ANALISIS INSTRUMENTAL

CROMATOGRAFIA GASEOSA
INTRODUCCION La cromatografa es un mtodo fsico de separacin basado en la distribucin de los componentes de una mezcla entre dos fases inmiscibles, una fija y otra mvil. En cromatografa gaseosa, la fase mvil es un gas que fluye a travs de una columna que contiene a la fase fija. Esta fase fija puede ser un slido poroso (cromatografa gas-slido o CGS), o bien una pelcula lquida delgada que recubre un slido particulado o las paredes de la columna (cromatografa gas-lquido o CGL). En el primer caso, el proceso que produce la separacin es la adsorcin de los componentes de la mezcla sobre la superficie slida y en el segundo, la particin de los mismos entre las fases lquida y gaseosa. Por ser la ms utilizada, la discusin que sigue se refiere a CGL.

INSTRUMENTAL Un instrumento para cromatografa gaseosa puede representarse por el siguiente esquema:
GAS P O RT A D O R P UE R T O D E I NY E C CI ON C O L UM N A D E T EC T O R R E G IS T R AD O R I NT E G R AD O R

El gas portador (fase mvil) proviene de cilindros provistos con vlvulas reductoras de presin. La muestra se introduce en el inyector con una microjeringa a travs de un septum de goma. All se produce la vaporizacin instantnea de la misma y su introduccin en la corriente de gas. La columna se halla dentro de un horno de temperatura variable, lugar donde se realiza la separacin de los componentes de la muestra. El detector produce una seal elctrica proporcional a la cantidad de materia a medida que cada componente separado fluye a travs de l. Esa seal es enviada al registrador que realiza un grfico de intensidad en funcin del tiempo (cromatograma) del tipo:

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Idealmente, se trata de picos gaussianos y cada pico corresponde a un componente de la muestra original. El integrador (o el software de control) calcula adems el rea correspondiente a cada pico, la cual es proporcional a la cantidad de analito. PARMETROS RELEVANTES Tiempo de retencin (tr) de un dado componente de la muestra es el tiempo transcurrido desde la inyeccin de la misma hasta la aparicin del mximo correspondiente al pico de ese componente. Un caso especial lo constituye un componente que no es retenido por la fase fija (no se reparte entre fases), el cual saldr de la columna antes que cualquier sustancia a un tiempo llamado tiempo muerto (t0). De esta manera, es posible definir tr como el tiempo que un cierto componente permanece retenido en la fase estacionaria:

El factor de capacidad (k) de un dado compuesto se define como:

que, en funcin de la constante de particin (K), del volumen de la fase fija (VL) y del volumen de la fase mvil (VG) se puede escribir como:

y en funcin de los tiempos de retencin:

Con respecto a la columna, se define como plato terico a una capa estrecha de la misma en donde se produce el equilibrio de particin de un compuesto entre la fase fija y la mvil. Para una columna de longitud L, el nmero de platos tericos (N) es:

siendo H la altura de plato terico, uno de los parmetros que determina la capacidad del proceso cromatogrfico para separar dos compuestos dados, y W el ancho de los picos a la altura de la lnea de base. A partir de las definiciones anteriores, es posible definir parmetros asociados a la separacin de dos sustancias A y B que caracterizan la eficiencia de una separacin. Siendo B la sustancia con mayor tr estos parmetros son: Factor de selectividad

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Resolucin

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Teniendo en cuenta que k, a, N y H dependen de la temperatura, tipo de fase fija, longitud de columna y flujo de fase mvil, es posible mejorar una separacin optimizando estos parmetros experimentales.

ETAPAS DEL ANALISIS DE UNA MUESTRA 1. 2. 3. 4. 5. Optimizacin de las condiciones instrumentales. Obtencin de los cromatogramas en condiciones ptimas (muestras y patrones). Calibracin (diferentes tcnicas). Cuantificacin del / los componentes presentes en la muestra. Tratamiento de los resultados: a. Se busca obtener como respuesta instrumental: Picos bien resueltos. Buena relacin seal / ruido. Lnea de base horizontal (sin deriva). Picos no distorsionados. b. Normalmente suele realizarse una calibracin por estndar externo o utilizando un estndar interno. i. Estndar externo: Se preparan muestras de patrones de concentracin conocida que se analizan y permiten construir una curva de calibracin para cada componente a cuantificar. Con este mtodo es necesario medir exactamente los volmenes inyectados tanto de los patrones como de la muestra incgnita. ii. Estndar interno: En este caso se agrega a la muestra una cantidad conocida de un compuesto que no est presente originalmente. En este caso, la calibracin se realiza analizando patrones de concentracin conocida para cada componente a cuantificar a los cuales se le agrega la misma cantidad del estndar interno que a la muestra incgnita. La curva de calibracin se construye graficando el cociente entre la seal del analito incgnita y el estndar interno en funcin de la concentracin del analito incgnita. Este mtodo elimina el error cometido por la irreproducibilidad en el volumen inyectado. c. Tanto para la medicin de la muestra como de los patrones, es conveniente estudiar la reproducibilidad de la seal analtica y la de los tiempos de retencin del / los analitos. Para ello se deben realizar varias inyecciones (n) de cada muestra y cada uno de los patrones y utilizar los valores medios. d. Se realizar el tratamiento de resultados siguiendo las indicaciones dadas en la gua de trabajos prcticos.

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PARTE EXPERIMENTAL Objetivos Analizar la influencia de los diversos parmetros instrumentales en la identificacin y separacin de los componentes presentes en una mezcla de alcoholes. Seleccionar las condiciones instrumentales ptimas para dicha separacin. Determinar la identidad de los componentes de la muestra utilizando patrones de cada analito y los tiempos de retencin obtenidos para cada uno de ellos en idnticas condiciones operativas. Determinar la concentracin de etanol en una muestra incgnita utilizando calibracin externa, adicin de estndar interno, normalizacin de reas. Comparar crticamente los resultados obtenidos con cada tipo de calibracin.

Materiales a emplear Cromatgrafo de gases Shimadzu GC/17 A e integrador Shimadzu CR5A. Columna capilar marca Supelco SPB-2250 (50 % metil - 50 % fenil siloxano), longitud: 30 m, dimetro interno: 0,25 mm, espesor de film: 0,20 mm. Patrones individuales de metanol, etanol, butanol y acetonitrilo (1% en agua). Patrones conteniendo mezclas de metanol, etanol, butanol y acetonitrilo en agua entre 1% y 5% en cada componente. Mezcla de etanol, metanol y acetonitrilo (1% en cada componente). Muestra artificial de composicin desconocida. Muestra de vodka. Microjeringa de 10 mL.

Experimentos a realizar Anlisis cualitativo de la muestra. Para identificar los componentes de la muestra se realizarn cromatogramas de una mezcla sinttica que contiene metanol, etanol y acetonitrilo todos en la misma concentracin, hasta optimizar la resolucin variando distintas condiciones instrumentales como la temperatura del horno y el flujo del gas portador. Una vez logradas las condiciones ptimas para la muestra ternaria, realice el cromatograma de la muestra de cuatro componentes incluyendo butanol1. Se analizarn luego patrones de cada componente por separado para proceder a su identificacin a travs de los tiempos de retencin obtenidos en idnticas condiciones operativas.

Anlisis cuantitativo. Se utilizarn las metodologas de cuantificacin descriptas anteriormente: i) Estndar externo ii) Estndar interno iii) Normalizacin de reas

Dado que el butanol es retenido ms fuertemente en la columna que el resto de los componentes, se optimiza en primer lugar la separacin de los otros tres analitos con el fin de no alargar innecesariamente el tiempo que insume cada corrida de prueba.

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Anlisis de los resultados Discutir los resultados obtenidos mediante las distintas metodologas utilizadas, analizando las ventajas y desventajas de cada una de ellas. Informar las condiciones experimentales, los tiempos de retencin de cada componente de la mezcla y la composicin porcentual de alcoholes en las muestras. Efectuar el anlisis estadstico apropiado. Obtenga los parmetros que caracterizan la eficiencia de la columna para estos analitos en las condiciones de trabajo (k, a, N y H).

CUESTIONARIO 1. Enumerar los tipos de detectores habitualmente empleados y evaluar su mbito de aplicacin. 2. Discutir la eleccin del gas portador a utilizar en relacin al tipo de detector con que se cuenta. Qu caractersticas debe reunir el gas elegido? 3. Discutir la aplicacin de la ecuacin de Van Deemter para modificar la eficiencia de un anlisis. 4. De qu manera influyen las condiciones instrumentales en el cromatograma? 5. Qu condiciones debe reunir un componente para ser utilizado como estndar interno? 6. Discutir las ventajas y desventajas de cada uno de los mtodos de cuantificacin utilizados. 7. Discutir la conveniencia de considerar como seal la altura o el rea del pico obtenido como respuesta de la muestra. 8. Compare el coeficiente b para dos columnas capilares con dimetro de 0,24 y 0,36 mm que contienen el mismo espesor de fase estacionaria, 0,2 ?m. Cul de ellas es ms conveniente para el anlisis de compuestos de bajo punto de ebullicin y cual para un compuesto termolbil? 9. Para la determinacin de residuos de xido de etileno en tubuladuras para uso mdico esterilizadas con dicho gas, una muestra dentro de un frasco cerrado se calent a 60 C por 20 minutos, se tomaron 500 mL de la fase gaseosa (head space) y se us una columna empacada de polietilenglicol de 3 mm de dimetro y 1.80 m de largo. La temperatura de la corrida es 60 C y el detector del tipo FID. Considerando que el materia de la tubuladura es PVC y los posibles productos de reaccin del xido de etileno son etilenglicol (PE: 197 C) y 2-cloroetanol (PE: 129 C): a. Discuta la conveniencia de la temperatura utilizada, la fase estacionaria y el tamao de columna. b. Para determinar etilenglicol y 2-cloroetanol, qu cambios debe realizar en la toma de muestra, en el tipo de columna y en la temperatura de trabajo? 10. Una muestra contiene las sustancias X e Y. Se desea determinar cuantitativamente X utilizando el mtodo del estndar interno. Se probaron los compuestos 1, 2 y 3 como posibles estndares internos, obtenindose el siguiente cromatograma:

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a. Cul elegira como estndar y qu condiciones variara en el cromatograma para su uso? b. Una vez conseguida las condiciones ptimas, cmo procede para la determinacin? 11. El fabricante de una columna para CG basada en poliestireno-polidivinilbenceno sugiere la corrida que se muestra a continuacin para la separacin de una serie de compuestos disueltos en metanol (condiciones indicadas en el cromatograma). Como se puede apreciar en el cromatograma, los dos primeros compuestos salen sobre la cola que corresponde a la seal de metanol. a. Examine los componentes de la muestra y establezca qu propiedades entran en juego en el orden de elucin de los mismos. b. Qu sucedera si se trabaja a 70 C?

BIBLIOGRAFA a. Principios de Anlisis Instrumental. D. A. Skoog, F. J. Holler y T. A. Hieman, 5a edicin, Mc Graw Hill, madrid 2001.. b. Mtodos Instrumentales de Anlisis. Willard, Merritt y otros. VI edicin.

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