Los conjuntos respiratorios son agregados de enzimas, coenzimas y cofactores en la membrana interna: Cuatro complejos: I, II, III, IV (transporte

te de e-) Un complejo V (fosforilazion oxidativa) CoQ sirve de nexo entre el compleo I o II y el complejo II El citrocomo C esta intercalado entre los complejos III y IV, pero no forman parte de ellos.

Desde el punto de vista estructural, son complejos muy grandes, dados sus pesos moleculares, que son altos, porque estn formados por mltiples cadenas repetidas. Intervienen protenas con hierro no hemtico (Fe-S), el hierro esta unido directamente a la protena. En algn caso, adems de haber hierro, puede haber Cu, que aparece en los citocromos A y C3.

La cadena respiratoria es un proceso de transferencia de electrones desde un potencial de reduccin estndar muy negativo, el del NAD (-0.32), hasta un potencial muy positivo, el del oxgeno (+0.82) (de reduccin a oxidacin). Por lo tanto, en la cadena respiratoria, la variacin de potencial de reduccin estndar ser: E0=+0.82-(-0.32)= +1.14V. Este es el que se va a utilizar para todo el proceso, en definitiva.

COMPLEO I: Coenzimas de oxidorreduccion 1: NAD(P)*

Es el de la NADH deshidrogenasa. En este complejo nos encontramos varias coenzimas importantes: Nicotinamida adenina dinucletido, cuya estructura es esta. Es una molcula aromtica, que es el acido nicotnico, en su forma amida, que tiene un N en el eslabn del anillo aromtico y est unido a su vez a ribosa, en la posicin 1, que est unida a travs de la posicin 5 de la ribosa a un fosfato. El fosfato, a travs de otro oxgeno y otro grupo fosfato, se une a otra ribosa y a otra base nitrogenada, la adenina.

En esta reaccin, nos queda todava un protn, porque hemos arrancado dos hidrgenos al sustrato y nos queda un sustrato convertido oxidado. Esta reaccin es estreoespecfica, es decir, el sustrato debe unirse a la enzima al centro activo de forma especfica nicamente en la posicin espacial detallada. Esta enzima, la NADH DH, utiliza toda una serie de sustratos reducidos.

Hay toda una serie de enzimas cuya coenzima es el NAD y van a dar lugar al NADH. Algunas no tienen el NAD como coenzima, pero tienen muy similares como el NADP, que no hay OH en el fosfato. Todas estas enzimas estn en la mitocondria, pero tambin estn en el citosol, como otra isoenzima diferente (malatodeshidrogenasa). Se produce NADH por reduccin de NAD+. Se usa ese poder reductor para la coenzima FMN: son tres ciclos (triciclo) en la isoaloxacina de la cual solo nos interesa una parte. N

N Esta unida a un azcar, el ribitol, que es un polialcohol de la ribosa, unido a grupo P. La primera reaccin de la cadena respiratoria es esta. El segundo paso consiste en utilizar este poder reductor para que se produzca otra molcula.

Es fuertemente coloreado porque tiene dobles enlaces alternados, que da a una fuerte absorcin de la luz visible. En esta reaccin que intervienen dos protones y dos electrones, o lo que es lo mismo el NADH y el H+ de la reaccin anterior se oxida a NAD+ reduciendo a la isoaloxacina. Los dos protones de la primera reaccin que estn en el NADH y en el H+, van a servir para reducir el FMN, a FMNH2. Hasta ahora estn fuera todos los sustratos de la cadena respiratoria. La NADH DH es la que inicia la cadena respiratoria, porque es la que tiene como coenzima la FMN.

En el complejo I intervienen protenas ferrosulfuradas :

En este complejo I intervienen las Fe-S, que se ha visto que hay diversos tipos y que tienen como propiedad comn, que contienen hierro unido a azufre: o de cistenas de protenas. o azufre inorgnico (azufre como tal). Estas intervienen en la cadena respiratoria transportando electrones, y dado que se transportan dos e-, han de utilizarse dos hierros.

En el complejo I interviene la CoQ

En este proceso interviene tambin, al final, esa molcula de conexin, que es la CoQ, que aunque no es del complejo I en realidad, se ve en este momento. Esta CoQ se llama ubiquinona. Es una molcula que se descubri tratando mitocondrias aisladas con un disolvente orgnico y que perdan la capacidad de transportar electrones. Si se reconstrua, volvan a transportar e-. Tiene esta estructura de quinona, compuesto fuertemente coloreado:

Es una cola isoprenoide. Tiene una cadena de 5 carbonos repetidos 10 veces, por eso se dice que es la CoQ10 En plantas, podemos encontrarnos con CoQ o con una vitamina K1 y en bacterias suele ser vitamina K2, que son molculas muy relacionadas. En la reaccin se estn transportando dos e- y dos H+, de manera que se reduce la molcula y pasamos a tener una molcula aromtica, en la que donde haba oxgeno ahora hay hidroxilo.

Balance energtico:
La cadena respiratoria la comenzamos con NADH +H+, que se oxida a NAD, a la vez que FMN se reduce a FMNH2, que es la reaccin de la NADH DH. Esto nos comienza en un potencial estndar de 0.32v. El caso es que se oxide FMNH2 a la vez que se nos reduce otra molcula, que en ese caso es una protena que tiene hierro Fe-S. El paso siguiente es que se oxide ese hierro reducido, a la vez que se reduce la CoQ. Esta ultima reaccin tiene un potencial estndar de: +0.04 v

Experimentalmente se ha observado que intervienen 5 protones, y no dos como se pensaba. De esta manera, se bombean al espacio intermembranal 4H+ desde la matriz mitocondrial. Esto ocurre porque se est produciendo energa en todo este proceso. Estn ms concentrados fuera que dentro, pero a pesar de eso salen, porque aprovechan esa energa del transporte de electrones. Estos protones van a servir para sintetizar 1ATP.

COMPLEJO II: comienza con la reaccin en la que el succinato se transforma en

fumarato (se oxida), a la vez que FAD (coenzima de la enzima), se reduce a FADH2. La cadena respiratoria puede comenzar en el complejo II en una reaccin.

Prcticamente no hay cambio en el potencial, por lo que no sirve para bombear protones hacia el exterior. Por lo tanto se va a perder la oportunidad de producir ATP. Por cualquiera de los dos complejos terminamos en CoQH2 donde seguir la cadena respiratoria.

Grupos prostticos de los citocromos

En el complejo 3 y 4 intervienen los citrocomos que son protenas con un peso molecular de unos 13 kDa, tienen de 100 a 110 aa y un grupo hemo, que lo hay de varios tipos. La protoporfirina IX, puede ser uno de ellos, en los citocromos tipo B. Puede ser la misma protporfirina ligeramente modificada, los grupo vinilo estn unidas a la protena a travs de cistenas, por lo tanto covalente mente y entonces es el hemo C. Se da esto en los citocromos C, que se da en el C1 Y C. El hemo A tiene una larga cadena polar y est en los citocromos A y A3. Todos tienen hierro que puede estar como 2+ y 3+. Adems de hierro, los citocromos A tienen cobre, que puede estar como Cu+ o 2+.

Todos los citocromos, por tener toda una serie de dobles enlaces alternados, absorben bien la luz (A la derecha se ve un espectro de absorcin de luz).

COMPLEJO III: es el complejo Q citocromo C oxidoreductasa

En l participan toda una serie de componentes: El citocromo B y el citocromo C1 y una protena ferrosulfurada que es la protena de rieske. Este complejo puede estar en dos estados: o o Bb= bajo potencial Bh= alto potencial

Al final del complejo 2 se haba formado CoQ. Esto sigue reducindose, a la vez que se oxida el citocromo B en su estado oxidado (con hierro 3+), que pasa a citocromo Bb, con hierro 2+, y dado que son dos molculas, se han transportado dos e- . El citocromo Bh con hierro oxidado, pasara a citocromo Bh con hierro reducido.

El caso es que tenemos la protena en su estado reducido y es la que va a interaccionar con el citocromo C, que es una molcula mvil en la membrana interna mitocondria, que esta fuera del complejo de manera que:

Se produce una variacin de potencial suficiente para que se bombeen los H+ al exterior, cuatro protones, de manera que todo esto se puede resumir mediante una reaccin global que:

La coencima QDH2 (en su estado reducido) + 2 Molculas de citocromo C en su estado oxidado) da lugar a la molcula de Q oxidada y a 2 citocromos C en su estado reducido. Por lo que en un principio intervienen dos protones que vienen de la matriz. Bombean contra gradiente. Esto se puede hacer gracias a la energa del transporte de e-.

COMPLEJO IV: complejo de la citocromo oxidasa, ya que interviene una enzima

que tiene como enzima el citocromo a y a3. Desde el citocromo C hasta el O2.

Tiene cobre, en estado cobre a. El ltimo paso es que el O2, con dos H+, que los tenemos en la matriz, den lugar a la formacin de una molcula de agua. Solo se van a poder bombear 2H+, para que se forme media molcula de ATP.

Cmo se sabe que por cada dos e- que se transportan, se bombean al exterior 10 H+? Cmo se sabe que van en este orden? La cadena respiratoria es:

Para cada una de esas etapas se han realizado inhibidores especficos. Ej.: la actuacin del complejo uno lo podemos cortar en la conexin con CoQ con algunos insecticidas como la rotenona. Se ha podido estudiar el mecanismo de cada complejo de la cadena respiratoria mediante el uso de inhibidores especficos para cada complejo, como son el caso de: -Insecticidas: la rotenona inhibe el paso de FMN a CoQ. -Barbitricos: el amital o la antimicina inhiben el paso de cit b a cit c1. -Cianuro (CN+) o monxido de carbono inhiben el paso de cit a + a3 a la formacin de oxgeno.

TEMA 15: FOSFORILACION OXIDATIVA

Tenemos un esquema similar al anterior, pero ya est incluido el complejo 5, (el complejo dos ya est). En el transporte de e-, con la energa que se produce mediante la cadena respiratoria, bombeamos al exterior de la mitocondria H+ .En el Complejo 1, 3 y 4 (4,4,2 H+). Estos protones van a ir acidificando el medio externo, por lo que regresaran fcilmente a la matriz a travs de un canal de H+ en la membrana interna mitocondrial que es la F0F1ATPasa. Este regreso de los protones hace moverse/girar a este complejo enzimtico, produciendo ATP (por cada 10 H+ que regresan, se van a producir 2,5 molculas ATP). Se necesitan 3H+ para producir un ATP, pero el cuarto es para producir ese giro en la molcula. Este complejo enzimtico, fue estudiado aproximadamente en 1940, por el experimentador Racker. Se saba que en la mitocondria tena lugar la sntesis de ATP, por lo que se necesitaba un sistema ATP-sintasa. Hacia 1950 Ochoa, Cori y Lenhinger, llegaron a la conclusin de que la sntesis de ATP estaba acoplada al transporte de electrones. En la mitocondria estn actuando toda una serie de deshidrogenasas, que forman coenzimas reducidas (NADH, FADH2), cuyo potencial reductor se va a aprovechar para la sntesis de ATP. La F0F1ATP-asa, se ha estudiado mediante microscopa electrnica fundamentalmente, de manera que hay un experimento de Racker: Trabajando con la membrana interna de las mitocondrias, por tratamiento con sonidos (sonicacion), se rompe. A partir de ellas se obtiene toda una serie de vesculas de membrana interna mitocondrial, que tienen 10

estructuras que son como cabezas que estn unidas a la membrana interna mitocondrial y la atraviesan incluso. Estas con una cabeza, un tallo y una parte intramembrana, son el complejo F0F1ATP-asa. La esferilla es el complejo o parte F1, donde se sintetiza o hidroliza el ATP. El tallo es una parte de interconexin que se considera parte de F1 y la intramembrana es la F0. Si con esas vesculas estudiamos el transporte de e-, implica que son capaces de hacer in vitro transporte de e- (cadena respiratoria), porque tendrn en esa estructura todos los componentes (complejos) y deben tener tambin la parte responsable de la sntesis de ATP (hacen la fosforilazin oxidativa). Si esas vesculas a continuacin las desnaturalizamos con tripsina o con urea, conseguimos arrancar toda la parte externa de esas estructuras, es decir, conseguimos tener vesculas cerradas, que conservan la parte de F0 y en cambio han eliminado la parte F1. Tras el tratamiento, estos componentes pueden hacer el transporte de e-, ya que siguen teniendo todos esos complejos en la membrana interna. En cambio, no pueden hacer la fosforilacin oxidativa, porque se ha desacoplado la protena, o se ha degradado esa enzima. Si hacemos una dilisis para eliminar el agente desnaturalizante, podemos volver a la situacin anterior al menos parcialmente (transporte de e- y fosforilacion oxidativa). Funciona como ATPsintasa en la mitocondria y ATPasa in vitro.

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F0F1ATPasa.

ATP sintasa mitocondrial Estructura de Fo F1

La parte mayor es F1 380 KDa y F0 100 KDa. F1 est formado por diversas cadenas proteicas ( 3 3 ) en las cadenas y estn alternadas. En est el sitio cataltico el ATP asa y el ATPsintasa. En el dmero tendr lugar la unin de ADP, ATP respectivamente. F0 tiene una forma de cilindro, de engranaje en cuyo centro se inserta el F1 de manera que puede girar. Est formada por la subunidad C10-14

F0 y F1 contactan con las protenas b2 y a. Una esfera que gira en un eje en un cilindro de engranaje que se mueve por el paso de protones que regresan del espacio intermembranal a la matriz. Los protones que haban salido en contra gradiente salen a travs de esta esfera para salir mediante el giro de ella para que se genere la energa mecnica que hace que se sintetice ATP. Una energa mecnica (de protones) da lugar al ATP. Esto se ha explicado mediante diferentes hiptesis:

Acoplamiento quimiosmtico de Mitchell es la que nos explica la sntesis de ATP a travs del aprovechamiento del transporte de protones: FUERZA PROTN MOTRIZ

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FUERZA PROTON MOTRIZ

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A travs de la membrana interna hay un gradiente qumico y elctrico. Hay ms protones fuera que dentro, por ello el pH en el espacio intermembrana es 0.75 unidades ms bajo que en la matriz. Por eso hay un exceso de cargas positivas fuera en comparacin con el exterior. De hecho hay un potencial de membrana que es del orden de 0.15 v. La diferencia de protones y de potencial hace que haya un gradiente electroqumico responsable de que puedan volver los protones. La diferencia hace posible la energa libre en el espacio intermitocondrial.

Aplicando la frmula se obtiene una energa libre de 20 Kj/mol. Energa aprovechable para que luego nos vuelvan protones a la matriz. Esa energa libre tambin se conoce como fuerza protn motriz. Esta energa se debe al transporte de electrones del NADH y del FADH2. Para que haya fosforilacin oxidativa debe haber una membrana interna intacta y cerrada, vesculas intactas, matriz mitocondrial envuelta de su membrana, gracias a ello se permite el bombeo de protones. La disposicin transmembrana facilita la salida de los protones al espacio intermembranoso. Las protenas que intervienen tienen que extenderse a lo ancho de la membrana interna mitocondrial, siendo sintetizadas algunas (9) de stas dentro de la misma mitocondria. La disposicin transmembrana que presentan las enzimas, es para favorecer que salgan los protones al espacio intermembranoso. Con este sistema los complejos de la cadena transportadora de electrones y fosforilacin oxidativa, sintetizan algunas protenas que intervienen en la propia mitocondrias. En concreto en la citocromo oxidasa.

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Experimentalmente
No hay sntesis de ATP ni cadena respiratoria si no hay gasto de oxgeno. Si aadimos succinato (un sustrato) se disparan los dos, por tanto son dos procesos acoplados, si no hay un sustrato para el transporte de electrones no se formar ATP. Si aadimos CN, deja de haber transporte de electrones y por tanto sntesis de ATP.

Otro experimento que nos demuestra lo mismo es que, si tenemos mitocondrias, no se dan ninguno de los procesos si no hay succinato, cuando se pone se disparan los dos. Si aadimos Oligomicina, antibitico que se une a la F0 inhibindolo, deja de haber transporte de electrones. Si desacoplamos los dos procesos con DNP (dinitrofenol) y se permite que haya transporte de electrones (transporte de protones a la matriz y que vuelvan no por el canal F0) no habr sntesis de ATP pero si hay cadena respiratoria al menos. Si aadimos pasa que ste se protona. En el espacio intermembranal hay un exceso de protones al aadir DNP, que tiene carga negativa. Este exceso de protones hace que la reaccin tienda a ir hacia la izquierda (Ley Chatelier): DNP- + H+ DNPH. De esta manera, se favorece que el DNP molecular (sin carga) atraviesa bien la membrana, pudiendo entrar sin problema a la matriz mitocondrial. El DNP, se encarga de captar protones del espacio intermembranoso, agotando los protones. Esto hace que no hay protones para pasar por la F0, por lo que conlleva que a que se disipe el gradiente electroqumico, no habiendo fosforilacin oxidativa, porque los protones los gastamos para que el DNP entre en la matriz mitocondrial. El FCCP acta igual que el DNP. (DNP hay que sabrsela, FCCP no hace falta).

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 Otro experimento alrededor de esta teora, es el hecho de crear gradiente de protones en el laboratorio de la siguiente forma:

Teniendo mitocondrias en suspensin y simplemente aadiendo un cido aumenta la concentracin de protones en el exterior, lo que implica que va a tender a entrar protones del espacio intermembranal a la matiz. Esto a su vez conlleva a un aumento de la fosforilacion oxidativa. La valinomicina es un ionforo que saca las cargas positivas de la matriz para que sigan entrando protones y por lo tanto favoreciendo la fosforilacin oxidativa. Si hay carga de protones podramos afirmar que hay fosforilacin oxidativa.

La sntesis de ATP en la F0F1 sintasa.

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 En 1994 se publica la teora definitiva. F1 es un motor rotatorio que sigue un mecanismo denominado mecanismo de cambio de unin propuesto por Boyer. Propuso lo siguiente: En las subunidades puede haber ATP, ADP o vacos. Hay tres sitios. Esos dobles gajo - pueden estar en una situacin laxa (L), tensa (T) o abierta (O). La transicin entre las tres conformaciones producen un cambio conformacional. La conformacin 1 (L) no tiene nada en sitio , la interaccin de esa configuracin con ADP nos lleva a la configuracin 2 (T) ADP + P y la sntesis de ATP nos lleva a la configuracin 3(O) que tiene ya ATP. Se cerrara sacando el ATP y volviendo a la configuracin 1.

Modelo de unin y cambio de ATPsintasa: el complejo F1 tiene tres sitios de unin de nucletidos de adenina no equivalentes, uno por cada par de subunidades y . En un momento determinado uno de estos sitios est en la conformacin -ATP (que une ATP fuertemente), un segundo est en la conformacin -ADP (unin suelta) y un tercero est en la conformacin -vaca (unin muy dbil). La fuerza protn-motriz hace que el eje central rotesubunidad , mostrada como una flecha verde, el cual se pone en contacto con cada par de subunidades de forma sucesiva. Ello produce un cambio de conformacin cooperativo en el que el sitio -ATP se concierte en la conformacin -vaca y el ATP se disocia; el sitio -ADP se convierte en la conformacin -ATP, que promueve la condensacin del ADP y Pi unidos para formar ATP; y el sitio -vaco se convierte en un sitio -ADP, que une dbilmente ADP y Pi, que difunden desde el disolvente. Este modelo, basado en observaciones experimentales, requiere que al menos dos de los tres sitios catalticos se alteren en actividad. El ATP no se puede liberar de uno de los sitios hasta que se fija ADP y Pi al otro. El mecanismo de catlisis rotacional es el que explica la sntesis de ATP. La subunidad determinada empieza en conformacin -ADP, que une ADP y Pi del medio circundante. A continuacin la subunidad cambia de conformacin, adoptando la forma -ATP, lo que comporta el rpido equilibro del ADP + Pi con el ATP en la superficie de la enzima. Finalmente la subunidad cambia hacia la conformacin -vaca, que tiene una afinidad muy baja por el ATP, por lo que el ATP recin sintetizado se libera de la superficie de la enzima. Cuando esta subunidad vuelve a adoptar la conformacin -ADP se une ADP +PI con lo que se inicia otra ronda de catlisis. Los cambios de conformacin son esenciales en este mecanismo, y estn impulsados por el paso de protones a travs de la porcin F0 de la ATP-sintetasa. Cada doble gajo est actuando en ese giro. En cada 120 est liberando ATP. Se aprovecha el giro de la F10, que nos hace falta para la sntesis de ATP: 3 H+ para cada ATP que se sintetice, aunque se emplean 4 H+, el cuarto es para el transporte a travs de la membrana del fosfato. De manera experimental: se realiza el acoplamiento de ATPasa con un largo filamento de actina fluorescente unida al F0 mediante la avidina. Al girar el complejo gira la actina la cual podremos observar al presentarse como fluorescente. Observamos un giro de 120 por cada 17

transicin a otra conformacin puesto que vemos a la actina fluorescente que cambia de posicin por cada cambio de conformacin.

Sistemas acoplados
En la membrana tenemos el canal F0 F1sintasa, estn volviendo protones a la matriz que se aprovechan para que haya sntesis de ATP. Ya que necesitamos que haya fosfatos en el interior, para eso tendr que haber un transportador de membrana, una permeasa, que nos introduzca fosfato desde el espacio intermembranal y necesita energa por lo que es un sistema acoplado por el que entran protones y fosfatos. Por otro lado hay otro sistema transportador responsable de la incorporacin de ADP (que entra) y expulsin de ATP (que sale). El ATP que se forma sale con el mismo transportador, y es un proceso de transporte antiparalelo. El ADP que ha entrado va a dar lugar a la formacin de ATP mediante el fosfato que ha entrado y mediante la entrada de protones.

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Esto no es siempre as. Cuando se necesita calor se utiliza la energa de transporte caracterstico del tejido adiposo pardo y de los animales que entran en hibernacin. Hay un proceso de desacoplamiento del transporte de electrones y la fosforilacin oxidasa. En el tejido adiposo pardo hay termogenina (UCP-1) que desacopla los dos sistemas para producir calor. La termogenina es una protena que desacopla los dos procesos porque tiene la capacidad de disipar el gradiente de protones. Permitiendo la entrada de protones a la matriz sin necesidad de la F0. Esta protena ejerce como canal de transporte de protones, permitiendo el paso de protones a la matriz, disipando as el gradiente y evitando que los protones pasen por la F0, lo cual hace que se desacoplen los sistemas de transporte de electrones y de fosforilacin oxidativa. Otro caso de protena desacoplante es la UCP-4 del cerebro. Tambin lo hacen otras protenas desacoplantes. Las protenas desacoplantes aprovechan la energa del gradiente para la produccin de calor

Enfermedades mitocondriales: suponen alteraciones genticas del DNA mitocondrial, produciendo protenas anmalas, las cuales generan fallos en la cadena transportadora de electrones. Estas son el caso de enfermedades como el Altheimer, la enfermedad de Parquinson o la intoleracia al ejercicio.

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TEMA 16: METABOLISMO DE HIDRATOS DE CARBONO GLUCLISIS

Va a ser fundamentalmente el de la glucosa, es lo ms importante, porque los hidratos de carbono son el componente esencial de la dieta (55%). Y a su vez el 80% del metabolismo de hidratos de carbono, se debe a la glucosa. La glucosa se sintetiza fundamentalmente a travs de la glucolisis (rotura de la glucos): es una ruta metablica que tiene lugar en casi todos los seres vivos (plantas, animales y casi todos los microorganismos). Es por lo tanto, importante para la casi totalidad de los seres vivos, pero la glucosa se puede utilizar para otros fines: Almacenamiento: acumulable como el glucgeno, almidn o sacarosa Oxidacin va glucolisis: dando lugar a piruvato Oxidacin va de las pentosas fosfato: producir NADPH Sntesis de la estructura de polmeros: celulosa, polmeros de la pared celular, en la matriz extracelular, etc.

GLUCILIS
Es una va en la que la glucosa, a travs de una serie de 10 reacciones se transforma en piruvato (molcula de cido privico). Todas estas reacciones son enzimticas y es un proceso que en su conjunto es exergnico (se realiza de manera espontnea y desprende energa). Segn los tipos de regulacin enzimtica de la gluclisis y el destino final del piruvato, sta se diferenciar de unos organismos a otros. An as, todas tienen en comn que de la glucosa a piruvato, se llega mediante mecanismos anaerobios. A partir de ah ste se puede utilizar de diversas maneras: Para dar lugar a lactato en un proceso que denominamos gluclisis anaerobia, es lo que denominamos fermentacin lctica. Este proceso hasta lactato solo se da en determinadas situaciones (msculo en esfuerzo, en algunos tipos celulares como los eritrocitos y en diversos tipos de microorganismos). Para dar lugar a Acetil CoA y CO2, en la gluclisis aerobia. La mayora de nuestros tejidos van a hacer una glucolisis aerobia. sta servir para integrarse en el ciclo de Krebs (mayora de clulas animales y vegetales y algunos microorganismos). Para dar etanol, que es un proceso anaerobio, en el que tiene lugar una descarboxilacin. Se denomina fermentacin alcohlica y se da en levaduras.

Por lo tanto hay tres maneras de utilizar la glucosa, de las cuales son interesantes las dos primeras. La gluclisis es una ruta metablica que se empez a estudiar a mediados del siglo XIX con cientficos como Pasteur, el cual descubri que la glucosa se depositaba como glucgeno en el hgado y empez a estudiar sobre la fermentacin del vino. Pero hasta el 1897 demostr que podra tener lugar la fermentacin alcohlica en extractos de levaduras por Bchner. As empezaron a identificarse las enzimas que participaban en estas reacciones. Harder y Yung demuestran la participacin del fosfato en la gluclisis (molculas fosfatadas). 20

Durante la primera mitad del siglo XX intervienen diversos grupos y al final de este siglo ya se conoce el proceso completo. Intervinieron el matrimonio Cori, Severo Ochoa, Embden, Meyerhof, Parnas (se denomina ruta con los 3 ltimos nombres). Esta ruta, que tiene lugar en el citosol, se lleva a cabo para gastar el combustible que es la glucosa y para producir ATP. Tiene dos fases: Con una molcula de glucosa, hasta piruvato, va a dar lugar en una primera fase al gasto de dos ATPs (las primeras 5 reacciones en la fase preparatoria o fase de inversin de energa). En la segunda mitad (ultimas 5 reacciones o fase de beneficios), se producen 4 ATPs y adems se producen dos molculas NADH. Esta ruta tiene lugar en el citosol. Dado que la fosforilacin oxidativa tiene lugar en la mitocondria, el paso del NADH a la mitocondria puede dar lugar a 2 ATPs o a un FDH2 que da lugar a 1,5 ATPs.

Las molculas de NADH se pueden utilizar para producir ATP o, en el caso de la LDH (lactato deshidrogenasa, que tiene como coenzima el NADH que es el producido por la glucolisis), servir para levar a cabo fermentacin lctica.

El paso de glucosa hasta lactato, el rendimiento total es 2 molculas de ATP, que no es mucho pero le renta en ejercicio fsico intenso. Esquema de la gluclisis aerobia Fase preparatoria:

Las reacciones que vamos a ver se levan a cabo con la glucosa que proviene de los alimentos (circula como tal en sangre) que para metabolizarse en la glucolisis es transformarse en la glucosas 6-fosfato, es una primera reaccin en la que gastamos ATP y se produce ADP. Esta glucosa 6p se tiene que isomerizar a fructosa 6-fosfato, que a su vez se fosforila a fructosa 1,6bisfosfato, la cual exige que intervenga una segunda molcula de ATP. Esta ltima molcula (fructosa 1,6 bisfosfato) se va a romper en: 3-fosfogliceraldhedo y dihidroxiacetonafosfato. A continuacin como solo puede seguir la glucolisis el primero, la segunda se transforma en 3fosfogliceraldehdo.

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Fase de beneficios

La siguiente fase es que el 3-fosfogliceraldhedo, se fosforile de nuevo a la vez que se oxide a 1,3-bisfosfoglicerato, en una reaccin en la que interviene un grupo fosfato (para cada molcula), pero no ATP y como el grupo aldehdo se oxida a carboxlico interviene el NAD+ (una para cada molcula). La siguiente reaccin es que el 1,3BPG, tiene alta energa permite formar ATP perdiendo el P de la posicin 1 que se une al ADP quedando as 3-fosfoglicerato. (Hay dos molculas siempre). El paso siguiente es una isomerizacin a 2-fosfoglicerato. (Hay diferencias en el eritrocito). En el siguiente paso ste da lugar a fosfoenolpiruvato (2). ste pierde el grupo fosfato en una reaccin en la que se forma piruvato, para producir ATP a partir de ADP. (Siempre dos molculas).

Este es el final de la glucolisis tanto aerobia como anaerobia. Si es la fermentacin, el piruvato se reducir a lactato, en una reaccin que exige NADH, que se ha formado en la reaccin del 3PGA a 1,3BPG. Se transforma entonces en NAD+.

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DETALLADAS

Fase preparatoria
1. Tenemos glucosa en el citosol, que sufre una fosforilacin. La glucosa inicial, ha entrado en la clula a travs de unos transportadores. Una vez dentro, ya se fosforila con una molcula de ATP, que pasa a ADP, en presencia de una enzima que es la hexoquinasa, que como otras quinasas que fosforilan, tiene magnesio. El sustrato de la reaccin es ATP magnesio, no ATP. Una vez finalizado este primer paso, lo que tenemos es glucosa 6P. La exoquinasa es una enzima que existe en distintas formas isoenzimticas: Hay HK I, II y III. Estas enzimas son dmeros (dos cadenas) y su peso molecular es de 100KDa, por lo que es bastante grande. Tienen una afinidad para la glucosa bastante alta: la Km esta en el rango de 1 a 4 .10-5M. Est muy bien porque la concentracin a la que llega la glucosa es bastante ms alta (10 milimolar), lo que favorece al xito de la reaccin. Estas estn en todos los tejidos del organismo, pero en hgado hay otra, que es la denominada HK IV. La de la glucolisis trabaja a concentraciones ms grandes de glucosa, la HK IV, que se llama glucoquinasa, que es otra hexoquinasa distinta, no es un dmero, sino un monmero, con un peso molecular de unos 58KDa y tiene una km bastante ms alta del orden de 5 milimolar. Afortunadamente es al hgado a done va la glucosa de la ingesta de alimentos. Estas hexoquinasas fosforilan tambin otros monosacridos (fructosa y manosa), no con glucoquinasa, que es especfica para glucosa.

2. La segunda reaccin de la glucolisis va a ser el paso de la Glucosa 6P a fructosa 6P. Pasamos de una aldosa a una cetosa. Se abre el ciclo de la glucosa (el ciclo del pirano) y se vuelve a cerrar formando el ciclo del furano. Esta reaccin es una isomerasa y es por lo tanto una fosfoglucoisomerasa.

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3. El paso siguiente consiste en que esta Fructosa 6P se fosforile a Fructosa 1,6 bisP con una molcula de ADP que pasa a ATP con Mg2+. Esta reaccin esta catalizada por una enzima que es la fosfofructoquinasa I, que tiene 4 subunidades (es un tetrmero) iguales. Es una enzima alostrica, muy importante porque es el principal punto de regulacin de la gluclisis. Es la que mas efectores o reguladores tiene, tanto positivos como negativos. En concreto esa enzima se puede ver que se estimula por una serie de molculas como por ejemplo: la fructosa 2,6 bisP, que es el principal regulador de la gluclisis, a nivel de esa enzima (fosfofructoquinasa I). Otros estimuladores de esta enzima (PFK1) son el AMP y el ADP, cuando hay mucha cantidad de estos, interesa que se produzca la glucolisis. Por otra parte, el ATP, inhibe la actividad de esta enzima, asi como en situaciones de un buen suministro de combustible en la clula, tales como cidos grasos.

4. La siguiente reaccin es que esta Fructosa 1,6bisP se nos rompa. El paso siguiente es la rotura de esta molcula en dos mitades de tres carbonos, en una reaccin que es reversible. Esta primera parte (carbono 1, 2, 3), va a ser una molcula de dihidroxiacetona fosfato y la otra mitad de tres carbonos va a dar el 3 fosfogliceraldehdo. La enzima que cataliza esta reaccin es la aldolasa, que requiere zinc en el centro activo para su actuacin y que se encuentra presente en prcticamente en todos los seres vivos de la siguiente manera: o Animales: aldolasa I: tiene 4 cadenas y tiene un peso molecular de 160KDa o Bacterias y levaduras: aldolasa II: tiene dos cadenas y pesa 65KDa Esta enzima tiene muchos grupos sulfridilos libres (tiene muchas cistenias R-SH) y tienen en su centro activo una lisina que va a ser muy importante para unirse al sustrato.

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5. La siguiente reaccin consiste en que la DHAP se convierta en 3PGA mediante una isomerasa (reaccin), cambiamos a una funcin aldehdo, mediante una fosfotriosaisomerasa, ms correctamente. Tambin podra ser que la DHAP, se redujera en ese grupo cetnico quedando glicerofosfato, que es un precursor de triacilglicridos. Entonces, al tener 3PGA, termina la primera fase de la glucolisis en la que se han gastado los ATPs.

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Fase beneficiosa
A partir de aqu se empiezan a fabricar ATP y a partir de este momento, se tienen siempre dos molculas. 1. 1.1. Estas dos molculas se van a oxidar a carboxilo, que se va a fosforilar. No interviene ATP, sino que interviene un fosfato (fosforilacion a nivel de sustrato). Va actuar una enzima que sea la 3fosfogliceraldehdo deshidrogenasa, en una reaccin en la que se nos forma un grupo oxidado y fosforilado (COO-O-P), por lo que cataliza tanto la oxidacin como la fosforilacin. Esta enzima posee en su centro activo una cistena. En ese centro activo se une el sustrato formando un enlace tiohemmiacetal (entre una triosa y el grupo SH de la cistena). Esta molcula es un acido carboxlico que est fosforilado en sus dos extremos y que es el 1,3,Bisfosfoglicerato, tiene alta energa y se va a desprender cuando se hidroliza. Interviene asimismo el NAD, reducindose a NADH +H+. El peso molecular global es 180KDa y cuatro cadenas. Podemos inhibir esta ultima enzima, con el yodoacetato, que reacciona as:

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1.2. El potencial que tiene esta ltima molcula, con alta energa, dar lugar a que pierda P, que va a servir para producir ATP. En esta reaccin quedar el grupo carboxilo sin fosforilar, dando lugar al 3PG. La enzima que participa en esta reaccin es la 3fosfogliceratoquinasa.

Esta y la etapa catalizada antes, se considera que forman un paso comn, coordinado. Por lo que hay que interpretarlas ambas como un proceso de fosforilacin a nivel de sustrato en el que se ha formado ya ATP. 2. En esta ltima reaccin puede haber alguna variante, que nos d lugar a un producto intermedio en el que cambia el lugar de un P, mediante la reaccin de fosfogliceratomutasa. Se forma el 2,3BPG, que puede perder un grupo fosfato formando 3PG, mediante una 3 fosfoglucoquinasa. 3. El 3PG, va a dar lugar al 2PG, cambiando de posicin el P. Esta reaccin est catalizada por una mutasa, que tiene magnesio 2+ como caracterstica.

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4. Mediante una condensacin se forma el fosfoenolpiruvato, por medio de una enzima de endolasa con presencia de Mg2+. Esta enzima tiene 85KDa y se inhibe por complejos de fluordifofato.

5. La ltima reaccin ser la catalizada por la piruvato quinasa, esta no es reversible. Se forma ATP a partir de ADP, formndose a su vez piruvato. Esta enzima tiene 250 KDa y se presenta de distintas formas. Es alostrica y tiene 4 cadenas, es muy importante en la regulacin de la gluclisis. Se presenta: o Piruvato quinasa A: en tejidos embrionarios. o Piruvato quinasa L: en el hgado y en otros rganos glucodiognicos, como el rin. o Piruvato quinasa M: en msculo y en corazn.

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La variacin de potencial de reduccin estndar de toda la reaccin es AE= -96.2 kJ/mol

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REGULACIN DE LA GLUCLISIS La regulacin se lleva a cabo principalmente en las etapas donde juega un papel el ATP, es decir, en las etapas de las quinasas.

Tiene lugar en la 1 etapa: hexoquinasa o glucoquinasa, es importante porque lleva a cabo la entrada del sustrato en toda la ruta. Hay dos diferencias: Hexoquinasa: es mucho ms afn. Glucoquinasa: trabaja con concentraciones de glucosas mucho ms altas. Existen cuatro isoenzimas codificadas por cuatro genes diferentes. Las hexoquinasas I y II musculares son inhibidas alostricamente por su producto glucosa 6-fosfato, por lo que siempre que la concentracin de glucosa 6-fosfato celular se eleva por encima de su nivel normal, estas enzimas son inhibidas temporal y reversiblemente, equilibrando la velocidad de formacin de glucosa 6-fosfato con la velocidad de su utilizacin y restableciendo el estado estacionario. La isoenzima de la hexoquinasa predominante en el hgado es la hexoquinasa IV (glucoquinasa). La concentracin de glucosa a la que la hexoquinasa IV est semisaturada (alrededor de 10mM) es superior a la concentracin usual de glucosa en la sangre. Cuando la concentracin de glucosa en la sangre es alta, tal como sucede despus de una comida rica en glcidos, la glucosa sangunea en exceso es transportada a los hepatocitos donde la hexoquinasa IV la convierte en glucosa 6-fosfato. Dado que la 32

hexoquinasa IV no est saturada a 10mM de glucosa, su actividad contina aumentando a medida que la concentracin de glucosa sube a 10mM o ms. La glucoquinasa no es inhibida por la glucosa 6-fosfato, por lo que puede, por lo tanto, continan operando cuando la acumulacin de glucosa 6-fosfato inhibe completamente la hexoquinasa I-III. Solo la hexoquinasa es regulable por el producto de la reaccin, por la glucosa 6P, porque le interesa utilizar la mayor cantidad de glucosa posible.

Otro punto importante de regulacin es la fosfofructoquinasa: La enzima se regula tambin por el pH de la clula. A pH < 7, la actividad de PFK disminuye rpidamente e impide una sobreproduccin de piruvato y lactato, que conduce a una posterior disminucin de pH. Se halla sometida a una compleja regulacin alostrica. El ATP no es solo sustrato de la PFK-1 sino que tambin es uno de los productos finales de la ruta glucoltica. Cuando los niveles elevados de ATP sealan que la clula est produciendo ATP ms rpidamente de lo que lo consume, el ATP inhibe la PKK-1 al fijarse a un sitio alostrico y disminuir la afinidad de la enzima por la fructosa 6-fosfato. El ADP y el AMP, que aumentan sus concentraciones cuando el consumo de ATP es superior a su produccin, actan alostricamente para aliviar esta inhibicin por el ATP. Estos efectos se combinan para producir una actividad enzimtica superior cuando se acumulan ADP o AMP y disminuir la actividad cuando se acumula ATP. El citrato sirve tambin como un regulador alostrico de la PFK-1; una concentracin alta de citrato aumenta el efecto inhibidor del ATP, reduciendo aun ms el flujo de glucosa a travs de la gluclisis. El regulador alostrico ms significativo de la PFK-1 es la fructosa 2,6-bisfosfato, la cual activa poderosamente la enzima. 33

La inhiben el ATP y el citrato. Asimismo esta favorecida por AMP, ADP y F 2,6BP. La formacin de ste ltimo se lleva a cabo en varios pasos: La Fructosa 6P, pasa a Fructosa 2,6bisfosfato, mediante una reaccin que esta catalizada por una Fosfofructoquinasa 2. Aqu tiene que participar ATP, va a salir ADP y es una enzima que requiere magnesio. En esta reaccin se produce este metabolito y en la reaccin inversa, mediante una molcula de agua, vamos a sacar un grupo fosfato. La fructosa 2,6 bisfosfato es el estimulador ms potente de la fosfofructoquinasa 1 y por lo tanto es el activador ms potente de la glucolisis y lo hace a nivel de la fosfofructoquinasa 1. Mientras que el inhibidor ms potente de la fructosa 1,6 bisfosfatasa, es la fructosa 1,6 bisfosfato. Es decir, inhibe la gluconeognesis.

En la tercera etapa interviene la piruvatoquinasa: La piruvatoquinasa, se ve favorecida por la fructosa 1,6BP, mientras que la inhiben alostricamente el ATP, la alanina, la Acetil CoA y los cidos grasos de cadena larga.

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La isoenzima heptica, forma L, se puede fosforilar con ATP, a partir de la protena quinasa, que es dependiente de cAMP, y tenemos piruvatoquinasa fosforilada que es poco activa: actividad baja. Esto disminuye la utilizacin de glucosa como combustible por el hgado, reservndola para su exportacin al cerebro y otros rganos. Esta se puede desfosforilar con una fosfatasa, dando piruvato quinasa, se activa por lo tanto. Esto sucede cuando hay una baja concentracin de glucosa en sangre provoca la liberacin de glucagn. Otra manera, es la piruvato quinasa, con su forma M, la isoenzima muscular, que al igual que L, se activa por la fructosa 1,6bisfosfato. Se inhiben las dos por ATP, que es el producto de la glucolisis y tambin por otra ruta. La caracterstica es que en el msculo, en respuesta a la adrenalina, el cAMP activa la degradacin del glucgeno y la gluclisis, proporcionando as el combustible necesario para la respuesta de luchar o huir.

Regulacin hormonal
Hay dos situaciones importantes para el organismo como son: Estado de alimentacin: estado inmediato a la comida (estado postprandial). Hay un aumento del aporte de hidratos de carbono al organismo, lo que significa que aumenta la concentracin de glucosa (la glucemia). Este aumento dispara la secrecin de insulina, por la clula pancretica. Esta hormona, la insulina, va a dar lugar sobre 35

las enzimas glucolticas (la insulina su funcin es utilizar la glucosa) un aumento de stas y va a activar an ms las enzimas de la gluclisis. Va a ejercer: Aumento de sntesis de enzimas glucolticas (flecha): aumenta la sntesis en hgado (rgano principal del metabolismo, induciendo la sntesis de una enzima clave como es la glucoquinasa y de la piruvatoquinasa) y en msculo (tiene un papel importante, pero especialmente sobre otra enzima, ya que induce la sntesis de la fructosa fosfoquinasa 1). Aumenta la actividad de enzimas glucolticas (un + o un redondeado): el papel ms importante es en el msculo esqueltico donde aumenta la actividad de la fosfofructoquinasa 1. En estado de ayuno: se puede medir por el tiempo que ha pasado desde la ltima ingesta. A base de agua y vitaminas, una persona puede estar ms o menos 50 das y sin beber lquido ms o menos 10 das. En este estado hay una disminucin del aporte de hidratos de carbono, ya que no se ingieren y hay una disminucin de la concentracin de la glucosa en sangre. Cuando esto sucede el organismo trata de contrarrestar este efecto: desciende la secrecin de insulina y va aumentar la secrecin de otras hormonas muy importantes (glucagn, adrenalina, cortisol y la hormona de crecimiento (GH)). Estas hormonas trabajan en rganos calve como:

Hgado (hepatocito): en la membrana del hepatocito hay una serie de receptores para distintas hormonas. En este caso, el receptor de glucagn y receptores para adrenalina, por ejemplo. Estos receptores son heptalices transmembrana, acoplados a protenas G, y que a su vez trabajan a travs de adenilato ciclasa. De esta manera, la unin de la adrenalina y el glucagn, activa la adenilato ciclasa que sintetiza AMPc. A travs de ATP, se activa a la protena quinasa A. Esta protena se encarga de fosforilar protenas, dando finalmente lugar a una activacin de la fructosa 2,6bisfosfatasa, que genera una disminucin de la gluclisis, ya que reduce los niveles de la fructosa 2,6 bisfosfato. Por este mismo mtodo se da lugar a la disminucin de la piruvato quinasa, por lo que igualmente disminuye la gluclisis. stas son dos maneras de que disminuya la glucosa y de activar la gluconeognesis. Esta es una manera de que haya un nivel discreto de glucosa. La proteinquinasa A da lugar a un aumento de la glucgeno fosforilasa. Por otra parte sta, inhibe a la glucgeno sintasa, que se encarga de la sntesis de glucgeno (no se va glucosa a glucgeno). Hay otras hormonas que intervienen, como son el cortisol, que es una hormona esteroidea (no acta a travs de receptores de membrana, sino a travs de receptores intercelulares). ste va a llegar al ncleo unindose a receptores intracelulares que estn en el citosol o en el ncleo. Atraviesa bien la bicapa lipdica, porque es un lpido. En el ncleo regula la sntesis de protenas, entre otras cosas, por lo que acta directamente sobre el DNA. Igualmente aumenta la sntesis de fosfoenolpiruvato carboxiquinasa (PEPcarboxiquinasa) que es una enzima de la gluconeognesis, por lo que aumenta la sntesis de glucosa. La adrenalina, en el hgado, se opone a la gluclisis.

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En el msculo: de entrada, el glucagn no va actuar, ya que acta a nivel heptico, pero aqu, sobretodo, la adrenalina aumenta la gluclisis. Es una afirmacin opuesta a la que tiene en el hgado. Esto se debe a que al musculo le interesa, para ejercer la contraccin muscular. En l se aumenta la glucolisis para uso interno, no la lanza a la sangre, al contrario que el hgado, que la distribuye. La adrenalina lo que hace es activar la fosfofructoquinasa I, es decir aumentar los niveles de fructosa 2,6bisfosfato, es decir el activador de la PPKI y por lo tanto a un aumento de la glucolisis.

Lo normal son 890mg de glucosa por 100ml de sangre. Se considera normal de 70 a 110. Por encima de 130, se considera que el individuo es diabtico. Y por debajo de 70 se considera una hipoglucemia severa.

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TEMA 17: METABOLISMO DE HIDRATOS DE CARBONO PIRUVATO

En este tema, nos vamos a centrar en lo que nos sirve de conexin con la gluclisis, hasta piruvato, con lo que viene despus, el uso del piruvato. En la gluclisis se produce NADH en el citosol. Para que ste lo podamos acumular en forma de ATP, tiene que entrar en la mitocondria, en la matriz mitocondrial. El NADH no entra libremente, por lo que debe entrar por mecanismos indirectos: Lanzaderas, que son dos esencialmente: La del Glicerol 3P El NADH lo podemos oxidar a la vez que se nos reduce dihidroxiacetona fosfato a Glicerol 3 fosfato. Todo esto se realiza en el citosol. La enzima que cataliza esta reaccin es una glicerol 3 fosfato deshidrogenasa, cuya coenzima es el NADH. Al haberse formado G3P, puede entrar en la mitocondria, aunque solo llega hasta la membrana interna mitocondrial, de manera que ah se vuelve a reoxidar, con otra glicerol 3 fosfato deshidrogenasa, que en este caso es una isoenzima mitocondrial que tiene una importante diferencia, ya que su coenzima es FAD y no NADH, como en el otro caso. Se pasa por lo tanto a FADH2 en la membrana interna mitocondrial, que puede integrarse en la cadena de transporte electrnico. Esto quiere decir que el NADH que tenamos fuera da lugar a FADH2, por lo que el 2,5 ATP que se formaban antes, se van a formar ahora 1,5 ATP, siendo el rendimiento menor con esta lanzadera. La otra es mejor, ya que si que rinde NADH, a partir de NADH fuera.

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La del malato/aspartato:

Tenemos NADH en el citosol que se nos produce en la gluclisis. Se trata de que un NADH se oxide en el citosol a NAD+, a base de que una molcula oxidada, como es el oxalacetato, que a su vez de lugar a malato (se reduce). El NADH no poda entrar en la mitocondria, pero el malato s que puede atravesar la membrana interna mitocondrial a base de utilizar un transportador. Esto se lleva a cabo por un proceso de difusin facilitada de manera que ya tenemos malato en el interior que puede oxidarse de nuevo a oxalacetato, a costa de que una molcula de NAD+, se reduzca a NADH + H+. Esto genera un rendimiento de 2,5 ATP, que es del 100%. La enzima que acta fuera es una malato deshidrogenasa y la que acta dentro es otra malato deshidrogenasa, que tiene el mismo mecanismo a base de NADH. Ya tenemos oxalacetato dentro. El paso siguiente es que el oxalacetato de lugar a aspartato. Ya que el primero es el -cetocido del segundo. Esto se produce a costa de que 40

cido glutmico, un aminocido, de lugar a su -cetocido, que es el -cetoglutarato. Es una reaccin de transaminacin y est catalizada por la glutmicooxalactico aminasa. A su vez ese aspartato, va a poder salir al citosol mediante un proceso de difusin facilitada, de manera que tendremos aspartato fuera. Este transporte consta de un transportador que saca asprtico a la vez que mete glutmico. El aspartato fuera, en el citosol, va a recuperar oxalacetato por una reaccin de transaminacin de la que el -cetoglutarato, va a dar glutamato.

Entrada de otros azcares en la ruta glucoltica:

Hay otros azcares que pueden alimentar la ruta glucoltica. La glucosa, nos puede provenir del glucgeno heptico o de la dieta, que es el 55% de los nutrientes diarios. Y el 80% de esa cifra es glucosa. La glucosa en la glucolisis da lugar a glucosa 6P, que da lugar a Fructosa 6P la cual da lugar a Fructosa 1,5 bisP y sta a 3PGA. Puede entrar como galactosa, que tiene una va de entrada de varios pasos que finalmente da lugar a glucosa 6P. Se encuentra en la leche. La fructosa est en el azcar comn y da lugar a fructosa 6P. Esta primera fructosa entra fosforilndose dando la segunda, en el tejido adiposo. Pero la otra manera es en hgado, que lo hace ms complicado. La fructosa se rompe de manera que da lugar a dihidroxiacetona fosfato y finalmente a gliceraldehdo 3 P. El 10% de los azcares que se absorben no son glucosa, son otros azcares y que se van a aprovechar en mayor o menor medida por la ruta glucoltica. (NO FORMULAS)

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Metabolismo del piruvato

El piruvato se ha producido de manera anaerobia y va a dar lugar a: Lactato de forma anaerobia. Este a su vez se puede aprovechar para formar glucosa, por medio de una reaccin reversible en la gluconeognesis. Etanol de manera anaerobia tambin Acetil CoA y CO2, de manera aerobia y por medio de una descarboxilacin. aa, por ejemplo (alanina es el aa de piruvato).

Por lo tanto la formacin de piruvato va a posibilitar el que se utilice el NADH de la glucolisis par producir lactato que puede pasar a la sangre. (En la contraccin muscular se produce mucho lactato). METABOLISMO AEROBIO La fermentacin lctica Es un proceso muy activo en musculo esqueltico y en bacterias acido lcticas Consiste en que la molcula de piruvato que se ha formado en la gluclisis reduce su grupo cetnico. Es un proceso en el que por lo tanto tiene que intervenir una molcula que haga ese proceso de reduccin, es decir que se oxide, y esa molcula es el NADH + H+ que pasa a NAD y se obtiene lactato. Esta reaccin es reversible y est catalizada por la lactato deshidrogenasa, una enzima que se presenta como diversas isoezimas en los tejidos, con distinta estructura qumica, pero que catalizan esta misma reaccin.

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Esta lactato deshidrogenasa tiene 4 cadenas que son de dos tipos: M (la que ms abunda en el msculo) o H (la que ms abunda en el corazn). Dado que tiene 4 cadenas las isoenzima pueden ser: M4, M3H, M2H2, MH3, H4. Tanto desde el punto de vista estructural como el funciona, las isoenzimas son diferentes. La H4 ser inhibida por piruvato, siguiendo el camino as de la oxidacin aerobia, que dar un balance energtico de ms energa. Hay distintas proporciones de ellas en los distintos tejidos. Esto tambin desde el punto de vista funcional:

Esta reaccin esta desviada hacia lctico, precisamente en msculo, ya que tiene M4 como isoenzima ms abundante. Esta M4 cataliza esta reaccin desplazada. Piruvato podra ir tambin hasta la oxidacin completa en presencia de O2, de manera que le piruvato se degradara hasta dar CO2 y agua. En msculo esqueltico, que est especializado en gluclisis anaerobia, simplemente se desplaza. En corazn, donde interviene H4, lo que ocurre es que se nos va a dar la inhibicin de esa lactato deshidrogenasa, de manera que la reaccin se va hacia gluclisis aerobia, porque se produce mucha ms energa por esa va. La LADH se inhibe con altas concentraciones de piruvato. El balance energtico de la fermentacin lctica ser que una molcula de glucosa da dos de piruvato y dos de ATP Glucosa +2ADP +2Pi 2lactato + 2ATP +2H2O

La fermentacin lctica es importante en diferentes situaciones. En el caso del hombre, en ejercicio intenso, en el sprint, despus de haber agotado la reserva de glucosa y se haya 43

formado todo el cido lctico (entrando en acidosis lctica), interesa hacer un reposo durante 30 minutos, siendo capaces de reponer nuestras reservas de glucgeno heptico y muscular, este ltimo sobre todo y poder eliminar el cido lctico que hemos formado. Esto se debe a que el msculo ha estado haciendo fermentacin lctica a un ritmo muy intenso. Esto ocurre igualmente con el cocodrilo, cuando hacen un ejercicio brutal, tienen muy poco glucgeno y gastan la glucosa por fermentacin lctica, pero en su caso necesitan varias horas para recuperarse. Otro animal que hace solo fermentacin lctica, que tiene prcticamente un metabolismo anaerobio, es el celacanto, de la costa occidental a profundidades de 3km, donde hay poco oxgeno, desaprovecha en gran medida la glucosa. En l es muy importante la glucolisis anaerobia. Problemas tumorales

Los procesos tumorales estn relacionados con la glucolisis anaerobia. A medida que avanza el cncer, se pierden las reservas, ya que van a ser utilizadas por el tumor. El tejido tumoral hace metabolismo fundamentalmente anaerobio, ya que al expandirse la masa tumoral no tiene suficiente riego sanguneo, por lo que tiene que adaptarse a un proceso en condiciones anaerobias que no le permiten obtener demasiado ATP de la glucosa. Para ello hace mucha glucolisis anaerobia, de manera que se llega a multiplicar por 10 la gluclisis en el tejido tumoral. Se necesita que haya una cantidad importante de enzimas de la gluclisis. Es decir, en el proceso tumoral se incrementa la sntesis de hasta 8 de las 10 enzimas de la gluclisis, as como de los GLUT, ms transportadores para captar la mayor parte de la glucosa disponible. El principal responsable del aumento de las enzimas es el factor HIF-1 Un factor de 44

transcripcin inducible por hipoxia. Se favorece la produccin y liberacin del HIF-1 que va a ser responsable de actuar en el ncleo y activar o potenciar la formacin de los RNAm y por lo tanto, finalmente la sntesis de las enzimas de la gluclisis y de los transportadores de glucosa (GLUT1, GLUT 3, hexoquinasa, fosfofructoquinasa, aldolasa, G-3PDH, fosfogliceratoquinasa, endosa, piruvatoquinasa, lactato OH). Adems es responsable del crecimiento de vasos sanguneos necesarios para el tumor. Una de las enzimas que se ha visto que aumenta por accin de este factor de transcripcin HIF1, es la hexoquinasa, que aumenta su sntesis del orden de 10 veces y por lo tanto se ha considerado como una diana teraputica del cncer, para impedir que se desarrolle o crezca a un ritmo demasiado acelerado el tumor. Para eso se han diseado inhibidores de la hexoquinasa, como la 2 desoxiglucosa, la lodinamina y el 3 bromopiruvato. Una cosa adicional es que con ese tipo de molculas no solo se inhibe la gluclisis, sino que tambin se inhibe la ruta de las pentosas fosfato y entonces no se pueden sintetizar los nucletidos de RNA y de DNA. No se aumenta el tamao del tumor. Fermentacin Alcohlica

Pasteur, la estudio a finales del siglo XIX. Este proceso tiene lugar en microorganismo y no en el hombre, porque no tenemos pirvuato descarboxilasa. A partir del piruvato, lo que se hace es descarboxilar, perder un carbono, como CO2 en la que viene la piruvato descarboxilasa. En este tipo de fermentacin, el balance energtico es que: Glucosa + 2ADP +2Pi 2etanol +2CO2 +2ATP 2H2O

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METABOLISMO AEROBIO (EXAMEN)

Piruvato deshidrogenasa

Desde finales del siglo XIX se conoca que si se tena bacterias que estaban haciendo la gluclisis anaerobia y se aada O2, se disminuye bruscamente la velocidad de la gluclisis. Este es el Efecto Pasteur. Esto ocurre porque en la gluclisis anaerobia se estn formando 2 ATP por cada molcula de glucosa, mientras que en la aerobia, esas cifras se multiplican por 15. El rendimiento de ATP es mucho ms elevado, por lo que no necesita realizar tanta gluclisis, para no gastar sus reservas de glucosa. Aumenta el cociente de concentraciones ATP/ADP. El ATP es un inhibidor de la fosfofructoquinasa I, produciendo una disminucin de la gluclisis. Esta gluclisis tiene el inconveniente de que hemos llegado a piruvato en el citosol. Por lo tanto, ste pasa a AcetilCoA en un proceso de descarboxilacin. Este proceso tiene lugar en la mitocondria. Tiene que entrar piruvato en la mitocondri y para ello, simplemente se realiza mediante un transportador de protones, que los saca a favor de gradiente. As se obtiene piruvato en la mitocondria, que sufre la accin del complejo piruvato deshidrogenasa. Complejo piruvato deshidrogenasa. Se ha estudiado en distintos organismo llegndose a la conclusin de que en el hombre y otros mamferos tienen un peso molecular de 7 a 8 millones de Dalton. Est formado por tres tipos de enzimas diferentes:

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Piruvato deshidrogenasa (E1): ms o menos 20 cadenas Dihidrolipoil transacetilasa (E2) ms o menos 60 cadenas Dihidrolipoil deshidrogenasa (E3): ms o menos 5 o 6 cadenas

Este complejo, adems de tener estos tipos de enzimas, tiene 5 tipos de coenzimas que participan: Pirofosfato de tiamina Acido lipoico Coenzima A (grupo sulfidrilo terminal) NAD FAD

La reaccin que cataliza el complejo piruvato deshidrogenasa es el que una molcula de piruvato de lugar a la prdida de un CO2 con la entrada de una molcula de CoASH, con la formacin de Acetil Coencima A. Va a intervenir NAD+ que va a pasar a NADH +H+. Es un proceso de descarboxilacion oxidativa, porque se pierde un CO2 y se oxida la molcula. Una molcula de piruvato se va a descarboxilar por la intervencin de la primera enzima (E1), que tiene como coenzima pirofosfato de tiamina y nos van a quedar dos carbonos de lo que era el piruvato. Este compuesto va a revertir la enzima libre con su pirofosfato de tianmina en una reaccin en la que interviene la E2, que tiene como coenzima cido lipoico. Esto va a interaccionar con el grupo de dos carbonos de antes, quedando la E2 unida a cido lipoico y el ciclo de 5 eslabones abierto (es decir, reducido). El paso siguiente va a ser que se pierda ese grupo acetilo mediante la intervecion de CoA, que tiene un grupo sulfidrilo como los del cido lipoico. Vamos a tener AcetilCoA y el resto de la molcula. Tenemos el cido dihidrolipoico. Ahora recuperamos la molcula que hemos dejado arriba. Se oxida el anillo, formando un enlace disulfuro mediante la participacin de la E3, que hace que intervenga FAD, que va a oxidar a estos, pasando a FADH2. Despus recuperamos FAD mediante NAD+ que pasa a NADH +H+. ste es el final del mecanismo de accin del complejo piruvato deshidrogenasa.

Regulacin de la piruvato deshidrogenasa

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A partir de piruvato se nos forma Acetil CoA a partir del complejo piruvato deshidrogenasa. sta pasa al complejo de krebs. El AcetilCoA puede provenir de la descarboxilacin oxidativa del piruvato, tambin de la -oxidacin de los cidos grasos (FFA), as como de los aa. Este AcetilCoA, inhibe la piruvato deshidrogenasa. Cuando hay un exceso de utilizacin de cidos grasos por esa va, se inhibe la actividad de la piruvato deshidrogenasa, por lo que inhibe a la glucolisis aerobia. Esto nos permite completar la regulacin de la piruvato deshidrogenasa. La PDH activa es la que est a la derecha, mientras que si se fosforila, se desactiva. La accin esta catalizada por una quinasa, que es regulable, la cual se activa por: AcetilCoA de cidos grasos, inhibiendo la actividad de la piruvato deshidrogenasa, dando sta con la forma inactiva. Tambin hace lo mismo ATP o el NADH (a altos niveles). Porque realmente la funcin de la glucolisis anaerobia es producir ATP y NADH. Esto en cuanto a regulacin de molculas diversas En cuanto a regulacin hormonal: Insulina: en el tejido adiposo Adrenalina: msculo cardaco

El beriberi es una enfermedad en la que hay deficiencia de tiamina, una vitamina hidrosoluble, que en forma de pirofosftato interviene en diversas reacciones. Si existe deficiencia de esta coenzima la gluclisis aerobia del organismo del enfermo es deficiente. El cerebro depende de esta gluclisis aerobia, por lo tanto, en el beriberi, la debilidad y las afecciones neurolgicas pueden resultar mortales (afecciones como la polineutis progresiva). 48

TEMA 18: CICLO DEL CIDO CTRICO, DE TRICARBOXLICOS O CICLO DE KREBS.

LOS CIDOS

Todos ellos se refieren a una ruta metablica cerrada, por lo tanto, que tiene 8 reacciones enzimticas y que comienza con Acetil-CoA, que procede de la gluclisis aerobia, la oxidacin de los cidos grasos o de los aminocidos. Contina siendo una oxidacin completa de CO2 y agua, permitiendo la produccin de molculas muy ricas energticamente con potencial energtico (FAD, FADH2, GTP), que sirven como punto final para la produccin de ATP en grandes cantidades. Se forma, este por lo tanto en grandes cantidades. Se forma adems con alto rendimiento porque tiene lugar en la matriz mitocondrial, sin necesidad de lanzaderas que transporten el NADH perdiendo potencial en ello. Esta ruta metablica no solo es catablica (vamos a molculas simples, CO2 y H2O), pero tambin es una ruta anablica, porque algunos de sus intermediarios se pueden desviar hacia reacciones de sntesis de otras molculas (succinil CoA). Es por lo tanto una ruta anfiblica, ya que conlleva ambos procesos. El problema que tiene utilizar molculas del ciclo de krebs para la sntesis de otros compuestos, es que quitamos elementos del ciclo de krebs y por lo tanto habr que volver a aportar cantidades suficientes de esos intermediarios. Esto se realiza mediante las reacciones anaplerticas (o de relleno). Esta ruta, desde el punto de vista histrico, se puede situar a finales del primer tercio del siglo XX, cuando investigadores como el hngaro Gyorgy, Knoop y Mortnius, haban descrito ya las reacciones, los interemediarios, pero no saban cmo enlazarlo. Fue Hans Krebs, en 1935, el que propusiera un modelo cclico, para la que la ruta diese CO2 y H2O. Mando publicar su trabajo y se lo rechazaron, ya que afirmaba que era una ruta cerrada. Lo mando publicar a otra revisa de peor nivel, donde si se lo admitieron. Krebs, estudio estas reacciones en el msculo de ala de pichn, ya que era un tejido muy aerobio. Lo propuso como va de oxidacin del piruvato del animal este, pero no fue capaz de proponer a la AcetilCoA. En 1951, Lipman, propuso la reaccin de la PDH (complejo piruvato deshidrogenasa). Se localiza en las mitocondrias de clulas eucariticas y en el citosol de las bacterias. Es mediante este complejo de enzimas, por el cual el piruvato procedente de la glucosa y otros azcares a travs de la gluclisis, se oxida para dar lugar a Acetil-CoA y CO2. A ambos les dieron el premio nobel en 1953. Las enzimas del ciclo de krebs estn en ntimo contacto con los componentes de la cadena respiratoria y de la fosforilacin oxidativa, estn en sus proximidades, lo que implica que se aproveche el potencial reductor que se forma en el ciclo de krebs. 49

Las reacciones del ciclo de krebs suponen que la AcetilCoa inicie el ciclo junto con una molcula de oxalacetato, que da lugar a una molcula que ya es un cido tricarboxlico: el citrato. Este da lugar a un intermediario muy fugaz, que dura muy poco tiempo, que es el cisaconitato. Este a su vez, da lugar a isocitrato. Este ltimo, forma una molcula de -cetoglutarato, en una reaccin en la que se pierde CO2 (descarboxilacin) y por lo tanto se forma energa (NADH). El -cetoglutarato sufre otra reaccin de descarboxilacin y tambin se produce energa en forma de NADH, dando lugar a una molcula denominada succinil-CoA, porque se incorpora una molcula de CoA. Esta da lugar a succinato, en una reaccin en la que se pierden la CoA-SH y se genera energa (GTP directamente). Este por oxidacin va a pasar a fumarato, reaccin en la que se genera energa (FADH2). El fumarato, a continuacin, da lugar a malato y por ltimo el malato da lugar a una molcula de oxalacetato, en cuya reaccin se produce tambin energa (NADH). Por cada molcula de AcetilCoA se produce: 3NADH: 7,5 ATP 1FADH2: 1,5 GTP: 1

Se nos forman 10 ATP por cada molcula de AcetilCoA, que se lleva al ciclo de krebs.

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REACCIONES

1. Formacin del citrato. La primera reaccin es la condensacin de Acetil CoA con oxalacetato (cido dicarboxlico con un grupo cetnico en posicin 2 donde se incorpora la Acetil CoA). Donde tenamos un grupo cetnico nos queda un grupo hidroxilo, dando lugar al citrato. En esta reaccin se nos separa CoA-SH. Esta reaccin est catalizada por una citrato sintasa. Es una reaccin unidireccional y fuertemente exergnica (AG<0). Esta molcula de citrato se observa que es simtrica. En una vuelta al ciclo de Krebs, se pierden dos molculas de CO2, y ninguna procede de la Acetil CoA que se acaba de incorporar al ciclo, sino que procede de los grupos carboxilos (coo-) del citrato. Hay un paso intermedio, que es el citril CoA, que se forma en el sitio activo de la enzima y se hidroliza rpidamente a CoA y citrato libres, que a continuacin abandonan en sitio activo. Este paso no es duradero. En este paso del citril-CoA, se induce la hidrlisis del tioster con la liberacin de CoA-SH (nombrado anteriormente).

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La citrato sintasa es la enzima limitante. Desde el punto de vista estructural es un dmero y con un peso molcular de 88kDa, que es inhibida por el citrato propiamente con fluroacetil CoA, que es un componente importante de muchos raticidas. Este se incorpora, solo que un hidrgeno en el primer carbono por arriba, es un fluor. De esta manera se acaba cortando el ciclo.

2. Formacin de isocitrato va cis-aconitato. El paso siguiente es la isomerizacin del citrato, es decir, el cambio de posicin del grupo hidroxilo que tenemos en el carbono tres (OH), que va a pasar al carbono 2, dado que se conservan los dos carbonos de arriba para expulsar CO2. Esto ocurre mediante dos pasos: o Deshidratacin: se forma un doble enlace, y el compuesto cis-aconitato, perdiendo una molcula de agua. Esta reaccin esta catalizada por la aconitasa (aconitato hidratasa). o Hidratacin: la aconitasa es la que cataliza la incorporacin de una molcula de agua para dar lugar a la presencia de un grupo hidroxilo, pero en este caso, en la posicin 2, es decir en el doble enlace del cis-aconitato, que esta unido a la enzima mediante dos vas diferentes en las que una conduce al citrato y la otra al isocitrato (ismero posicional del citrato). Esta aconitasa, es una enzima que contiene hierro y por tanto un centro ferrosulfurado. Para actuar necesita un tripptido (glutatin), que participa en reacciones de oxidacin-reduccin. Esta reaccin es endergnica, y es arrastrada por el propio ciclo.

3. Oxidacin del isocitrato a -cetoglutarato y CO2. El tercer paso es la descarboxilacin oxidativa en la que se va a perder una molcula de CO2 en la posicin central, en una reaccin en la que participa NAD. Esta catalizada por la isocitrato deshidrogenasa, 52

dando un compuesto con un carbono menos, denominado -cetoglutarato. Es una reaccin exergnica, por lo que tiene lugar sin problema. La enzima es un tetrmero (4 cadenas), cuando est unida a ADP y es solo un dmero si est unida a ATP. Una de las coenzimas que participa, al ser similar es el pirofosfato de tiamina. (En el beriberi, al haber deficiencia de este hay una deficiencia en la -glutarato DH y con ello en todo el ciclo de Krebs).

4. Oxidacin del -cetoglutarato a succinil-CoA y CO2. El siguiente paso es la otra descarboxilacin oxidativa por la que el -cetoglutarato se convierte en succinil-CoA y CO2 por accin del complejo de la -cetoglutarato deshidrogenasa. El NAD + acta como receptor de electrones y el CoA es el transportador del grupo succinilo.

5. Conversin de succinil-CoA en succinato. Tiene lugar una fosforilacin a nivel de sustrato. El paso siguiente va a ser la prdida de CoA-SH, en una reaccin en la que, dado que la unin de la CoA es de alta energa (enlace tioster), nos va a servir para formar a partir de GDP, GTP, aprovechando la energa libre de hidrlisis de esta CoA. Esta reaccin esta catalizada por la succinilCoA sintetasa. (Cuando interviene un nucletido se habla de sintetasas, si no interviene, es de sintasas). Tenemos entonces, una molcula se succinato. Este GTP va a dar lugar a la formacin de ATP a partir de ADP, mediante hidrlisis, con una nuclesido difosfoquinasa. El GDP se utiliza para renovar la enzima succinil-CoA y el Pi para que se forme el CoA.

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6. Oxidacin del succinato a fumarato. Se da a su vez una deshidrogenacin. El paso siguiente es que ese succinato se oxide, de manera que se forme un doble enlace en esa posicin, en la reaccin de la succinato deshidrogenasa que habamos visto en la cadena respiratoria. En este caso, esta utiliza FAD como coenzima, que pasa a FADH2, con los dos H que estamos quitando de esas posiciones. Se est formando el doble enlace, a distinto lado, por lo tanto un compuesto trans. Esto es la molcula de fumarato. Si ponemos el compuesto cis, es el maleato, que no se da. Esta enzima succinato es un dmero, con un peso molecular de 100 kDa, con las dos subunidades de 70 y 30 kDa.

7. Hidratacin del fumarato a malato. El siguiente paso, es que este fumarato se hidrate en una reaccin que tambin es reversible, de manera que se nos va a formar un grupo hidroxilo, en la molcula de L-malato, que tambin puede ser D, ya que es asimtrico el carbono, pero este ltimo no se da. Con una enzima que es la fumarasa, que es una enzima que tiene cuatro cadenas, por lo que es un tetrmero y que tiene un peso molecular de 200 kDa, solo acta sobre el fumarato y no sobre el maleato que se podra formar, por lo que es estereoespecfica y adems sobre el L malato, en concreto obre el doble enlace trans del fumarato.

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8. Oxidacin del malato a oxalacetato. A su vez se da una deshidrogenacin. Ahora el L-malato, se oxida por la posicin 2, el hidroxilo, a grupo cetnico, dando lugar a oxalacetato, que es con el que se comienza el ciclo, en una reaccin catalizada por una deshidrogenasa, interviniendo NAD, que pasa a NADH y un H+, y catalizada por la L-malato deshidrogenasa. Esta enzima tiene descritas 6 formas isoenzimticas, que realizan la misma reaccin.

El equilibrio de esta reaccin se encuentra muy desplazado hacia la izquierda en condiciones termodinmicas estndar, pero en clulas intactas el oxalacetato es eliminado continuamente por la reaccin altamente exergnica de la citrato sintasa (etapa1). Esto mantiene la concentracin intracelular del oxalacetato extremadamente baja, lo que empuja la reaccin de la malato DH hacia la formacin de oxalacetato. El rendimiento del ciclo es: Se dan 3 molculas de NADH: 3*2.5=7,5ATP 1 de FADH2: 1,5 ATP 1 molcula de GTP: 1 ATP

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Por lo tanto en total se dan 10 molculas de ATP por vuelta.

BALANCE ENERGTICO GLUCOLISIS AEROBIA Y CICLO DE KREBS

Glucosa a 2 piruvato: 2ATP y 2NADH que equivalen a 5 ATP o a 3ATP (segn la lanzadera que utilicemos). 2 Piruvato a 2 Acetil-CoA: se producen 2NADH: lo que equivale a 5ATP (mitocondria) 2actilCoA: dan 2*10= 20ATP

En total 32 ATP 30 segn la lanzadera que utilicemos por molcula de glucosa. Es una manera mucho ms rica que la glucolisis anaerobia, por eso esta frena la velocidad de glucolisis.

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Se puede resumir la gluclisis aerobia como que una molcula de glucosa, va a dar lugar a 6 CO2, oxidndose y a su vez formar 6 molculas agua, en una reaccin que tiene una variacin de energa libre estndar de -686Kcal/mol. En este proceso, por lo tanto hay un fuerte desprendimiento de energa, que se aprovecha para producir los ATP de arriba: ((32*7.3)/686)*100=30% somos capaces de aprovechar para producir ATP (1/3) REGULACIN DEL CIDO CTRICO

El flujo de tomos de carbono desde el piruvato hacia el ciclo del cido ctrico y a travs de l est sujeto a una estrecha regulacin a dos niveles: la conversin del piruvato en Acetil-CoA, el material de partida del ciclo y la entrada del Acetil-CoA en el ciclo. La produccin del AcetilCoA est regulada por mecanismos alostricos y covalentes: Alostricos: La inhibicin alostrica de la oxidacin del piruvato se incrementa enormemente cuando se hallan disponibles cidos grasos de cadena larga. Asimismo AMP, CoA y NAD +, que se acumulan cuando fluye demasiado poco Acetil-CoA hacia el ciclo del cido ctrico, activan alostricamente el complejo de la PDH. La actividad es activada cuando las demandas energticas son grandes y las clulas necesitan un flujo mayor de Acetil-CoA hacia el ciclo. Y es anulada cuando se dispone gran cantidad de combustible en forma de cidos grasos de cadena larga y de Acetil-CoA adems de: Regulacin por NADH: el cociente de concentraciones de NADH/NAD+, inhibe las reacciones de las deshidrogenasas por altos niveles de NADH. ATP: el cociente de concentraciones de ATP/ADP. Un exceso de ATP se comporta como un inhibidor del ciclo de Krebs, actuando sobre la isocitrato DH. Por otra parte el ADP 57

estimula. Esto ocurre porque el complejo PDH depende de una protena quinasa que se activa alostricamente por ATP. La quinasa inactiva el complejo por fosforilacin. De manera contraria, unos niveles bajos de ATP activan el complejo PDH. Covalentes: la modificacin covalente de protenas es una regulacin que complementa a la anterior. El complejo de la PDH es inhibido mediante la fosforilacin reversible de un residuo Ser especfico. En una de las dos subunidades de E1. Adems hay tres factores que gobiernan la velocidad de flujo a travs del ciclo: la disponibilidad de sustrato, la inhibicin por los productos acumulados y la retroinhibicin alostrica de los enzimas que catalizan etapas tempranas del ciclo. EL ciclo est regulado en sus tres etapas altamente exergnicas, que son las catalizadas por la citrato ciclasa, la isocitrato deshidrogenasa y la -cetoglutarato deshidrogenasa. La disponibilidad de los sustratos para la citrato sintasa (Acetil-CoA y oxalacetato) vara con el estado metablico de la clula y limita en ocasiones la velocidad de formacin del citrato. El NADH, un producto de la oxidacin del isocitrato y el -cetoglutararto, se acumula bajo ciertas condiciones, y a elevada [NADH]/[NAD+] ambas reacciones de deshidrogenacin resultan gravemente inhibidas por la accin de masas. En el interior de la clula, la reaccin de la malato deshidrogenasa est esencialmente en equilibrio, es decir, que est limitada por el sustrato, y cuando [NADH]/[NAD+] es alta, la concentracin de oxalacetato es baja, lo que enlentece el primer paso del ciclo. La acumulacin de productos inhibe los tres pasos limitantes del ciclo: el succinil-CoA inhibe la -cetoglutararto deshidrogenasa (y tambin la citrato sintasa); el citrato bloquea la citrato sintasa, y el producto final, ATP, inhibe tanto la citrato sintasa, como la isocitrato deshidrogenasa. La inhibicin de la citrato sintasa por parte del ATP es mitigada por el ADP, un activador alostrico de este enzima.

Los componentes del cido ctrico son importantes interm ediarios biosintticos.

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Es una ruta anfiblica, lo que quiere decir que sirve tanto para procesos anablicos como catablicos (sintetiza y degrada compuestos). Las flechas azules indican la formacin de otros compuestos en el ciclo de Krebs que salen. -cetoglutarato y oxalacetato: sirven como precursores de los aminocidos aspartato y glutamato, sintetizando a partir de sus carbonos esos aminocidos as como para sintetizar los nucletidos de purina y pirimidina. Succinil-CoA: es un intermediario central de la sntesis del anillo de porfirina de los grupos hemo que actan como transportadores de oxgeno y de electrones. Oxalacetato: gluconeognesis.

Las rutas de sntesis llevan al gasto de intermediaros del ciclo de Krebs y por lo tanto a que no funcionase el ciclo del cido ctrico. Ha de haber unos niveles suficientes para que esto siga en marcha. El organismo repone los niveles de intermediarios que tiendan a agotarse. Las vas de reposicin de intermediarios del ciclo de Krebs son las vas de relleno o vas anaplerticas (flechas rojas). REACCIONES ANAPLERTICAS

Todas ellas convierten piruvato o fosfoenolpiruvato a oxalacetato o malato en diversos tejidos y organismos. La ms importante es la primera reaccin. Cuando el ciclo del cido ctrico carece de oxalacetato o de algn otro intermediario, se carboxila piruvato para producir ms oxalacetato. Esta reaccin requiere energa que es aportada por el ATP. La enzima piruvato carboxilasa, que cataliza esta reaccin, es una enzima reguladora y se encuentra prcticamente inactiva en ausencia de Acetil-CoA. En cambio, cuando ste est en exceso, se permite que el ciclo utilice ms Acetil-CoA en la reaccin de la citrato sintasa. Tiene lugar en rganos gluconeognicos (rin e hgado). Suponiendo que el ciclo tiene una parte defectuosa (que tiene unos niveles muy bajos, por ejemplo de oxalacetato), se le puede engaar para que introduzca derivados de la glucosa. Esto se lleva a cabo metiendo piruvato directamente a oxalacetato. 59

Otra reaccin que utiliza piruvato, que tambin es de carboxilacin: Piruvato +HCO3- +NAD(P)H ----- malato +NAD(P)+ Esta tiene lugar en eucariticos y bacterias. Interviene la malato DH, que es una manera de intercambiar NADPH y NADH, porque luego en el ciclo de Krebs se utiliza NADH. La segunda reaccin de la imagen trata del fosfoenolpiruvato, que se puede carboxilar directamente en una reaccin en la que se nos forma oxalacetato. Esta tiene lugar sobre todo en musculo cardiaco y esqueltico. Est reaccin se lleva a cabo mediante la enzima PEP carboxilasa que es activada por el intermediario glucoltico fructosa 1,6-bisfosfato.

CICLO DE GLIOXILATO

En el ciclo de Krebs el oxalacetato da lugar a citrato, este a cis-aconitato, este a isocitrato, este a su vez a -cetoglutarato, que da lugar a succinato. ste forma succinil CoA, el cual da succinato. El succinato origina fumarato y por ultimo ste a malato. Que vuelve finalmente al oxalacetato. El ciclo del glioxilato sirve como mecanismo para convertir acetato en glcido: Supone un atajo, de manera que desde el isocitrato, que proviene del citrato anteriormente formado por la condensacin de la Acetil-CoA con oxalacetato. Mediante la rotura de isocitrato vamos a ir a succinato y a otra molcula que es el glioxilato por la isocitrato liasa. El glioxilato se condensa con una segunda molcula de acetil-CoA, que viene de cidos grasos libres, al igual que la primera que tenamos, para dar, mediante la malato sintasa, malato.

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Esto solo ocurre en los organismos en los que tiene lugar este ciclo, que es en las plantas, ciertos invertebrados y muchos microorganismos. Los vertebrados no porseen las enzimas especficas del ciclo del glioxilato (isocitrato y malato sintasa) y, por lo tanto, no pueden producir sntesis neta de glucosa a partir de lpidos. Posteriormente el malato comienza a oxidarse a oxalacetato, el cual puede volver a condensarse con otra molcula de Acetil-CoA para empezar otra vez otra vuelta del ciclo. Es una versin abreviada del ciclo del cido ctrico, porque solo tiene una serie de reacciones, y sirve para utilizar la Acetil-CoA, producto de la oxidacin de los cidos grasos. REACCIONES DE ESTE CICLO El isocitrato, que tiene la estructura de un cido tricarboxlico, sufre la accin que va a romper el ltimo enlace por abajo, que ocurre por la enzima isocitrato liasa, formndose la molcula de glioxilato a partir de la molcula de abajo. La parte de arriba va a dar a la molcula de succinato, que es un intermediaro del ciclo de Krebs. Por otra parte, el glioxilato, se va a unir a una molcula de Acetil-CoA, para dar lugar a un compuesto de 4 carbonos, que es el L-malato, a partir de una enzima que es la malato sintasa. La parte de arriba de la molcula viene de la Acetil-CoA. En esta reaccin se pierde la CoA. Este ciclo se lleva a cabo en los glioxisomas: Hay asociaciones triples de gotas lipidias, glioxisomas y de mitocondrias, de manera que el succinato que se produce en el glioxisoma, pasa a la mitocondria, al ciclo de Krebs.

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TEMA 19. GLUCONEOGNESIS

Esta es aparentemente inversa a la gluclisis, aunque no es realmente as. Es una via encargada de convertir el piruvato y los compuestos relacionados de tres y cuatro carbonos, en glucosa. Es una ruta que tiene lugar en todos los animales, plantas, hongos y microorganismos. Estado postprandial: Estamos absorbiendo glucosa que llega al hgado y pasa a la sangre. De esta manera acaba pasando as a una situacin de hiperglucemia. Esto no es as realmente, ya que se almacena la glucosa como glucgeno en el hgado. Ayunas: Bajan los niveles de glucosa en sangre, producindose una situacin de hipoglucemia. En esta situacin, se empieza a gastar el glucgeno heptico (10h ya se ha gastado). El heptico es para todo el organismo, y el muscular solo para el propio msculo. En este momento tienen que entrar en marcha otros mecanismos, denominados gluconeognicos (sntesis de nueva glucosa). De ello se encargan el hgado (80%) y la corteza renal (20%). Pero en varios das de ayuno, la corteza renal es capaz de hacer incluso hasta el 50%.

Esta gluconeognesis se hace a partir de varias molculas de gluconeognicas. Los precursores importantes de la glucosa en animales son compuestos de tres carbonos tales como el lactato, piruvato, el glicerol, aminocidos gluconeognicos (alanina funamentalmente) y cidos grasos. Son especialmente la lactato y la alanina. 62

Va a haber una fuerte relacin entre msculo e hgado, devolviendo el primero al hgado gran parte. El lactato producido por la gluclisis anaerbica del msculo, tras un ejercicio intenso, vuelve al hgado y se convierte en glucosa, que vuele de nuevo al msculo y se convierte en glucgeno en un circuito denominado Ciclo de Cori. Hay tejidos que sintetizan la glucosa y otros que la utilizan como principal fuente de energa. El hgado y la corteza renal lo sintetizan y otros lo necesitan como el cerebro, testculos, eritrocitos y msculo, entre otros. Por lo que hay rganos gluconeognicos por excelencia y otros glucolticos, es decir dependientes.

La gluconeognesis, es la ruta que va en direccin contraria a la glucolisis, pero que no coinciden todas sus etapas con ella. Muchas de las enzimas son bidireccionales y por lo tanto catalizan los pasos correspondientes de la gluconeognesis. 7 de las 10 reacciones enzimticas de la gluconeognesis son la inversa de las reacciones glucolticas.

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Haciendo un breve resumen: vemos que piruvato, en la mitocondria (que entr por un cotransporte con protones), va a dar lugar a fosfoenolpiruvato en el citosol, donde van a tener lugar una serie de reacciones hasta que lleguemos a fructosa 1,6 bisP, que nos permitir llegar finalmente a la glucosa.

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El piruvato que va a alimentar a gluconeognesis, viene sobretodo del lactato, que lo forma fuera de la mitocondria. Por otra parte este fosfoenolpiruvato, va a poder ser proporcionado por el ciclo de Krebs, en una de las reacciones de sntesis. ste a su vez, va a poder proceder de diversos aminocidos y de cidos grasos (propionato), que se produce en la degradacin de cidos grasos de n impar de carbonos. Se realiza inicialmente en la mitocondrias, pero luego las reacciones tienen lugar en el citoplasma, excepto la ltima, que es especfica del hgado y de la corteza renal, que tiene lugar en el Retculo endoplasmtico.

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REACCIONES
En primer lugar se transporta el piruvato desde el citosol a la mitocondria o se genera dentro de sta a partir de la alanina por transaminacin. Empieza la reaccin en piruvato, que da por carboxilacin a oxalacetato, con la piruvato carboxilasa que requiere la coenzima biotina.

El oxalacetato, puede, como alternativa menor, estando en la mitocondria, salir de la mitocondria al citosol, mediante un transportador de aminocidos cidos, donde interviene el oxalacetato y el glutamato (en el tema de lanzaderas). Esta alternativa tiene cierta importancia y para ello tiene que pasar necesariamente primero a una molcula de aspartato, que es verdaderamente la que atraviesa la membrana mitocondrial, que da lugar a oxalacetato ya fuera. En esta reaccin interviene una transaminasa, en ambos cambios. Este oxalacetato, sigue fuera la misma ruta. El oxalacetato, al no haber un transportador en la membrana mitocondrial, antes de ser exportado al citosol, debe ser reducido a malato, con la malato deshidrogenasa a expensas de NADH. Oxalacetato + NADH + H+ L-malato + NAD+

ste puede salir con un transportador, fuera de la mitocondria. Este malato vuelve a dar oxalacetato, que directamente no sale. Esto ocurre con la malato dehidrogenasa citoslica (la otra era mitocondrial).

Este oxalacetato da lugar a fosfoenol piruvato (reaccin inversa ms arriba), por descarboxilacin (prdida de CO2, por lo que requiere energa que obtiene del GTP, dando GDP.).Este conjunto de reacciones equivale a un paso que tiene lugar en la glucolisis.

La reaccin es reversible en las condiciones intracelulares; la formacin de un compuesto fosfato de alta energa (PEP) se compensa con la hidrlisis de otro (GTP).

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Esta ruta, por lo tanto, necesita enrga.

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REGULACION DE LA GLUCONEOGNESIS

El tipo de regulacin es de dos tipos: a nivel de la actividad de las enzimas a nivel de actividad de las enzimas.

El tipo de regulacin es contraria a la glucolisis. Diversos efectores que activaban, inhiben ahora y al revs.

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En la gluclisis el punto central de regulacin era la fosfofructoquinasa 1 y en la gluconeognesis, se inhibira la fructosa bisfosfatasa (segundo paso)

El ATP inhiba la gluclisis y en este caso estimula. El glucagn es un inhibidor de la gluclisis y estimula la gluconeognesis, es decir la formacin de glucosa. A nivel de la cantidad: Glucagn: induce la sntesis de las enzimas gluconeognicas (en ayuno). A su vez va a reprimir la sntesis de las enzimas glucolticas 69

Cortisol: tiene el mismo efecto de que el glucagn Insulina. En la etapa de despus de la comida, induce la sntesis de enzima glucolticas e inhibe las de las gluconeognicas

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PRECURSORES DE LA GLUCONEOGNESIS

Se nos puede formar glucosa a partir, sobre todo, de : Lactato, que es el precursor esencial de la gluconeognesis. Aminocidos (alanina, asprtico, glutmico y de glutamina), pero en especial de la alanina, ya que es el aminocido derivado del piruvato y este es un precursor de glucosa. Glicerol de triacilglicridos, derivado de la glicolisis. Un triacilglicrido va a dar lugar a tres molculas cido graso y a glicerol. Es un buen precursor de la glucosa, a costa de ir desde el tejido adiposo hasta el hgado, a travs de la sangre. Ah, este glicerol, va a poder ser utilizado para formar glucosa. Pasando a glicerofosfato y este a fosfodihidroxiacetona, que dar lugar a glucosa. 71

Propionato (cido propionico) de la degradacin de los cidos grasos libres, de la -oxidacin, de cadena impar. Oxalacetato: es un intermediario del ciclo de Krebs. El asprtico es su aminocido. Es un intermediaro por lo tanto en la sntesis de glucosa

Lactato: es el ms importante

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A partir de glucosa en msculo, se va a producir piruvato, que acabara dando lactato. Este lactato, puede pasar a la sangre y llegar al hgado, para ser reutilizado mediante la gluconeognesis. All dar piruvato, que finalmente dar glucosa, porque el hgado es capaz de formar glucosa. Esta glucosa va a salir a la sangre y va a pasar a los tejidos que la necesitan. Este clico se denomina, ciclo de cori o ciclo del lactato:

En el musculo, el piruvato, que es el -cetocido de la alanina, captando un grupo amino, da alanina y el -cetocido correspondiente. Esta alanina pasa a la sangre y puede pasar igualmente al hgado. All dar lugar a piruvato por transaminacin, liberando as el correspondiente grupo amino (por ejemplo por transaminacin con un -cetocido). Este grupo amino puede terminar siendo usado por el ciclo de la urea, de manera que esta es la forma natural de eliminar la urea por la orina. A su vez, esta alanina dar lugar a glucosa que de nuevo pasara a la sangre. Esto se denomina, ciclo de la alanina.

stas son dos maneras de recuperara metabolitos del msculo.

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La parte de los aminocidos que aprovechamos son los carbonos, para formar glucosa. Entonces, este esqueleto carbonado, puede dar glucosa en su totalidad (aminocidos glucognicos), para formar cuerpos cetnicos (aminocidos cetognicos) o para las dos cosas (aminocidos mixtos). Los cetognicos son dos: leucina y lisina)

Los cidos grasos libres sirven tambin para sintetizar glucosa, de manera que el propionato de cidos grasos, se carboxila por un paso intermedio de propionil-CoA, hasta succinil CoA, pudiendo perder esta la CoA, dando succinato, y por lo tanto ya estamos en el ciclo de Krebs y salimos por oxalacetato hasta glucosa.

EL ETANOL INHIBE LA GLUCONEOGNESIS

Se utiliza principalmente en el hgado, mediante la enzima alcohol deshidrogenasa heptica. Esta enzima utiliza NAD pasndolo a NADH + H+, en una reaccin de oxidacin. Este NADH se pude utilizar para pasar, por ejemplo, piruvato a lactato, recudindolo, mediante la lactato desdhidrogenasa. Es un paso en el que se nos va a formar NAD. El NADH, se puede utilizar tambin en el paso de oxalacetato a malato, del ciclo de Krebs, gastndose, y formando NAD, por la enzima malato deshidrogenasa. En ambos casos, gastamos NADH, pero tambin piruvato y oxalacetato, que son los precursores de la gluconeognesis, por lo tanto, inhibimos la formacin de glucosa. Por eso, se les da a las personas con hipoglucemia.

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Neonatos: los recin nacidos, tiene una cetognesis muy reducida, muy limitada, forman pocos cuerpos cetnicos, porque no se ha desarrollado bien el transporte de cidos grasos a las mitocondrias, ya que su sntesis tiene lugar en el hgado y han de ser transportados. Los cuerpos cetnicos son escasos. El neonato por lo tanto tira mucho del recurso de glucosa y para ello realiza la glucogenolisis y gluconeognesis. El prematuro tiene muy poco glucgeno, por lo que depende de la gluconeognesis. En ambos casos, la gluconeognesis, no se desarrolla a velocidades importantes, por lo que provoca hipoglucemia.

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