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INTRODUCCIN
Chlamydia trachomatis Chlamydia psitaci Chlamydia pneumoniae
Chlamydiaceae
Chlamydia trachomatis
Chlamydia psitaci Chlamydia pneumoniae
Chlamydia trachomatis
Presenta una morfologa esfrica observndose como cocos Gram negativos. incapaz de desarrollar un metabolismo con produccin de energa. depende de la clula del husped para la obtencin de ATP.
A nivel mundial 89 millones de nuevos casos anuales. E.U 4 millones de los cuales 2.6 presentes en mujeres. En Mxico se ha observado una prevalencia de hasta el 10 % en mujeres.
Vallejos Medio Cleotilde, Enrquez Guerra Miguel ngel, Lpez Villegas Ma. Del Rosario, Valdez Garca J. Antonio, Prez Pria Kasuky Patricia. 2010. Canto de Cetina Thelma, Polanco Reyes Lucila, Fernndez Gonzlez Vctor, Ruiz Garca Sandra. 2003.
Tabla 2. Muestra las complicaciones que llega a producir el padecimiento infeccioso por C. trachomatis.
Complicacin producida por C. trachomatis Descripcin
Infeccin vaginal
Cervicitis
Endometritis
Salpingitis
plvica Infeccin
de
la
cavidad
Diagnstico
Cultivo
Clulas McCoy (sensibilidad de 80% y especificidad de 100%).
Hiptesis
La ITS causada por C. trachomatis se detecta en muestras cervicales de mujeres con vida sexual activa mediante la amplificacin de sus cidos nuclicos.
Objetivo
Determinar la prevalencia de infeccin por C. trachomatis mediante la Reaccin en Cadena de la Polimerasa en muestras cervicales de un grupo de mujeres con vida sexual activa de Cd. Jurez, Chihuahua.
Objetivos Especficos
Estandarizar la tcnica de extraccin de ADN, para la amplificacin de cidos nuclicos.
Establecer la correlacin que existe entre los casos positivos y los datos epidemiolgicos.
METODOLOGA
Medio de trasporte
Se prepar 250 mL de medio de trasporte
( sacarosa 68.46 g 2g-1 , KH2PO4 g -1).
-1
, K2HPO4
Se esteriliz 15Lb durante 15 min. Ya frio, se colocarn 1000 L de medio de trasporte en tubos (Criogen Vials). Se almacen en cuarto frio.
MUESTREO
No use desodorante vaginal al menos 48 horas antes. No realizarse lavados vaginales dos das antes. Evite el contacto sexual al menos 24 horas antes de la prueba. Haber finalizado la menstruacin 4 o 5 das antes de la toma de muestra
Muestreo
Octubre 2011 a Junio 2012 Carta de consentimiento informado
Encuesta
Toma de muestra
Prueba y error
Extraccin de ADN Gerard Lucotte, etal. (Protocolo 1)
Agregar 0.7 por volumen obtenido de isopropanol frio, reposar 5 min (en frio).
Centrifugar a 13,000 rpm durante 30 seg, descartar el sobrenadante y agregar 250 L de etanol.
Centrifugar a 13,000 rpm durante 30 seg, eliminar el sobrenadante y dejar secar por 24 hrs.
la de en 10
PCR
Electroforesis
PCR
Gel de agarosa al 2%
201 bp
RESULTADOS
MUESTRAS
Se obtuvieron 116 muestras. Se extrajeron por el Protocolo 2 ya estandarizado.
La deteccin del producto de amplificacin mediante electroforesis de C. trachomatis, plsmido obtenido por PCR (banda especifica de 201 bp). MPM, marcador ADN; P, muestra positiva; N, muestra negativa; 1-5 muestras probadas.
La deteccin del producto de amplificacin mediante electroforesis de C. trachomatis, plsmido obtenido por PCR (banda especifica de 201 bp). MPM, marcador ADN; P, muestra positiva; N, muestra negativa; 6-10 muestras probadas.
La deteccin del producto de amplificacin mediante electroforesis de C. trachomatis, plsmido obtenido por PCR (banda especifica de 201 bp). MPM, marcador ADN; P, muestra positiva; N, muestra negativa; 11-15 muestras probadas; muestra 15 positiva.
La deteccin del producto de amplificacin mediante electroforesis de C. trachomatis, plsmido obtenido por PCR (banda especifica de 201 bp). MPM, marcador ADN; N, muestra negativa; 16-20 muestras probadas; muestra 18 positiva.
La deteccin del producto de amplificacin mediante electroforesis de C. trachomatis, plsmido obtenido por PCR (banda especifica de 201 bp). MPM, marcador ADN; N, muestra negativa; 1-6 muestras probadas para la corroboracin del peso de la banda; muestra 1, 4 y 6 positivas.
n= 79
57% 43%
25
20 15 10 64.6% 35.4%
5
0 No Si
Grafica 2. Uso de anticonceptivos en la poblacin de estudio dentro de la investigacin.
Tipo de anticonceptivo
16 14 12 10 8 6 4 2 0
Grafica 3. La poblacin que utiliza anticonceptivos prefiere los hormonales con un 58% de consumo en comparacin a otros mtodos.
Al termino de la investigacin se observa que la prevalencia de los casos positivos a C. trachomatis identificados por la amplificacin de cidos nuclicos es del 3.79 %, lo que permite corroborar los datos que ofrece la literatura donde se describe una prevalencia menor al 10% (Canto et al., 2001).
CONCLUSIN
La poblacin de estudio se caracterizo por pertenecer en la mayora al grupo de 18-25 aos de edad La iniciacin de su vida sexual en ese rango de edad. Ms del 50% de la poblacin de estudio no utiliza ningn mtodo anticonceptivo y cuenta con ms de una pareja sexual desde el inicio de la actividad sexual.
Los experimentos realizados en la presente investigacin proporcionaron un mtodo de deteccin de C. trachomatis, para su diagnstico. Se observaron datos epidemiolgicos que tienen en comn las pacientes con resultado positivo a la amplificacin de cidos nuclicos. Permitiendo observar un posible grupo de riesgo.
La amplificacin de cidos nuclicos por el mtodo de PCR utilizando los oligonucletidos Chla A y Chal B, permite la identificacin de casos positivos de C. trachomatis Se observo una prevalencia del 3.79 % de casos positivos en la poblacin de estudio.
RECOMENDACIONES
En base a los resultados obtenidos se recomienda darle seguimiento a la investigacin aumentando las variables a estudiar, como la relacin sinrgica que pueda tener la bacteria de C. trachomatis con otras bacterias que tengan desarrollo en las clulas del epitelio columnar. Realizar la secuenciacin a la seccin del plsmido de 201 bp, para confirmar la secuencia amplificada por el mtodo utilizado. En un estudio posterior, considerar un nmero de muestra que ampli la poblacin as como los criterios de inclusin.