UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA FACULTAD DE INGENIERIA EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS DEPARTAMENTO ACADEMICO DE ALIMENTOS

TRABAJO N2: ESTERILIZACION

DOCENTE CURSO ALUMNOS CICLO

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Blga M. Sc. Margarita Alcedo Romero. MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS I FERNANDEZ ROMERO, Mery. 2013 II

TINGO MARA PER

I.

INTRODUCCION

Los microorganismos pueden ser destruidos, inhibidos o muertos por agentes fsicos o qumicos. Se dispone actualmente de una gran variedad de tcnicas y agentes que actan de manera diferente y cada uno tiene sus propios lmites de aplicacin de prctica.

Entre los agentes fsicos ms utilizados estn el calor, la presin, la radiacin, los filtros y el ultrasonido. Entre los agentes qumicos se encuentran los compuestos de cloro, yodo, flor y bromo; metales pesados como el mercurio; as mismo alcoholes, fenoles, aldehdos y cetonas entre otros. La eleccin del mtodo de esterilizacin depende de la naturaleza del material que va a ser tratado. El material que se va a esterilizar debe prepararse de tal manera que se conserve sin contaminar una vez esterilizado.

II. -

OBJETIVOS

Proporcionar al estudiante conocimientos bsicos sobre los principales mtodos empleados en la esterilizacin, tanto para la eliminacin o destruccin completa de microorganismos

contenidos en objetos Impartir conocimientos de cmo prevenir el ingreso de los microorganismos en un ambiente determinado estril.

III. 3.1.

MARCO TEORICO

CONCEPTO DE ESTERILIZACIN La esterilizacin es el procedimiento por el cual de destruyen los

microorganismos y sus formas resistentes, que se encuentran contaminando la superficie de un objeto o general. El xito del estudio de un microorganismo al estado de pureza depende de la esterilizacin, ya que el material requerido debe reunir las condiciones necesarias de asepsia que garanticen la exactitud y validez de un diagnostico o estudio de investigacin en particular. 3.2. MTODOS DE ESTERILIZACIN Los microbios se matan por medio de agentes fsicos o agentes qumicos, otros incluyen los agentes mecnicos. Los mtodos de esterilizacin comprenden entonces, todos los procedimientos fsicos, mecnicos y qumicos que se emplean para destruir grmenes patgenos. Los ms utilizados en la actualidad son los mtodos fsicos (calor, radiaciones, filtracin, centrifugacin) y los mtodos qumicos (agente qumico). 3.2.1. MTODOS FSICOS 3.2.1.1. Calor Hmedo material de estudio en

La utilizacin del calor y su eficacia depende de dos factores: el tiempo de exposicin y la temperatura. Todos los microorganismos son susceptibles, en distinto grado, a la accin del calor. El calor provoca desnaturalizacin de protenas, fusin y desorganizacin de las membranas y/o procesos oxidantes irreversibles en los

microorganismos. El calor hmedo produce desnaturalizacin y coagulacin de protenas. Estos efectos se deben principalmente a dos razones: el

agua es una especie qumica muy reactiva y muchas estructuras biolgicas son producidas por reacciones que eliminan aguay el vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho ms elevado que el aire. Procedimientos: A. Ebullicin: Se requiere un recipiente con agua. Es la aplicacin del calor mediante la ebullicin del agua a presin atmosfrica (100 oC). Mediante este mtodo se esterilizan inyectadoras, agujas e instrumentos de ciruga menor. No es confiable en su totalidad este mtodo por cuanto quedan las esporas.

B. Tyndalizacin: Esterilizacin por accin discontinua del vapor de agua a una temperatura de 100 oC en varias sesiones. Se basa en el principio de Tyndal. Las bacterias que resisten una sesin de calefaccin, hecha en determinadas condiciones, pueden ser destruidas cuando la misma operacin se repite con intervalos separados y en varias sesiones. Se efecta por medio del autoclave de Chamberland, dejando abierta la vlvula de escape, o sea funcionando a la presin normal. Puede tambin realizarse a temperaturas ms bajas, 56 u 80 ocupara evitar la descomposicin de las sustancias a esterilizar, por las temperaturas elevadas.

C. Pasteurizacin: Es la aplicacin de una temperatura inferior a 110 C durante 30 minutos. La aplicacin del calor va seguida de un rpido enfriamiento. Se usa para prevenir las infecciones de origen lcteo y retasar la descomposicin de la leche, ya que las bacterias de la leche no forman esporas (bacilo tuberculoso, salmonella, estreptococo y brcela).

D. Vapor a presin (autoclave): Se realiza la esterilizacin por el vapor de agua a presin. El modelo ms usado es el de

Chamberland. Esteriliza a 120 a una atmsfera de presin (estas condiciones pueden variar) y se deja el material durante 20 a 30 minutos. El vapor a presin proporciona temperaturas altas con penetracin y humedad en abundancia que facilitan la coagulacin de las protenas.

3.2.1.2.

Calor Seco

El calor seco produce desecacin de la clula, es esto txicos por niveles elevados de electrolitos, fusin de membranas. Estos efectos se deben a la transferencia de calor desde los materiales a los microorganismos que estn en contacto con stos. La accin destructiva del calor sobre protenas y lpidos requiere mayor temperatura cuando el material est seco o la actividad de agua del medio es baja. Entre los mtodos que utilizan el calor seco como medio de esterilizacin se destacan: Flameado: Consiste en la exposicin directa del instrumento a una flama en forma directa por poco tiempo con el mechero de Bunsen. Incineracin: Consiste en someter el material contaminado a altas temperaturas en hornos especiales para reducirlo prcticamente a cenizas. Su fin es evitar el vertido de material de alto riesgo en la basura. Estufa (Horno Pasteur de aire caliente) Por medio de las estufas de doble cmara, el aire caliente generado por una resistencia, circula por la cavidad principal y por el espacio entre ambas cmaras, a temperatura de 170 C para el instrumental metlico y a 140 C para el contenido de los tambores. Se mantiene una temperatura estable mediante

termostatos de metal, que al dilatarse por el calor, cortan el circuito elctrico.

3.2.1.3.

Radiaciones

La accin de las radiaciones del tipo de radiacin y el tiempo de exposicin. a. Radiaciones ionizantes: Producen iones y radicales libres que alteran las bases de los cidos nucleicos, estructuras proteicas y lipdicas, y componentes esenciales para la viabilidad de los microorganismos, dando lugar a mutaciones en los

microorganismos que los incapacitan metablicamente para producir una enzima esencial y sobreviniendo la muerte bacteriana. Las radiaciones tienen gran penetrabilidad y se las utiliza para esterilizar materiales termolbiles (termosensibles) como jeringas descartables, sondas, etc. Se utilizan a escala industrial por sus costos. b. Rayos Gamma: Su empleo esta basado en los conocimientos sobre la energa atmica. Este tipo de esterilizacin se aplica a productos o materiales termolbiles y de gran importancia en el campo industrial. Puede esterilizar antibiticos, vacunas, alimentos, etc. c. Rayos X: Penetran bien, pero requieren mucha energa, son pocos operativos para su empleo masivo, su uso es muy costoso, por lo tanto son muy poco usados con fines de esterilizacin d. Rayos Ultravioletas: Afectan a las molculas de DNA de los microorganismos. El ADN absorbe una longitud de onda de 2600 y libera energa ocasionado re arreglo de enlaces qumicos son escasamente penetrantes y se utilizan para superficies, se utilizan para la esterilizacin en quirfanos.

3.2.1.4.

Mecnicos

Filtracin: En la filtracin se usan membranas filtrantes con poros de un tamao determinado. El tamao del poro depender del uso al que se va a someter la muestra. Los filtros que se utilizan pueden no retener virus o micoplasmas, estos ltimos estn en el lmite de separacin segn el dimetro de poro que se utilice. La filtracin se utiliza para emulsiones oleosas o soluciones termolbiles. Su usa para esterilizar aceites, algunos tipos de pomadas, soluciones oftlmicas, soluciones intravenosas, drogas diagnsticas, radiofrmacos, medios para cultivos celulares, y soluciones de antibiticos y vitaminas. Este mtodo es til para identificar microorganismos en muestras de agua potable y otras sustancias. Tambin l aire puede ser sometido a una limpieza exhaustiva provocando su paso a travs de materiales capaces de retener los microorganismos y partculas en suspensin. Tipos de filtros: 1. Filtros profundos o Filtros de profundidad: Consisten de un material fibroso o granular prensado, plegado, activado, o pegado dentro de los canales de flujo. En este tipo de filtros la retencin de las partculas se produce por una combinacin de absorcin y de retencin mecnica en la matriz. 2. Membranas filtrantes: Tienen una estructura continua, y la retencin se debe principalmente al tamao de la partcula. Partculas ms pequeas al tamao del poro quedan retenidas en la matriza del filtro debido a efectos electrostticos. 3. Filtros de huella de nucleacin (Nucleoporo): Son pelculas muy delgadas de policarbonato que son perforadas por un tratamiento conjunto con radiacin y sustancias qumicas. Son filtros con orificios muy regulares que atraviesan la membrana verticalmente. Funcionan como tamices, evitando el paso de toda partcula con un tamao mayor al del poro.

3.2.2. METODOS QUMICOS Estos mtodos provocan la perdida de viabilidad de los microorganismos. a. xido de etileno: Es un agente alquilante que se une a compuestos con hidrgenos lbiles como los que tienen sulfhdricos, hidroxilos, etc. Es utilizado en la esterilizacin gaseosa, generalmente en la industria farmacutica. Destruye todos los microorganismos incluso virus; es un agente microbiano de amplio espectro, destruye la bacteria en estado vegetativo, incluyendo al bacilo de la tuberculosis, las esporas y los virus. Sirve para esterilizar material termosensibles como el descartable (goma, plstico, papel, etc.), equipos electrnicos, bombas grupos carboxilos, amino,

cardiorrespiratorias, metal, etc. Es muy peligroso por ser altamente inflamable y explosivo, y adems cancergeno. b. Aldehdos: Son agentes alquilante que actan sobre las protenas, provocando una modificacin irreversible en enzimas e inhiben la actividad enzimtica. Estos compuestos destruyen las esporas. c. Glutaraldehdo: Consiste en preparar una solucin alcalina al 2% y sumergir el material a esterilizar de 20 a 30 minutos, y luego un enjuague de 10 minutos. Este mtodo tiene la ventaja de ser rpido y ser el nico esterilizante efectivo fro. Puede esterilizar plstico, goma, vidrio, metal, etc. d. Formaldehdo: Se utilizan las pastillas de para formaldehdo, las cuales pueden disponerse en el fondo de una caja envueltas en gasa o

algodn, que despus pueden ser expuesta al calor para una rpida esterilizacin (accin del gas formaldehdo). Tambin pueden ser usadas en Estufas de Formol, que son cajas de doble fondo, en donde se colocan las pastillas y se calienta hasta los 60 C y pueden esterilizar materiales de ltex, goma, plsticos, etc. Esterilizacin por gas-plasma de Perxido de Hidrgeno: Es proceso de esterilizacin a baja temperatura la cual consta en la transmisin de perxido de hidrgeno en fase plasma (estado entre lquido y gas), que ejerce la accin biocida.

3.3.

Preparacin para la limpieza y esterilizacin El material de vidrio nuevo o usado, debe limpiarse en forma tal

que elimine toda huella de suciedad original, se evita as la precipitacin y depsito de los agentes limpiadores. 1. Conocer el grado de dureza del agua. 2. Usar detergentes que no tenga lcalis, que sean fcilmente solubles en agua tibia, que no precipite en agua fra, tibia o caliente. 3. Que limpie con facilidad y no irrite las manos. 4. No usar detergentes o jabn no garantizado.

3.4.

Almacenamiento del material esteril

Una vez que un material est estril puede mantener esta condicin si est protegido en la forma apropiada. Es decir, la duracin de la esterilidad de un material no est relacionada directamente con el tiempo, sino con factores que comprometen su exposicin al medio ambiente. Los materiales estriles pierden su esterilidad: Cuando se produce cualquier ruptura, accidental o no, del material que lo recubre durante su transporte o almacenamiento. Al humedecerse el material de empaque. Es importante no manipular los materiales estriles con las manos hmedas, ni colocarlos sobre superficies mojadas. Al almacenar los materiales estriles se deben tomar una serie de precauciones, tales como: Controlar el acceso a las reas de almacenamiento de materiales estriles. Mantener el rea de almacenamiento limpia, libre de polvo, sucio e insectos. IV.

V. 4.1 Materiales

MATERIALES Y MTODOS

Frascos o Erlenmeyer conteniendo caldo nutritivo Algodn para taponar Gradillas metlicas Papel kraf. Lpiz de cera o plumn indeleble Autoclave/incubadora

4.2 Mtodos Distribuir el medio de cultivo (caldo nutritivo) en 2 matraces de prueba. Poner uno de los matraces en le autoclave para esterilizar el medio de cultivo. Por 15 minutos a una presin de 15 libras. Despus del tiempo sacar el tubo del autoclave. Luego el autoclavado fue llevado a la estufa y el otro quedo en el ambiente, donde permanecen hasta el da siguiente. Sern observados en el microscopio.

VI.

RESULTADOS

Tabla 1. Datos sobre la presencia de microorganismos en el caldo nutritivo autoclavado y sin autoclavar. Muestra (caldo nutritivo en Erlenmeyer) A (autoclavado) Observacin macroscpica (96 horas) Claro Observacin microscpica (96 horas) Microorganismos muertos

CONCLUSIONES

Hubo una esterilizacin completa

B (sin autoclavar)

Hubo turbidez

Microorganismos En forma de bacilos

Aparicin de bacterias en el caldo nutritivo

Fuente: Laboratorio de microbiologa.

VII. -

CONCLUSIONES

En la prctica empleamos la esterilizacin por calor hmedo y seco, donde uno de los recipientes con caldo nutritivo fue auto clavado e incubado.

En uno de los caldos nutritivos se observo presencia de microorganismos en forma de bacilo y esfricas con distintos movimientos, ya esto matraz no fue autoclavado.

Para evitar el ingreso de otros microorganismos en los cultivos despus de la esterilizacin se cierra hermticamente en un ambiente determinado estril.

VIII. -

REVISION BIBLIOGRAFICA

http://www.shadetattoo.com/pdf/M%C3%89TODOS%20DE%20ESTERILIZACI% C3%93N.pdf http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/Seminarioesterilizacion.htm Microbiologa de alimentos y sus procesos de elaboracin . John T. NICKERSON. ANTHONY J. SINSKEY. EDITORIAL ACRRIBIA. 1972. Zaragoza. Espaa

IX.

ANEXOS

Fig.1 Caldo nutritivo autoclavado

Fig.2 Caldo nutritivo al tercer da.

Fig.3 Caldo nutritivo no autoclavado

Fig.4 No autoclavado al 3 dia