Desarrollo, especificacin y diversidad de las neuronas de proyeccin callosas

Dr. Eduardo Castro-Sierra HIMFG/ENM-UNAM

Introduccin. Fame RM et al. TINS 2011; 34:41-50. Harvard U. Boston.

La neocorteza contiene cientos de distintos subtipos neuronales. La complejidad de la cognicin y la conducta asociativa se expande con abundancia y diversidad incrementadas de singular y precisa conectividad entre estos subtipos neuronales. Las neuronas de proyeccin callosa (NPC) tienen un papel fundamental en esta complejidad asociativa de alto nivel.

Introduccin

Estas son neuronas piramidales interhemisfricas comisurales, cuyos axones mielinizados conforman al cuerpo calloso. Este tracto, el mayor en los mamferos placentarios, conecta a los 2 hemisferios cerebrales.

Desarrollo
Desarrollo de la neocorteza. Durante el desarrollo de la neocorteza, las poblaciones iniciales de progenitores parcialmente restringidos secuencialmente originan a las neuronas, la astrogla y la oligodendrogla.
Las poblaciones neuronales se pueden dividir en:
a) Neuronas de proyeccin excitatorias glutamatrgicas (NEGLU) b) Interneuronas inhibitorias GABArgicas (NIGABA)

Desarrollo

Las NEGLU se desarrollan primero a partir de progenitores apicales y basales tempranos en la zona ventricular (VZ) del palio dorsal, y despus de progenitores intermedios basales en la zona subventricular (SVZ). Las NIGABA, por su parte, se desarrollan a partir de progenitores en las eminencias ganglionares del subpalio ventral.

Desarrollo
Las 6 capas de la neocorteza progresivamente se forman, de adentro hacia afuera, durante el desarrollo embrionario, con migracin de las neuronas tardas superficiales ms all de las neuronas tempranas profundas. Esas neuronas superficiales se crean de progenitores basales intermedios tardos de la SVZ, un tipo de progenitor amplificador del trnsito generado de progenitores de la gla radial.

Desarrollo
Las neuronas con la misma localizacin laminar comparten una fecha comn de procreacin; sin embargo, an dentro de la misma capa, muchos subtipos neuronales, anatmica y molecularmente distintos, coexisten.
As, existe una substancial diversidad, tanto entre como dentro de las capas, y la posicin laminar no basta para definir ni la identidad ni la funcin del subtipo neuronal.

Desarrollo
Tres subclases existen dentro de las NEGLU:
a) Neuronas de proyeccin corticofugal (NPCFu) b) Neuronas de proyeccin callosa (NPC) c) Neuronas de conexin en circuitos ipsilaterales

Las primeras se proyectan de la corteza, respetan a la lnea media y residen en las capas profundas; se dirigen tanto subcorticalmente a reas cerebrales ms profundas como subcerebralmente al tallo cerebral y la columna espinal. En contraste, las segundas cruzan al cerebro en la lnea media, se proyectan interhemisfricamente y funcionan para integrar la informacin entre ambos hemisferios.

Desarrollo. Patologa
Las NPC son ms abundantes que las NPCFu y comprenden la mayor clase de neuronas comisurales de los mamferos placentarios. Sus cuerpos celulares se hallan principalmente en las capas corticales II y III, V y, en menor grado, VI. Las anormalidades de las NPC son patolgicas. La ausencia de la conectividad en estas neuronas se asocia con defectos de raciocinio, solucin de problemas y generalizacin.

Desarrollo. Patologa
La disgenesia de las NPC es una de las pocas patologas reproducibles en los Trastornos del Espectro del Autismo (TEA, o ASD), con reduccin del tamao y la conectividad del cuerpo calloso, en relacin con el volumen total enceflico.
Adems, la agenesia del cuerpo calloso, as como la callosotoma quirrgica, tienen como resultado dficit cognoscitivo que difiere segn el momento en el desarrollo durante el cual se produjo la prdida de las conexiones, cunto del cuerpo calloso ha sido alterado y el grado de efectos secundarios, como la conectividad aberrante.

Neuronas de proyeccin callosa. Desarrollo

NPC
Desarrollo temprano y gua axnica

Las NPC se crean a lo largo de la gnesis de la corteza junto con otras neuronas cuyos cuerpos se encuentran en las mismas capas corticales: En el ratn, las NPC de la capa VI aparecen junto con neuronas de proyeccin crtico-talmica (NPCTa) aproximadamente en el da 12.5 embrionario (E12.5). Las NPC de la capa V aparecen junto con neuronas motrices crtico-espinales (NMCE) alrededor del da 13.5 embrionario (E13.5). Las NPC superficiales aparecen entre los das 15.5 y 17.5 embrionarios (E15.5-E17.5).

Neuronas de proyeccin callosa. Desarrollo

Conforme aparecen las NPC, los 2 hemisferios telenceflicos comienzan a fusionarse, ayudados, en parte, por 2 poblaciones de gla [la gla medial en cremallera (MZG) y la gla del indusium griseum (IGG)]. Aunque no se conocen completamente an los mecanismos celulares y moleculares de la fusin central, parece aceptarse que, si la lnea media no se ha fusionado totalmente, los axones callosos no tienen substrato y no pueden cruzar al lado opuesto.

Neuronas de proyeccin callosa. Desarrollo

Figura 1. Desarrollo y diversidad de las NPC

Neuronas de proyeccin callosa. Desarrollo

Conforme los hemisferios continan fusionndose, las poblaciones de gla y neuronas locales forman una honda transitoria y en forma de puente a travs de la lnea media (Fig. 1a).

Las NPC envan axones ventralmente hacia la zona intermedia (IZ) guiadas, en parte, por seales de la gla del indusium griseum (IGG), dorsalmente en la lnea media y la cua glial, y las poblaciones de la honda subcallosa (SCS), ventralmente.

Neuronas de proyeccin callosa. Desarrollo

Al llegar a la zona intermedia, los axones callosos se dirigen hacia la lnea media para cruzar en la frontera cortico-septal, en vez de proyectarse lateralmente, como lo hacen las NPCFu.

Al encontrar la cua glial contralateral, dichos axones se vuelven dorsalmente y extienden hacia la neocorteza en direccin de sus metas homotpicas.
Durante el desarrollo, los axones de neuronas de la corteza cingulada comienzan a cruzar la lnea media y podran servir de pioneras de las NPC neorcoticales.

Neuronas de proyeccin callosa. Diversidad anatmica

Diversidad anatmica

Cada NPC extiende un axn a la regin homeotpica de la neocorteza contralateral; as, la localizacin de una NPC en la corteza definir la meta de su axn calloso.

El cuerpo calloso suele categorizarse en 6 regiones de rostral a caudal, nombradas por sus regiones homeotpicas de conexin: frontal, motriz, somatosensorial, auditiva, temporo-parietal y visual.
Las fibras callosas varan en densidad y dimetro en esas regiones, tanto en el ratn como en el humano.

Neuronas de proyeccin callosa. Diversidad anatmica

Adems de las proyecciones homeotpicas interhemisfricas, las subpoblaciones de NPC pueden definirse por la variedad de proyecciones axonales duales de larga distancia que extienden:
a) Proyecciones duales al estriado contra- o ipsilateral (NPCEstr) b) Proyecciones caudales a la corteza somatosensorial primaria contra- o ipsilateral (NPR) c) Proyecciones rostrales a reas frontales contra- o ipsilaterales (NPF) (Fig. 1b)

Neuronas de proyeccin callosa. Diversidad anatmica

Mientras que las NPC de las capas profundas tienen axones de proyeccin dual de larga distancia, las NPC de las capas superficiales participan en circuitos locales dentro de las columnas corticales. Ipsilateralmente, las NPC superficiales envan colaterales a neuronas piramidales en las capas II/III y con ms fuerza an a las neuronas de la capa V. Tambin envan colaterales a las piramidales y estrelladas de la capa VI. neuronas

Neuronas de proyeccin callosa. Desarrollo, diversidad y control gentico

Controles moleculares-genticos sobre el desarrollo y la diversidad de las NPC

Debido a que la mayora de las NPC se halla en las capas superficiales, los primeros controles moleculares identificados en la generacin y el desarrollo de las NPC fueron ciertos genes especficos de la lmina (Brn1 y Brn2; Cux1 y Cux2). Posteriormente, el primer regulador molecular crtico de especificacin amplia de NPC, la protena 2 enlazadora de secuencias ricas en AT (SATB2), fue identificado y caracterizado como factor de transcripcin enlazador de ADN.

Neuronas de proyeccin callosa. Desarrollo, diversidad y control gentico

En la ausencia de la funcin de SATB2, las neuronas que habran extendido sus axones a travs del cuerpo calloso, se proyectan, por el contrario, subcorticalmente por la cpsula interna y adoptan algunas de las caractersticas moleculares de NPCFu. Sin embargo, muchas interesantes cuestiones acerca de las seales moleculares instructivas responsables del cruce en la lnea media y las conexiones homeotpicas y heterotpicas siguen sin haber podido ser resueltas.

Neuronas de proyeccin callosa. Desarrollo, diversidad y control gentico

Para poder identificar los controles moleculares del desarrollo de poblaciones individuales y especficas de NPC, en una manera directa y no sesgada, la metodologa reciente de aislamiento y purificacin de poblaciones neuronales individuales ha provisto potencia y sensibilidad substanciales.
Un acercamiento, ha sido el de primero marcar retrgradamente distintas poblaciones de NPC en cuanto a sus trayectorias axonales durante el desarrollo y metas axonales definitivas, y luego purificarlas por seleccin celular activada por fluorescencia (FACS, Fig. 2).

Neuronas de proyeccin callosa. Genes especficos

Figura 2. Identificacin de genes especficos de las NPC

Neuronas de proyeccin callosa. Desarrollo, diversidad y control gentico

Por una variedad de razones, este mtodo primero se us para marcar y aislar NPC, neuronas de proyeccin crtico-tectal (NPCT), NPCTa, NPCEstr y NMCE especficas de segmentos cervical o lumbar.

Estas neuronas purificadas se sometieron a anlisis de microarreglos comparativos para identificar genes diferencialmente expresados por cada poblacin en 4 estadios bsicos de desarrollo embrionario y post-natal (E18.5, P3, P6 y P14).

Neuronas de proyeccin callosa. Desarrollo, diversidad y control gentico

Los genes de NPC identificados han sido analizados en cuanto a sus distribuciones especficas de la lmina y la sublmina en diferentes etapas de maduracin (Fig.3). La informacin temporal resultante de estos anlisis permite identificar estadios moleculares diversos en el desarrollo de las NPC que seguramente reflejan procesos conocidos que se presentan durante la maduracin de las NPC.

Neuronas de proyeccin callosa. Caracterizacin gnica

Caracterizacin de genes segn el estadio

a) Genes tempranos - antes de E18.5 - que actan en la especificacin del subtipo neuronal, el refinamiento de la diferenciacin, la migracin y la extensin axonal inicial (Inhba, Btg1, Frmd4b, Epha3 y Ptn). b) Genes cuya expresin bruscamente se eleva y cae - expresados slo durante los estadios medios del desarrollo de las NPC - (Cpne4, Tmtc4, Nnmt, Cav1, Nectin-3 y Chn2). c) Genes tardos que actan en la maduracin y el refinamiento de la conectividad adulta (Plexin-D1, Gfra2, TcrB y Dkk3).

Neuronas de proyeccin callosa. Identificacin gnica

Figura 3. Genes espacialmente restringidos que identifican subpoblaciones de NPC

Neuronas de proyeccin callosa. Caracterizacin gnica

Adems de los datos de expresin temporal gnica, ese trabajo identifica la expresin diferencial de los genes laminares especficos de subtipo. Un subgrupo de los genes de NPC identificados parece ser especfico de estas neuronas en todas las capas en las que se hallan, mientras que otros discriminan entre las NPC de las capas profundas y aquellas de las capas superficiales (Fig. 3).

Neuronas de proyeccin callosa. Caracterizacin gnica

Adems, ciertos genes finamente subdividen a las NPC en capas individuales y parecen etiquetar subpoblaciones discretas de NPC que no han sido previamente descritas con criterios anatmicos o morfolgicos.

Algunos genes expresados especficamente en las NPC de capas superficiales se expresan a lo largo de las capas II/III, otros estn restringidos a slo la parte ms superficial de estas capas y otros ms estn restringidos a la porcin ms profunda de las capas superficiales (Fig. 3).

Neuronas de proyeccin callosa. Caracterizacin gnica

Dado que las capas superficiales han sufrido una expansin evolucionaria considerable, los genes con expresin restringida a las capas profundas podran reflejar cambios transcripcionales que permitieron que las NPC surgieran de poblaciones ms antiguas de NPCFu. Las capas profundas tambin contienen la gran mayora de NPC con axones de proyeccin dual, por lo que los genes expresados en subpoblaciones de NPC ms profundas podran identificar y controlar el desarrollo de poblaciones especficas de proyeccin dual.

Neuronas de proyeccin callosa. Caracterizacin gnica

Por el contrario, los genes restringidos a las NPC de capas superficiales podran servir como controles en el desarrollo de colaterales columnares. De este modo, hay una evidente diversidad molecular, y, seguramente, funcional, dentro de la poblacin general de NPC. Las investigaciones sobre la funcin de estos controles moleculares-genticos permitirn una mejor caracterizacin y un mejor conocimiento de las funciones y la relevancia clnica de las subpoblaciones de NPC.

Neuronas de proyeccin callosa. Evolucin

Evolucin Las NPC y sus vas axonales asociadas en el cuerpo calloso son de surgimiento relativamente reciente en la evolucin. El cuerpo calloso no es nico en su habilidad de conectar los 2 hemisferios neocorticales, pero es el nico tracto dedicado exclusivamente a integrar la informacin de los 2 hemisferios corticales.

Neuronas de proyeccin callosa. Evolucin

En los mamferos no eutricos, como los marsupiales, el tracto de fibras interhemisfricas fundamental es la comisura anterior, la que consta de fibras de la amgdala, el tracto olfativo y los lbulos temporales, as como de conexiones de larga distancia de la neocorteza que toman un curso tortuoso en la proyeccin a la corteza contralateral. La comisura hipocmpica tambin tiene un papel en la realizacin de la comunicacin interhemisfrica en animales a los que les falta el cuerpo calloso.

Neuronas de proyeccin callosa. Evolucin

La pre-existencia de estos otros tractos comisurales pudo haber permitido ms fcilmente la evolucin y el establecimiento de las neuronas de proyeccin comisural cortical que se transformaron en las NPC. La distribucin laminar general de las NPC no slo habla a favor de una ventana temporal general de generacin durante el desarrollo de NPC a partir de poblaciones progenitoras diversas, sino tambin sugiere la expansin evolucionaria preferencial de esta poblacin neuronal conforme la corteza se expandi durante la evolucin.

Neuronas de proyeccin callosa. Evolucin

Las capas corticales II/III evolucionariamente noveles, y presentes ya en los roedores, se expanden notablemente en los primates (Fig. 4), as como el volumen de la substancia blanca en el cuerpo calloso, con ms de 190x106 de axones en el humano.
Estas capas superficiales neocorticales de los mamferos surgieron principalmente de progenitores de la SVZ, una zona progenitora distinta presente en los mamferos, los pjaros y los cocodrilos, pero no en los anfibios.

Neuronas de proyeccin callosa. Comparacin filognica

Figura 4. Comparacin de la neocorteza en desarrollo y del adulto de ratn, macaco y humano

Neuronas de proyeccin callosa. Evolucin

La SVZ misma se ha expendido y diversificado en los primates hasta incluir 2 regiones distintas: la SVZ interna y la SVZ externa, las que generan la diversidad cortical expandida, particularmente en las capas superficiales, que se encuentra en los primates (Fig. 4). La SVZ externa (OSVZ) contiene progenitores nicos de tipo gla radiales que son proliferativos y se renuevan a s mismos, distintos de los de la SVZ interna (ISVZ).

Neuronas de proyeccin callosa. Evolucin

Ciertos controles moleculares de las poblaciones de SVZ se han identificado: el gene 2 cerebral de T-caja (Tbr2) y el transcripto 1 de expresin subventricular (Svet1). Dado que la mayora de las NPC se halla en las capas superficiales expandidas durante la evolucin y generadas de esta poblacin progresivamente expandida de progenitores intermedios, sera posible predecir que, en comparacin con las NPCFu, las NPC tendran un papel especialmente importante en la cognicin.

Bibliografa
Fame RM, MacDonald JL, Macklis JD. Development, specification and diversity of callosal projection neurons. TINS 2011; 34:41-50 Molyneaux BJ, Arlotta P, Fame RM, MacDonald JL, MacQuarrie KL, Macklis JD. Novel subtype-specific genes identify distinct subpopulations of callosal projection neurons. J Neurosci 2009; 29:12343-12354
Schoenemann PT, Sheehan MJ, Glotzer LD. Prefrontal white matter volume is disproportionately larger in humans than in other primates. Nat Neurosci 2005; 8:242-252