Quim. Nova, Vol. 27, No.

3, 503-507, 2004

Maria Edite Pinto Gonalves* e Maria Filomena Cames Faculdade de Cincias, Universidade de Lisboa Centro de Electroqumica e Cintica da Universidade de Lisboa /Departamento de Qumica e Bioqumica, Edifcio C8, 3 piso, Campo Grande 1749-016 Lisboa - Portugal Joo Miguel Paiva, Maria Joo Benoliel e Rui Neves Carneiro Empresa Portuguesa das guas Livres, Rua do Alviela,12 Calada dos Barbadinhos, 1170-012 Lisboa - Portugal Recebido em 19/5/03; aceito em 5/8/03

VALIDATION OF SIMULTANEOUS DETERMINATION OF BROMIDES AND BROMATES BY ION CHROMATOGRAPHY IN DRINKING WATER. European Directive (98/83/CE), compulsory after 2008, states that bromate in drinking water must be controlled at levels below 10 mg L-1. Supporting implementation of the Directive, the European Comission has established project SMT4-CT96 2134, in collaboration with various european institutions, aiming at the identification of the interferents to the current analytical method (Ionic Chromatography with Conductimetric Detection IC/CD), their removal and the automation of pretreatment and injection steps, as well as the development of alternative methods. EPAL, responsible for the water supply to a great deal of Portuguese regions, has taken steps to meet these requirements. Although not part of such project, this work (the result of a project conducted under a protocol of collaboration between EPAL SA and FCUL Faculty of Sciences, University of Lisbon), reports on studies of usefulness to laboratories planning to monitor bromate in ozone treated waters, in conditions different from those described in EPA 300.1. Simultaneous determination of bromide is justified by its role as bromate precursor. Keywords: ion chromatography; ozone treatment; water analysis, bromide and bromate.

INTRODUO A etapa de desinfeco no processo de tratamento de gua , sem dvida, a mais importante quando se trata de gua destinada ao consumo humano. Ao longo de muitos anos, o agente de desinfeco utilizado foi o cloro, mais especificamente na forma de cido hipocloroso (HOCl), substncia altamente txica, cujos efeitos residuais, e a formao de subprodutos txicos, alguns dos quais cancergenos, tm enfatizado a necessidade de se considerar mtodos alternativos de desinfeco, como o caso da ozonizao. Na ozonizao, o agente desinfetante o gs oznio (O3) que, por sua vez, tambm origina subprodutos txicos, de entre os quais os ons bromato (BrO3-) que tm origem na oxidao dos ons brometo (Br-) presentes de forma natural nas guas a serem tratadas. Existem vrios mecanismos documentados na literatura, que procuram demonstrar a forma com que os ons brometo so oxidados a ons bromato pela ao do oznio. Segundo von Gunten e Hoign1, em estudos mecansticos realizados em amostras de guas simuladas, no naturais, demonstraram que na presena de um captador orgnico para os radicais OH, a formao do bromato pode ser predita com exatido atravs de uma oxidao direta, mesmo em guas contendo amnia: Br- + O3 + H2O HOBr + O2 + OHHOBr + H2O H3O+ + OBrOBr- + O3 Br- + 2 O2 OBr- + 2 O3 BrO3 - + 2 O2 HOBr + O3 reao muito lenta !

*e-mail: megoncalves@fc.ul.pt # As opinies expressas so da inteira e exclusiva responsabilidade dos autores, no configurando a posio oficial da EPAL, S.A. sobre a matria.

Na ausncia destes captadores, as reaes radicalares do OH contribuem significativamente na formao dos bromatos por oxidao indireta. O on bromato pode, portanto, ser formado tanto pela ao direta do oznio molecular, quanto pela ao do radical hidroxilo sobre o on brometo. Estudos mais recentes por Westerhoff et al.2 realizados em amostras de guas naturais (contendo matria orgnica) e no naturais (livres de matria orgnica), concluram que a formao de bromato pelos mecanismos do oznio molecular e do radical OH pode variar de uma amostra para outra dependendo do pH e do carbono orgnico dissolvido. Em amostras de gua naturais contendo matria orgnica, a formao de bromato controlada pelo mecanismo do radical OH, enquanto em amostras de guas simuladas (no naturais) livres de carbono orgnico dissolvido, ambos os mecanismos so importantes numa proporo de 30% para o mecanismo do oznio molecular e 70% para o do radical OH. Provenientes da oxidao dos ons brometo (Br-) presentes nas guas a serem tratadas, os ons bromato (BrO3-) so os que mais preocupaes trazem Organizao Mundial de Sade (OMS)3 bem como a outras agncias reguladoras como a U.S. EPA (Agncia de Proteo Ambiental dos Estados Unidos)4 devido ao seu carcter cancergeno, mesmo a nveis de poucos g L-1. Dentro da Unio Europia (UE), a Diretiva Comunitria da gua5, (98/83/CE) de 3 de Novembro de 1998 (relativa qualidade da gua destinada ao consumo humano), reflete essa preocupao recomendando, de acordo tambm com a OMS e a U.S. EPA, que os nveis de ons bromato presentes estejam abaixo dos 10 g L-1. Os Estados membros tm um prazo de dez anos para se adequarem a este valor estabelecido. Entretanto, no perodo compreendido entre os cinco e os dez anos aps a entrada em vigor da diretiva, um valor paramtrico provisrio de 25 g L-1 vigorar, enquanto estudos de risco de sade mais aprofundados vo sendo realizados. Diante deste quadro, a necessidade de implementao, por parte

Nota Tcnica

VALIDAO DO MTODO DE DETERMINAO SIMULTNEA DOS ONS BROMETO E BROMATO POR CROMATOGRAFIA INICA EM GUAS DE CONSUMO HUMANO#

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dos rgos nacionais responsveis pela monitorizao da qualidade da gua nos pases membros da UE, de um mtodo analtico capaz de detectar e quantificar os ons bromato nestes nveis de concentrao, de extrema importncia, o que levou a EPAL (Empresa Portuguesa das guas Livres), entidade responsvel pela qualidade da gua consumida no territrio portugus, a implementar e validar um mtodo analtico capaz de detectar e quantificar os ons bromato a estes nveis de concentrao, e assim cumprir o estabelecido na Directiva Comunitria. Neste trabalho aqui descrito, foi estudada a determinao simultnea dos ons brometo e bromato atravs de Cromatografia Inica. Esta metodologia escolhida, ainda em fase de desenvolvimento tcnico e cientfico, aps pesquisa na literatura de mtodos analticos existentes adequados, foi submetida a um extenso estudo de validao, atravs de testes alusivos ao intervalo de trabalho, limites de deteco e quantificao, linearidade, sensibilidade e ensaios de recuperao. Com algumas adaptaes s condies existentes, o mtodo foi aplicado, e os resultados alcanados permitem EPAL cumprir as exigncias colocadas pela Diretiva Comunitria. O interesse na determinao simultnea dos ons brometo devido ao seu papel de precurssor na formao dos ons bromato como demonstrado anteriormente. PARTE EXPERIMENTAL Sistema cromatogrfico As anlises cromatogrficas foram realizadas num cromatgrafo modelo DX-120 (Dionex Sunnyvale, CA) equipado com bomba isocrtica. O volume de injeo da amostra era de 500 L, as colunas analticas incluam uma pr-coluna Dionex AG9-HC (50x4 mm), e uma coluna analtica Dionex AS9-HC (250x4 mm). Deteco obtida por um detector de condutividade clula CDM-3 Dionex com volume interno de 1,0 L. A condutividade do eluente foi suprimida atravs do supressor aninico Dionex ASRS II (4 mm) no modo de regenerao por auto-supresso, aplicando-se uma corrente ao supressor de 300 mA. A aquisio e tratamento de dados foi obtida atravs do software PeakNet 5.01 (Dionex). Reagentes e solues Todas as solues aquosas foram preparadas com gua deionizada, ultrapura tipo I, filtrada por membrana 0,22 m obtida com um sistema Milli-Q (Millipore, Bedford, MA, USA). O eluente Na2CO3 9,0 mM (Merck) foi purgado em ultrassons durante 15 min para remoo dos gases dissolvidos (principalmente CO2). As solues padro dos analitos, NaBr (Fluka Chemika) e NaBrO3 (SigmaAldrich-Chemie), foram preparadas atravs da diluio das solues padro-me de 1.000 mg L-1 (ppm). RESULTADOS E DISCUSSO Inicialmente o mtodo escolhido (U. S. EPA mtodo 300.1 Determinao de nions inorgnicos em gua para consumo humano por cromatografia inica)6 e adaptado s condies existentes, foi testado com relao aos seus limites de deteco. Os primeiros testes para a verificao da resposta analtica do cromatgrafo e da coluna analtica foram realizados com a soluo 9,0 mM de Na2CO3 como eluente com uma vazo de 1,25 mL min-1 e um volume de injeo de amostra de 200 L. Os resultados iniciais demonstraram que a sensibilidade do aparelho no atingia os nveis de concentrao desejados, principalmente com relao aos bromatos, cuja deteco era facilmente confundida

com o rudo da linha de base, alm de ser tambm prejudicada pela interferncia dos ons cloreto, cujo tempo de reteno bastante prximo ao dos ons bromato. Atravs da alterao do volume de amostra injetado de 200 L para 500 L, foi obtida uma melhora significativa na sensibilidade do aparelho, o que se refletiu no limite de deteco alcanado. A partir destes testes iniciais pode-se definir e estudar uma gama de trabalho, e proceder-se a construo das curvas de calibrao para os ons brometo e bromato em simultneo. Intervalo de trabalho Ao final de inmeras tentativas com vrios intervalos, cujos testes de homogeneidade de varincias se mostraram insatisfatrios, chegou-se ao estabelecimento dos intervalos, 50 a 500 g L-1 e 10 a 50 g L-1 para brometo e bromato, respectivamente, utilizando um volume de amostra de 200 L como recomenda a literatura6. Aps alguns testes decidiu-se alterar o volume de amostra para 500 L. Vale ressaltar tambm que, a fim de obtermos melhores resultados na determinao conjunta destes ons, a faixa de trabalho que satisfez os testes estatsticos em simultneo, foi aquela que se apresenta acima. A faixa de trabalho estabelecida para os brometos tambm satisfaz a zona de concentraes deste on que deve ser monitorizada, como demonstra um estudo7 que revelou durante experimentos de ozonizao em guas tratadas por coagulao e filtrao, que concentraes de brometo to baixas quanto os 50 g L-1 so suficientes para promover a formao de bromato. O mesmo estudo refere que concentraes de brometo entre os 100 e os 500 g L-1 produzem ons bromato em guas ozonizadas acima dos limites estabelecidos pela Diretiva Europia. Os intervalos de trabalho estabelecidos foram estudados em simultneo atravs da utilizao de cinco pontos de calibrao distribudos regularmente ao longo dos respectivos intervalos. Para o estudo da homogeneidade de varincias foram construdas curvas de calibrao atravs da injeo de padres mistos, num volume de 500 L, obtendo-se cromatogramas semelhantes aos que constam da Figura 1, onde os picos relativos aos bromatos so aqueles cujo tempo de reteno de aproximadamente 4,9 min, e os picos relativos aos brometos so aqueles cujo tempo de reteno de aproximadamente 8,6 min. Os picos cujo tempo de reteno de aproximadamente 5,4 min devem-se aos ons cloreto, um interferente importantssimo nas determinaes de bromato, uma vez que ambos os ons eluem da coluna analtica em tempos muito prximos.

Figura 1. Cromatogramas obtidos para os ons Brometo (tr 8,6 min) na gama de 0,05 a 0,50 mg L-1, e Bromato (tr 4,9 min) na gama de 0,01 a 0,05 mg L-1num volume de injeo de 500 L. A presena do interferente cloreto nota-se no tr 5,9 min

As curvas de calibrao obtidas para os ons brometo e bromato, a partir das reas sob os picos relativos s concentraes dos padres, apresentam-se respectivamente nas Figuras 2 e 3.

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Tabela 1. Resultado dos estudos de linearidade e homogeneidade Parmetros Homogeneidade de varincias Linearidade Coeficiente de correlao (R) Critrio PG < 5,35 PG < 15,98 (R) > 0,995 Brometo mdia 2,59 3,26 1,000 Bromato mdia 3,8 1,27 0,9999

Figura 2. Grfico da funo de calibrao dos brometos na gama de 0,05 a 0,50 mg L-1; estudo da linearidade

estabelecido para cada um dos ons, os resultados demonstram tambm que o modelo linear o que melhor se ajusta aos pontos obtidos, o que tambm se confirma atravs dos coeficientes de correlao (R) obtidos, muito prximos de 1,000. Limiares Analticos Limites de Deteco (LDM) e de Quantificao (LQM) Os limiares analticos foram calculados estatisticamente8,10 de acordo com as equaes (1) e (2), e os resultados obtidos encontram-se na Tabela 2. (1)

(2)
Figura 3. Grfico da funo de calibrao dos bromatos na gama de 10 a 50 g L-1; estudo da linearidade

A homogeneidade de varincias dos intervalos de trabalho foi testada de maneira independente durante trs dias, atravs do Teste de Fisher8 (onde o primeiro e o ltimo padro das curvas de calibrao para ambos os ons foram analisados em 10 rplicas independentes e suas varincias associadas, S12 e S52, foram calculadas a fim de verificar a existncia ou no de diferenas significativas entre elas). O valor teste PG obtido atravs da razo destas varincias comparado com o valor tabelado da distribuio F de Snedecor/Fisher (neste caso F(9;9;0,99) = 5,35). A linearidade foi testada atravs do Teste de Mandel8,9 (onde estimamos qual dos modelos linear ou no-linear proporciona o melhor ajuste dos pontos da curva de calibrao). O valor teste PG, comparado com o valor tabelado da distribuio F de Snedecor/ Fisher (neste caso F(4;4;0,99) = 15,98). Na Tabela 1, apresentam-se os resultados em termos numricos dos testes de linearidade e homogeneidade de varincias. De acordo com estes resultados, os valores obtidos para os testes de Fisher mostram que no h diferenas significativas entre as varincias dos padreslimites, ou seja, as varincias so homogneas e independentes da concentrao ao longo de todo o intervalo

onde o desvio padro residual da curva de calibrao e b o declive da mesma. Analisando os resultados que constam da Tabela 2 com relao ao brometo, nota-se que, de maneira geral, os limites de quantificao encontram-se ligeiramente acima da concentrao do primeiro padro, mas estes resultados so muito melhores do que os apresentados em intervalos estabelecidos em tentativas anteriores. O limite de deteco mdio obtido de 16,4 g L-1, est muito acima dos 0,98 g L-1 registrados na literatura para a metodologia escolhida6. O bromato, que na realidade o objeto de interesse deste estudo, apresenta de modo geral, resultados muito melhores em relao aos limites de deteco e quantificao do que os apresentados pelo brometo. De acordo com a Tabela 2, nota-se que o limite de quantificao mdio obtido para o bromato de 6,7 g L-1, encontrase abaixo da concentrao do primeiro padro que de 10 g L-1, portanto abaixo do valor paramtrico limite estabelecido na Diretiva. Com relao ao limite de deteco mdio obtido de 2,2 g L-1, extremamente satisfatrio considerando que o valor registrado na literatura de 1,32 g L-1. Sendo o objetivo principal deste trabalho alcanar um nvel de deteco dos ons bromato em concentraes bastante baixas a fim de se poder detectar a sua presena nos nveis considerados atualmente prejudiciais sade, os resultados alcanados so bastante satisfatrios no que diz respeito aos limiares analticos.

Tabela 2. Limiares analticos do mtodo para os ons brometo e bromato Parmetros LDM / g L-1 LQM / g L-1 Sensibilidade (b) Desvio Padro Residual (Sy/x) Coef. de Variao do mtodo (Vx0)% Critrio _ LQM < 50 g L-1 /BrLQM < 10 g L-1 /BrO3_ _ (Vx0)<5% Brometo mdia 16,4 49,0 692371,6 3431,47 1,91 Bromato mdia 2,2 6,7 341288,7 223,86 2,25

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O aumento no volume de amostra elevou a amplitude do sinal analtico obtido (o que se denota atravs da inclinao da reta obtida) trazendo uma grande melhora na sensibilidade do mtodo, tendo como conseqncia o abaixamento do limite de deteco e de quantificao do mtodo, tornando possvel detectar a presena do on bromato nos nveis de concentrao abaixo dos exigidos pela legislao que entrar em vigor. Apesar dos valores de sensibilidade (b) obtidos para o brometo serem muito mais elevados do que os obtidos para os bromatos, os valores do desvio padro residual (que descreve a preciso da calibrao) apresentados pelos brometos tambm so muito mais elevados do que os do bromato, denotando um grande desvio dos valores experimentais com relao aos valores estimados pela reta de regresso. Traduzindo-se, no caso dos brometos, em piores limites de deteco e quantificao com relao aos alcanados pelos bromatos. Os resultados obtidos para o coeficiente de variao do mtodo (Vx0)% (Equao 3), que se encontram na Tabela 2, so bastante satisfatrios permitindo ao analista verificar o seu desempenho. (3) Estudos de exatido com materiais de referncia certificados, no puderam ser realizados pelo fato de, na ocasio, no existirem estes materiais disponveis para os ons brometo e bromato. Os ensaios de recuperao para o bromato foram realizados em algumas amostras em que a etapa de desinfeco foi realizada atravs da ozonizao. As amostras foram coletadas em uma estao de tratamento de gua nas etapas anterior e posterior ao processo de ozonizao, e aps uma primeira anlise para determinao da concentrao inicial do on bromato, estas foram fortificadas atravs da adio amostra de uma quantidade conhecida do analito (ver Tabela 3). Os resultados obtidos para estes ensaios de recuperao encontram-se na Tabela 3. De acordo com o Standard Methods11, a porcentagem de recuperao pode variar de 80 a 120%. Qualquer valor obtido compreendido dentro deste intervalo fornece a informao de que tanto o procedimento quanto a matriz no influenciam de modo significativo na deteco do analito, demonstrando que o mtodo capaz de identificar todo o analito presente. Apesar das poucas amostras analisadas, os valores obtidos nos ensaios de recuperao encontram-se na sua maioria dentro da faixa dos 80 aos 120%. Os resultados demonstram que o procedimento escolhido no afeta a deteco dos bromatos. No caso da amostra pr-ozonizada, o valor de recuperao obtido, 75,5%, poder estar associado a caractersticas fracamente oxidantes do meio com reflexo na menor estabilidade do ion bromato. Efeito do uso da etilenodiamina na determinao dos ons bromato A metodologia utilizada, recomenda a utilizao da etileno-

diamina (EDA), para preservao das amostras no caso da determinao de bromato6. A adio de EDA na concentrao de 50 mg L-1 nas amostras tem como objetivo impedir que ons hipobromito (OBr), possivelmente presentes em guas ozonizadas, uma vez que so intermedirios nas reaes de oxidao dos ons brometo a bromato, venham com o passar do tempo a transformar-se em bromato, alterando a sua concentrao original na amostra. Sendo assim, os padres de calibrao, devem estar nas mesmas condies das amostras. Portanto, a EDA deve ser adicionada aos padres na concentrao de 50 mg L-1. Devido s dvidas com relao a adio de EDA vir a deteriorar a coluna analtica, e tambm interferir na determinao dos ons bromato, foram realizados testes que consistiram na preparao dos padres de calibrao, adicionando etilenodiamina na concentrao de 50 mg L-1. As injees dos padres foram realizadas normalmente, notando-se atravs dos cromatogramas obtidos (de acordo com a Figura 4) que, de uma injeo para outra, um pico nunca detectado at ento, surgiu prximo ao tempo de reteno dos cloretos e que a cada injeo se tornava maior, independente do fato de a concentrao adicionada de EDA ser sempre a mesma.

Figura 4. Efeito cumulativo da Etilenodiamina na coluna analtica

Conclui-se, que a etilenodiamina vai se acumulando na coluna analtica diminuindo, com o passar do tempo, os stios ativos disponveis na coluna, afetando deste modo as posteriores determinaes quantitativas dos analitos de interesse. Decidiu-se pela no utilizao de etilenodiamina como conservante das amostras. Aconselhando-se ento que as amostras sejam analisadas no perodo de uma semana, mantendo-as sob refrigerao a 4 C. CONCLUSO De acordo com os resultados obtidos nos estudos de validao do mtodo de determinao simultnea dos ons brometo e bromato, nos intervalos de 50 a 500 g L-1 e de 10 a 50 g L-1, respectivamen-

Tabela 3. Ensaio de recuperao ons bromato Amostra Vol. amostra (mL) 24,875 24,875 24,875 Vol. padro (mL) 0,125 0,125 0,125 Conc. inicial amostra (g/L) 15,0 14,0 14,0 Conc. do padro (g/L) 50,0 50,0 50,0 Conc. obtida amostra+padro (g/L) 49,0 57,6 58,8 Recuperao do padro (%) 75,5 90,0 92,0

Pr-ozonizao 17/08 Ps-ozonizao 17/08 Desinfeco final 17/08

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te, pode-se dizer que o objetivo inicialmente proposto de implementao de um mtodo analtico por Cromatografia Inica, para determinao quantitativa de brometo e bromato na faixa de concentrao necessria s exigncias da Diretiva Comunitria da gua 98/83/CE de 3 de Novembro de 1998, foi alcanado. O mtodo implementado, satisfez as exigncias com relao ao bromato, com um limite de deteco mdio de 2,2 g L-1, e um limite de quantificao mdio de 6,7 g L-1; abaixo do valor mximo recomendado de 10 g L-1. De acordo com estes resultados, conclui-se tambm que a presena do on cloreto no causou interferncia real anlise do on bromato. Com relao ao brometo, no h um valor de concentrao a ser respeitado, mas sua determinao importante, devido ao seu papel de precursor na formao do bromato. O mtodo, ao satisfazer as necessidades com relao preciso, exatido, linearidade e homogeneidade do intervalo de trabalho, foi validado, estando pronto para entrar em rotina no Laboratrio Central da EPAL. REFERNCIAS
1. von Guten, U.; Hoign, J.; Environ. Sci. Technol. 1994, 28, 1234. 2. Ozekin, K.; Westerhoff, P.; Amy, G. L.; Siddiqui, M.; J. Environ. Eng. 1998, May, 456.

3. World Health Organization, Guidelines for Drinking Water Quality, 2 nd ed., vol. 2, Geneva, 1996; http://www.who.int/docstore/water_sanitation_health/ GDWQ/Chemicals/bromatefull.htm, acessada em Maro 2003. 4. Environmental Protection Agency (U.S.EPA) Code of Federal Regulations Parts 9, 141, 142 National Primary Drinking Water Regulations: Disinfectants and Disinfection By-products; Final Rule 69406 Federal Register/vol. 63, n. 241/Wednesday, December 16, 1998; http:// www.epa.gov/OGWDW/mdbp/dbpfr.pdf, acessada em Maro 2003. 5. Directiva 98/83/CE do Conselho, de 3 de Novembro de 1998, relativa qualidade da gua destinada ao consumo humano; Jornal Oficial das Comunidades Europias, L 330, 5 de Dezembro de 1998. 6. Hautman, D. P.; Munch, D. J.; Method 300.1, Determination of Inorganic Anions in Drinking Water by Ion Chromatography, Revision 1.0; National Exposure Research Laboratory, U.S. Environmental Protection Agency, Cincinnati, Ohio, 1997; http://www.epa.gov/safewater/methods/met300.pdf, acessada em Maro 2003. 7. http://www.ktl.fi/sytty/abstracts/varti3.htm, acessada em Julho 2003. 8. ISO 84661 Water Quality Calibration and evaluation of analytical methods and estimation of performance characteristics Part 1: Statistical evaluation of the linear calibration function, International Standard 1990. 9. ISO 84662 Water Quality Calibration and evaluation of analytical methods and estimation of performance characteristics Part 2: Calibration strategy for non linear calibration functions, International Standard 1990. 10. Guia Relacre n 13 Validao de Mtodos Internos de Ensaio em Anlise Qumica, Relacre, Lisboa, 2000 (ISBN 972-8574-02-9). 11. Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, 19th ed. of Standard Methods, 1995.