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PREVALENCIA DE Chlamydia trachomatis EN MUESTRAS CERVICALES DE UN GRUPO DE MUJERES CON VIDA SEXUAL ACTIVA DE CIUDAD JAREZ CHIHUAHUA

Por: Ingrid A. Uranga Rivas Asesor: Jesus A. Araujo

INTRODUCCIN
Chlamydia trachomatis Chlamydia psitaci Chlamydia pneumoniae

Chlamydiaceae

Chlamydia trachomatis
Chlamydia psitaci Chlamydia pneumoniae

humanos Varias complicaciones

aves Psitacosis humanos Infeccin del aparato respiratorio

Chlamydia trachomatis
Presenta una morfologa esfrica observndose como cocos Gram negativos. incapaz de desarrollar un metabolismo con produccin de energa. depende de la clula del husped para la obtencin de ATP.

Iglesias et al., 2007, Cervantes, 2009.

Cuerpo elemental (CE): infeccioso Cuerpo reticular (CR): forma replicativa

Ostos y Snchez, 2003

15 variedades serolgicas Serotipos mas comunes:


A-C tracoma D-K infecciones genitourinarias, conjuntivitis folicular, neumona del lactante y Sndrome de Reiter.

Basualdo et al., 2001,Vallejos et al., 2010

A nivel mundial 89 millones de nuevos casos anuales. E.U 4 millones de los cuales 2.6 presentes en mujeres. En Mxico se ha observado una prevalencia de hasta el 10 % en mujeres.

Vallejos Medio Cleotilde, Enrquez Guerra Miguel ngel, Lpez Villegas Ma. Del Rosario, Valdez Garca J. Antonio, Prez Pria Kasuky Patricia. 2010. Canto de Cetina Thelma, Polanco Reyes Lucila, Fernndez Gonzlez Vctor, Ruiz Garca Sandra. 2003.

Tabla 2. Muestra las complicaciones que llega a producir el padecimiento infeccioso por C. trachomatis.
Complicacin producida por C. trachomatis Descripcin

Infeccin vaginal

Al inicio del contacto, portadora asintomtica.

Cervicitis

Inflamacin del cuello de la matriz por la infeccin.

Endometritis

Infeccin de la mucosa cavidad de la matriz.

Salpingitis

Inflamacin de las trompas de Falopio.

Enfermedad inflamatoria (EPI)

plvica Infeccin

de

la

cavidad

peritoneal y estructuras anexas.


Ostos Ortiz Olga Lucia, Melida Snchez Ruth.2003

Diagnstico
Cultivo
Clulas McCoy (sensibilidad de 80% y especificidad de 100%).

Anticuerpo fluorescente directo (DFA) e Inmunoanlisis enzimtico (EIA)


DFA = Ac. Monoclonales contra MOP de especie (sensibilidad de 80 a 90% y especificidad de 98-99 %). EIA= LPS de genero (sensibilidad de 80% y especificidad de 95%).

Microbiologa mdica de Jarwetz, etal. 2005

Deteccin de cido nucleco


PCR (sensibilidad ~ 100%)

Microbiologa mdica de Jarwetz, etal. 2005

Hiptesis
La ITS causada por C. trachomatis se detecta en muestras cervicales de mujeres con vida sexual activa mediante la amplificacin de sus cidos nuclicos.

Objetivo
Determinar la prevalencia de infeccin por C. trachomatis mediante la Reaccin en Cadena de la Polimerasa en muestras cervicales de un grupo de mujeres con vida sexual activa de Cd. Jurez, Chihuahua.

Objetivos Especficos
Estandarizar la tcnica de extraccin de ADN, para la amplificacin de cidos nuclicos.

Establecer la correlacin que existe entre los casos positivos y los datos epidemiolgicos.

METODOLOGA

Medio de trasporte
Se prepar 250 mL de medio de trasporte
( sacarosa 68.46 g 2g-1 , KH2PO4 g -1).
-1

, K2HPO4

Se esteriliz 15Lb durante 15 min. Ya frio, se colocarn 1000 L de medio de trasporte en tubos (Criogen Vials). Se almacen en cuarto frio.

Buffer de lisis celular


Se prepar 100 ml de buffer de lisis ( 10mM Tris-HCl, pH 7.5, 1mM
EDTA, 0.1% SDS).

MUESTREO

Indicaciones para la toma de muestra

No use desodorante vaginal al menos 48 horas antes. No realizarse lavados vaginales dos das antes. Evite el contacto sexual al menos 24 horas antes de la prueba. Haber finalizado la menstruacin 4 o 5 das antes de la toma de muestra

Muestreo
Octubre 2011 a Junio 2012 Carta de consentimiento informado

Encuesta

Toma de muestra

Posicin ginecolgica a la participante

1era toma = Papanicolaou

2da toma =C.trachomatis

ESTANDARIZACION DE EXTRACCIN DE DNA

Prueba y error
Extraccin de ADN Gerard Lucotte, etal. (Protocolo 1)

Extraccin de ADN por lisis alcalina (Protocolo 2)

Centrifugar a 3,000 rpm durante 5 min y se descarta el sobrenadante.

Adicionar 200 L de buffer de lisis y 5 L de proteinasa

Dejar reposar durante 10 min a T ambiente.

Agregar 0.7 por volumen obtenido de isopropanol frio, reposar 5 min (en frio).

Centrifugar a 4,000 rpm durante 10 min y trasferir el sobrenadante a un tubo nuevo.

Incubar a 95C durante 5 min, y dejar reposar por 10 min a T ambiente.

Centrifugar a 13,000 rpm durante 30 seg, descartar el sobrenadante y agregar 250 L de etanol.

Centrifugar a 13,000 rpm durante 30 seg, eliminar el sobrenadante y dejar secar por 24 hrs.

Se re suspende muestra en 25 L agua y se coloca agitacin durante min.

la de en 10

PCR
Electroforesis

5 L de muestra + 5 L buffer de carga

PCR

Gel de agarosa al 2%

201 bp

RESULTADOS

MUESTRAS
Se obtuvieron 116 muestras. Se extrajeron por el Protocolo 2 ya estandarizado.

REVELADO DE PRODUCTOS DE PCR

La deteccin del producto de amplificacin mediante electroforesis de C. trachomatis, plsmido obtenido por PCR (banda especifica de 201 bp). MPM, marcador ADN; P, muestra positiva; N, muestra negativa; 1-5 muestras probadas.

La deteccin del producto de amplificacin mediante electroforesis de C. trachomatis, plsmido obtenido por PCR (banda especifica de 201 bp). MPM, marcador ADN; P, muestra positiva; N, muestra negativa; 6-10 muestras probadas.

La deteccin del producto de amplificacin mediante electroforesis de C. trachomatis, plsmido obtenido por PCR (banda especifica de 201 bp). MPM, marcador ADN; P, muestra positiva; N, muestra negativa; 11-15 muestras probadas; muestra 15 positiva.

La deteccin del producto de amplificacin mediante electroforesis de C. trachomatis, plsmido obtenido por PCR (banda especifica de 201 bp). MPM, marcador ADN; N, muestra negativa; 16-20 muestras probadas; muestra 18 positiva.

La deteccin del producto de amplificacin mediante electroforesis de C. trachomatis, plsmido obtenido por PCR (banda especifica de 201 bp). MPM, marcador ADN; N, muestra negativa; 1-6 muestras probadas para la corroboracin del peso de la banda; muestra 1, 4 y 6 positivas.

Tabla 3. Edad de participantes

Tabla 4. Edad en la que se inicio la vida sexual

n= 79

Multiples parejas sexuales


26.5 26 25.5 25 24.5 24 23.5 23 No Si
Grafica 1. Representacin del numero de compaeros sexuales de las participantes, registradas en UAMI para diagnostico oportuno de cncer cervicouterino.

57% 43%

Uso de mtodos de planificacin


35 30

25
20 15 10 64.6% 35.4%

5
0 No Si
Grafica 2. Uso de anticonceptivos en la poblacin de estudio dentro de la investigacin.

Tipo de anticonceptivo
16 14 12 10 8 6 4 2 0

Grafica 3. La poblacin que utiliza anticonceptivos prefiere los hormonales con un 58% de consumo en comparacin a otros mtodos.

Tabla 5. Comparacin de encuesta epidemiolgica de los casos positivos.

Al termino de la investigacin se observa que la prevalencia de los casos positivos a C. trachomatis identificados por la amplificacin de cidos nuclicos es del 3.79 %, lo que permite corroborar los datos que ofrece la literatura donde se describe una prevalencia menor al 10% (Canto et al., 2001).

CONCLUSIN

La poblacin de estudio se caracterizo por pertenecer en la mayora al grupo de 18-25 aos de edad La iniciacin de su vida sexual en ese rango de edad. Ms del 50% de la poblacin de estudio no utiliza ningn mtodo anticonceptivo y cuenta con ms de una pareja sexual desde el inicio de la actividad sexual.

Los experimentos realizados en la presente investigacin proporcionaron un mtodo de deteccin de C. trachomatis, para su diagnstico. Se observaron datos epidemiolgicos que tienen en comn las pacientes con resultado positivo a la amplificacin de cidos nuclicos. Permitiendo observar un posible grupo de riesgo.

La amplificacin de cidos nuclicos por el mtodo de PCR utilizando los oligonucletidos Chla A y Chal B, permite la identificacin de casos positivos de C. trachomatis Se observo una prevalencia del 3.79 % de casos positivos en la poblacin de estudio.

RECOMENDACIONES

En base a los resultados obtenidos se recomienda darle seguimiento a la investigacin aumentando las variables a estudiar, como la relacin sinrgica que pueda tener la bacteria de C. trachomatis con otras bacterias que tengan desarrollo en las clulas del epitelio columnar. Realizar la secuenciacin a la seccin del plsmido de 201 bp, para confirmar la secuencia amplificada por el mtodo utilizado. En un estudio posterior, considerar un nmero de muestra que ampli la poblacin as como los criterios de inclusin.

GRACIAS POR SU ATENCIN!!