Morfologa Microscpica y Macroscpica Wendy Salamanca, Wilmer Urrutia, Wilfredo Ortiz Microbiologa General, Universidad de Pamplona 2012 RESUMEN

Los microorganismos son ubicuos, (que se encuentran en cualquier lugar del entorno humano: suelo, agua, etc.), las condiciones ambientales son las que determinan las caractersticas de los microorganismos presentes como la variedad de especies o el numero poblacional. La morfologa macroscpica se encarga de estudiar los aspectos grandes o bruscos de las bacterias como el tamao la forma y el ordenamiento, la microscopia se indica al estudio de las estructuras fina de la bacterias que comprenden la pared celular, la membrana etc. Palabras claves: cultivo axnico, medio de cultivo, tcnica asptica, ubicuos. INTRODUCCIN Cuando los microorganismos crecen sobre medios slidos crean colonias de clulas en principio provenientes de un individuo originario. Las caractersticas fsicas de las colonias son de gran ayuda en la identificacin. Cada microorganismo crece de manera diferente formando colonias de distinto color, forma, tamao, textura, olor, brillo, etc. Existen colonias ms o menos elevadas, con bordes enteros, estrellados, deflecados, y un largo etc. El tiempo de incubacin necesario para que aparezcan las colonias tambin puede tener valor en la identificacin. Cuando las bacterias crecen en la superficie de un medio nutritivo solidificado con agar o gelatina, las clulas que proliferan quedan prcticamente en posicin fija y forman masas de millones y millones de clulas observables a simple vista. Las colonias as formadas tienen dimensiones desde las mnimas apenas visibles hasta masas de varios milmetros de dimetro. Presentan caractersticas no solo de volumen sino tambin de forma y textura, y en algunos casos de color que, si bien hasta cierto punto depende de la naturaleza del medio de cultivo y de las condiciones de incubacin, en circunstancias establecidas son constantes y muchas veces de gran valor diferencial. La morfologa de las colonias constituye una de las caractersticas morfolgicas de las bacterias indispensables para su aislamiento. La dimensin de las colonias bacterianas es muy uniforme para cada especie o tipo. La forma de la colonia depende de su borde y de su espesor. El borde puede ser liso o irregular, y aserrado en mayor o menor grado. Cuando el espesor es mucho mayor en el centro y disminuye uniformemente hacia el borde, se dice que la colonia es elevada, en ocasiones tanto que casi tiene forma hemiesfrica o puede ser uniforme. La consistencia y la textura

de la masa de clulas tambin son caractersticas disitintivas de la morfologa colonial. La pigmentacin es ms frecuente en las bacterias saprofitas, y la masa celular puede tener color rojo, anaranjado, amarillo, etc., por la presencia de pigmentos carotinoides y es verde en caso de algunas bacterias fotosintticas que contienen bacterioclorina. Como estas caractersticas ocurren en grados y combinaciones variables segn los tipos de bacteria, el aspecto de la colonia muchas veces es plenamente caracterstico y pueden distinguirse tipos de bacterias entre s en cultivos mixtos o contaminados. Sin embargo, la diferenciacin por la morfologa de las colonias no solo ha sido provisional; se necesita un estudio detallado de la fisiologa y las caractersticas inmunolgicas de una bacteria para identificarla Aunque las bacterias son sumamente diminutas, es posible medir sus dimensiones con relativa facilidad y precisin para este fin el microscopio se equipa con un ocular micromtrico que proporciona el tamao de la bacteria , las clulas bacterianas individuales son elipsoidales, esfricas, alargadas, cilndricas o en espiral, helicoidales .Cada una de estas formas es propia de una especie determinada. De esta forma las bacterias se clasifican en cocos bacilos espirales esto en la morfologa gruesa o macroscpica. A comienzos de las dcadas de 1940 se pudo disponer del microscopio electrnico como instrumento de laboratorio para microbilogos. El

increble alto poder de resolucin alcanzable con este microscopio, aunado a un nuevo mtodo para preparar muestras, hizo posible identificar las partes estructurales de una clula individual desarrollaron tcnicas mediante las cuales una bacteria se pueda cortar en secciones muy finas y ser examinadas por microscopia electrnica, una de las limitaciones de la microscopia es el escaso contraste. Se pueden utilizar colorantes para teir las clulas y a aumentar as su contraste facilitando su observacin .Los colorantes son compuestos orgnicos y cada uno tiene su determinada afinidad por determinados componentes celulares muchos de los colorantes utilizados con frecuencia en microbiologa estn cargados catatnicos y se combinan fuertemente con constituyentes celulares cargados negativamente, como los cidos nucleicos y los polisacridos cidos entre los colorantes se puede citar:

Azul de safranina.

metileno,

cristal

violeta,

TINCION DE GRAM: su mtodo de utilizacin es el siguiente, se realizan sobre un porta con una suspensin de microorganismos previamente secada y

fijada, se derrama una pequea cantidad de una solucin diluida del colorante y se mantiene el contacto durante uno o dos minutos; a continuacin, se lava varias veces con agua y se seca este tipo de preparacin suele observarse con un objetivo de inmersin. Esta es una tincin diferencial como su nombre lo indica no tien del mismo modo todos los tipos de clulas, tcnicas a resaltar las tinciones simples: en las cuales se observa morfologa y agrupamiento estas son llevadas a cabo con un solo colorante, la tincin compuesta en estas se utilizan dos o ms colorantes estas diferencian grupos de microorganismos y estructuras la ms utilizada dependiendo el resultado de esta tincin las bacterias pueden dividirse en dos grandes grupos Gram positivas que presentan de un color morado y Gram negativas presentan un color rojo, estas diferencias de la tincin de Gram se debe a la diferencia de la estructura de la pared celular de las bacterias Grampositivas y Gramnegativas de tal manera que el alcohol es capas de decolorar las clulas gramnegativas y no las gramnegativas.

Las clulas generalmente son tratadas para coagular el protoplasma antes de teirlas, proceso llamado fijacin. Para bacterias, la fijacin por el calor es lo ms corriente, aunque tambin puede fijarse con sustancias qumicas como formaldehido, cidos y alcoholes. La fijacin se realiza habitualmente en clulas que han sido fijadas sobre un portaobjetos, tratando despus ste con el agente fijador, y siguiendo inmediatamente el proceso de tincin. La fijacin produce habitualmente el encogimiento de las clulas; la tincin, por el contrario, hace que las clulas aparezcan mayores que lo que son realmente, de manera que las medidas de las clulas que han sido fijadas o teidas no pueden realizarse con mucha precisin. MEDIOS DE CULTIVO: Son las soluciones nutritivas que se usan en el laboratorio para el cultivo de los

microorganismos .En microbiologa se usan dos tipos generales de cultivo los qumica mente definidos o complejos. Los medios definidos se preparan aadiendo cantidades precisas de compuestos orgnicos o inorgnicos purificados a un volumen de agua destilada .Por tanto se sabe la composicin qumica exacta de un medio definido .Los medios complejos pueden ser entonces adecuados o incluso ventajosos por varias razones. A menudo los medios complejos emplean hidrolizados de casena (la protena de la leche) carne soja levaduras u otras sustancias muy nutritivas pero sin embargo no definidas qumicamente tales hidrolizados estn disponibles comercialmente en forma de polvo y pueden ser pesados con facilidad y disueltos en agua destilada para preparar un medio. No obstante, una limitacin importante al usar medio complejo es que no se puede controlar su composicin nutritiva exacta.

aisladas visibles llamasa colonias estas pueden ser de tamao y forma variable de pendiendo del organismo ,las condiciones de cultivo el suministro de nutrientes (como la cantidad de oxigeno presente), y otros parametros fisiologicos . Los medios solidos se preparan igual que los liquidos salvo que antes de esterilizar los medios, se les aade agar como agente gelificante normalmente al 1.5%. el agar se funde durante el proceso de estrelizacion y el medio fundido se vierte sobre la placa de cristal o de plastico y se deja que se solidifique antes de usarce.

PARTE EXPERIMENTAL Caractersticas macroscpicas A partir de los cultivos de referencia realizamos la descripcin macroscpica de: Los medos de cultivo se preparar con frecuencia en forma semisolida o solida mediante la adicin al medio liquido de un agente solidificante .los medios solidos inmovilizan a las celulas , permitiendoles crecer y formar masas Salmonella spp, Pseudomonas, Staphylococcus aureu, Bacillus cereus, Klebsiella spp, E. coli, Streptococus spp, Cerratia spp. 2 A partir de un pool microbiano se realizo dos siembras por agotamiento sobre agar nutritivo

3 Se incubo cajas durante 24 horas a 37 grados centgrados y se observo su crecimiento 4 Observamos el crecimiento de dos cultivos mixtos. 5 A partir de 5 cultivos mixtos seleccionar 3 colonias de diferente morfologa. Caractersticas microscpicas: 1) partir de un pool microbiano realizamos una tincin simple con azul de metileno que se le adiciono al frotis durante un minuto des pues de ello lavamos con agua destilada dejamos secar observamos a 100x por ultimo describimos morfologa y agrupamiento 2) A partir de un pool microbiano realizamos la tincin compuesta Gram: adicionamos cristal violeta durante un minuto lavamos, se adiciono lugol durante un minuto lavamos nuevamente con agua destilada adicionamos alcohol cetona durante 20 seg lavamos con agua destilada se adicion safranina por 1 minuto y posteriormente se lav por ultimo observamos a 100x. RESULTADOS: Los resultados se muestran en la Tabla 1 (Resultados Morfologa Macroscpica). DISCUSION DE RESULTADOS Para el sembrado de cultivo se llevaron a cabo tres mtodos: en placa (por agotamiento) en medio lquido (con

caldo nutritivo), y en medio Slido con pico de flauta con 3 diferentes bacterias para posteriormente incubarlas bacterias. Luego de la incubacin se observaron sus caractersticas macroscpicas y estasn varian deacuerdo a su crecimiento en el medio de cultivo. CONCLUSIONES Durante esta experiencia se llev a cabo la observacin de las caractersticas macroscpicas de bacterias en diferentes medios de cultivo y con diferente mtodo de siembra, tambin se llev a cabo la observacin de las caractersticas microscpicas, con lo cual se lleva a a la conclusin de que por cada bacteria o microorganismo hay caractersticas que la diferencian de los dems, lo cual hace que facilite su identificacin BIBLIOGRAFIA 1. Michael T. Madigan, John M. Martinko, Jack Parker, BROCK, BIOLOGIA DELOS MICROORGANISMOS dcima edicin. 2. Martos P., Salido F., Fernndez M., Microbiologa clnica prctica, 2 edicin, Repeto, Cdiz.

3. Wollin, M. Tratado de microbiologa, 20ed, Editorial Interamericana, Mxico (1973) p.p. 901.

Tabla 1: Resultados Morfologa Macroscpica

BACTERIA Salmonella spp Pseudomona spp Serratia spp Klebsiel spp Bacillus cereus Streptoccocos spp Serratia spp Sthapylococo s aureus TAMAO pequeo FORMA puntiforme ELVACION convexa MARGEN Entero COLOR Amarillo translucido amarillo claro rojo Crema blanca Blanco veis Crema blanca rojo Blanco plido SUPERFICIE lisa ASPECTO translucida COSISTENCIA blanda

Mediano Mediano Grande Mediano Pequeo Mediano Pequeo

Irregular Puntiforme Irregular Irregular Puntiforme Puntiforme Puntiforme

Plana Elevada Convexa Plana Elevada Elevada Plana

Ondulada Entero Ondulada Ondulada Entero Entero Entero

Lisa Lisa Lisa Rugoso Lisa Lisa Lisa

Translucid a opaca Opaca Opaca Translucid a opaca Opaca

Blanda Blanda Blanda Blanda Blanda Blanda Blanda

Seale las ventajas en cuanto a observaciones de las colonias en medios slidos frente a medios lquidos Observacin macroscpica: El tamao de las bacterias impide verlas a simple vista. Sin embargo, las colonias que forman sobre medios slidos s son visibles, y en ellas se puede estudiar una serie de caractersticas que nos ayudan a su identificacin. A nivel morfolgico, podemos estudiar la forma de las colonias, su tamao, aspecto del borde (liso, rugoso, ondulado, ramificado, etc.), presencia de brillo, color, etc. Incluso sobre medio lquido las bacterias producen modificaciones de inters para su clasificacin y que tienen que ver esencialmente con las caractersticas de su metabolismo. As se observa si la turbidez es uniforme, si crecen en el fondo, si lo hacen en la zona superficial, si producen pigmentos, etc.