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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE]

REOVIRIDAE
INTRODUCCION Reoviridae es una familia de virus ARN de vertebrados que pueden afectar al sistema gastrointestinal (como los Rotavirus) y a las vas respiratorias del husped. El genoma es ARN de cadena doble y por lo tanto se incluyen en el Grupo III de la Clasificacin de Baltimore. El nombre de "Reoviridae" se deriva de "virus respiratorio entrico hurfano", en donde el trmino "virus hurfano" hace referencia al desconocimiento de alguna enfermedad a la que poder asociar al virus. Aunque recientemente han sido identificadas diversas enfermedades causadas por los virus de la familia Reoviridae, el nombre original an se utiliza. La infeccin se produce a menudo en seres humanos, pero la mayora de los casos son leves o subclnicos. El virus puede ser fcilmente detectado en heces y tambin en secreciones nasales o farngeas, orina, lquido cefalorraqudeo y sangre. A pesar de la facilidad con la que se detecta, el papel del virus en las enfermedades o el tratamiento es an incierto. Actualmente se est investigando el uso de estos virus en la lucha contra el cncer. Los viriones no presentan envoltura. Sus cpsides, formadas por mltiples protenas, tienen simetra icosadrica (T-13) y estn generalmente organizadas en dos capas concntricas, una exterior y otra interior. Los genomas de estos virus consisten en 10-12 segmentos de ARN bicatenario que se agrupan en tres categoras de acuerdo a su tamao: L (grande), M (mediano) y S (pequeo). Los segmentos tienen una longitud comprendida entre 3,9 y 1 kpb,1 y cada segmento codifica 1-3 protenas. Las protenas se denotan por la letra griega correspondiente al segmento del que fue traducido (protenas pa ra el segmento L, para M, y para S). Dado que estos virus tienen genomas ARN bicatenarios, la replicacin se produce exclusivamente en el citoplasma. El virus codifica varias protenas que son necesarias para la replicacin y conversin del genoma ARN bicatenario en ARN monocatenario de sentido positivo o negativo. El virus puede entrar en
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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE] la clula husped a travs de un receptor en la superficie de la clula. El receptor es desconocido pero se cree que incluye cido silico y molculas de adhesin celular (JAMs). El virus presenta parte del endolisosoma sin revestir por proteasas, donde la cpsida es parcialmente digerida para permitir la entrada en la clula. El ncleo del virus entra entonces en el citoplasma mediante un proceso todava desconocido y all el genoma es transcrito conservativamente, produciendo un exceso de cadenas de sentido positivo, que se utilizan como plantillas para sintetizar ARNm de sentido negativo. Las partculas virales comienzan a ensamblarse en el citoplasma 6-7 horas despus de la infeccin. Una caracterstica que distingue a los virus ARN bicatenarios,

independentemente de la familia a la que pertenezcan, es su capacidad para llevar a cabo la transcripcin de los segmentos de ARN bicatenarios bajo las condiciones apropiadas dentro de la cpsida. En todos estos virus, las enzimas requeridas para la transcripcin endgena son, por tanto, parte de la estructura del virin. REOVIRUS La familia Reoviridae incluye los Orthoreovirus, Rotavirus y Orbivirus. El nombre Reovirus fue propuesto en 1959 por Albert Sabin para un grupo de virus respiratorios y entricos no asociados con ninguna enfermedad conocida, y de ah el nombre de virus r (respiratorio), e (entricos), o (orphan, hufanos). Los Reoviridae son virus sin envoltura con cpsides de protenas de doble capa que contienen 10 a 12 segmentos de los genomas de ARN bicatenario. Esos virus son estables frente a un espectro amplio de pH y temperatura, y en los aerosoles transportados por el aire. Los Orbivirus haban sido clasificados antes como Arbovirus. Los Orthoreovirus, tambin conocidos como reovirus de los mamferos o simplemente reovirus, fueron aislados por primera vez durante los aos cincuenta en heces de nios. Constituyen el prototipo de esta familia vrica y la

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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE] base molecular de su patogenia ha sido objeto de estudio extenso. De modo habitual, estos virus causan infeccin asintomtica en el hombre. Los rotavirus causan gastroenteritis infantil humana, una enfermedad muy comn. Son responsables de aproximadamente el 50% de todos los casos de diarrea infantil que requieren hospitalizacin a causa de deshidratacin (70000 casos anuales en Estados Unidos). En los pases subdesarrollados, los rotavirus pueden producir hasta un milln de fallecimientos al ao.

REOVIRIDAE RESPONSABLES DE ENFERMEDAD HUMANA

VIRUS ORTHOREOVIRUS

ENFERMEDAD Enfermedad respiratoria superior leve, enfermedad gastrointestinal, atresia biliar.

ORBIVIRUS ROTAVIRUS

Enfermedad febril con cefalea y mialgia Enfermedad gastrointestinal, enfermedad respiratoria(?)

Murray, Microbiologa Mdica Estructura Los rotavirus y reovirus comparten muchas caractersticas estructurales, de replicacin y patgenas. Ambos tienen morfologa icosahdrica con una cpsula doble (60 a 80 nm de dimetro). El nombre rotavirus procede del latn rota, rueda; y se refiere al aspecto del virin en los negativos de las micrografas electrnicas. En esas micrografas se ven tambin partculas de rotavirus incompletas. Estos virus carecen de la capa exterior de la cpside y se encuentran frecuentemente en preparaciones de heces diarreicas y cultivos celulares. El virin tiene tres objetivos principales: empaquetamiento (centro de la nucleocpside), proteccin (cpside exterior) y suministro (PSVI). El virin debe proteger el centro de la nucleocpside frente al medio ambiente, transportarlo a
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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE] travs del medio cido del tracto gastrointestinal y la luz del intestino hasta el tejido diana, e introducirlo en el citoplasma de la clula diana. La cpside exterior est compuesta de protenas estructurales, que rodean un ncleo (core) con enzimas para la sntesis de ARN y 10 (reo) o 11 (rota) segmentos diferentes del genoma ARN bicatenario. La escisin proteoltica del virin activa la capacidad infecciosa del virus y produce una partcula subvrica infecciosa (PSVI) intermedia. De modo interesante, los rotavirus recuerdan a los virus con envoltura en el sentido de que poseen glucoprotenas, adquieren y despus pierden una envoltura durante el ensamblaje, y parecen tener actividad protena de fusin para favorecer la penetracin directa a travs de la membrana de la clula diana. Los segmentos genmicos de los rotavirus y reovirus codifican protenas estructurales y no estructurales. Como en el virus influenza A, se puede producir reordenamiento de los segmentos genticos para crear virus hbridos. Las protenas de los reovirus se denominan (1, 2, 3), (1, 2) y (1, 2, 3), de acuerdo con el tamao del segmento genmico del que proceden. Los rotavirus se numeran de acuerdo con las protenas del virin (PV) (1-7) o las protenas no estructurales (NE) (1-4). Las protenas del centro incluyen enzimas necesarias para la transcripcin del ARNm. Las protenas 1 y PV4 estn localizadas en los vrtices de la cpside y se extienden desde la superficie en forma de puntas. Tienen varias funciones, como hemaglutinacin y adherencia vrica, e inducen la sntesis de anticuerpos neutralizantes. La PV4 es activada por escisin enzimtica, por lo que presenta una estructura similar a la de las protenas de fusin de los paramixovirus. La escisin es necesaria para la entrada en las clulas. La PV7 de los rotavirus provoca tambin sntesis de anticuerpos neutralizantes y se une a un receptor de la superficie celular.

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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE]

Murray, Microbiologa Mdica

Murray, Microbiologa Mdica

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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE] SEGMENTOS DEL GENOMA, PROTEINAS Y FUNCIONES DE LAS PROTEINAS DE REOVIRUS SEGMENTOS DEL GENOMA (PESO MOLECULAR) Segmentos grandes (2,8 x 106) 1 2 3 1(centro) Componente transcriptasa Transcriptasa ,enzima 2 ( centro, punta Comp. vrtice) 3 (centro) Segmentos medianos (1,4 x 106) 1 2 2 (centro) 1 C (cpside exterior) 3 NE Favorece ensamblado vrica. Segmentos pequeos (0.7 x 106) 1 1(cpside Hemaglutinina, adherencia protena vrica, de Escindi de u 1, forma compleja con 3 cobertura Componente transcriptasa PROTEINAS FUNCIONES (CONOCIDAS)

exterior) (tetramrico) 2 3 4 2(centro) NE 3

determina

tropismo tisular en vrtices de cpside Componente transcriptasa Componente transcriptasa

complejo u 1 C, (cpside Forma componente importante de cpside externa) externa , controla sntesis de ARN y protenas vrica y del husped

Murray, Microbiologa Mdica

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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE] Replicacin La replicacin de los reovirus y rotavirus comienza con la ingestin del virus. El virin completo es digerido parcialmente en el tracto gastrointestinal, y probablemente activado mediante escisin enzimtica de las protenas de la cpside externa (3/PV7), prdida de la 3 y escisin de la PV4 para producir la PSVI. Las 1/PV4 en los vrtices de la PSVI se unen a glucoprotenas con cido silico presentes en las clulas epiteliales y de otros tipos, entre ellas el receptor beta-adrenrgico para los reovirus. La PSVI de rotavirus atraviesa la membrana de la clula diana por un mecanismo desconocido. Los viriones completos de reovirus y rotavirus pueden ser captados por un endocitosis mediada por un receptor; sin embargo, sta es una va muerta para los rotavirus. Una vez dentro de la clula, la cpside externa libera el ncleo en el citoplasma, y las enzimas del centro inician la produccin de ARNm. El ARN bicatenario permanece siempre en el ncleo. La transcripcin del genoma ocurre en dos fases, precoz y tarda, pero antes de la replicacin del genoma. La cadena de ARN (-) es usada como plantilla para enzimas del ncleo del virin, que sintetizan ARNm individuales completos con un extremo ceflico 5metil guanosina y un extremo caudal 3poli A. El ARNm deja el ncleo y es traducido. Las protenas del virin y los segmentos de ARN (+) se asocian en estructuras similares a ncleos, que se agregan en grandes inclusiones citoplasmticas. Los segmentos de ARN (+) son copiados para producir ARN () en los nuevos ncleos pueden generar ms ARN (+) o ser ensamblados en viriones. El proceso de ensamblaje difiere en los reovirus y rotavirus.en el caso de los reovirus, las protenas de la cpside se externa se asocian con el core, y el virin abandona la clula por lisis celular. El ensamblaje de los rotavirus semeja al de los virus con envoltura. Los ncleos se asocian con la protena vrica NE28 en el exterior del retculo endoplasmtico, y adquieren las protenas de la cpside externa y una membrana al entrar por gemacin en RE. Las protenas PV7 Y NE28 son glucosiladas. Se pierde la membrana y el virus sale de la
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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE] clula tambin por lisis celular. Los reovirus inhiben la sntesis de macromolculas celulares en las ocho primeras horas de infeccin.

ORTHOREOVIRUS (REOVIRUS DE MAMIFEROS) El grupo Orthoreovirus son ubicuos y han sido aislados en casi todos los mamferos del mundo. Los viriones son muy estables y han sido detectados en aguas residuales y de los ros. Los reovirus de mamferos pueden clasificarse en tres serotipos, 1 a 3, sobre la base de pruebas de neutralizacin en inhibicin de la hemaglutinacin. Los tres comparten un antgeno comn que fija el complemento. Patogenia e inmunidad No causan enfermedad de importancia en el hombre. Sin embargo, el estudio de la enfermedad por reovirus en los ratones aument los conocimientos sobre la patogenia de la infeccin vrica. Dependiendo de la cepa, los reovirus pueden ser neurotrpicos o viscerotrpicos en los ratones. Las funciones y propiedades de virulencia de las protenas de los reovirus fueron identificadas mediante comparacin de las actividades de virus hbridos que diferan en solo un segmento del genoma (que codificaba una protena). La nueva actividad es atribuible al segmento genmico de la otra cepa vrica. Tras la ingestin y activacin de la PSVI, se unen a las clulas M del intestino delgado, que transfieren los virus al tejido linfoide de las placas de Peyer que tapizan el intestino.los virus se replican e inician la viremia. Aunque el virus es citoltico in vitro, causa sntomas escasos o nulos antes de entrar en la circulacin y producir infeccin en lugares distantes. En el modelo murino, la protena de la cpside externa responsable de la actividad hemaglutinina (1) facilita tambin la diseminacin vrica hasta los ganglios linfticos mesentricos y determina el neurotropismo del virus. Los ratones y probablemente el hombre, producen respuestas humorales y celulares protectoras frente a las protenas de la cpside externa. Aunque en
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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE] condiciones normales son lticos, son capaces tambin de ocasionar infeccin persistente en los cultivos celulares. MECANISMOS PATOGENOS DE LOS REOVIRUS El virus es diseminado por va fecal oral y posiblemente respiratorio La infeccin citoltica del epitelio intestinal causa perdida de electrolitos y evita reabsorcin de agua La enfermedad puede ser significativa en los lactantes con menos de 24 meses y asintomtica en los adultos Durante la fase diarreica se liberan grandes cantidades de virus. Epidemiologa Como ya se ha dicho, el grupo Orthoreovirus han sido detectados en todo el mundo. Los estudios de seroprevalencia sugieren que la mayora de las

personas se infectan durante la niez, y aproximadamente el 75% de los adultos tienen anticuerpos. Las infecciones causantes de inmunidad son asintomticas. La mayora de los animales, entre ellos los chimpancs y los monos, tienen tambin anticuerpos detectables. No se sabe si existen

reservorios animales para la infeccin humana. Sndromes clnicos Los reovirus infectan a personas de todas las edades, pero ha sido difcil relacionarlos con enfermedades especficas. Se cree que la mayora de las infecciones son asintomticas o tan leves que pasan inadvertidas. Hasta ahora, estos virus han sido asociados con enfermedad respiratoria superior leve (febrcula, rinorrea, faringitis), enfermedad gastrointestinal y atresia biliar. Diagnstico de laboratorio La infeccin por Orthoreovirus humanos se puede detectar mediante identificacin del antgeno o el ARN del virus en material clnico, aislamiento vrico o pruebas serolgicas para anticuerpos especficos. Se utilizan muestras de faringe, nasofaringe y heces de pacientes con enfermedad respiratoria superior o diarrea.
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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE] Orthoreovirus humanos se pueden aislar en fibroblastos (clulas L) de ratn, clulas primarias de rin de mono y clulas HeLa. Los cultivos celulares con incubados y obtenidos en busca de efectos citopticos (ECP) durante un periodo de tres semanas. Al principio del ciclo infeccioso las inclusiones aparecen como puntos pequeos en la periferia del citoplasma de la clula husped. Ms adelante las inclusiones son mayores y se localizan junto al ncleo. Para confirmar la presencia del virus se emplean la hemaglutinacin, la neutralizacin y la deteccin directa de antgeno o ARN vricos. El diagnstico serolgico de la infeccin requiere documentacin de un aumento de por lo menos cuatro veces en los anticuerpos especficos entre las muestras tomadas en la fase aguda y durante la convalecencia, puesto que los anticuerpos contra Orthoreovirus se encuentran de modo habitual en nios y adultos sanos. Las tcnicas usadas para detectar anticuerpos contra Orthovirus incluyen inhibicin de la hemaglutinacin, neutralizacin fijacin del

complemento e inmunofluorescencia indirecta, aunque no son de empleo habitual. Tratamiento, prevencin y control La enfermedad por Orthoreovirus es leve y autolimitada. Por esta razn no hay necesidad de tratamiento ni se han investigado posibles medidas de prevencin y control.

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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE] GENERO COLTIVIRUS Y ORBIVIRUS Los coltivirus y los orbivirus infectan a los vertebrados y a los invertebrados. Los coltivirus provocan la fiebre de las garrapatas de Colorado y enfermedades semejantes en el ser humano. Los orbivirus originan principalmente trastornos en los animales, como la enfermedad de la lengua azul de las ovejas, la peste equina africana y la enfermedad hemorrgica epizotica del ciervo. La fiebre de las garrapatas de Colorado es una entidad aguda caracterizada por fiebre, cefalea y mialgias graves, descrita por primera vez en el siglo XIX, y que actualmente se considera que es una de las enfermedades vricas transmitidas por garrapatas ms habituales de EE.UU.. A pesar de que cada ao se producen cientos de infecciones, se desconoce cul es su incidencia exacta debido a que la fiebre de las garrapatas de Colorado no es una enfermedad de declaracin obligatoria. Estructura y Fisiologa Pumarola 2 Edicin Forman un grupo de reovirus transmitidos por artrpodos (arbovirus), de tamao algo menor (65-80 nm), que presentan una cubierta interna de simetra icosadrica, dividida en 32 capsmeros de gran tamao, que adoptan una morfologa circular a en anillo, caracterstica del genera, y son visibles a travs de la cubierta externa, que es difusa. Contienen un ARN bicatenario dividido en 10 fragmentos. Murray 5a Edicin La estructura y la fisiologa de los coltivirus y los orbivirus son similares a las de los otros reovirus, con las siguientes excepciones principales:

1. La cpside externa de los orbivirus no tiene una estructura capsomrica identificable, a pesar de poseer una cpside interna icosadrica.

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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE] 2. El virus provoca viremia, infecta a los precursores de los hemates y permanece en los hemates maduros protegido de la respuesta inmunitaria.

3. El ciclo vital del orbivirus incluye tanto a los vertebrados como a los invertebrados (insectos).

Los virus de la fiebre de las garrapatas de Colorado tienen 12 segmentos de genoma de ARN bicatenario, y los orbivirus tienen 10 segmentos. Replicacin Muchos orbivirus preferentemente infectan a las clulas endoteliales

vasculares, orbivirus entrar en la clula husped por endocitosis y la capa exterior se retira posteriormente. El ciclo completo de replicacin viral se produce en el citoplasma de la clula husped. La transcripcin del genoma viral en ARNm se produce dentro de la partcula ncleo y ARNm se traduce en los ribosomas con protenas de la clula husped, protenas virales son sintetizadas 2-14 das despus de la infeccin inicial. . Nueva viriones se autoensamblan en el citoplasma y se liberan de la clula husped por gemacin. Durante el proceso de gemacin transitoriamente adquiere una envoltura lipdica que puede ser detectado por un corto perodo de tiempo despus de su liberacin, pero este se pierda posteriormente. Murray 5a Edicin PATOGENIA El virus de la fiebre de las garrapatas de Colorado afecta a las clulas precursoras de los hemates sin provocar ningn dao importante. El virus permanece en el interior de estas clulas incluso despus de que maduren para formar hemates; este factor protege al virus de su propia eliminacin. La viremia resultante puede persistir durante semanas o meses, incluso tras desaparecer la sintomatologa. Estos dos factores facilitan la transmisin del virus al vector garrapata. La infeccin del endotelio vascular, la musculatura lisa vascular y los pericitos puede ocasionar una enfermedad hemorrgica grave como consecuencia del
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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE] debilitamiento de la estructura capilar. La debilidad provoca la prdida de sangre y hemorragia, y potencialmente hipotensin y shock. La infeccin neuronal puede producir meningitis y encefalitis.

Diagnstico y Sntomas Pumarola 2 Edicin Se diferencian de los reovirus par su sensibilidad a los cidos y de los restantes arbovirus (togavirus, bunyavirus) por su resistencia al eter y solventes organicos. Presentan la propiedad de aglutinar los glbulos rojos de pollo de 1 da. Se pueden dividir en 17 subgrupos serolgicos por la reaccin de FC y estos a su vez en mas de 80 serotipos par la reaccin de IH. Pueden producir infecciones en el hombre y en diversas especies animales y estan caracterizados porque en su transmisin intervienen diversos artrpodos: subgrupos Lengua azul (culicoides), Corriparta (mosquitos), Changuinola (Phlebotomus) y garrapatas. Los virus mas importantes que afectan al hombre son el virus de la fiebre par garrapatas del Colorado y los virus del subgrupo Kemerova que estan difundidos en Europa Oriental, Egipto, Sudan, California y Per. La fiebre por garrapatas del Colorado es una infeccin de los pequeos roedores salvajes, que se transmite al hombre par la garrapata Dermacentor andersoni. Su distribucin geogrfica es paralela a la del vector y afecta a acampadores, excursionistas y trabajadores del bosque en diversos estados (California, Colorado, Montana, Nevada, Idaho) de Estados Unidos. Las larvas de Dermacentor se infectan en los roedores durante la fase de viremia, y a los pocos das aparece el virus en la saliva. La garrapata adulta permanece infectada durante toda su vida y transmite la infecci6n al hombre por picadura. EI virus, despus de la fase inicial infecta los ganglios linfticos y llega al bazo, se multiplica en las celulas y produce un bloqueo en la maduraci6n de leucocitos y plaquetas. En la sangre no se encuentra libre en el

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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE] plasma, sino asociado can los hemates, que en gran nmero contienen antgeno. En el 10-20 % de casas puede invadir el SNC y producir encefalitis. La enfermedad se caracteriza por un cuadra febril bifasico; en la primera fase se produce cefalalgia, mialgias y debilidad, con leucopenia y trombopenia, y pueden producirse en los casos graves hemorragias y encefalitis. El diagnstico se puede sospechar par los datos clnicos, antecedentes epidemiolgicos y situacin geogrfica. El virus puede aislarse de los hemates por inoculacin en cultivos celulares o en ratn lactante por via intracerebral. Tambien puede demostrarse la presencia de antgeno en los hemates por inmunofluorescencia y de anticuerpos en el suero por reacciones de NT, IC elF. No existe tratamiento especfico. La profilaxis se basa en evitar las reas infestadas y la picadura de garrapatas (repelentes). Se encuentra en estudio la preparacin de una vacuna con virus inactivado. EPIDEMIOLOGA

La fiebre de las garrapatas de Colorado es propia de las regiones del oeste y noroeste de EE.UU. y el oeste de Canad, las cuales corresponden al rea de distribucin de la garrapata de la madera Dermacentor andersoni (a altitudes de 1200 a 3000 m) (figura 62-5). Las garrapatas adquieren el virus cuando se alimentan de un organismo anfitrin virmico y despus lo transmiten a travs de su saliva al alimentarse de otro anfitrin. Los anfitriones naturales de este virus son los mamferos, como las ardillas, las ardillas voladoras, los conejos y los ciervos. Durante la primavera, el verano y el otoo se producen casos de enfermedad en el ser humano, pues son las estaciones en las que este invade con mayor frecuencia el hbitat de la garrapata. ENFERMEDADES CLNICAS

El virus de la fiebre de las garrapatas de Colorado suele provocar infeccin moderada o subclnica. Los sntomas de la enfermedad aguda se parecen a los del dengue. Tras un perodo de incubacin comprendido entre 3 y 6 das, la
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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE] infeccin sintomtica debuta con la aparicin brusca de fiebre, escalofros, cefalea, fotofobia, mialgias, atrofia y letargo. Entre las caractersticas de la infeccin destaca una fiebre bifsica y conjuntivitis, y posiblemente

linfadenopata, hepatosplenomegalia y un exantema maculopapuloso o petequial. Una caracterstica destacada de la enfermedad es la leucopenia tanto de neutrfilos como de linfocitos. En algunos casos, los nios presentan una enfermedad hemorrgica ms grave. La fiebre de las garrapatas de Colorado se debe distinguir de la fiebre maculosa de las Montaas Rocosas, una infeccin provocada por rickettsias y transmitida por garrapatas caracterizada por un exantema, puesto que esta ltima requiere tratamiento antibitico. DIAGNSTICO DE LABORATORIO

El diagnstico de la fiebre de las garrapatas de Colorado se puede establecer mediante la deteccin directa de los antgenos vricos, inoculacin del virus o anlisis serolgicos. El mtodo mejor y ms rpido es la deteccin del antgeno vrico en las superficies de los hemates en un frotis de sangre mediante inmunofluorescencia. Los departamentos de Public Health o los Centersfor Disease Control and Prevention proporcionan las pruebas de laboratorio. La obtencin de un diagnstico serolgico hace preciso comparar los ttulos de anticuerpos de las fases aguda y convaleciente, ya que pueden producirse infecciones subclnicas en las que los anticuerpos persisten durante toda la vida del sujeto. Aproximadamente 45 das despus del inicio de la enfermedad aparecen IgM especficas, y su deteccin tambin es un posible indicio de infeccin aguda o muy reciente. La tcnica ms adecuada es la

inmunofluorescencia, aunque para detectar los anticuerpos de la fiebre de las garrapatas de Colorado tambin se utilizan la fijacin del complemento, las pruebas de neutralizacin y los enzimoinmunoanlisis.

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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE] TRATAMIENTO, PREVENCIN Y CONTROL

No existe tratamiento especfico para la fiebre de las garrapatas de Colorado. Generalmente la enfermedad es de resolucin espontnea lo que indica que basta con un tratamiento complementario. La viremia se mantiene durante un perodo prolongado, lo que implica que los pacientes infectados no pueden donar sangre poco despus de recuperarse. La prevencin consiste en:

1) evitar las zonas infestadas de garrapatas.

2) utilizar ropa protectora y repelentes de garrapatas.

3) eliminar las garrapatas antes de que se produzca la picadura.

A diferencia de la enfermedad asociada a las rickettsias transmitidas por la garrapata, en la que la transmisin de la bacteria etiolgica requiere un perodo prolongado de alimentacin del insecto, los coltivirus presentes en la saliva de la garrapata pueden entrar en la circulacin sangunea muy rpidamente. Se ha desarrollado una vacuna inactivada con formol frente a la fiebre de las garrapatas de Colorado, pero su distribucin a la poblacin general no es necesaria debido a la levedad de la enfermedad.

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GENERO ROTAVIRUS

Estructura y Fisiologa Pumarola 2 Edicin EI virin tiene un dimetro de 65-75 nm y presenta un cpside constituido par una doble cubierta, de contorno circular liso bien delimitado, que junto con las proyecciones del core le comunica el aspecto caracterstico de rueda (llanta con sus radios), cuando se observa por microscopia. Contiene un ARN bicatenario, dividido en 11 fragmentos, a diferencia de los generos anteriores. Es estable a los cidos y resistente al ter y solventes orgnicos. Los rotavirus se han encontrado en las heces del hombre y de diversas especies animales. Contienen un antgeno comn, probablemente localizado en la cubierta interna, que se demuestra por FC elF, y antgenos tipo especficos en la cubierta externa demostrables por otras reacciones serolgicas. En los rotavirus humanos se han identificado por FC dos serogrupos (I y II) y por NT cuatro serotipos (1, 2, 3 Y4)

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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE] Murray 5a Edicin Los rotavirus son agentes etiolgicos habituales de la diarrea infantil en todo el mundo. Los rotavirus conforman un extenso grupo de virus causantes de gastroenteritis que afectan a muchos mamferos y aves distintos. Los viriones de los rotavirus son relativamente estables a temperatura ambiente y resistente a los tratamientos con detergentes, pH extremos de 3,5 a 10, e incluso procesos repetidos de congelacin y descongelaciones repetidas. Su infectividad se refuerza por la accin de enzimas proteolticas como la tripsina. Los rotavirus humanos y animales se clasifican en serotipos, grupos y subgrupos. La enfermedad del ser humano est provocada por los rotavirus pertenecientes al grupo A, y ocasionalmente de los grupos B y C. Estructura de la partcula viral Estudios realizados recientemente, utilizando criomicroscopa electrnica y reconstruccin de imgenes, han permitido realizar anlisis detallados de las caractersticas estructurales de la partcula viral virin, con una resolucin de aproximadamente 26 . Las partculas virales tienen aproximadamente 75 nm de dimetro, con una geometra icosahedrca con simetra de T=13l. El virin maduro est compuesto por tres capas concntricas de protena que engloban al genoma viral. La capa externa del virin esta formada por 780 molculas de la glicoprotena VP7. De esta capa lisa se proyectan 60 espculas de ~12 nm de longitud constituidas por dmeros de la protena VP4; la base de stos dmeros de VP4 interacciona con la capa intermedia del virin. Esta capa intermedia, de aproximadamente 10 nm de grosor, consta de 260 unidades morfolgicas constituidas por trmeros de la protena VP6, esta protena es la ms abundante del virus, constituyendo aproximadamente el 50% de la protena total del virin. La capa intermedia, a su vez, rodea a la capa ms interna del virin o nucleocpside, que est formada por 60 dmeros de la protena VP2, la cual engloba al genoma viral.

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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE] Una copia de la protena VP1 y una de VP3 estn asociadas con la cara interna de la capa de VP2, y localizadas en los doce vrtices del icosahedro, donde se ha propuesto que llevan a cabo su funcin de replicar y modificar los genes del virus. Tambin dentro de esta nucleocpside se encuentran los once

segmentos de ARN de doble cadena (ARNdc) que constituyen el genoma del virus. Los estudios de criomicroscopa electrnica han revelado que estos segmentos de ARN parecen estar tambin ordenados geomtricamente dentro de la partcula, y se ha propuesto que de los aproximadamente 18,500 pares de bases (pb) que constituyen al genoma viral, cerca de 4,500 pb estn organizados con una simetra que parece depender del ensamble icosahdrico de VP2, la cual al hacer contacto con los segmentos de ARN, induce en estos su organizacin. Tomando en conjunto todas estas observaciones, se ha sugerido que las protenas VP1, VP2 y VP3 estn involucradas en la organizacin del genoma dentro de la nucleocpside mediante interacciones ARN-protena. La existencia de cada una de las capas proteicas del virus, as como las interacciones que existen entre VP7 y VP4, y de estas protenas con VP6, han sido corroboradas mediante la produccin de pseudo-partculas virales, a travs de la co-expresin de los genes que codifican para cada una de estas protenas (VP2, VP6, VP4 y VP7), en sistemas de expresin heterlogos,como el sistema de clulas de insecto infectadas con baculovirus recombinantes. Estos experimentos tambin han demostrado que las protenas virales tienen la habilidad intrnseca de auto-ensamblarse. Por criomicroscopa electrnica se ha observado que la partcula viral completa contiene 132 canales acuosos, que han sido clasificados en tres grupos (I, II y III) dependiendo de sus caractersticas de simetra y tamao. Estos canales, atraviesan a la partcula viral desde la capa externa hasta la nucleocpside. An no es claro el papel que juegan estos canales durante el ciclo de replicacin del virus, sin embargo se ha propuesto que podran estar involucrados en la entrada de los metabolitos necesarios para la transcripcin del ARN dentro de la partcula de doble capa, as como de la salida de los transcritos virales. De hecho, recientemente al observar por criomicroscopa
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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE] electrnica partculas virales activas en el proceso de transcripcin, se ha encontrado que los ARN mensajeros (ARNm) virales salen de la partcula a travs de los canales tipo I, que se encuentran localizados en los 12 vrtices de la partcula icosahdrica, en los que tambin se localizan las protenas VP1 y VP3. Caractersticas fisicoqumicas y funcionales de la partcula viral Existen tres tipos de partculas virales con diferentes caractersticas estructurales y funcionales: i) la partcula completa, que contiene las tres capas proteicas, es tambin llamada TLP (Triple-Layered Particle); esta es la partcula infecciosa ya que la presencia de la capa externa formada por las protenas VP4 y VP7 le permite unirse y penetrar a su clula husped (como veremos ms adelante); ii) la partcula que contiene dos capas proteicas o DLP (Doble-Layered Particle); esta partcula no es infecciosa, pero es transcripcionalmente activa. El tratamiento de las TLPs con agentes quelantes del in calcio, tales como EDTA o EGTA, provoca que la VP4 y la VP7 se desprendan de la partcula viral, generndose as las DLPs que tienen la capacidad de sintetizar los ARN mensajeros virales; y por ltimo, iii) las partculas que contienen una sola capa de protenas, o nucleocpsides, que tienen la actividad de replicar al genoma viral. Estas partculas se pueden generar in vitro, mediante el tratamiento de las DLPs con agentes tales como tiocianato de sodio, o altas concentraciones de calcio. Adems de tener diferentes actividades biolgicas, estas partculas tienen diferentes propiedades fisicoqumicas. Entre estas vale la pena mencionar el hecho de que tienen diferentes densidades, lo que nos permite separarlas mediante gradientes de cloruro de cesio. Las TLPs tienen una densidad de 1.36 g/cm3, las DLPs de 1.38 g/cm3 y las nucleocpsides de 1.44 g/cm3. Tambin, dada su diferencia en tamao, estos tres tipos de partculas pueden ser separadas mediante electroforesis en geles de agarosa.
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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE] Las partculas de rotavirus son relativamente estables. Las partculas virales son funcionales en un rango de pH de 3 a 9, y el virus es estable por meses a 40C, y an a 200C cuando se mantiene en 1.5mM de calcio. La partcula completa mantiene su integridad y su infectividad cuando es tratada con solventes orgnico tales como ter, cloroformo o fren, lo que refleja la ausencia de lpidos en su estructura. Los rotavirus pierden su infectividad al ser tratados con desinfectantes tales como formalina, cloro, betapropiolactona y etanol al 95%, debido a la prdida de la capa externa. Genoma El genoma de los rotavirus est constituido por once segmentos de ARN de doble cadena, (ARNdc) cuyos tamaos varan de aproximadamente 660 pb del gen ms pequeo, hasta aproximadamente 3300 pb para el gen ms grande. Esta diferencia de tamaos permite que estos segmentos al ser separados electroforticamente presenten un patrn caracterstico, tpico y nico para los rotavirus, lo que ha sido la base para desarrollar un mtodo diagnstico para estos virus. En general el patrn electrofortico, o electroferotipo, consiste de un grupo de cuatro segmentos de ARN (1-4) de alto peso molecular; 5 segmentos de tamao mediano)que incluyen un triplete muy caracterstico formado por los segmentos 7, 8 y 9; y los dos segmentos ms pequeos. Como ya se ha mencionado, el genoma viral desnudo (en ausencia de las protenas de la cpside) no es infeccioso, ya que para transcribirse, este genoma necesita de una ARN polimerasa que pueda utilizar ARN como molde. Esta polimerasa no se encuentra en las clulas, por lo que el virus debe de proveer esta actividad para garantizar su replicacin. Los ARN mensajeros (ARNm) de rotavirus contienen la estructura de CAP en su extremo 5, pero a diferencia de la mayora de los ARNm celulares, no tienen poli(A) en su extremo 3 (47, 72). En general, la secuencia nucleotdica de los genes virales es rica en A/T (58- 67%). Cada segmento de ARN codifica por una protena viral, excepto el gen 11 el cual contiene dos marcos abiertos de lectura, los cuales codifican dos protenas virales. En la mayora de los

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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE] casos la traduccin de los ARNm comienza en el primer codn de inicio que tiene las caractersticas del consenso de Kozak. Actualmente, conocemos la secuencia nucleotdica de los once segmentos de ARN de varias cepas de rotavirus. El anlisis comparativo de estas secuencias ha revelado que existen varias caractersticas compartidas entre todos los segmentos. La figura 4 muestra un esquema que ilustra estas caractersticas comunes: Todos los genes de rotavirus estn flanqueados en los ext remos 5 y 3 por secuencias no traducidas; la longitud de estas secuencias es variable entre los diferentes genes (entre 9 y 49 nucletidos en el extremo 5 y entre 17 y 182 nucletidos en el extremo 3), pero se conserva entre los segmentos equivalentes de cepas aisladas de diferentes especies. Estas secuencias no traducidas flanquean un marco abierto de lectura en todos los segmentos, a excepcin del segmento 11 que contiene dos marcos abiertos de lectura. Los primeros 10 nucletidos del extremo 5, as como los ltimos 8 nucletidos del extremo 3 estn altamente conservados entre todos los segmentos de las diferentes cepas; las secuencias consenso de estas regiones son : 5 (GGC A/U A/U UA/U A A/U A/U.....) y en el extremo 3:(.A/U U G/U U/G G/U A/G CC) (31, 79). La alta conservacin de estas secuencias consenso entre los diferentes segmentos sugiere que estas regiones contienen seales que son importantes para la transcripcin, transporte, replicacin y/o ensamblaje de los segmentos virales. Cada partcula viral contiene exactamente 11 segmentos de ARN de doble cadena, lo que indica que la replicacin y el empaquetamiento de las 11 especies de mensajeros debe de ser un proceso altamente coordinado. Recientemente se ha reportado que en las regiones no traducidas de los mensajeros de los rotavirus existen seales de replicacin que actan en cis. Entre estas, se ha definido una seal promotora mnima, esencial para la sntesis de la hebra negativa de ARN (que es la hebra de ARN complementaria al mensajero o hebra positiva) durante la replicacin del genoma, la cual esta formada por los ltimos siete nucletidos del extremo 3'. Se han identificado tambin otras dos regiones adicionales, que funcionan como reguladores positivos, ya que en presencia de estas secuencias se obtiene un nivel optimo de sntesis de los ARNm virales; estas secuencias consisten de

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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE] aproximadamente 25 nucletidos, inmediatamente "ro arriba" de la regin promotora del extremo 3' y de al menos 10 nucletidos en el extremo 5' del ARNm. Hasta ahora las secuencias que se han identificado representan seales para la replicacin y la traduccin de los ARNs mensajeros virales, sin embargo aun no se han encontrado las seales que son necesarias para la encapsidacin de los once segmentos diferentes en una sola partcula viral. La bsqueda de estas regiones es un tpico de arduo estudio en el campo de los virus cuyos genomas estn formados por ARNs segmentados. Como mencionamos anteriormente, el genoma de los rotavirus se puede rearreglar, esto es que cuando una clula es coinfectada por dos cepas distintas de rotavirus, la progenie viral resultante de esta co-infeccin es una poblacin de virus que contiene diferentes combinaciones de los diferentes genes parentales. La animacion II ilustra este proceso de rearreglo gnico. Este tipo de rearreglos gnicos entre rotavirus de diferentes cepas es posible gracias a las secuencias consenso que comparten todos los segmentos del genoma viral y es una fuente de variabilidad gnica de esta familia de virus. Ciclo replicativo Los rotavirus inician su ciclo de infeccin unindose a un receptor localizado en la superficie de la clula. Despus de la unin al receptor, los rotavirus penetran al interior de la clula y pierden la capa externa, con lo cual se activa la transcripcin. Los ARNs recin sintetizados cumplen dos funciones: como ARNs mensajeros que dirigen la traduccin de las protenas del virus, y como templados para la sntesis de los ARNs complementarios para la replicacin del genoma. La seleccin, el empaquetamiento, y la replicacin de los segmentos del genoma, as como la morfognesis de las partculas de doble capa (DLPs), se llevan a cabo en estructuras electrodensas denominadas viroplasmas, que estn compuestos de grandes cantidades de ARN y protenas virales. Una vez formadas, las DLPs abandonan el viroplasma, y adquieren la capa externa al gemar a travs de la membrana del retculo endoplsmico modificada por protenas virales, finalmente los viriones maduros son liberados de la clula por lisis.

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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE] Todo el ciclo replicativo de los rotavirus se lleva a cabo en el citoplasma celular, sin necesitar el ncleo de la clula. Los pasos del ciclo replicativo de los rotavirus que a continuacin se detallan, se han caracterizado principalmente en las clulas MA104. Esta lnea celular, derivada de clulas epiteliales de rin de mono, es una de las ms susceptibles a la infeccin por rotavirus y ha sido ampliamente utilizada para caracterizar bioqumicamente a estos virus. Vale la pena mencionar que en estudios recientes se ha caracterizado el ciclo replicativo de los rotavirus en una lnea celular derivada de clulas provenientes de colon intestinal humano. Estas clulas, a diferencia de las clulas MA104 tienen la capacidad de polarizarse al crecerlas en filtros especiales. Se ha observado que en esta lnea celular, el ciclo replicativo de rotavirus es mas lento, encontrndose el mximo de produccin viral a las 24 horas despus de la infeccin. Estudios de microscopia electrnica de stas clulas polarizadas e infectadas han mostrado que hay algunas diferencias en la morfognesis del virus con respecto a lo que se ha observado en las clulas MA104.Estos estudios aun estn en desarrollo pero ser de gran inters aprender las diferencias que existen en la morfognesis del virus entre clulas polarizadas y nopolarizadas.

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Protenas Estructurales La VP1 est situada en el ncleo del virus y es una RNA polimerasa. En una clula infectada produce los transcritos de ARNm para sintetizar las protenas vricas y duplica el genoma para producir nuevas partculas vricas. La VP2 forma parte de la capa ms interna del virin y va unida al genoma de ARN. La VP3 tambin forma parte de la capa interna del virin y es un enzima llamado guanilil transferasa. Es una enzima que produce la caperuza en 5' del ARN (capping enzyme), durante la modificacin postranscripcional del ARN mensajero. Esta caperuza estabiliza el extremo 5' del mensajero e impide que sea atacado por nucleasas, enzimas que degradan cidos nucleicos. La VP4 est situada en la parte externa del virin y forma una protuberancia, que es capaz de unirse a los receptores celulares de la clula para entrar en su interior. La VP4 debe ser modificada por una proteasa intestinal, para dar lugar a VP5* y VP8*, antes de que la partcula vrica sea infecciosa. La estructura de VP4 determina la virulencia del virus y que sea de tipo P. La VP6 es la protena principal de la cpside. Es altamente antignica y puede usarse para determinar la especie del rotavirus. Se usa en los ensayos clnicos para determinar la existencia de infeccin por rotavirus A. La VP7 es una glicoprotena que forma parte de la capa externa del virin. Aparte de sus funciones estructurales, determina el tipo G de la cadena, y junto con VP4, est implicada en la respuesta inmunitaria al virus. Protenas No Estructurales NSP1 es transcrita por el gen 5 y es una protena no estructural de unin a ARN.
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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE] NSP2 es una protena de unin a ARN, que se acumula en inclusiones citoplasmticas (viroplasma) y es necesaria en la replicacin del genoma. NSP3 est unida a ARNm en las clulas infectadas y es la responsable de la finalizacin de la sntesis proteica celular. NSP4 es una enterotoxina viral que induce diarrea y fue la primera enterotoxina viral que se descubri. NSP5 est codificada por el segmento 11 del genoma vrico del rotavirus A, y en las clulas infectadas se acumula en el viroplasma. NSP6 es una protena de unin a cido nucleico es codificada por el gen 11, en un marco abierto de lectura desfasado.

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Segmento del ARN (gen) 1 2

Genes y protenas del rotavirus Tamao Protena Peso Localizacin (pares molecular de bases) kDa 3302 2690 VP1 VP2 125 102 Vrtices del ncleo Forma la capa interna del ncleo Vrtices del ncleo Protuberancias superficiales No estructural

Funcin

ARN polimerasa ARN-dependiente Estimula la RNA replicasa viral Enzima guanilil transferasa de ARNm Atraque celular, virulencia No es esencial en el crecimiento del virus Estructural y antgeno especfico de cada especie Aumenta la actividad del ARNm viral y finaliza la sntesis de protenas celulares. NTPasa involucrada en el empaquetamiento de ARN Estructural y neutralizadora de antgenos. Enterotoxina Moduladora de la unin del ARNsc y ARNdc

2591

VP3

88

4 5

2362 1611

VP4 NSP1

87 59

1356

VP6

45

Cpside interna

1104

NSP3

37

No estructural

1059

NSP2

35

No estructural

1062

VP71 VP72 NSP4 NSP5 NSP6

38 y 34

Superficie

10 11

751 667

20 22

No estructural No estructural

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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE] Diagnstico y Tratamiento Pumarola 2 Edicin Mientras que gran nmero de rotavirus animales han podido mantenerse por pases en cultivos celulares, no ocurre 10 mismo con las cepas de rotavirus humanos. Recientemente se ha efectuado un gran avance en el cultivo de los rotavirus humanos, empleando tcnicas de cocultivo con rotavirus animales y tambien por inoculacin en celulas de mono en tubos rotatorios, previo tratamiento de las muestras por tripsina, con las que se ha conseguido aislar rotavirus del 75 %de muestras fecales. Los rotavirus producen diarreas en los animales jvenes de diversas especies (terneros, cerdos, corderos, conejos). En el hombre intervienen en la produccin de diarreas en los nios mayores de 6 meses, pues en estos casos se han podido observar rotavirus en las heces con mayor frecuencia, los nios desarrollan una respuesta inmune y su inoculacin a animales jvenes les produce diarrea. Tambien se han observado rotavirus en las heces de nios sanos, aunque en proporcin mucho menor, especialmente en nios menores de 6 meses sometidos a lactancia artificial. Se supone que se transmiten por contacto directo, por la va fecal-oral, sobre todo por manos sucias, aun cuando, debido a su resistencia a los agentes externos, es probable que tambien se produzca por contacto indirecto o a travs del agua y alimentos. Se encuentran y eliminan por las heces en cantidades elevadas 106-1011 /g, lo que representa una gran facilidad de transmisin, y son muy frecuentes las infecciones intrahospitalarias. Son virus muy difundidos, de manera que a partir de los 3 aos de edad gran nmero de nios presentan anticuerpos en su suero, par cuyo motivo no se presentan en forma de brotes en la comunidad. El mecanismo de produccin de la diarrea no se conoce con certeza. Los niveles de AMP cclico no se encuentran aumentados, pero la presencia de una gran cantidad de virus en las vellosidades intestinales, especialmente en las celulas mas diferenciadas de su extremidad, con una gran capacidad potencial de funciones, hace suponer que se produzcan alteraciones de la absarci6n y
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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE] del fisiologismo normal, probablemente dficit en la sintesis de diversas enzimas, que serian la causa de estos procesos. Se considera que los rotavirus intervienen en el 40-60 % de gastroenteritis en los nios de 6 meses a 2 aos de edad, que aparecen en invierno y son producidas especialmente por el serotipo 2. Despus de un periodo de incubacin corto, se presenta fiebre, vmito y diarrea (sin moco, sangre ni leucocitos), que puede variar desde una diarrea blanda a una acuosa con cierto grado de deshidratacin, y aunque por lo general el cuadro es benigno y se produce la curacin en 1-2 semanas (media de 5 das), se han observado casos de deshidratacin graves e incluso mortales. Los rotavirus tambien se han encontrado en las heces en casos de otras enfermedades (enfermedad de Crohn, esclerosis mltiple, esclerosis en placas, encefalitis, uremia hemoltica), cuyo papel en su determinismo se desconoce. El diagnstico se efecta par examen directo de las heces con el microscopio electrnico por el mtodo de tincin negativa, 10 que permite observar su imagen caracterstica siempre que su concentraci6n en las heces sea superior a 106/g. Se mejoran los resultados mediante mtodos de concentracin por centrifugacin o por la adicin de suero inmune (MEl). Tambien se utiliza la centrifugaci6n de los extractos de heces directamente sobre cultivos celulares, lo que facilita la infecci6n de las celulas, y puede demostrarse la presencia del virus o de sus antgenos por inmunofluorescencia. La necesidad de emplear mtodos de rutina que permitan detectar concentraciones menares de virus en las heces ha hecho que recientemente se empleen otras tcnicas, como la contrainmunoelectroforesis, el

radioinmunoensayo, hibridacin in situ y el test inmunoenzimtico ELISA, que es el mtodo de eleccin. Estos mtodos tambien se utilizan para la demostraci6n de anticuerpos en el suero de los enfermos, usando como antgeno cultivos de 6rganos, en especial la deteccin de las IgM especificas par IF 0 ELISA, e incluso la microscopia electrnica inmune, pues la adicin de suero del enfermo produce la aglutinacin de los viriones, pero hay que tener en cuenta que, debido a la presencia de infecciones inaparentes, los resultados son difciles de interpretar.
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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE] Dada la importancia de las diarreas infantiles por rotavirus como causas de morbilidad y mortalidad infantil, seria del mayor inters la obtencin de una vacuna eficaz, preparada con rotavirus animales o recombinantes, que administrada par va anal indujera la aparicin de anticuerpos locales (lgA secretora) en la mucosa intestinal del nio. Respecto a este se ha preparado una vacuna oral con mutantes ca adaptadas al frio de rotavirus bovinos (cepa NCDV), que ha dado buenos resultados. Sin embargo, los avances efectuados con las tcnicas de cultivo han hecho que se intente obtener mutantes atenuadas de rotavirus humanos o recombinantes entre un virus humano y uno animal, dada la existencia de un genoma segmentado. Tambien se estudia la posibilidad de obtener el antgeno protector principal (VP7) por la tcnica del ADN recombinante e incluso de conseguir por sintesis peptdica el eptope de dicho antgeno, previa determinacin de su secuencia en aminocidos. Par otra parte, el hecho de que los nios sometidos a lactancia materna presenten con menor frecuencia infecciones por rotavirus ha sugerido la posibilidad de proteger a los nios de alto riesgo por inmunizacin pasiva, ya vacunando a las madres y aumentando el titulo de IgA en la leche materna o mediante la administracin par va oral de y-globulina, que en experiencias en animales se ha demostrado eficaz. Murray 5a Edicin PATOGENIA E INMUNIDAD

Los rotavirus son capaces de sobrevivir en el entorno cido de un estmago tamponado o en un estmago despus de una comida. La replicacin vrica se produce tras la adsorcin en las clulas epiteliales cilndricas que recubren las vellosidades del intestino delgado.

Aproximadamente 8 horas despus del inicio de la infeccin se observan inclusiones citoplsmicas que contienen protenas recin sintetizadas y ARN. Durante la enfermedad se pueden eliminar hasta 10 10 partculas vricas por gramo de heces. Los estudios del intestino delgado, ya sea en animales
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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE] infectados experimentalmente o en muestras de biopsia de lactantes, revelan atrofia y aplanamiento de las microvellosidades e infiltracin de clulas mononucleares en la lmina propia. Al igual que el clera, la infeccin por rotavirus impide la absorcin de agua, lo que provoca una secrecin neta de agua y la prdida de iones y, en conjunto, da lugar a diarrea lquida. La protena NSP4 de los rotavirus puede actuar de manera semejante a una toxina para estimular la entrada del ion calcio en los hemates, la liberacin de activadores neuronales y provocar una alteracin neuronal de la absorcin de agua. La prdida de lquidos y electrlitos puede originar una deshidratacin grave, e incluso la muerte cuando el tratamiento administrado no contemple el aporte de electrlitos. La inmunidad frente a la infeccin requiere la presencia de anticuerpos, principalmente de inmunoglobulina (Ig) A en la luz del intestino. Los anticuerpos adquiridos de manera activa o pasiva (como los anticuerpos del calostro y de la leche materna) pueden reducir la gravedad de la enfermedad, aunque no son capaces de impedir sistemticamente la reinfeccin. En ausencia de anticuerpos, la inoculacin incluso de pequeas cantidades de virus provoca infeccin y diarrea. La infeccin en los lactantes y nios pequeos generalmente es sintomtica, mientras que en los adultos suele ser asintomtica.

EPIDEMIOLOGA Los rotavirus son ubicuos en todo el mundo, estando infectados cerca del 95% de los nios cuando tienen de 3 a 5 aos de edad (cuadro 62-3). Se cree que los rotavirus se transmiten de una persona a otra por va feco-oral. La diseminacin mxima del virus tiene lugar entre 2 y 5 das despus del inicio de la diarrea, aunque es posible que no vaya acompaada de la aparicin de sintomatologa. El virus sobrevive bien en fmites como los muebles y los juguetes, as como en las manos, pues resiste la desecacin. Aunque los animales domsticos portan rotavirus serolgicamente relacionados, no se cree que sean una fuente habitual de infeccin para el ser humano. Se producen brotes epidmicos en centros de educacin preescolar, guarderas y en nios hospitalizados.
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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE] Los rotavirus son una de las causas ms habituales de diarrea grave en nios pequeos a nivel mundial, afectan a ms de 18 millones de lactantes y nios y causan alrededor de 1 milln de muertes anuales por deshidratacin. En Norteamrica se producen brotes anuales durante el otoo, el invierno y la primavera. El cuadro ms grave aparece en nios con desnutricin grave. La diarrea por rotavirus es una enfermedad grave y muy contagiosa, con riesgo de muerte para los lactantes de los pases en vas de desarrollo, y se registra durante todo el ao. En China se han producido varios brotes relacionados con los rotavirus del tipo B que afectaron a millones de personas debido a la contaminacin del agua suministrada.

ENFERMEDADES CLNICAS

Los rotavirus causan principalmente gastroenteritis. El perodo de incubacin de la diarrea asociada a os rotavirus se es tima en 48 horas. Los sntomas clnicos principales en los pacientes hospitalizados son vmitos, diarrea, fiebre y deshidratacin. En esta forma de diarrea no aparecen leucocitos ni sangre en heces. La gastroenteritis por rotavirus es una enfermedad de resolucin espontnea, y su recuperacin generalmente es completa y sin secuelas. Sin embargo, la infeccin puede llegar a ser mortal en lactantes que viven en pases en vas de desarrollo y presentan desnutricin y deshidratacin antes de contraer la infeccin.

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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE] DIAGNSTICO DE LABORATORIO

Los sntomas clnicos en pacientes con infecciones por rotavirus se parecen a los de otras diarreas vricas (p. ej., virus de Norwalk). La mayora de los afectados tienen grandes cantidades de virus en las heces, lo que convierte a la deteccin directa del antgeno vrico en el mtodo de eleccin para el diagnstico. El enzimoinmunoanlisis y la aglutinacin de ltex son mtodos rpidos, fciles y relativamente econmicos para detectar la presencia de rotavirus en las heces. En las muestras tambin se pueden detectar de forma directa la presencia de partculas vricas mediante microscopa electrnica. El cultivo celular de los rotavirus es complejo y no se puede llevar a cabo con fines diagnsticos. Los estudios serolgicos se utilizan principalmente en trabajos de investigacin y epidemiolgicos. Puesto que hay muchos individuos que tienen anticuerpos especficos frente a rotavirus, se necesita un incremento del ttulo de anticuerpos hasta el cudruple para establecer el diagnstico de infeccin reciente o enfermedad activa.

TRATAMIENTO, PREVENCIN Y CONTROL

Los rotavirus se adquieren a edades muy jvenes. Su naturaleza ubicua hace difcil limitar la diseminacin y la infeccin por estos virus. De todos modos, los pacientes hospitalizados con un cuadro clnico se deben aislar con el fin de limitar la diseminacin de la infeccin a otros pacientes vulnerables. No existe ninguna terapia antivrica especfica para la infeccin por rotavirus. La morbimortalidad asociada a la diarrea por rotavirus es consecuencia de la deshidratacin y el desequilibrio, electroltico. El objetivo del tratamiento complementario es sustituir lquidos de manera que se pueda corregir el volumen sanguneo y los desequilibrios electroltico y cido-base. El desarrollo de una vacuna segura frente a los rotavirus constituye un objetivo prioritario con el fin de conferir proteccin a los nios, especialmente los de pases subdesarrollados, frente a una enfermedad potencialmente mortal. Se han preparado vacunas experimentales a partir de rotavirus animales, como el
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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE] rotavirus del mono rhesus y el virus de la diarrea de los terneros de Nebraska. Estas vacunas comparten determinantes antignicos con los rotavirus humanos, no provocan la enfermedad en el ser humano y confieren proteccin frente a la infeccin. Las dos vacunas incluidas en ensayos clnicos son una vacuna atenuada basada en una nica cepa de virus humano y una mezcla de cinco antgenos de distintas cepas de virus elaborada como un virus hbrido bovino humano atenuado. Una vacuna reciente basada en un virus hbrido Humano-Rhesus aprobada por la Food and Brug Administration (FDA) estadounidense confera proteccin, pero se retir en 1999 debido a la incidencia de invaginacin. Es posible que las vacunas no ofrezcan proteccin frente a todos los serotipos de rotavirus. La Vacuna Los estudios con vacunas frente al rotavirus se empezaron a desarrollar en 1982. El objetivo era reproducir la infeccin natural con la administracin oral de un rotavirus vivo atenuado y prevenir as la enfermedad grave y la mortalidad con las infecciones posteriores. Las primeras vacunas se basaron en el modelo jenneriano y utilizaron cepas de rotavirus animales, de ms fcil crecimiento que las cepas humanas y naturalmente atenuadas. Los estudios iniciales utilizaron una vacuna de rotavirus bovina, monovalente y oral (RIT 4237) con buenos resultados iniciales en Finlandia, pero una escasa respuesta en pases en vas de desarrollo. A continuacin se ensayaron las vacunas monovalentes de mono rhesus y humana de virus atenuados, con una gran variabilidad en los resultados atribuida a la falta de proteccin especfica de la vacuna monovalente. As surgi la segunda generacin de vacunas, las llamadas vacunas resortantes o recombinantes. La primera vacuna desarrollada fue la de rotavirus resortante rhesus-humano tetravalente, que inclua tres virus resortantes, correspondientes a los serotipos G1, G2 y G4 humanos, y una cepa de rotavirus del mono rhesus antigenicamente similar al serotipo G3 humano. Los estudios de eficacia en Finlandia, EEUU y Venezuela demostraron una disminucin en la incidencia de gastroenteritis grave por rotavirus en un 70-90% de los nios vacunados. En
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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE] 1998 la vacuna fue autorizada en EEUU con el nombre comercial de RotaShield y poco despus fue recomendada su utilizacin por el Comit Asesor de Inmunizaciones de EEUU (ACIP) junto con los CDC y la Academia Americana de Pediatra. Pocos meses despus la vacuna fue retirada por su posible asociacin con una mayor incidencia de invaginacin intestinal tras la aplicacin de la primera dosis, aunque los estudios posteriores no han logrado encontrar una asociacin definitiva. En la actualidad se reconoce la invaginacin tras la administracin de RotaShield como un efecto adverso infrecuente, lo que hace que los estudios de seguridad de futuras vacunas deban incluir un mnimo de 60.000 sujetos para detectar un riesgo de esa magnitud. El fracaso de esta vacuna supuso un enlentecimiento en el desarrollo de vacunas contra rotavirus por una parte, pero por otra ayud a una mejor concienciacin de la enfermedad y su importancia como una causa importante de mortalidad infantil en pases en vas de desarrollo. As, en el ao 2000, la OMS consider prioritario el desarrollo de nuevas vacunas bajo un estricto nivel de seguridad crendose un Programa de Vacunas contra rotavirus, cuyo principal objetivo es acelerar la disponibilidad de vacunas econmicamente accesibles cuyo uso resulte apropiado en los pases en desarrollo. En la actualidad estn en fase de estudio varias vacunas orales de virus vivos atenuados y dos de ellas estn incluidas en estudios clnicos a gran escala en fase III. Por una parte la vacuna procedente de la cepa resortante bovina-humana constituida por 4 serotipos (G1, G2, G3 y G4) y el genotipo P8, ha demostrado una alta eficacia (cercana al 100%) en la prevencin de la enfermedad moderada o grave producida por rotavirus as como una eficacia en torno al 70% en la prevencin de cualquier tipo de GEA producida por rotavirus. Adems, los estudios realizados comprueban su tolerancia e inmunogenicidad, aunque la respuesta de anticuerpos neutralizantes est dirigida principalmente a la cepa bovina. Por otra parte, otra vacuna monovalente procedente de rotavirus humanos atenuados (Cepa RIX4414), incluyendo los antgenos VP7 y VP4 ms
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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE] frecuentes en patologa humana ha obtenido igualmente resultados de alta eficacia en la prevencin de las diarreas producidas por rotavirus, especialmente en el caso de las formas graves que requieren hospitalizacin. Los estudios clnicos realizados en Finlandia, Latinoamrica (Brasil, Mjico y Venezuela) y Asia (Singapur) con dos dosis mostraron una eficacia del 70-73% frente a cualquier diarrea por rotavirus y del 86-90% frente a la diarrea grave sin que se haya observado una mayor incidencia de efectos secundarios respecto al grupo control. Esta vacuna ha sido comercializada recientemente en Mxico. En los estudios realizados a gran escala con ms de 60.000 nios con ambas vacunas, no se ha observado una mayor incidencia de casos de invaginacin intestinal en los nios vacunados con respecto a placebo. En la actualidad, existen otras lneas de investigacin de desarrollo de nuevas vacunas frente a rotavirus que permitan una mayor efectividad

fundamentalmente en pases en vas de desarrollo. As, se han planteado varias modificaciones en las vacunas de segunda generacin, como la encapsulacin de partculas vricas o el uso de otras vas de administracin, como la intranasal. As mismo se estn investigando vacunas de tercera generacin que incluyen el desarrollo de particulas sin ARN viral (VLPs) con los antgenos mayores del rotavirus y vacunas de ADN plasmdico, que codificaran protenas vricas especficas. Por tanto, el futuro de las vacunas frente a rotavirus es prometedor. Los estudios de eficacia, seguridad e inmunogenicidad con dos dosis de vacuna de rotavirus humano monovalente (Rotarix ) y tres dosis de vacuna recombinante bovino-humana pentavalente (RotaTeq ) permiten considerar su prxima disponibilidad. Ambas estn incluidas en estudios clnicos a gran escala en fase III, la primera principalmente en pases en va de desarrollo y la segunda en pases industrializados.

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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE] Sin embargo, existen algunos interrogantes como cul es la carga real de la enfermedad, grado de proteccin heterotpica que confieren las distintas vacunas, duracin de la inmunidad, precio de la vacuna, etc a los que debemos encontrar respuesta en los prximos aos, antes de concluir una posible recomendacin de vacunacin universal.

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BUNYAVIRIDAE
El supergrupo Bunyaviridae comprende por lo menos 200 virus con ARN de cadena negativa segmentado, y con envoltura. El supergrupo se divide en cinco gneros sobre la base de caractersticas estructurales y bioqumicas: Bunyavirus, Phlebovirus, Uukuvirus, Nairovirus y Hantavirus . La mayora de los bunyavirus son arbovirus (virus transmitidos por artrpodos), diseminados por mosquitos, garrapatas o moscas, y endmicos en el vector. medio ambiente del

ESTRUCTURA Estos virus son partculas aproximadamente esfricas con 90 a 120 nm de dimetro . La envoltura del virus contiene dos glucoprotenas (GI y G2) y engloba tres ARN de cadena negativa nicos, asociados con protenas (nuclecleocapside). Las nucleocpsides incluyen los ARN grande (L), mediano (M) y pequeo (S), asociados con la ARN polimerasa ARN dependiente (protena L) y dos protenas no estructurales (NE, NEn) (. A diferencia de otros virus con ARN de cadena negativa, los bunyavirus no tienen una protena de la matriz. Los cinco gneros del supergrupo se distinguen por variaciones en el tamao de las protenas del virin,la longitud de las cadenas L, M y S del genoma y su transcripcin.

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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE] REPLICACION Los bunyavirus siguen las reglas de replicacin de los virus con cadena negativa y envolura. La glucoprotena G1 del virus interacciona con receptores de la superficie celular, experimenta endocitosis y se funde con las

membranas endosmicas en el medio ambiente cido de la vescula. La liberacin de la nucleocpside en el citoplasma permite que comience la sntesis de ARNm y protenas. La cadena M codifica la protena no estructural NEm y las glucoprotenas G1 (protena de adherencia vrica) y G2, y la cadena L codifica la protena L (polimerasa). La cadena S del ARN codifica dos protenas no estructurales, N y NE. La cadena S de los flebovirus es ambisentido, lo que permite que el ARNm de la protena N sea transcrita directamente del genoma, mientras que el ARNm de la protena NE, se transcribe desde el intermediario replicativo. La replicacin del genoma por la protena L proporciona tambin nuevas plantillas para transcripcin, lo que aumenta la tasa de sntesis de ARNm. Las glicoprotenas son sintetizadas y glucosiladas en el retculo endoplsmico. Despus son transferidas al aparato de Golgi, donde se produce la gemacin del virus. La G1 y la G2 no son translocadas a la membrana plasmtica. CARACTERISTICAS PECULIARES DE BUNYAVIRUS -Por lo menos 200 virus relacionados, pertenecientes a cinco gneros, que comparten morfologa y componentes bsicos comunes. - Virin con envoltura y nucleocpsides con 3 nucleocpsidas de ARN negativo (L, M, S) y ausencia de proteina de la motriz -El virus se replica en el citoplasma -El virus puede infectar q.humanos y artrpodos -El virus de los artrpodos puede ser transmitido o los huevos de los artrpodos

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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE] AGENTES PRIMARIA ANTIMICTICOS Y LUGARES DE ACTIVIDAD

Genoma (ARN de cadena negativa) L (2,9 x 106) M (1,6 x 106)

Protenas L ARN polimerasa, 170 kd G1 Glucoproteina de punta, 75 kd G2 Glucoprotena de punta, 65 kd NEm Protena no estructural, 1 5 a 17 kd

S (0,4 x 106)

N Protena de lo nudeocpside, 25 kd NEs Protena no estructural, 10 kd

PATOGENIA Como Los arbovirus, los bunyavirus comparten muchos mecanismos patgenos de los togavirus y flavivirus . El virus es diseminado por el vector
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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE] artrpodo e inyectado en la sangre para iniciar una viremia. La progresin a partir de esa fase hacia la viremia secundaria y la mayor diseminacin del virus puede transportarlo a los rganos diana caractersticos de la enfermedad vrica cada virus, como el SNC, rganos (como el hgado , rin) y el endotelio vascular. Los bunyavirus causan encefalitis por lesin neuronal y glial, as como edema cerebral. Las lesiones se concentran en la sustancia gris cortical de los lbulos frontales, temporales y parietales, los ncleos basales, el mesencfalo y el puente. En ciertas infecciones virmicas (p. ej, fiebre del Valle Rift) se puede producir necrosis heptica. En otras (p. ej, fiebre hemorrgica de Crimea e infeccin por virus Hantaan), la lesin primaria se caracteriza por edema y extravasacin de hemates. En la infeccin por virus Hantaan esos cambios son ms prominentes en el rin y se acompaan de necrosis hemorrgica renal. EPIDEMIOLOGA Estos virus son transmitidos por mosquitos, garrapatas o de flebotomos a roedores, aves y animales ms grandes cuadro . Los animales se convierten en reservorios para continuar el ciclo de infeccin. Los seres humanos son

infectados al entrar en el entorno del insecto vector. A diferencia de otros muchos arbovirus, gran parte de los bunyavirus pueden sobrevivir durante el invierno en los huevos de los mosquitos y permanecer asi en geogrfica. El grupo Hantavirus no tiene vector la zona

artrpodo, sino que se

disemina de mamfero a mamifero usualmente roedores, y puede contagiar directamente a los humanos mediante aerosoles. Muchos miembros de esta familia de virus se encuentran en Sudamrica, sudeste de Europa, sudeste de Asia y frica, y comparten los nombres exticos de sus ni ecolgicos. Los componentes del grupo de virus de la encefalitis de California (p. ej., virus LaCrosse) se encuentran en los bosques de Norteamrica y causan encefalitis humana en Estados Unidos. Un brote epidmico de sndrome de distrs respiratorio del adulto, acaecido durante 1993 en el sudoeste de Estados Unidos, fue atribuido a un hantavirus. Esos
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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE] virus son difundidos principalmente por mosquitos Aedes, sobre todo durante los meses de verano. SNDROMES CLNICOS Los bunyavirus (transmitidos por mosquitos) suelen causar una enfermedad febril inespecfica relacionada con la viremia. Indistinguible de la producida por otros virus. El perodo de incubacin es de aproximadamente 48 horas y la fiebre dura alrededor de tres das. La mayora de los pacientes experimentan un cuadro leve, incluso los infectados por agentes capaces de causar enfermedad grave (p. ej., virus de la fiebre del Valle Rift o virus LaCrosse). El comienzo de la encefalitis (p. ej. por virus LaCrosse) es sbito tras un perodo de incubacin de aproximadamente una semana, con fiebre, cefalea, letargia y vmitos. El 50% de los pacientes con encefalitis experimentan convulsiones, generalmente al principio de la enfermedad. Los signos de irritacin menngea slo se encuentran en la tercera parte de los casos. Como media,la enfermedad dura siete das. La mortalidad es inferior al 1%, pero hasta el 20% de los pacientes pueden experimentar secuelas en forma de trastornos convulsivos. Las fiebres hemorrgicas, como la del Valle Rift, se caracterizan por hemorragias petequiales, equimosis, epistaxis, hernatemesis, melena y gingivorragia. La mortalidad puede llegar al 50% en los casos con fenmenos hemorrgicos. MECANISMOS PATGENOS DE LOS BUNYAVIRUS 1- El virus se contagio con la picadura de un artrpodo (p. ej., mosquito) 2- La viremia inicial puede causar sntomas de tipo gripal 3- El desarrollo de viremia secundario puede permitir que el virus llegue a tejidos diana especficos: SNC, otros rganos y endotelio vascular. Los anticuerpos son importantes para controlar la viremia; el interfern y la inmunidad mediada por clulas pueden prevenir el progreso de la infeccin.

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EPIDEMIOLOGIA DE LAS INFECCIONES POR BUNYAVIRUS ENFERMEDAD/FACTORES VIRICOS -Capacidad para replicarse en clulas de mamfero y de artrpodo -Capacidad para pasar al ovario e infectar los huevos de artrpodo, lo que permite al virus sobrevivir durante el invierno TRANSMISIN -Por artrpodos o travs de fisuras cutneas -Grupo encefalitis de California: transmitidos por mosquitos Aedes -Los mosquitos Aedes se alimentan durante el da y viven en los bosques -Los mosquitos Aedes ponen huevos en pequeos charcas de agua entre los rboles, neumticos, etc.

QUIN EST EN RIESGO? -Personas en el hbitat del artrpodo vector - Grupo encefalitis de California: campistas, guardabosques, leadores
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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE] GEOGRAFA/ESTACIN -La incidencia de la enfermedad guarda relacin con la distribucin del vector -La enfermedad es ms permanente en verano MODOS DE CONTROL -Eliminacin del vector o de hbitat -Evitar el hbitat del vector

DIAGNSTICO DE LABORATORIO El diagnstico de la enfermedad por bunyavirus es en general serolgico. Las tcnicas de neutralizacin, si se dispone de cultivos celulares apropiados, proporcionan el mtodo de eleccin, aunque tambin se usan otras pruebas. La determinacin de IgM especfica tiene utilidad para documentar la infeccin aguda. La seroconversin o el aumento de por lo menos cuatro veces en el ttulo de anticuerpos IgG tienen valor para documentar la infeccin reciente, aunque son comunes las reacciones cruzadas entre gneros vricos. Las tcnicas ELISA permiten detectar antgenos en muestras clnicas de los pacientes con niveles altos de viremia (p. ej., fiebre del Valle Rift, fiebre hemorrgica con sndrome renal y fiebre hemorrgica de Crimea). Se han
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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE] introducido pruebas ELISA para detectar antgenos viviricos en los mosquitos. El aislamiento del virus a partir de muestras habituales puede ser difcil y quizs exija cultivos celulares especiales o inoculacin a ratones lactantes. TRATAMIENTO, PREVENCIN Y CONTROL No se dispone de tratamiento especfico para las infecciones por bunyavirus. La enfermedad humana se previene al interrumpir el contacto con el vector, sea un artrpodo o un mamfero. Los vectores artrpodos son controlados mediante eliminacion de las condiciones que permiten su multiplicacin, pulverizacin de insecticidas, uso de mosquiteros y prendas protectoras, y control de la infestacin por garrapatas en los animales. El control de los roedores minimiza la transmisin de muchos virus, sobre todo el Hantaan. Se han introducido vacunas contra la fiebre del Valle Rift para uso en humanos y animales (ovejas y vacas). Discusiones: - Los segmentos del genoma parental de RNA bicatenario nunca escapan de la SVP.

Conclusiones: - Virus cuyo genoma es RNA bicatenario segmentado, cada segmento va codificar una protena. Se forma un ARNm el cual va ser traducido en protenas o tambin puede ser utilizado para la sntesis de nuevo genoma viral.

Referencias Bibliograficas:

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[FAMILIA REOVIRIDAE Y BUNYAVIRIDAE] Zinsser, Microbiologa, 20 edicin, Editorial Medica Panamericana, Buenos Aires-Argentina, 1994. Acton J, Virologia, 1 ed, Editorial Interamericana, Mxico, 1967. Patrck R. Murray,2 edicin, Editorial Elsevier, Espaa. Jawetz, Melnick y Adelberg.2002. Geo F.Brooks. Microbiologa Mdica de editorial el manual moderno. Mxico, DF. Pumarola A. , 2 edicin, Savat Editores, Espaa.

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