RESUMEN

Se realiz la determinacin de la cantidad de nitrgeno existente en una sustancia orgnica, y se adquiri destreza en el manejo de las tcnicas de digestin y destilacin. Se emple el mtodo de Kjeldhal a partir de la digestin de la sustancia orgnica, posteriormente se realiz la destilacin, para por ltimo realizar la titulacin, y as se obtuvieron los datos necesarios para calcular el porcentaje de nitrgeno y protena presentes en la muestra. De esta manera se concluye que el mtodo de Kjeldahl est basado en la combustin hmeda de la muestra, calentndola con cido concentrado en presencia de catalizadores metlicos y de otro tipo para efectuar la reduccin del nitrgeno orgnico de la muestra a amonaco, el cual es retenido en solucin como sulfato de amonio. La solucin de digestin se hace alcalina y se destila para liberar el amonaco que es atrapado y titulado. DESCRIPTORES: DETERMINACIN-CANTIDAD-DENITRGENO/DIGESTIN/DESTILACIN/TITULACIN

DETERMINACIN DE NITRGENO EN PROTENAS 1. OBJETIVOS. 1.1 Determinar la cantidad de nitrgeno existente en una sustancia orgnica. 1.2 Adquirir destreza en el manejo de las tcnicas de digestin y destilacin. 2. TEORA. 2.1.1 Nitrgeno en protenas El mtodo ms asequible para determinar el contenido en protenas totales es medir el contenido en nitrgeno y establecer una proporcionalidad entre esta medida y el contenido en nitrgeno de las protenas. El valor general aceptado para convertir el contenido en nitrgeno a protenas es 6,25, ya que se acepta que el contenido medio en nitrgeno de las protenas de los alimentos es del 16%(protena con una distribucin estndar de aminocidos). Si se conoce mejor el alimento es posible precisar ms. As puede usarse 5,83 para el trigo, 5.95 para el arroz o 6.38 para la leche. 2.1.2 Mtodo de Van Slike Determinando el nitrgeno en el cogulo de fibrina obtenido por recalcificacin de 1 c. c. de plasma oxalatado. Como catalizador del proceso de destruccin sulfrica de la substancia a investigar hemos usado el oxalato de potasio (13). El aparato de destilacin lo hemos construido segn el modelo de Michaelis que se encuentra en el libro de Corona ( 13) al que agregamos un tubo de desage entre el embudo de introduccin de las substancias a reaccionar y el generador de vapor de agua, como existe en el aparato de Parnas y Wagner. Esto evita desconectar el aparato para su limpieza despus de cada anlisis, pues ella se realiza en forma automtica, debido a la aspiracin que ejerce el generador de vapor una vez que se ha suprimido el calentamiento.

2.1.3 Mtodo de Kjendahl La sustancia a investigar se somete a un tratamiento oxidativo con cido sulfrico concentrado en presencia de una mezcla catalizadora (las sales/xidos metlicos sirven para el transporte de oxgeno con formacin intermedia de oxgeno naciente; el sulfato potsico sirve para elevar el punto de ebullicin, alcanzndose temperaturas de 300-400C durante la digestin). Del sulfato amnico formado se libera el amonaco por tratamiento alcalino y ste se transporta con ayuda de una destilacin en corriente de vapor a un recipiente con cido brico y se realiza una titulacin con una solucin valorada de cido sulfrico. El contenido en protena de la muestra se calcula teniendo en cuenta el contenido medio en nitrgeno de la protena en cuestin.(3) 3. PARTE EXPERIMENTAL. 3.1 Fundamento del mtodo (de digestin y destilacin) 3.2 Materiales y Equipos 3.2.1. Digestor 3.2.2. Destilador 3.2.3. Erlenmeyer (V:250ml) (A:+-50ml) 3.2.4. Balones de Kjendahl 3.2.5. Bureta (V:50ml) (A:+-0,1ml) 3.2.6. Vasos de precipitacin (V:200 ml) (A:+-50 ml) 3.2.7. Ncleos de ebullicin. 3.3 Sustancias y Reactivos

3.3.1. Agua destilada (H2O) (l) 3.3.2. Hidrxido de sodio al 50% (NaOH) (ac) 3.3.3. cido sulfrico concentrado (H2SO4) (l) 3.3.4. Sulfato de sodio anhidro Na2SO4 3.3.5. Selenio Se 3.3.6. cido brico al 2,5%, H3BO3 (ac) 3.3.7. cido clorhdrico 0,1N, HCl (ac) 3.3.8. Rojo de metilo C15H15N3O2 (l) 3.3.9. Azul de metileno C16H18N3ClS (l) 3.3.10. Indicador mezclado. 3.4 Procedimiento 3.4.1 Digestin 3.4.1.1 Se pesa 1,5g de muestra y se coloca en un baln de Kjeldahl de 500ml. Se aade 30ml de H2SO4 concentrado, 3-4g de Na2SO4 y 2ml de H2SeO3 al 2,5% (o pastilla de selenio). Poner tambin pocos ncleos de ebullicin. 3.4.1.2 Se calienta suavemente el baln hasta que se observe desprendimiento de de humos blancos, en ste momento se eleva la temperatura y se contina la digestin hasta cuando toda la materia orgnica se haya destruido, es decir, hasta cuando el lquido haya tomado una coloracin amarillo cristalino. 3.4.1.3 Terminada la digestin, se deja enfriar el baln, luego se aade 200ml de agua destilada, 2-3 gotas de rojo de metilo, con lo que la solucin de cido se torna de una coloracin rosado fuerte, luego se aade suficiente cantidad de solucin de NaOH al 50% (80ml). Con lo que la solucin toma una coloracin amarillenta. 3.4.2 Destilacin 3.4.2.1 En un erlenmeyer de 500ml se colocan 100ml de cido brico al 2,5%, 6-7 gotas del indicador mezclado, con lo que la solucin toma una coloracin violeta morado, luego se introducen dentro del erlenmeyer el tubo de vidrio que baja del destilador hasta que la punta del tubo quede sumergida en la solucin que contiene el erlenmeyer. 3.4.2.2 Se coloca el baln de Kjeldahl en las ampollas de Humpley del destilador y se procede a destilar hasta cuando en el baln quede una tercera parte del volumen inicial. 3.4.2.3 El destilado se lo recibe en el erlenmeyer que contiene el cido brico con lo que se produce un cambio de coloracin de violeta morado a verde esmeralda, luego el amoniaco contenido en la solucin se cido brico se titula con una solucin de cido clorhdrico 0,1N valorada hasta el punto final de titulacin que es violeta morado. 3.5 Diagramas de Flujo
H2SO4 Na2SO4(s) H2SeO3(s) CO2(g) SO2(g)

Digestin
Harina de haba

Mezclado

Calentamiento
(NH4)2 SO4

t=2 h

Enfriamiento

Destilacin

NH3 (g) NaOH (ac)

(NH4)2 SO4(l)

Mezclado

Destilacin

Reactor

H3BO3 (ac) HCl (ac)

Titulacin

3.6

Observaciones

Al colocar la harina de haba, el sulfato de sodio, catalizador y ncleos de ebullicin se forma una solucin de color negro, al calentar el baln, el color va cambiando, despus de algn tiempo toma un color vino, mientras sigue el calentamiento toma un color caf, hasta tomar un color tomate, por ultimo toma un color amarillo intenso hasta un amarillo traslucido, cuando ocurri estos la digestin termino, esto ocurri al cabo de 10 horas aproximadamente. La destilacin se realizo una semana despus, cuando se estaba preparando el baln para la destilacin se pudo apreciar que los ncleos de ebullicin se haban desintegrado, el sulfato de amonio presente en la solucin es demasiado fuerte que desintegro los ncleos de ebullicin (material de vidrio). Para la destilacin la solucin obtenida se mezcla con agua, se aade 3 gotas de rojo de metilo con lo que la solucin toma una coloracin rosada fuerte, al aadir la solucin de hidrxido de sodio toma una coloracin rosada de color menos intenso que el anterior, esto se destila y se recoge el destilado en solucin de acido brico con lo que la solucin toma un color azul-violeta, al titular con acido clorhdrico la solucin toma un color violeta intenso. 3.7 Reacciones
catalizadores(Se) calor

n - C -NH2 + H2SO4
protena

CO2 + (NH4)2 SO4 + SO2 2NH3 + Na2SO4+ 2H2O

Ec.3.7-1

(NH2)SO4 + 2 NaOH

Ec.3.7-2

NH3 + H3BO3 (cido brico) H2BO3- + H+ H3BO3 4.1 4. DATOS Datos Experimentales

NH4 + H2BO3- (in borato) Ec. 3.7-3 Ec. 3.7-4

Harina de haba, g

Tabla Datos experimentales Normalidad del cido Volumen de HCl, ml clorhdrico, N

1,5 g 5. CLCULOS 5.1 Clculo del porcentaje de Nitrgeno

0,1

%N

( vol , HCl ) ( Ncido ) ( Mequiv , N ) 100 ( peso , muestra )

5.2 Clculo del porcentaje de protena % Protena = % N2 * 6,25 6. RESULTADOS Tabla 6 1 Resultados Harina de haba, g 1,5 % Nitrgeno 2,58 % Proteina 16,13

7. DISCUSIN En la realizacin de la prctica, surgieron ciertos inconvenientes principalmente en la etapa de digestin, debido a que en determinado momento del calentamiento de la muestra, se derram, una vez concluido el tiempo de reaccin, al momento de trasvasar a otro baln, la muestra cambi de color amarillo, nuevamente a negro, por lo cual tuvimos que someterla una vez ms a calentamiento. En la etapa de destilacin tambin existieron problemas, pues existi un reflujo y no se pudo concluir la prctica. Para tratar de mejorar este tipo de inconvenientes es necesario controlar con mayor atencin y sin distraernos ni por un instante la temperatura de calentamiento de la muestra, porque en cualquier momento puede ocurrir una reaccin violenta y se puede regar. 8. CONCLUSIONES 8.1. El mtodo de Kjeldahl es un proceso de anlisis qumico para determinar el contenido en nitrgeno de una sustancia qumica. Se usa comnmente para estimar el contenido de protenas de los alimentos. 8.2. El contenido de nitrgeno en una protena es determinado en presencia de acido sulfrico, selenio y calor, descomponindose para dar sulfato de amonio, que tratado con hidrxido de sodio desprende amoniaco que se recoge en acido brico 0.1N y se valora con acido clorhdrico 0.1N. 8.3. El mtodo de Kjeldahl es satisfactorio para determinar el nitrgeno en protenas, aminas y amidas. 8.4. La cantidad de nitrgeno presente en 1,5 gramos de harina de haba nos dio como resultado 2, 58%, por tanto el contenido de protena es 16,13%.

9. APLICACIONES 9.1. En el anlisis de los alimentos, es un factor que se toma en cuenta para establecer la calidad de los mismos. Por ello, debe mantenerse dentro de los lmites establecidos en el rgimen. 9.2. Se usa comnmente para estimar el contenido de protenas de los alimentos. Los otros componentes mayoritarios como grasas y carbohidratos y otros compuestos estructurales como la lignina no contienen nitrgeno, pero los aminocidos de las protenas si. 9.3. Otras sustancia como las vitaminas tambin contienen nitrgeno, pero son una parte muy pequea y tienen una influencia insignificante en el resultado del anlisis.

10. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS. 10.1 Citas Bibliogrficas (1)FUENTE/INTERNET/http://avdiaz.files.wordpress.com/2008/08/tema1-introduccion.pdf (2)FUENTE/INTERNET/http://www.scielo.org.pe/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S172646341943000100002 (3)FUENTE/INTERNET/ http://www.fao.org/docrep/010/ah833s/AH833S17.htm 10.2 Bibliografa 10.2.1. avdiaz.files.wordpress.com 10.2.2. www.scielo.org.pe 10.2.3. www.fao.org 11. ANEXOS 11.1 Diagrama del Equipo