indicadora de pH como indicador. Divida la disolucin en 3 partes iguales y haga las siguientes pruebas:
Prueba de Fehling. Mezcle 1 mL de la disolucin A* y 1 mL de la disolucin B* en un tubo de ensayo, agregue una parte de la disolucin de sacarosa invertida (hidrolizada) y caliente a ebullicin.
Haga la misma prueba para una muestra de la disolucin de sacarosa al 5% sin hidrolizar. Observe y anote sus resultados. Realice la prueba de Seliwanoff: Aada 0,5 mL de la sacarosa hidrolizada en un tubo limpio, seguido adicione 1 mL de reactivo de Seliwanoff (0,5 g de resorcinol en 330 mL de HCl Concentrado, agua c.sp. 1000 mL). Agite y caliente en un bao de agua hasta reducir el volumen a la mitad. Anote sus observaciones.
Segunda parte: Hidrlisis del almidn.
1) Adicione a un frasco erlenmeyer, 25 mL de solucin de almidn al 5%. 2) Separe 2 mL de esta disolucin y divdalos equitativamente en dos tubos de ensayo para efectuar las pruebas de Benedict y yodo-yoduro. 3) Agregue 3 mL de HCl del 20% a la solucin de almidn restante y agite, luego distribuya 12 mL de esta disolucin en 12 tubos de ensayo (1 mL en cada tubo), caliente con flama suave los 12 tubos en un bao Mara usando un vaso de precipitados de 400 mL que contenga una disolucin de salmuera. 4) Cada 5 minutos saque 2 tubos de ensayo, con uno realice la prueba de Benedict y con el otro haga la prueba de Yodo. En resumen los ensayos se realizaran a los 5, 10, 15, 20, 25 y 30 minutos despus de adicionar el HCl. 5) Para la prueba de yodo adicione 3 gotas de lugol a cada una de las soluciones de azcares en forma independiente. Observe la coloracin que toma la solucin al contacto con el lugol.
Tercera parte: Cuantificacin de glucosa por el mtodo de la glucosa oxidasa.
1) Prepare 1 mL de una solucin de glucosa de concentracin 0,5 g% a partir de una solucin patrn de glucosa al 1g%. 2) A partir de la solucin de 0,5 g% prepare 25 mL de diluciones con las siguientes concentraciones 0,25 0,125 0,0625 0,0312 y 0,015 g%. Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 1. RECONOCIMIENTO 33 DE CARBOHIDRATOS
3) En un tubos de ensayo agregue 2 mL de cada dilucin y despus 20 L del reactivo de trabajo (mezcla de glucosa oxidasa, peroxidasa, 4-Aminoantipirina, fenol y buffer fosfato). 4) Incube los tubos por 10 minutos a 37C. Lea la absorbancia de las muestras a longitud de onda de 500 nm, usando el reactivo de trabajo como blanco. Grafique la concentracin de glucosa en cada tubo vs la absorbancia a 500 nm. 5) Mezcle 20 L del hidrolizado de la sacarosa y 20 L del hidrolizado del almidn con 2 mL del reactivo de trabajo, incube por 10 minutos a 37C. Luego realice lectura de la absorbancia de cada muestra a 500 nm, usando el reactivo de trabajo como blanco. Extrapole el resultado de cada muestra en la curva de calibracin construida en el paso 4. RESULTADOS.
Los resultados obtenidos en las diferentes pruebas son slo cualitativos, ya que se trata de identificar, en la mayora de los casos, la funcin carbonilica presente en los carbohidratos ensayados y la presencia de azcar reductor. Finalizada la prctica complete la siguiente tabla (con signos +/-) para las muestras ensayadas y concluya qu grupo funcional est presente en cada una de ellas.
Muestra Sacarosa Sacarosa hidrolizada Almidn Almidn hidrolizado 5 min Almidn hidrolizado 10 min Almidn hidrolizado 15 min Almidn hidrolizado 20 min Almidn hidrolizado 25 min Almidn hidrolizado 30 min Felhing Selliwanof Lugol
Asumiendo que una molcula de almidn tiene un peso molecular promedio entre 105 y 106 g/mol, calcule el rendimiento de la hidrlisis del almidn en su
experimento. Pista, debe tener en cuenta la concentracin de glucosa en su muestra de almidn hidrolizado. BIBLIOGRAFA
RENDINA G. Tcnicas de Bioqumica Aplicada. Nueva editorial Interamericana S.A. Mxico 1974.
SALVE, M; PRIETO, S; AMICH, S. Laboratorio de Bioqumica. McGRAW-HILLINTERAMERICANA. Madrid. 1994.

LEHNINGER AL., NELSON DL. Principios de Bioqumica, Segunda edicin. Barcelona: Ediciones Omega; 1993.
VOET , Donald. VOET, Judith. Bioqumica. Tercera Edicin. Editorial Mdica Panamericana. Buenos Aires- Argentina, 2006.
PEARANDA, OI, et al. Revisin de la modificacin qumica del almidn con cidos orgnicos. REVISTA INGENIERA E INVESTIGACIN VOL. 28 No. 3, DICIEMBRE DE 2008 (47-52).
FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS PROGRAMA DE QUMICA PRCTICA 2. SEPARACIN DE MONOSACARIDOS POR CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA.
Tiempo de la prctica: 2 horas.
FUNDAMENTO TEORICO
El trmino cromatografa fue acuado en 1906 por el botnico ruso Mikhail Tswett para hacer referencia a la separacin de los pigmentos contenidos en extractos vegetales, conforme stos se filtraban a travs de una columna rellena de un slido poroso. Actualmente, bajo la denominacin de cromatografa se agrupan los procesos en los que los componentes de una mezcla, disueltos en una fase mvil se van desplazando con diferente velocidad a travs de una fase estacionaria. La adecuada eleccin de la fase mvil y la fase estacionaria puede hacer que tales diferencias se traduzcan en una separacin efectiva de los solutos, a la vez stos pueden identificarse atendiendo a su particular velocidad de avance.
La cromatografa en capa fina (TLC, Thin Layer Chromatography) tiene como principio hacer avanzar, por capilaridad, una fase mvil sobre una fase estacionaria plana, de modo que los solutos de la muestra aplicada se separen por su diferente factor de retencin (Rf). El Rf es el nmero que expresa la distancia que avanza un soluto divido por la distancia que avanza el frente del solvente (fase mvil).
En la cromatografa de capa fina, la fase estacionaria es un slido pulverizado que se encuentra extendido en forma de una capa fina (0,15-0,5 mm de espesor) sobre un soporte de vidrio, plstico o metal. Para conseguir la cohesin del conjunto, el slido pulverizado suele incluir un agente cementante como el sulfato de clcido o alcohol polivinilico. Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | FACULTAD DE CIENCIAS 36 BSICAS
En la industria qumica de alimentos es comn el uso de los monosacridos y disacricos como agentes edulcorantes, destacndose el uso de la glucosa, fructosa y sacarosa, con menor frecuencia se pueden encontrar la galactosa, lactosa y maltosa. Tambin se pueden encontrar en algunos productos alimenticios, polisacridos como los derivados de la celulosa, almidones, peptinas, los cuales se pueden hidrolizar por mtodos qumicos y enzimticos para obtener los constituyentes monosacridos y oligosacaridos. En general los azcares mencionados se pueden identificar por la tcnica de Cromatografa en capa Fina. OBJETIVOS
Qu el estudiante: 1. Conozca los mtodos de separacin de monosacridos y disacridos en alimentos comunes de la dieta humana. 2. Adquiera destreza en el manejo de materiales y manipulaciones asociadas con la cromatografa en capa fina. 4. Analice y compare la composicin de carbohidratos de diferentes muestras de alimentos, mediante cromatografa de capa fina.
8 Tubos de ensayo de 7 mL (por grupo). 3 Pipetas graduadas de 10, 5, 2 y 1 mL (por grupo). 3 probetas de 50 mL y de 10 mL. 1 Gradilla para tubos de ensayo (por grupo) 1 Pinzas de madera (por grupo). 1 Bao de agua con termostato. 1 Beacker de 500 mL (por grupo). 1 Vidrio reloj grande (por grupo) 1 Pipeteador (por grupo). Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 2. SEPARACIN DE 37 MONOSACARIDOS POR CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA.
Frasco Lavador Glucosa 0,1M. Sacarosa 0,1M. Galactos 0,1M Lactosa 0,1 M Maltosa 0,1 M Fructosa 0.1 M Hidrolizado de almidn Hidrolizado de sacarosa cido sulfrico concentrado Acido aceitco glacial Anisaldehido Metanol Absoluto. Agua Destilada Cmara cormatografica Capilares de vidrio Plancha de calentamiento Acetonitrilo Agua destilada
PROCEDIMIENTO
Cromatografa de capa fina: 1) Aada a un tanque de cromatografa 20 mL una mezcla de acetonitrilo: agua (85:15 v/v) para formar una capa de 1 cm de espesor. Espere 30 minutos para que la cmara de cromatografa se sature con la mezcla de solventes. Esta es la fase mvil. 2) Utilice una cromatoplaca de Silica Gel 60 F254 de 5 x 5 cm y con espesor de 0,2 mm para la corrida cromatografica. Taze suavemente con un lpiz una lnea de 1 cm desde el borde inferior y sobre esa lnea marque puntos Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 2. SEPARACIN DE 38 MONOSACARIDOS POR CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA.
equidistantes (separados 0,5 cm uno de otro), Deje una distancia de 0,5 cm a cada borde lateral de la placa. 3) Utilice un capilar o una punta de micropipeta de 10 L para aplicar una gota (0.05 mL) de cas una de las muestras de azucares (0,1 M) que se utilizarn como patrones: D-glucosa, D-fructosa, D-galactosa, sacarosa, Maltosa y Lactosa. 4) Aplique en igual forma, los extractos o preparados de azucares presentes en las diferentes muestras de alimentos. 5) Coloque la cromatoplaca en el tanque de cromatografa. Desarrolle el cromatograma, hasta que el frente del solvente se encuentre a 1 cm del borde superior. 6) Saque la cromatoplaca del tanque y marque el frente del disolvente. Seque la cromatoplaca a temperatura ambiente o en una corriente aire. 7) Revele la cromatoplaca por aspersin con el reactivo anisaldehido y acido sulfrico (Agregar 8 mL de cido sulfrico concentrado y 0,5 mL de
anisaldehido a una mezcla de 85 mL de metanol y 10 mL de cido actico glacial). Observacin: El revelado se debe realizar en una cmara de extraccin de gases. 8) Calentar la cromatoplaca en una plancha de calentamiento o en una estufa a 100C por 5 -10 minutos para desarrollar las manchas coloreadas.
Preparacin de las muestras de alimentos:
1) Muestra 1: Disuelva un dulce de su eleccin en 10 mL de agua. 2) Muestra 2: Vierta el contenido interno de dos chocolates rellenos y mezclar con 10 mL de agua. 3) Muestra 3: Pese 1 g de miel de abejas y mezcle con 10 mL de agua. 4) Muestra 4: Pese 1 g de jarabe para pancakes y disulvalo en 10 mL de agua. 5) Muestra 5: Hidrolizado del almidn obtenido en la practica 1. 6) Muestra 6: Hidrolizado de Sacarosa obtenido en la practica 2 Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 2. SEPARACIN DE 39 MONOSACARIDOS POR CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA.
RESULTADOS.
Determinar el valor Rf de los azcares utilizados como patrn y por comparacin para determinar tentativamente la presencia de esos azcares en las diferentes muestras.
BIBLIOGRAFA
GARCA SEGURA JM, et al. Tcnicas Instrumentales de anlisis en Bioqumica. Editorial Sintsis S.A. Madrid (Espaa). 2007. 292-296.
Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 2. SEPARACIN DE 40 MONOSACARIDOS POR CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA.
FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS PROGRAMA DE QUMICA PRCTICA 3. RECONOCIMIENTO DE LIPIDOS

FUNDAMENTO TEORICO
Los lpidos son sustancias no polares insolubles en agua, pero solubles en solventes orgnicos. Algunas de las caractersticas ms importantes de los lpidos: a) son componentes de las membranas biolgicas; b) son fuentes de almacenamiento de energa y carbono; c) lubricantes y protectores; d) reguladores hormonales; e) precursores de vitaminas liposolubles; f) emulsificantes digestivos, y reguladores del metabolismo intracelular.
Lpidos en una bicapa lipdica: Fosfolpidos y colesterol.
La composicin qumica de los lpidos est determinada principalmente por Carbono, hidrgeno y oxgeno, y en menor proporcin se puede encontrar el nitrgeno, fsforo y azufre. Estructuralmente se clasifican en lpidos simples
(esteres de cidos grasos y alcohol) y lpidos complejos (esfingomielinas, cerebrosidos y gangliosidos), y derivados (carotenoides, vitaminas liposolubles, Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | FACULTAD DE CIENCIAS 41 BSICAS
cidos biliares).
Otra clasificacin se fundamenta en la propiedad que tienen
algunos lpidos de formar jabones al reaccionar con una base fuerte, proceso que se conoce como saponificacin.
A continuacin se presenta algunos ejemplos de lpidos simples y lpidos complejos saponificables y no saponificables.
LPIDOS SIMPLES SAPONIFICABLES
O C R1
O H3C (CH 2)14 C O CH3 cido palmitico
H2C O HC O H2C
O C O C R3 R2
O H3C (CH 2)4 (CH CHCH 2)4 (CH 2)2 C OH
Triglicerido
cido araquidico
LPIDOS COMPLEJOS SAPONIFICABLES

O CH 2 O
O C CH 2 R1
O H2C O HC O H2C
O C O C O P OH O CH 2 NH3
+
R1
R2
CH 2 C O CH 2 H2C O
R2 O CH C OH
CH2 OH HO O H OH H H HO H HO
Fosfatidiletanolamina
Monogalactosil acil glicerol
Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 3. RECONOCIMIENTO 42 DE LIPIDOS
LPIDOS COMPLEJOS INSAPONIFICABLES
A) Derivados del Isopreno:

H3C CH3 CH3 CH3 H3C
CH3 CH3
CH3
CH3
CH3
-caroteno
CH3 HO CH3 CH3 CH3
H3C CH3
O CH3
CH3
-tocoferol
C) Esteroles y derivados
H3C CH3 H3C CH3 CH3 CH3 H H H3C CH2 Vitamina D 3 HO H H CH3 CH3
H HO
H Colesterol
Entre las pruebas cualitativas y cuantitativas para estimar los lpidos estn:
a) Hidrlisis de Triglicridos: La hidrlisis enzimtica o no enzimtica de estos lpidos consiste en la ruptura de su enlace ster en presencia de agua, lo cual produce glicerol y tres molculas de cido graso. In Vivo la reaccin ocurre intestino delgado y es catalizada por la enzima lipasa pancretica y es un paso fundamental en el proceso de digestin de los triacilgliceroles. In Vitro la reaccin ocurre en presencia de cidos y bases fuertes.
b) La hidrlisis alcalina de las grasas se conoce con el nombre de saponificacin y el producto es la sal metlica del cido graso (jabn) y el glicerol. Cuando para la reaccin de saponificacin se utilizan las bases de los metales alcalinos (por ejemplo: sodio, potasio) el resultado es un jabn soluble; mientras que, cuando la base es de un metal del grupo de los alcalinotrreos calcio), el resultado es un jabn insoluble.
O H2C O HC O H2C O C O C O C Triglicerido R3 R3 R2 R1 R2 O C O R1 C O C Jabn O OK Glicerol O O OK H2C OK
(magnesio,
OH OH OH
3 KOH
HC H2C
(Reaccin de saponificacin).
c) Transesterificacin: En presencia de cidos o bases los intercambian sus grupos alcoxi por otro alcohol.
acilgliceroles
O H2C O HC O H2C
O C O C O C R3 R2 R1 H2C OH O
cido
H3C OH
HC H2C
OH
3 H3C
C O CH3 Metilster
Metanol
OH
Triglicerido
Glicerol
R = Radical alquilo
d) Esterificacin: La reaccin se produce entre el grupo oxcido del lpido y un alcohol, en presencia de un cido (generalmente cido sulfrico u cido fosfrico), inicia por un ataque nucleoflico del oxgeno del alcohol al carbono del grupo carboxlico del lpido. El protn migra al grupo hidroxi del cido que luego es eliminado como agua. Un ejemplo de una reaccin de esterificacin In Vivo, es la sntesis de esteres de colesterol, en este caso el grupo hidrxilo del colesterol reacciona con el grupo cido de un fosfolpido. Esta reaccin es catalizada por una enzima (lecitin: colesterol aciltransferasa).
H3C O R O
R CH3 H
CH3 CH3
H O
-
H3C
H H
OColina
+
HO
Fosfatidil Colina
Colesterol
H3C
CH3 R CH3 H H H3C CH3
HO
H O
+
OColina H3C O
O H Lisolecitina
Ester del Colesterol
El mtodo qumico para la determinacin del colesterol en una muestra es la reaccin de Liebermann-Burchard. El colesterol libre y esterificado es oxidado con una mezcla de acido sulfrico y anhdrido actico, formndose un complejo que absorbe en el espectro de luz visible a longitud de onda de 410 nm.
El fundamento se basa en las siguientes reacciones:

H3C CH3 CH3 CH3 H H H3C O
H+
O
+ H3C
H3C
H HO
H O
H3C CH3 CH3 CH3 H H H3C CH3 H
H3C CH3 CH3 H H3C
Epimerizacin
O H H
-H2O
H3C
OBJETIVOS
Qu el estudiante: 1. Conozca las tcnicas de identificacin de lpidos simples y complejos en alimentos comunes de la dieta humana. 2. Relacionar las caractersticas fisicoqumicas de algunos lpidos con los mtodos utilizados para su identificacin.
Tubos de ensayo Erlenmeyer de 250 mL Vaso de precipitado de 50, 250 y 500 mL Embudo de separacin Probetas de 15 y 50 mL Balanza ter de petrleo. KOH al 30% NaCL CaCl2 Agua de bromo cido sulfrico concentrado -Naftol al 5% Cloroformo Alcohol n-butrico Tricloruro de antimonio en cloroformo saturada en fro -tocoferol al 0,02%. Pipetas de 10, 5, y 1 mL Pipeteador manual. Aceite de cocina de diferentes fuentes vegetales y animales Aceite de hgado de bacalao.
PROCEDIMIENTO
Primera Parte: Saponificacin. Agregue 10 gramos de aceite de cocina en un erlenmeyer de 250 mL: aada 30 mL de KOH al 30% en alcohol y se calienta a reflujo sobre un bao de agua durante una hora. Deje enfriar algunos minutos la muestra y aada 50 mL de agua, enfre la muestra bajo la llave. Vierta la solucin en un embudo de separacin y se extrae con 30 ml de ter de petrleo. Conserve la capa superior (fraccin saponificable) y realice con ella las siguientes pruebas:
1. Precipitacin Salina: Aada 20 mL de agua a unos 5 mL de la fraccin saponificable obtenida en el punto anterior. Adicione cloruro de sodio hasta saturacin (alrededor de 5g). Anote las propiedades fsicas del jabn que se separa. Establezca si tiene propiedades detergentes.
2. Jabones Insolubles: Adicione algunas gotas de cloruro de calcio y de cloruro de magnesio (solucin saturada) a volmenes de 5 mL de la fraccin saponificable. Observe lo qu ocurre.
3. Determinacin colorimtrica de glicerina: Aada a 5 mL de la fraccin saponificable un volumen igual de agua de bromo recin preparada (PRECAUCIN: El agua de bromo debe trabajarse en una cabina de extraccin de gases, ya que esta desprende gases que son txicos). Caliente en bao de agua hirviente o en bao de vapor durante 20 minutos, y luego se lleva a ebullicin para expulsar la totalidad del bromo. Adicione a 0,4 mL de esta solucin 0,1mL de - naftol al 5% en alcohol etlico, y 2 mL de H 2SO4 concentrado. Mezcle con cuidado, se calienta dos minutos en bao de agua hirviente, se deja enfriar. Si hay presencia de glicerina se observa un color verde azuloso. Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 3. RECONOCIMIENTO 48 DE LIPIDOS
Segunda Parte: Prueba para la determinacin de esteroles.
1. Prueba de Liebermann-Burchard para la identificacin de esteroles: Esta reaccin es especfica para los esteroles que posee grupos -OH en el carbono 3 (como el colesterol) y un doble enlace en el carbono 5. Agregue en tubos de ensayos bien secos un volumen de 2 mL de soluciones diluidas de Ergosterol y colesterol (0,02%) en cloroformo, se aade 15 gotas de de anhdrido actico; se mezcla y se deja enfriar
2. Adicione 5 gotas de cido sulfrico concentrado a cada tubo, se mezcla y se observa el desarrollo de un color. La prueba es positiva si la mezcla de reaccin toma un color verde azulado; sin embargo el Ergosterol se diferencia por la formacin de una coloracin roja transitoria previa al desarrollo del color verde.
Tercera Parte: prueba para la determinacin de Tocoferoles y Carotenos.
1. Prueba de Furter-Meyer modificada para la determinacin de tocoferoles: Agregue en un tubo de ensayo limpio y seco 1 mL de solucin de - tocoferol al 0,05% en cloroformo, aada a esta 3,5 mL de alcohol n-butrico y 0.5 ml de cido ntrico concentrado. Mezcle y caliente el tubo en un bao de agua a 80 C durante 10 minutos. La prueba es positiva para tocoferoles si aparece un color rojo bronce. RECOMENDACIN: Los carotenoides y algunos esteroles producen un color amarillo o pardo con esta prueba, llegando incluso a enmascarar el color rojo bronce que dan los tocoferoles, cuando la concentracin de los primeros es muy alta.
2. Reaccin de Carr-Price para determinacin de Vitamina A: Disuelva dos gotas de aceite de hgado de bacalao en 1 mL de cloroformo. Enfre en bao de hielo y adicione 2 mL de solucin de tricloruro de antimonio en cloroformo, saturada en fro. Anote sus observaciones. Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 3. RECONOCIMIENTO 49 DE LIPIDOS
RESULTADOS.
Resuelva las siguientes preguntas: 1) Explique los fundamentos tericos de cada uno de los procedimientos realizados en esta prctica. 2) Escriba la estructura qumica del Ergosterol e investigue su funcin biolgica. 3) Cules son las fuentes de la vitaminas liposolubles? y Cul es la funcin biolgica es ests?
BIBLIOGRAFA
RENDINA G. Tcnicas de Bioqumica Aplicada. Nueva editorial Interamericana S.A. Mxico 1974.
LOPEZ E., Anzola C. Guas de Laboratorio de Bioqumica para la Carrera de Qumica. Notas de Clase. Universidad Nacional de Colombia, 2005.
FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS PROGRAMA DE QUMICA PRCTICA 4. SEPARACIN DE LPIDOS POR CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA (CCD)
Tiempo de la prctica: 2 horas. FUNDAMENTO TEORICO
Las mezclas complejas de lpidos se pueden separar por procedimientos cromatogrficos como la CCD, tambin llamada TLC (Thin Layer hromatography). Este procedimiento, al igual que la extraccin de lpidos, se basa en la diferencia de la polaridad relativa entre estas molculas. Para la CCD se utiliza una matriz de un material insoluble y polar, como la slica gel Si (OH) 4, la cual es esparcida en una capa fina sobre un soporte, que para el caso de separacin de lpidos es generalmente vidrio.
Las muestras son colocadas en el borde de la placa, que se encuentra en una cmara con un ambiente saturado del vapor del solvente. A medida que el solvente sube por la placa por capilaridad, va arrastrando a los lpidos. Los lpidos polares se unirn fuertemente a la slica, mientras que los lpidos neutrales no sern retenidos. La separacin ocurre por una interaccin entre los lpidos y la slica y su solubilidad relativa en los solventes utilizados.
Los lpidos una vez separados pueden ser detectados en las placas de TLC mediante distintos mtodos de tincin. Las molculas que actan como reveladores reaccionan con diferentes componentes de los lpidos, como los dobles enlaces de los cidos grasos, el fsforo o los grupos amino de la cabeza polar. Las diferentes especies lipdicas son identificadas en base a su migracin
relativa en las placas, al compararlos con muestras patrn que se incluyen en las corridas.
OBJETIVOS.
Qu el estudiante: 1. Conozca las tcnicas de identificacin de lpidos simples y complejos en alimentos comunes de la dieta humana. 2. Relacione las caractersticas fisicoqumicas de algunos lpidos con los mtodos utilizados para su identificacin. 3. Adquiera destreza en el manejo de materiales y manipulaciones asociadas con separaciones orgnicas. 4. Analice y compare la composicin lipdica de diferentes muestras, mediante cromatografa de capa fina.
MATERIALES Y REACTIVOS.
Manteca Yema de huevo de gallina Aceite de hgado de bacalao Aceite de girasol Vitaminas liposolubles. 4 Tubos de ensayo de 7 mL x grupo. 2 Beacker de 250 mL x grupo. 2 Probetas graduadas de 15 y 50 mL x grupo. 3 Pipetas graduadas de 10, 5, y 1 mL x grupo. 1 Pipeteador manual x grupo. 1 vidrio reloj x grupo 1 pinza metlica pequea por grupo. Centrifuga de tubos. Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 4. SEPARACIN DE 52 LPIDOS POR CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA (CCD)
Metanol Cloroformo ter de petrleo. Hexano ter di-etlico. cido frmico cido acetico cido sulfrico concentrado. Acetona Anhdrido actico. Placa cromatogrfica de 5x7.5 cm slica gel. Capilares de vidrio. Recipiente saturado con vapor de yodo Secador de cabello Regla mtrica y lpiz
PROCEDIMIENTO.
Primera Parte: Extraccin de lpidos totales.
1) A 1 mL de la muestras agrguele 4 mL de una mezcla de metanol-cloroformo 2:1. Esta mezcla debe prepararse en el momento de usarla.
2) Mezcle vigorosamente durante 5 minutos. Caliente la muestra en un bao termostatizado a 50C durante 30 min. Deje reposar 10 minutos sobre la gradilla.
3) Agregue 1,5 mL de cloroformo y 1,5 mL de agua destilada. Mezcle nuevamente durante 5 minutos.
Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 4. SEPARACIN DE 53 LPIDOS POR CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA (CCD)
4) Centrifugue por 5 minutos a 10.000 rpm. Extraiga la fase inferior (fase orgnica) y transfirala a otro tubo limpio y seco.
5) Evapore el solvente de la fase orgnica recuperada, la cual contiene los lpidos extrados de las muestras, esta se utilizar en la cromatografa de capa fina. Extraiga los lpidos de la muestra con 0,5 mL de cloroformo.
Segunda parte: Cromatografa Unidimensional.
1) Agregue 10 mL de la fase mvil (acetona/hexano 1:3 v/v) a un beacker de 500 mL. Este siste,a arrastra a los lpidos no polares. Tapare el beacker con un vidrio reloj para saturarlo (cmara cromatogrfica).
2) Trace sobre la cromatoplaca una lnea de origen con lpiz. PRECAUCIN: la lnea deber quedar por encima del nivel de disolvente cuando la cromatoplaca se introduzca en la cmara). 3) Con ayuda de un capilar siembre 5L de la muestra, luego la siguiente, conservando siempre la distancia de 1,0 cm entre ellas.
4) Seque bien la placa cromatogrfica bajo una corriente de aire. Introduzca la cromatoplaca en la cmara saturada con la fase mvil. Tenga el cuidado de ubicar la placa en el centro del recipiente, sin que est en contacto con las paredes y de forma de que el extremo con las manchas quede sumergido dentro del solvente.
5) Apoye el otro extremo de la placa a la boca del frasco, luego tpelo y deje que el solvente suba por capilaridad hasta que el frente del disolvente est a una distancia aproximada de 2 cm. del extremo superior de la placa (desarrollo de la cromatografa). Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 4. SEPARACIN DE 54 LPIDOS POR CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA (CCD)
6) Retire la cromatoplaca de la cmara y squela por 5 min con aire caliente. Una vez seca, desarrollar la placa en una cmara para cromatografa de capa fina estabilizada por 10 min con la segunda fase mvil:
cloroformo/metanol/actico/agua (50:25:8:2) v/v. IMPORTANTE: Terminar la corrida antes que el solvente llegue al borde superior de la placa.
7) Saque la placa del frasco, marque el lugar hasta donde subi el solvente (frente del solvente). Luegop deje que esta seque al aire libre durante 15 minutos.
8) Introduzca la placa en otra cmara saturada con yodo. Esperar hasta que observe el revelado de las muestras.
9) Calcule el factor de retencin (Rf) de cada lpido. El Rf es un parmetro caracterstico de cada analto y se calcula El Rf se calcula midiendo el desplazamiento del compuesto a partir del origen/ desplazamiento del solvente a partir del origen.
Tercera Parte: Cromatografa Bidimensional:
1) Siembre la muestra en forma de punto, en la interseccin de ambas lneas, como se muestra en la figura (IMPORTANTE: Evaporar el solvente con una corriente de aire, a medida que se va aplicando la muestra sobre la cromatoplaca).
2) Desarrolle la primera dimensin de la placa en una cmara estabilizada por 10 minutos con cloroformo/metanol/hidrxido de amonio (13:5:1) v/v. Secar la placa con aire caliente por 15 minutos.
3) Una vez seca la muestra, desarrolle la segunda dimensin de la placa en la cmara saturada con cloroformo/acetona/metanol/actico/agua (6:8:2:2:1) v/v. IMPORTANTE: Terminar la corrida antes que el solvente llegue al borde superior de la cromatoplaca.
4) Seque la cromatoplaca e introdzcala en un frasco con vapores de yodo. RESULTADOS.
1) Calcule los Rf. para cada uno de los componentes lipidicos separados en la cromatografa Unidimensional y Bidimensional. 2) Establezca diferencias en composicin y cantidad relativa de los componentes lpidicos de cada muestra. 3) Investigue la composicin lipidica de cada una de las muestras ensayadas y ordnelas en forma decreciente de acuerdo a su polaridad. BIBLIOGRAFA.
MATHEWS,Christopher et al. Bioqumica. 3 ed. Madrid: Addison Wesley, 2003. 353-363 p.
FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS PROGRAMA DE QUMICA PRCTICA 5. PROPIEDADES BIOQUMICAS DE LOS AMINOACIDOS
FUNDAMENTO TEORICO
Los aminocidos son molculas orgnicas cuya frmula general es la siguiente:
En solucin acuosa estas molculas se disocian formando iones dipolares o formas zwitterions, en las cuales el extremo carboxilo esta disociado y el amino se encuentra protonado.
La presencia de grupos aminos y carboxilos en su estructura, le da un carcter anfiprtico a la molcula, es decir que puede comportarse como un cido o como una base, segn el pH del medio en el cual se encuentra. En medio cido, los aminocidos actan como una base conjugada, mientras que en medio bsico acta como cido conjugado. Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | FACULTAD DE CIENCIAS 57 BSICAS
Las curvas de titulacin de los aminocidos mono carboxlicos y mono amnicos, (como por ejemplo la glicina), da lugar a dos equilibrios de titulacin, cada uno correspondiente a los grupos disociados. Para este caso es fcil establecer el valor de pK NH3+ y del pK COO- de cada especie mediante una curva de titulacin.
El pK para la deprotonacin del grupo amino se puede calcular por la adicin de base, mientras que el pK para el grupo carboxilo se puede establecer por la adicin de un cido. La adicin de una base o un cido fuerte formar una solucin amortiguadora, consistente en un par cido-base conjugado que resiste los cambios de pH. Una solucin amortiguadora formada por un cido dbil y su base conjugada, puede ser cida, neutra o bsica dependiendo de la posicin que mantengan entre s los siguientes equilibrios qumicos:
El primer equilibrio favorece la formacin de un sistema amortiguador cido, mientras que el segundo favorece la formacin de un amortiguador bsico. Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 5. PROPIEDADES 58 BIOQUMICAS DE LOS AMINOACIDOS
OBJETIVOS.
Que el estudiante: a) Compruebe el carcter anfiprtico de los aminocidos. b) Aprenda a calcular el punto Isoelctrico de un aminocido. c) Prediga el valor del pH durante una titulacin cido-base de un aminocido. MATERIALES Y REACTIVOS.
Vasos de precipitado de 100 y 500 mL. Pipeta graduada de 1 mL (para el NaOH). Pipeta graduada de 1 mL (para el HCl). Bureta de 25 mL. Soporte universal y pinzas Frasco lavador. Pipeteador manual. pH metro digital Agitador magntico. Glicina 0,025 mol/L. cido asprtico 0,025 mol/L. Arginina 0,025 mol/L. HCl 0,1M. NaOH 0,1M. Formaldehdo 37% neutralizado. Indicador fenolftalena. Agua destilada. Papel milimetrado.
Curvigrfo.
Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 5. PROPIEDADES 59 BIOQUMICAS DE LOS AMINOACIDOS
PROCEDIMIENTO.
Parte 1: Titulacin de una solucin de glicina con NaOH en ausencia de formaldehdo. a) Adicione HCL 0,1 M a un volumen de 25 mL de glicina 0,025 M, hasta llevar a pH 1,5. Agregue de dos a tres de indicador fenolftalena. Observe el color de la solucin. b) Titule la solucin anterior con NaOH 0,1 M en volmenes de 1 mL. Agite la solucin, mida el pH y anote cada lectura. Continu la adicin de NaOH hasta alcanzar un pH de 12.
Parte 2. Titulacin de una solucin de glicina en presencia de exceso de formaldehdo. a) Adicione a 25 mL de glicina un volumen igual a 5 mL de formaldehdo al 37% (previamente neutralizado). b) Realice el mismo procedimiento de la parte 1. Repita el mismo procedimiento con el cido asprtico y la arginina.
RESULTADOS.
1) Registre los datos de cada titulacin en tablas de Equivalentes de NaOH gastado vs pH. 2) Con estos datos elabore una grfica de valores de pH vs volumen en mL de NaOH gastados en la titulacin, segn el caso. Localice en la grfica los diferentes pK de los aminocidos. Utilice la ecuacin de Henderson Hasselbalch para realizar los respectivos clculos matemticos de pK. Identifique en la grfica el pH donde tiene poder amortiguador el aminocido. 3) Discuta sobre la funcin del formaldehido en la titulacin. : BIBLIOGRAFA. Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 5. PROPIEDADES 60 BIOQUMICAS DE LOS AMINOACIDOS
CONN, Eric et al. Bioqumica Fundamental. 4 ed. Mxico: Limusa S.A, 2001. 2132 p.
SKOOG, Douglas et al. Qumica Analtica 7 ed. Madrid: McGraw-Hill Interamericana, 2001. 278-313 p.
Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 5. PROPIEDADES 61 BIOQUMICAS DE LOS AMINOACIDOS
FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS PROGRAMA DE QUMICA PRCTICA 6. SEPARACIN DE AMINOCIDOS POR CROMATOGRAFA EN PAPEL
FUNDAMENTO TEORICO
Los L- aminocidos que se encuentran en las protenas se presentan en forma de iones dipolares, poseen cadenas laterales caractersticas, algunas no polares, otras polares o sin carga elctrica a pH fisiolgico. Es posible obtener su separacin por diferentes mtodos, basados bien en su movimiento en un campo elctrico (electroforesis), o en la afinidad que cada aminocido tenga por los componentes estacionario o mvil de un sistema cromatogrfico.
La separacin cromatogrfica de los L-aminocidos est basada en la diferencia en la velocidad de desplazamiento estas molculas al ser arrastradas por una fase mvil, a travs de un lecho cromatogrfico que contiene la fase estacionaria. Las propiedades fisicoqumicas de los aminocidos son las que determinan la movilidad de los aminocidos entre s y con respecto a la fase mvil; mientras que la base de la separacin cromatogrfica ser, por tanto, la diferencia en la migracin de los mismos.
Existen varias clases de cromatografa, una de las que permite la separacin de aminocidos es la cromatografa en papel. En esta tcnica la fase estacionaria es una tira de papel filtro, las muestras son adsorbidas en la superficie del papel por la accin de fuerzas electrostticas (Fuerzas de Van Der Waals, puentes de hidrogeno, efectos inductivos, etc.). Como fase mvil se utiliza un sistema de solventes que se escoge de acuerdo a la polaridad de los componentes a separar en la mezcla. La separacin se da mediante migracin diferencial de los Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | FACULTAD DE CIENCIAS 62 BSICAS
componentes, ya que la fase mvil arrastra a las substancias que son apolares y aquellas ms polares son retenidas por la fase estacionaria.
Los componentes separados son visualizados en forma de manchas, las cuales son reveladas con agentes qumicos como la Ninhidrina (hidrato de
tricetohidrindeno) y el reactivo de Folin (1,2-naftoquinona-4-sulfonato de sodio en medio bsico), cuya reaccin con los aminocidos producen sustancias coloreadas. La reaccin de la ninhidrina con los aminocidos viene dada por la siguiente ecuacin:
Nota: los nicos aminocidos que no reaccionan con la ninhidrina son la prolina y la hidroxiprolina debido a que sus grupos -aminos son parte de un anillo de cinco miembros. OBJETIVOS.
Qu el estudiante: 1. Conozca uno de los mtodos bioqumicos de separacin y anlisis de aminocidos. 2. Comprenda los procesos fisicoqumicos que participan en la separacin de aminocidos por medio de una cromatografa de adsorcin diferencial. 3. Diferencie los tipos de cromatografa. 4. Reconozca las propiedades de los aminocidos que hace posible su separacin por cromatografa de papel.
Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 6. SEPARACIN DE 63 AMINOCIDOS POR CROMATOGRAFA EN PAPEL
Tira de papel filtro de 8 x 11.5 cm Frasco de vidrio de 250 mL con tapa. Secador de pelo Dos clip Pinza metlica pequea Estufa a 80 C Cistena 0.05 M Histidina 0.05 M Glicina 0,05M Alanina 0,05 M Tiptofano 0,05 M Fenilalanina 0,05M Arginina 0,05 M cido Glutamico 0,05M cido Aspartico 0,05 M Prolina 0,05M Histidina 0,05M Mezcla Etanol: agua: amoniaco (80:10:10) Aminocido glicina 0.05 M Solucin de Ninhidrina 0.2% en acetona. Tubo capilares de vidrio Mechero
PROCEDIMIENTO.
1) Prepare una mezcla de aminocidos utilizando las mismas cantidades de cada uno. 2) Sobre una tira de papel filtro trace una lnea de origen con lpiz. Coloque 2 l de una mezcla de aminocidos sobre la lnea trazada, con ayuda de un tubo capilar de vidrio previamente preparado. A una distancia de separacin de 1,5 cm coloque 2 l de uno de los aminocido, luego los siguientes, conservando siempre la distancia de 1,5 cm entre cada muestra. 3) Seque bien la hoja de papel utilizando el secador de cabello. 4) Mida 50 mL del sistema solvente (etanol: agua: amoniaco) y virtalo con cuidado en el interior del frasco, sin que se impregne las paredes de este con la solucin. 5) Enrolle el papel filtro ya seco, con la ayuda del tubo de ensayo e introducir el cilindro de papel en el frasco con la ayuda de las pinzas metlicas. Tenga el cuidado de ubicar el cilindro de papel en el centro del recipiente, sin que este en contacto con las paredes y de forma de que el extremo con las manchas quede sumergido dentro del solvente. 6) Sujete los bordes exteriores del papel al recipiente con la ayuda de los clips.. Tape el frasco de vidrio y dejar que el solvente suba por capilaridad por un tiempo aproximada de 2 horas (desarrollo de la cromatografa). 7) Saque el rollo de papel mediante las pinzas metlicas, dejndolo secar al aire libre durante 30 minutos, una vez seca el papel retire los clips. 8) Roci sobre le papel una solucin de ninhidrina con ayuda de un atomizador. Tenga la precaucin de impregnar el papel, lo menos posible. Guarde el papel en oscuridad, dejando secar durante 20 min en estufa a 40 C. 9) Calcule el Rf. Este es un parmetro que es caracterstico de cada aminocido y se determina mediante la siguiente frmula: El Rf se calcula midiendo el desplazamiento del compuesto a partir del origen/ desplazamiento del solvente a partir del origen. Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 6. SEPARACIN DE 65 AMINOCIDOS POR CROMATOGRAFA EN PAPEL
RESULTADOS.
1) Escriba la ecuacin especfica de los aminocidos utilizados cuando reaccionan con la ninhidrina. 2) Calcule los Rf para cada uno de los aminocidos estudiados. 3) Investigue si es posible separar los 20 aminocidos naturales por cromatografa en papel. 4) Qu es una cromatografa de papel bidimensional? 5) Consulte qu otros tipo de cromatografa se utiliza para la separacin de aminocidos.
BIBLIOGRAFA.
MATHEWS,Christopher et al. Bioqumica. 3 ed. Madrid: Addison Wesley, 2003. 353-363 p. GARCA SEGURA JM, et al. Tcnicas Instrumentales de anlisis en Bioqumica. Editorial Sintsis S.A. Madrid (Espaa). 2007. 292-296.
Experimentos de Bioqumica. Mxico: McGraw Hill Interamericana; 1993.
FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS PROGRAMA DE QUMICA PRCTICA 7. SEPARACIN DE LAS PROTEINAS DEL PLASMTICAS
FUNDAMENTO TEORICO
La sangre est formada por elementos celulares (40%) como eritrocitos, linfocitos y plaquetas, los cuales estn dispersos en el plasma. El 8% del peso corporal equivale a la sangre, del cual el 60% es plasma (este se compone de agua, 90% y solutos totales como protenas globulinas y fibringeno). Las protenas plasmticas, a excepcin de las inmunoglobulinas, son sintetizadas en el retculo endoplasmtico de los hepatocitos. Entre las funciones generales de estas protenas se encuentran: a) Mantener la presin onctica de la sangre; b) participar en la regulacin del equilibrio electroltico y cido base; c) servir como fuente de nitrgeno y aminocidos para la nutricin de tejidos; d) facilitar el transporte de nutrientes y productos del metabolismo; e) activar mecanismos de coagulacin y anticoagulacin; y, f) reconocer agentes extraos y activar respuestas de defensa celular.
La concentracin de protenas en el plasma sanguneo es de 6,4 a 7,5g/100 mL y de acuerdo con su perfil electrofortico pueden dividirse en tres grupos, a saber: Albmina, globulinas (1, 2, y ) y fibringeno. Cada uno de estos grupos de protenas puede ser separada con base en su diferencia de solubilidad en soluciones salinas. A continuacin se presenta sus rangos de concentracin normal en el plasma sanguneo.
Albmina, esta constituye el 55% de las protenas plasmticas, su concentracin oscila entre 3 - 5 g/ 100 mL de plasma. Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | FACULTAD DE CIENCIAS 67 BSICAS
1- globulinas, representa 5% de las protenas del plasma, a este grupo pertenece la 1- glicoprotena cida, 1- antitripsina y la 1- fetoglobulina; su concentracin es 0,3 a 0,6 g/100 mL de plasma.
2- globulinas, 9% de las protenas plasmticas, (0,4 a 0,9 g/100 mL), son ejemplos de este grupo las siguientes: haptoglobulina, ceruplasmina y 2 macroglobulina.
- globulinas, 13% de las protenas, su concentracin est entre 0,6 y 1,1 g/100 mL de plasma. A este grupo pertenecen la protena C reactiva, la transferan y la 2- microglobulina.
globulinas,
pertenecen
al
grupo
las
inmunoglobulinas,
con
una
representatividad del 11% y un rango normal de 0,7 a 1,5 g/ mL de plasma. Fibringeno: Es el 7% de las protenas del plasma, su concentracin en este fluido es de 0,2 a 0,4 g/100 mL. OBJETIVOS.
Qu el estudiante: 1. Identifique los diversos procedimientos de separacin de los componentes principales de la sangre. 2. Analice el comportamiento de las protenas plasmticas y la hemoglobina en presencia de sales y cido tricloroactico. MATERIALES Y REACTIVOS.
Sulfato de amonio. NaCl 2%. Albmina al 1% Solucin de HgCl2 0,005M.Cistena 0.05 M Histidina 0.05 M Glicina 0,05M
Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 7. SEPARACIN DE 68 LAS PROTEINAS DEL PLASMTICAS
cido actico glacial. Acetato de plomo 0,005M. Solucin EDTA 0,05M. Etanol al 95% Centrifuga Bao serolgico. Tubos de ensayo Pipetas de 5, 10 y 25 mL. Pipeteador manual.
PROCEDIMIENTO.
Primera parte: Obtencin de fibringeno y albmina plasmtica.
1) Obtenga 10 mL de plasma sanguneo tal como se indica en la prctica No 8. 2) Aada al plasma sanguneo una cantidad suficiente de Sulfato de Amonio saturada (72.6g/100 mL de H2O) para una saturacin final del plasma del 25%. 3) La muestra se somete a centrifugacin a 10.000 r.p.m por 10 minutos. Durante la centrifugacin se forma un precipitado de fibringeno, el cual se separa del sobrenadante con cuidado. 4) El sobrenadante recuperado se trasvasa a un tubo limpio y seco. Se aumenta la concentracin de Sulfato de amonio hasta el 33%, aadiendo mayor cantidad de la solucin de sulfato de amonio saturada. 5) Para el clculo de la cantidad de sulfato de amonio necesaria para llevar una solucin a una saturacin especifica, a 23 C es: X = 53, 3 (S2 S1)/10,2S2 6) Donde X = gramos de sulfato de amonio slido que se aaden a 100 ml de solucin de saturacin S1 para alcanzar la saturacin S2. S1 = saturacin de la solucin inicial. S2= saturacin de la solucin final.
Nota: S1 y S2 son fracciones de saturacin para transformarlas en porcentaje, es necesario multiplicarlas por 100.
7) Se somete la muestra a centrifugacin a 10.000 r.p.m/ 10 min. El precipitado que se forma corresponde a las euglobulinas. 8) El sobrenadante obtenido en el paso anterior se lleva hasta una saturacin del 46%, aadiendo ms Sulfato de amonio. En este caso el precipitado que se forma es de seudoglobulinas. 9) El sobrenadante se lleva a una saturacin del 64%, y por centrifugacin se separa la albmina. 10) El resto de la albmina se separa del sobrenadante aadiendo unos cristales de Sulfato de amonio hasta alcanzar la saturacin completa. 11) Los precipitados de fibringeno y albmina se reconstituyen en 5 mL de NaCl al 2% y se guardan para su posterior anlisis.
Segunda parte: Coagulacin del fibringeno
12) Aada tres a cinco gotas de trombina preparada al fibringeno reconstituido. Repita el procedimiento con la albmina precipitada con sulfato de amonio al 64% de saturacin. Anote sus observaciones.
Tercera parte: Efecto de la concentracin de alcohol en la solubilidad de la albmina.
13) Se ponen en un bao de hielo cinco (5) tubos que contienen los reactivos sealados en el cuadro que se muestra abajo.
14) Observe lo que ocurre en cada tubo. Formule una hiptesis para explicar su observacin.
15) A continuacin espere a que los tubos alcancen la temperatura ambiente, ponindolos en un bao de agua a 40 C. Luego vuelva a enfriarlos a 0 C. Observe lo que sucede y formule una explicacin.
Cuarta parte: precipitacin de protenas por metales.
16) Aada 3 mL de solucin transparente de albmina al 1% y ligeramente alcalinizada a un tubo de ensayo de 19 mL. Adicione a esta 1 mL de solucin de HgCl2 0,005 M. Observe si hay formacin de precipitado.
17) Aada algunas gotas de cido actico glacial, constate si el precipitado se disuelve.
18) Repita este procedimiento con acetato de plomo 0,005 M. Espere 5 minutos y aada 1mL de EDTA 0,05 M. Anote sus observaciones. Formule una hiptesis para explicar su observacin.
RESULTADOS. 1) Explique los conceptos de Salting in y de Salting out. 2) Investigue la funcin que cumple el fibringeno y la albmina en la sangre. 3) Explique cules son los procedimientos para evitar la formacin de fibringeno In vivo y cul es su aplicacin en la prctica mdica. Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 7. SEPARACIN DE 71 LAS PROTEINAS DEL PLASMTICAS
4) Calcule la concentracin de alcohol en cada uno de los tubos del procedimiento de la tercera parte de la prctica. 5) Cul es el producto de la reaccin de las protenas y los iones metlicos como Hg, Pb, Cu y Zn? Cul es la importancia clnica de esta propiedad de las protenas.
BIBLIOGRAFA.
RENDINA G. Tcnicas de Bioqumica Aplicada. Mxico; Nueva editorial Interamericana S.A. 1974. Experimentos de Bioqumica. Mxico: McGraw Hill Interamericana; 1993.
FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS PROGRAMA DE QUMICA PRCTICA 8. EXTRACCION Y CARACTERIZACION DE LA CASEINA

FUNDAMENTO TEORICO
La leche contiene diversas protenas: Casenas, alfa-lactoabumina, betalactoglobulina, inmunoglobulinas, lactoferrina y lactoperoxidasa. Las casenas son las protenas ms abundantes de la leche, ya que representan el 80% de las protenas totales (aproximadamente 2,8 gramos/ 100 mL). Las casenas de la leche tienen pesos moleculares que oscilan entre 25.000 y 40.000; las ms importantes son la (alfa), la (beta) y la (kappa), que representan, respectivamente, el 50, 30 y 15% del total de las casenas. En la leche, estas protenas se asocian entre si para formar micelas, que se encuentran estabilizadas y solubilizadas gracias a la presencia de la casena , y del calcio.
Cuando se va a fabricar queso, se agregan a la leche cuajo (enzimas coagulantes, principalmente Renina), que catalizan la ruptura de un solo enlace peptdico de la -casena, la unin entre el aminocido fenilalanina en la posicin 105 y la metionina en la 106, lo que provoca la desestabilizacin de las micelas y por lo tanto la precipitacin de casi todas las casenas, las que posteriormente se van a transformar en queso. El suero restante contiene principalmente lactosas y protenas solubles (lacto-albumina y lacto-globulina), las protenas del suero del queso tienen excelentes propiedades funcionales y un valor nutritivo muy alto debido a su excepcional contenido en lisina, triptfano, metionina y cistena.
OBJETIVOS.
Que el estudiante: 1) Realice extraccin de la casena de la leche y verificar su naturaleza proteica. 2) Calcule el rendimiento de la extraccin de la casena de la leche. 3) Cuantifique la concentracin de casena en una solucin. 4) Caracterice el perfil electrofortico de la protena extrada por SDSPAGE MATERIALES Y REACTIVOS.
Leche descremada Acido actico Etanol absoluto Solucin de NaCl 0,9% Albumina srica Bovina Reactivo de Bradford Reactivo de Millon Hidrxido de sodio al 10% Sulfato de cobre (II). Acido ntrico concentrado. Agua destilada Mechero Mortero Papeles filtro (uno por grupo) Varilla de vidrio Beacker de 100 mL Tubos de ensayo (10 por grupo) Pipeteadores Pipetas de 10 y 5 mL Gradilla de madera Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 8. EXTRACCION Y 74 CARACTERIZACION DE LA CASEINA
Balanza analtica. Espectrofotmetro visible Celdas para espectrofotmetro plsticas Agua destilada Micropipetas de 20, 200 y 1000 uL Puntas para micropipetas. Agitador magntico
PROCEDIMIENTO.
A. Tcnica de extraccin:
1) Verter aproximadamente 30 mL de leche descremada en un beacker de 100 mL. Calentar la lecha hasta 40 C, adicionando por goteo, acido actico 2 M, agitando en forma continua y hasta que no se observe mas precipitacin.
2) Dejar decantar, guardar el suero y pasar el slido obtenido a otro beacker. disgregar el slido con ayuda de una varilla. Lavar con 20 mL de etanol absoluto y dejar decantar.
3) Desechar el lquido y secar el slido entre hojas de papel de filtro por 24 horas. Pese la cantidad de casena obtenida y calcule el rendimiento de la extraccin.
4) Pasar pequeas fracciones de solido a 3 tubos de ensayos limpios y secos. Observaciones: La casena no utilizada se puede secar en estufa, pulverizar en un mortero y guardar en frasco de vidrio.
B. Reacciones de caracterizacin de la casena.
Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 8. EXTRACCION Y 75 CARACTERIZACION DE LA CASEINA
1) Reaccin de Biuret: Agregar sobre la casena 20 gotas de solucin acuosa al 10 % de hidrxido de sodio y 2 gotas de solucin acuosa de sulfato de cobre (II). Anotar sus observaciones.
2) Reaccin xantoproteca: Agregar sobre la casena del otro tubo de ensayo, 10 gotas de acido ntrico concentrado. Anotar sus observaciones.
3) Reaccin de Milln: Colocar 2 gotas de Reactivo de Millon y si no se observa cambio, calentar suavemente con mechero. Anotar sus observaciones.
C. Cuantificacin de Protena total por el ensayo de Bradford.
1) Realizar una curva de calibracin usando como protena patrn Albumina Srica Bovina (BSA) de concentracin 0,02% p/v. Prepare diluciones del BSA con solucin de NaCl 0,9%, como se describe a continuacin:
2) Mezclar el contenido de cada tubo suavemente. Deje reposar por 15 minutos. Calcule la concentracin final de BSA en cada uno de los tubos usando la frmula de las diluciones. Lea la densidad ptica de cada dilucin a longitud de onda de 620 nm. Anote cada lectura.
3) Construya una grafica de densidad ptica vs concentracin (mg/mL).
4) Pese 100 mg de la casena extrada de la leche y solubilcela en 100 mL de solucin de cloruro de sodio 0,9% p/v. Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 8. EXTRACCION Y 76 CARACTERIZACION DE LA CASEINA
5) Mezcle 1 mL de reactivo de Bradford con 20 L de la solucin de casena preparada. Mezcle y lea la densidad ptica de la solucin a longitud de onda de 620 nm. Calcule la concentracin de casena en mg/mL, extrapolando el valor de la densidad ptica en la curva de calibracin de BSA. RESULTADOS.
Compare el valor de la concentracin terica de la casena con el valor de la concentracin de casena calculada por fotocolorimetra. Existe diferencia? Si la respuesta es positiva, explique por qu?
BIBLIOGRAFA.
MATHEWS,Christopher et al. Bioqumica. 3 ed. Madrid: Addison Wesley, 2003. 353-363 p. GARCA SEGURA JM, et al. Tcnicas Instrumentales de anlisis en Bioqumica. Editorial Sintsis S.A. Madrid (Espaa). 2007. 292-296.
CONN, Eric et al. Bioqumica fundamental. 4 ed. Mexico. Limusa S.A., 2001. 101-107 p.
BRADFORD MM. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal Biochem 1976; 72:248-254.
Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 8. EXTRACCION Y 77 CARACTERIZACION DE LA CASEINA
FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS PROGRAMA DE QUMICA PRCTICA 9. AISLAMIENTO DE CIDOS NUCLEICOS

FUNDAMENTO TEORICO
Los cidos nucleicos son un grupo de macromolculas que participan en los procesos de transmisin de la informacin gentica durante el proceso de divisin celular y expresin de las distintas protenas. Existen dos tipos de cidos nucleicos: el ADN (cido desoxirribonucleico) y el ARN (cido ribonucleico). En la clula el ADN se encuentra en el ncleo, en las mitocondrias y en los cloroplastos; mientras que el ARN se encuentra en el ncleo, en las mitocondrias, en los ribosomas y en el citoplasma. Ambos tipos de cidos nucleicos se encuentran en los procariotes y en los eucariotes, mientras que en los virus se encuentra solo uno de los dos.
Tanto el ADN como el ARN estn conformados qumicamente, por la unin de una cadena de polinucletidos formada por repeticin de varios nucletidos, los cuales estn formados por la unin de un nuclesido y un grupo fosfrico. Los nuclesidos se originan por la unin de una base nitrogenada (purina o pirimidina) con un azcar pentosa (D- ribosa, en el caso del ARN y la D- desoxirribosa en el caso del ADN), esta unin es mediada por un enlace - N- glucosdico entre el carbono anomrico de la pentosa y el N1 de la pirimidina o el N9 de la purina. (Ver estructuras a continuacin). Tanto el ADN como el ARN estn formados por cuadro bases nitrogenadas, a saber: dos purinas y dos pirimidinas. Las bases purnicas son: adenina (A) y guanina (G); las pirimidnicas son: citosina (C), timina (T) y uracilo (U). En el ARN la timina es reemplazada por el uracilo
Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 9. AISLAMIENTO DE 79 CIDOS NUCLEICOS
La unin de dos nucletidos mediante un enlace fosfodiester, entre el grupo fosfato de la posicin 5 de uno de los nucletidos y el hidroxilo de la posicin 3 del otro, da lugar a un dinucletido. La adicin de sucesivos nucletidos da lugar a una cadena de polinucletido.
La separacin, identificacin y cuantificacin del ADN y del ARN se constituye hoy en da en tcnicas fundamentales para la investigacin y el diagnstico de patologas. Para la obtencin de los cidos nucleicos, se requiere de la combinacin de una serie de procedimientos que van desde la homogenizacin del tejido, ruptura de las membranas celulares, separacin de los cidos nucleicos de las protenas, y purificacin del mismo OBJETIVOS.
Qu el estudiante: 1) Conozca cmo est organizada la cromatina en las clulas eucariticas. 2) Aisl los cidos nucleicos de diversas muestras de biolgicas a travs de tcnicas bsicas de la Bioqumica. 3) Reconozca la funcin que cumple cada uno de los reactivos utilizados en el proceso de extraccin de cidos nucleicos.
Pipetas graduadas de 1 y 5 mL. Tubos de ensayo de 7 mL. Tubos de ensayo de 15 mL. Gradilla para tubos de ensayo Micropipetas automticas de 10L y 1000L. Puntas desechables con capacidad para 200L y 1000L. Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 9. AISLAMIENTO DE 80 CIDOS NUCLEICOS
Celdas de cuarzo para el espectrofotmetro. Microcentrifuga refrigerada. Espectrofotometro UV-visible Bao termostatado Tris HCl 0,5M. EDTA 0,5M. SDS (Sodio dodesil sulfato) 10% p/v. Etanol Absoluto fro. NaCl 0.1 M Acetato de sodio 3 M pH 5.2 Acetato de amonio 5 M. Cloroformo Alcohol isoamlico Fenol Agua destilada Frasco Lavador Varilla de vidrio Hgado de res o pollo.
PROCEDIMIENTO.
Parte 1. Extraccin de ADN genmico.
1) Agregue 2 mL de buffer de extraccin (Tris HCl 10mM (pH 8), EDTA 50 mM y NaCl 1,4 M) a un volumen de 7,5 mL de muestra previamente homogenizada. Mezcle vigorosamente.
2) Agregue 0,4 mL de SDS 10% p/v. Caliente en bao de agua a 65 C durante 90 minutos, invirtiendo el tubo cada 15 minutos.
3) Centrifugue por 10 minutos a 5.000 r.p.m. y reparta el sobrenadante en tubos de ensayo de 7 mL (mximo 2 mL por tubo). Agregue igual volumen (2 mL) de la mezcla fenol:cloroformo: alcohol isoamlico (25:24:1) y agite por inversin, suavemente, durante 5 a 10 minutos.
4) Centrifugue a 3000 r.p.m. durante 10 minutos. Traspase la fase acuosa superior a un nuevo tubo. Aada un volumen igual de CIoroformo: alcohol isoamilico (24:1).
5) Centrifugue durante 10min a 3000 rpm. Transfiera el sobrenadante a un tubo limpio, cuidando de no tocar la interfase.
6) Agregue 0,6 volmenes de etanol absoluto fro por las paredes del tubo y observe la precipitacin del ADN en la interfase. Extraiga el ADN con una varilla de vidrio, rotndola para formar un ovillo y continu con el protocolo de la parte 3.
7) Si no se obtienen fibras realice el protocolo de la parte 2 de esta gua y luego con la parte 3.
Parte 2. Precipitacin del ADN.
1) Mida el volumen de la muestra de ADN con ayuda de una micropipeta.
2) Ajuste la concentracin de sal adicionando 1/ 10 del volumen de acetato de sodio 3M (pH 5,2) o acetato de amonio 5 M. Mezclar bien.
3) Adicione de 2 a 2,5 volmenes de etanol fro al 100% (calculado posterior a la adicin del acetato de sodio).
4) Coloque el tubo sobre hielo o almacene a una temperatura de -20 C por un tiempo mayor a 30 minutos.
5) Centrifugue la muestra a una velocidad de 3000 r.p.m por 10 a 15 minutos. Decante el sobrenadante cuidadosamente y lave el precipitado con 1 mL de etanol al 70%.
6) Centrifugue nuevamente y descarte el sobrenadante. Seque el precipitado a temperatura ambiente.
Parte 3. Espectro UV del ADN.
1) Disuelva el ADN en 2 a 4 mL de agua destilada. Mida el volumen final. Agregue el ADN disuelto a una cubeta de cuarzo limpia y seca.
2) Introduzca la cubeta en un espectrofotmetro UV-Visible. Determine el espectro de absorcin de la muestra desde 300 200 nm, usando como blanco agua destilada.
3) Anote la absorbancia de la muestra a 250, 260 y 280 nm. Si la lectura a 260 queda por fuera del rango fotomtrico, prepare con una alcuota de 0,2 mL, diluciones seriadas, x 10, x 100 y x1000 para leer la absorbacia. Calcule la relacin de absorbancia 260/280. RESULTADOS.
Presente un informe de sus resultados de la siguiente forma: a) Calcule la concentracin del ADN extrado. b) Calcule la cantidad de ADN obtenido. c) Calcule la pureza del ADN Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 9. AISLAMIENTO DE 83 CIDOS NUCLEICOS
BIBLIOGRAFA.
SAMBROOK, Joseph; FRITSCH, Edward y MANIATIS, Tom. Molecular Cloning a Laboratory Manual. 2 ed. Vol. 1. New York: Cold Spring Harbor Laboratory, 1989.
NELSON, David y COX, Michael. Lehninger Principios de Bioqumica. 4 ed. Barcelona: Ediciones Omega, 2006. MATHEWS, Christopher et al. Bioqumica. 3 ed. Madrid: Addison Wesley, 2003. 311-347 p.
FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS PROGRAMA DE QUMICA PRCTICA 10. ELECTROFORESIS DE ACIDOS NUCLEICOS
FUNDAMENTO TEORICO
En la actualidad, la investigacin molecular requiere de la separacin de macromolculas especficas a partir de mezclas complejas. Las tcnicas electroforticas proveen tales herramientas y permiten, inclusive, la identificacin, cuantificacin, separacin y caracterizacin de molculas o fragmentos de molculas especficas. La electroforesis es la migracin de partculas inicas bajo la influencia de un campo elctrico; estas partculas migran hacia el ctodo o nodo (electrodos - y +), en dependencia de una combinacin de su carga, peso molecular y estructura tridimensional. Dos fuerzas de accin opuesta determinan la velocidad de la partcula en cuestin; por un lado, la fuerza elctrica, que la atrae al electrodo, cuya intensidad es directamente proporcional a la carga y, de acuerdo a la segunda ley de Newton le impone una aceleracin directamente proporcional al cociente carga/masa (q/m).
Fuerza (F) = masa (m) x aceleracin (a)
a = F/m
Por otro lado, la fuerza de rozamiento, que se opone a la migracin con una intensidad que depende del tamao y la forma de la partcula y de las caractersticas del medio (viscosidad y estructura, por ejemplo).
La electroforesis es una de las herramientas bsicas de la biologa molecular. Este mtodo permite: a) un anlisis rpido y preciso de mezclas de varios fragmentos Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | FACULTAD DE CIENCIAS 85 BSICAS
de ADN en funcin de su tamao; b) la recuperacin de fragmentos de ADN de determinado tamao para su posterior utilizacin en ingeniera gentica.
Electroforesis en geles de agarosa: La electroforesis de agarosa se utiliza en el laboratorio para separar macromolculas en solucin, en forma analtica (es decir, slo para verlas) o preparativa (para purificarlas). Los cidos nuclecos tienen un fosfato cargado negativamente por nucletido, como el peso molecular de los cuatro nucletidos es similar, la relacin q/m es independiente de la secuencia y el tamao de la molcula. Por lo tanto la aceleracin impuesta por la fuerza elctrica es igual para cualquier molcula de cido nucleco. La nica diferencia en velocidad de migracin estar dada por diferencias en la fuerza de rozamiento, o sea de su forma y de su tamao. En la electroforesis el medio de soporte para las molculas de cidos nuclecos es una red molecular de un polmero orgnico, conocida como gel, por su consistencia gelatinosa. La ms utilizada en el laboratorio de biologa molecular es la agarosa, un derivado del agar-agar (el de las placas de Petri), un polisacrido extrado de un alga que forma, al disolverlo, una red estabilizada poli interacciones no covalentes. Durante la electroforesis de agarosa, la mezcla de molculas de ADN de distinto tamao migran (correr, en la jerga de laboratorio) a travs del gel durante un cierto tiempo y se obtiene una separacin en la que la distancia recorrida por una molcula es inversamente proporcional al logaritmo de su peso molecular (o de su longitud en pares de bases). El tamao de una muestra incgnita puede estimarse corriendo en paralelo muestras de longitud conocida (marcadores de peso molecular).
Cuando se hace un anlisis electrofortico de muestras de cidos nuclecos que no poseen todos la misma forma, debido, por ejemplo, a la presencia de estructuras secundarias que dependen del apareamiento interno, o sea, de la secuencia (RNA o DNA simple cadena), es necesario, para determinar su peso molecular, homogeneizar su estructura. Para ello se utilizan agentes denaturantes fuertes que destruyan la estructura secundaria, por ejemplo urea, formamida, formaldehdo o pH bsico (para DNA). Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 10. 86 ELECTROFORESIS DE ACIDOS NUCLEICOS
La velocidad de migracin de las molculas depende de su peso molecular y la fuerza de rozamiento.
OBJETIVOS.
Qu el estudiante: 1) Conozca los principios de la migracin electrofortica, la electroforesis, as como la aplicacin de estas tcnicas en la investigacin molecular. 2) Reconozca los tipos de electroforesis apropiado para el anlisis de fragmentos de ADN de acuerdo a su tamao. 3) Desarrolle destreza en la preparacin de los geles de agarosa. 4) Compare los tamaos entre s de los distintos tipos de ADNs (procariote y eucariote). MATERIALES Y REACTIVOS. Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 10. 87 ELECTROFORESIS DE ACIDOS NUCLEICOS
Cmara de electroforesis horizontal. Fuente de poder. Regulador de voltaje. Lmpara de UV y mscara protectora para ojos. Agitador con plancha de calentamiento. Balanzas analticas. Pesa sustancia
Puntas desechables para micropipetas. Gradillas para tubos eppendorf Tubos eppendorf de 1,5 mL Tubos Falcon de 50 mL Vaso de precipitado de 200 mL. Matraces aforados de 1000 mL. Agitador de vidrio. Guantes desechables. Tris Base cido actico glacial EDTA cido brico Azl de bromofenol Xylene cyanol FF Ficoll Type 4000 Bromuro de Etidio Agarosa Guantes desechables.
Soluciones de uso general:
TAE 50 X, compuesto por: 242 g de Tris base, 57.1 g de cido actico glacial, 100 mL de EDTA 0.5M y agua destilada hasta completar volumen hasta 1 litro, en un matraz aforado de vidrio.
TBE 10X, compuesto por: 108 g de Tris base, 55 g de cido brico, 40 mL de EDTA 0.5 M (pH 8) y agua destilada hasta completar volumen hasta 1 litro en un matraz aforado de vidrio.
Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 10. 88 ELECTROFORESIS DE ACIDOS NUCLEICOS
Buffer Muestra 6x, compuesto por: Azul de Bromofenol 25% w/v, Xylene cyanol FF 0.25% w/v, Ficoll Type 4000 15% y EDTA 120 mM, preparar un volumen de 10 mL en un tubo de Falcon de 50 mL.
Solucin de Bromuro de Etidio a una concentracin de 10 mg/mL (precaucin el Bromuro de Etidio es txico, por lo que su manipulacin debe hacerse con guantes). PROCEDIMIENTO.
1) Preparar 100 mL de agarosa al 0.7% en un vaso de precipitado de vidrio. Pesar 0.7 g de agarosa y adicionar 100 mL de TBE 1X o TAE 1X.
2) Disolver la agarosa sobre una plancha de calentamiento, hasta que la solucin se observe clara.
3) Atemperar la solucin hasta una temperatura cercana a los 55 C (El Bromuro de Etidio puede adicionarse a la solucin de agarosa en este punto a una concentracin de 0.5 g /mL. PRECAUCION EN BROMUTO DE ETIDIO ES CANCERIGENO, USAR GUANTES).
4) Preparar la cubeta de geles sellando los extremos con cinta de enmascarar. Colocar el peine sobre la cubeta de geles dejando un espacio de aproximadamente 1 centmetro entre el extremo final del gel y el peine.
5) Adicionar la solucin de agarosa a la cubeta de geles y esperar aproximadamente 30 minutos a que solidifique a temperatura ambiente. Remover suavemente el peine y colocarlo en la cmara de electroforesis, adicionar el buffer de corrida (el mismo buffer utilizado para preparar el gel), hasta que el gel este totalmente sumergido. Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 10. 89 ELECTROFORESIS DE ACIDOS NUCLEICOS
6) Las muestras se prepararan de la siguiente forma: Adicionar 1 L de buffer muestra 6x por cada 5 L de solucin de ADN. Mezclar bien. Cargar 5 -12 L de ADN en cada carril (para un mini gel).
7) Correr la electroforesis a 50-150 voltios, hasta que los marcadores hayan migrado a una distancia apropiada, esto dependiendo del tamao del ADN a visualizarse. Si el bromuro de Etidio no fue agregado previamente al gel, teirlo con una solucin de 0.5 g /mL de Bromuro de Etidio disuelta en el buffer de corrida. Visualizar las bandas de ADN en un transiluminador con luz UV
BIBLIOGRAFA.
SAMBROOK, Joseph; FRITSCH, Edward y MANIATIS, Tom. Molecular Cloning a Laboratory Manual. 2 ed. Vol. 1. New York: Cold Spring Harbor Laboratory, 1989.
NELSON, David y COX, Michael. Lehninger Principios de Bioqumica. 4 ed. Barcelona: Ediciones Omega, 2006.
Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 10. 90 ELECTROFORESIS DE ACIDOS NUCLEICOS
FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS PROGRAMA DE QUMICA PRCTICA 11. OBTENCIN DE BIODIESEL EMPLEANDO UNA LIPASA
FUNDAMENTO TEORICO
La
federacin Europea de
Biotecnologa
menciona, en 1983, que los
biocatalizadores inmovilizados son enzimas, clulas u organelos (o combinacin d ellos) confinados o localizados en cierta regin definida del espacio, con retencin de su actividad cataltica y, si es necesario de su viabilidad y que pueden ser usados de modo repetido y continuo.
Entre las ventajas de empleo de los biocatalizadores inmovilizados estn: Aumento de estabilidad del biocatalizador Disminucin de los costos del proceso por reutilizacin del biocatalizador, simplificacin de los pasos de recuperacin y purificacin Posibilidad de utilizar distintas configuraciones y modos de produccin
Entre las desventajas podemos mencionar Potencial alteracin de la conformacin de la enzima respecto a su forma nativa provocando la posible prdida de su actividad cataltica. Heterogeneidad en la distribucin del biocatalizador sobre el soporte.
La lipasa es una enzima cuya actividad principal es catalizar la hidrlisis del triacilglicerol a glicerol, actuando como catalizador en reacciones lipolticas a travs de la hidrlisis de los enlaces ster de acilgliceroles. El centro activo est formado por una triada cataltica de los aminocidos Serina, Histidina y Asparagina. El Biodiesel es un biocombustible lquido que se obtiene a partir de Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | FACULTAD DE CIENCIAS 91 BSICAS
aceites vegetales o grasas animales, mediante procesos de esterificacin y transesterificacin.
OBJETIVOS.
Qu el estudiante: 1) Reconozca los procesos biocataliticos como una opcin para promover reacciones qumicas y sus aplicaciones. 2) Ejemplifique la reaccin de hidrlisis de cidos grasos para la obtencin del biodiesel.
Cmara cromatografica. Cromatoplacas de Silica Gel 60 F254 Frasco Erlenmeyer de 25 mL Capilares de vidrio Embudo de separacin Frasco color mbar Probeta de 10 mL Pipetas de 1 y 5 mL Lipasa B de Candida antrctica inmovilizada (Movozyme 435) Metanol absoluto Hexano Acetato de etilo Acido actico Etanol cido sulfrico Cristales de Yodo Espatula Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 11. OBTENCIN DE 92 BIODIESEL EMPLEANDO UNA LIPASA
Agitador magntico Guantes desechables.
PROCEDIMIENTO.
1) Colocar en un frasco erlenmeyer de 25 mL, 8,4 mL de aceite vegetal (maz, soya o aceite quemado) y 200 mg de Lipasa B de Candida antrctica inmovilizada. Agitar la mezcla en un agitador magntico a una temperatura de 35C durante 2,5 horas.
2) Aadir fracciones de 0,4 mL de metanol cada 20 minutos durante 2,5 horas siguientes. Tomar una gota con ayuda de un tubo capilar para la cromatografa en capa fina antes de cada adicin.
3) Analizar el biodiesel obtenido mediante Cromatografia en capa fina de la siguiente forma Colocar 5 mL de una fase mvil (hexano/acetato de tilo/cido actico 94:5,5:0,5) en la cmara cromatografica. Sobre una cromatoplaca de 5 cm de alto x 2,5 cm de ancho, colocar una muestra de aceite comercial, biodiesel sintetizado a los diferentes tiempos y biodiesel comercial 1%. Eluir la placa aproximadamente 20 minutos Secar y rociar con mezcla de revelado (etano/metanol/cido sulfrico
40:25:35), dejar reposar y aplicar calor. Si la reaccin se ha completado, separe el biosiesel empleando un embudo de separacin. Si la reaccin de trans-esterificacin no se ha completado, deje incubar 1 hora ms a 35C con agitacin. Tomar una muestra para Cromatografa de capa fina, analizar y recuperar el biodiesel de la mezcla empleando un embudo de separacin y almacenar Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 11. OBTENCIN DE 93 BIODIESEL EMPLEANDO UNA LIPASA
en un frasco mbar.
RESULTADOS.
Determine el Rf de las muestras eludas en la placa cromatografica obtenida. Mida el volumen del biodiesel obtenido Determine el porcentaje de transformacin
RESULTADOS.
MIRANDA R., et al. Qumica Verde Experimental. Universidad Nacional Autnoma de Mxico: Facultad de Estudios Superiores Cuautitln. 2011.
WADE, L. G. Qumica Orgnica. Editorial Pearson. Segunda Edicin. Mxico, 1993.
Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 11. OBTENCIN DE 94 BIODIESEL EMPLEANDO UNA LIPASA
BIBLIOGRAFIA GENERAL
ALDRICH. Catalog Handbook of Fine Chemicals. 1994-1995. ALEMANY M. Prcticas de Bioqumica. Editorial Alambra, S.A. Mxico 1982. BRADFORD MM. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal Biochem 1976; 72:248-254. GARCA SEGURA JM, et al. Tcnicas Instrumentales de anlisis en Bioqumica. Editorial Sintsis S.A. Madrid (Espaa). 2007. 292-296. HACKETT Y ROBBI. Manual de seguridad y primeros auxilios. Editorial Alfa Omega 1992. HARRIS C. Manual de medidas acsticas y control del ruido. Editorial Mc Graw Hill. Mxico 1995. HERRERA E. Elementos de bioqumica. Editorial Mc Graw Hill Interamericana. Mxico 1993. LEHNINGER AL., NELSON DL. Principios de Bioqumica, Segunda edicin. Barcelona: Ediciones Omega; 1993. LOPEZ E., Anzola C. Guas de Laboratorio de Bioqumica para la Carrera de Qumica. Notas de Clase. Universidad Nacional de Colombia, 2005. LUDWIG H. Buenas prcticas de laboratorio y buenas prcticas de fabricacin actuales. Hewlwtt Packard 1995. MIRANDA R., et al. Qumica Verde Experimental. Universidad Nacional Autnoma de Mxico: Facultad de Estudios Superiores Cuautitln. 2011. NOLLER, C. Qumica Orgnica. Editorial Interamericana. Tercera Edicin. Mxico. 1980. ORGANIZACIN MUNDIAL DE LA SALUD (OMS) . Manual de bioseguridad en el laboratorio 1994. Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 11. OBTENCIN DE 95 BIODIESEL EMPLEANDO UNA LIPASA
PEARANDA, OI, et al. Revisin de la modificacin qumica del almidn con cidos orgnicos. REVISTA INGENIERA E INVESTIGACIN VOL. 28 No. 3, DICIEMBRE DE 2008 (47-52). RENDINA G. Tcnicas de Bioqumica Aplicada. Nueva editorial Interamericana S.A. Mxico 1974. SALVE, M; PRIETO, S; AMICH, S. Laboratorio de Bioqumica. McGRAWHILL-INTERAMERICANA. Madrid. 1994. SAMBROOK, Joseph; FRITSCH, Edward y MANIATIS, Tom. Molecular Cloning a Laboratory Manual. 2 ed. Vol. 1. New York: Cold Spring Harbor Laboratory, 1989. SIGMA. Biochemicals and Reagents for Life Science Research. 2000-2001. SKOOG, D; HOLLER, J; y NIEMAN, T . Principios de Anlisis Instrumental. Quinta Edicin. New York. 2001. UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO. Manuales
Departamentales. Bioqumica y Biologa Molecular. Facultad de Medicina UNAM. 1999-2000. VOET, Donald. VOET, Judith. Bioqumica. Tercera Edicin. Editorial Mdica Panamericana. Buenos Aires- Argentina, 2006. WADE, L. G. Qumica Orgnica. Editorial Pearson. Segunda Edicin. Mxico, 1993.
Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 11. OBTENCIN DE 96 BIODIESEL EMPLEANDO UNA LIPASA

Manual de Laboratorio D Ebioquimica

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Dary Luz Mendoza Meza. Q.F.

, MsC | Manual de Laboratorio 1

BARRANQUILLA COLOMBIA 2012

Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | Manual de Laboratorio 2

INTRODUCCIN AL LABORATORIO DE BIOQUMICA

REGLAS GENERALES DE LABORATORIO

Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | Manual de Laboratorio 6

PREPARACION DE LOS INFORMES DE LA PRCTICA.

cronolgico. Cada referencia citada en el texto debe aparecer en la bibliografa y viceversa.

Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | Manual de Laboratorio 9

DESORDEN = POCA SEGURIDAD.

B. Manipulacin de productos qumicos.

Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | 14

Las principales son:

Armar siempre los equipos bajo una campana.

4. Seguridad en equipos de uso comn del laboratorio.

Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | 19

Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | 20

5. Qu hacer en caso de accidente: Primeros auxilios Fuego en el laboratorio.

Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | 21

Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | 25

FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS PROGRAMA DE QUMICA PRCTICA 1. RECONOCIMIENTO DE CARBOHIDRATOS

Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | FACULTAD DE CIENCIAS 26 BSICAS

Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 1. RECONOCIMIENTO 27 DE CARBOHIDRATOS

Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 1. RECONOCIMIENTO 28 DE CARBOHIDRATOS

Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 1. RECONOCIMIENTO 29 DE CARBOHIDRATOS

Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 1. RECONOCIMIENTO 30 DE CARBOHIDRATOS

Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 1. RECONOCIMIENTO 31 DE CARBOHIDRATOS

Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 1. RECONOCIMIENTO 32 DE CARBOHIDRATOS

Segunda parte: Hidrlisis del almidn.

Tercera parte: Cuantificacin de glucosa por el mtodo de la glucosa oxidasa.

Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 1. RECONOCIMIENTO 34 DE CARBOHIDRATOS

SALVE, M; PRIETO, S; AMICH, S. Laboratorio de Bioqumica. McGRAW-HILLINTERAMERICANA. Madrid. 1994.

Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 1. RECONOCIMIENTO 35 DE CARBOHIDRATOS

Preparacin de las muestras de alimentos:

FACULTAD DE CIENCIAS BSICAS PROGRAMA DE QUMICA PRCTICA 3. RECONOCIMIENTO DE LIPIDOS

Lpidos en una bicapa lipdica: Fosfolpidos y colesterol.

Otra clasificacin se fundamenta en la propiedad que tienen

LPIDOS SIMPLES SAPONIFICABLES

O H3C (CH 2)14 C O CH3 cido palmitico

O H3C (CH 2)4 (CH CHCH 2)4 (CH 2)2 C OH

LPIDOS COMPLEJOS SAPONIFICABLES

Monogalactosil acil glicerol

Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 3. RECONOCIMIENTO 42 DE LIPIDOS

LPIDOS COMPLEJOS INSAPONIFICABLES

A) Derivados del Isopreno:

Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 3. RECONOCIMIENTO 43 DE LIPIDOS

Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 3. RECONOCIMIENTO 44 DE LIPIDOS

CH3 R CH3 H H H3C CH3

Ester del Colesterol

Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 3. RECONOCIMIENTO 45 DE LIPIDOS

El fundamento se basa en las siguientes reacciones:

H3C CH3 CH3 CH3 H H H3C CH3 H

H3C CH3 CH3 H H3C

Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 3. RECONOCIMIENTO 46 DE LIPIDOS

Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 3. RECONOCIMIENTO 47 DE LIPIDOS

Segunda Parte: Prueba para la determinacin de esteroles.

Tercera Parte: prueba para la determinacin de Tocoferoles y Carotenos.

Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | PRCTICA 3. RECONOCIMIENTO 50 DE LIPIDOS

Dary Luz Mendoza Meza. Q.F., MsC | FACULTAD DE CIENCIAS 51 BSICAS

Primera Parte: Extraccin de lpidos totales.

Segunda parte: Cromatografa Unidimensional.