GENERALIDADES DE BACTERIAS Dr. Jos Molina Lpez joseml@unam.mx Dra. Teresa Uribarren Berrueta berrueta@unam.

mx Departamento de Microbiologa y Parasitologa, Facultad de Medicina, UNAM. CLASIFICACIN DE LAS BACTERIAS De acuerdo al Arbol de la Vida de Woese, microbilogo creador de la nueva taxonoma molecular basada en la comparacin entre especies de la fraccin 16s del ARN ribosomal, se proponen 3 dominios Archaea, Bacteria y Eucarya, en los que se incluye a todos los seres vivos, aunque existen controversias.

rbol de la vida segn Carl Woese. J. Deacon. University of Edinburgh Los dominios Archeae y Bacteria corresponden a las clulas procariotas, una de cuyas caractersticas es la de carecer de membrana nuclear. Con base en el estudio de fsiles y modelos, se calcula que emergieron hace unos 3.6 - 4 billones de aos. Su importancia radica en el hecho de haber desarrollado una pared celular o membrana externa que les confiri, desde el principio, de autonoma y proteccin con respecto a su medio ambiente. Desde entonces constituyeron la forma de vida ms abundante en el planeta en trminos de biomasa y nmero de especies. A pesar de su menor complejidad en relacin a Eucarya, los integrantes de los dominios Archeae y Bacteria pueden vivir en hbitats extremos: se les encuentra en las profundidades de la Tierra, sobreviviendo gracias al lento catabolismo del carbono orgnico depositado en los sedimentos, y en las profundas fuentes hidrotermales submarinas. Se acepta la aparicin del dominio Eukarya, con membrana nuclear y orgnulos ms desarrollados, desde hace unos dos billones de aos; de este dominio derivan todos los

organismos eucariontes uni y multicelulares. Otra clasificacin de los seres vivos muy utilizada es la propuesta por Whitaker y Margulis. Ellos clasifican a los organismos en cinco reinos, Animalia, Plantae, Fungi, Protista y Monera, en ste ltimo reino se incluyen todas las bacterias. IMPORTANCIA DE LAS BACTERIAS Los miembros pertenecientes a los dominios Bacteria y Archaea son las formas ms abundantes en el planeta. Las bacterias constituyen una proporcin significativa por lo que respecta al peso corporal de los diferentes hospederos (desde 0.5 k hasta unos 2.5 k). Su biomasa total lleg a estimarse en 3.5 1014 kg de carbono. Sin embargo, en 2008 solo se aceptaban ~7,000 especies microbianas, versus 300 000 especies de plantas y 1 250 000 de animales, lo cual no refleja la biodiversidad total de las bacterias. (Achtman et al., 2008). La Bacteriologa es una disciplina de la Microbiologa, que ha estado presente a lo largo de la historia de la humanidad. Las bacterias son responsables de millones de muertes de personas a nivel mundial. Entre algunas enfermedades infecciosas bacterianas, causantes de grandes epidemias que han mermado la poblacin, se encuentran: la difteria, clera, tuberculosis, sfilis, ttanos, tos ferina, y fiebre tifoidea. Sin embargo, tambin existen infecciones bacterianas que aunque estn asociadas en menor frecuencia como causa de muerte, son un problema de salud pblica en pases en vas de desarrollo como el nuestro, entre las que podemos mencionar: diarreas (causadas por Shigella o Escherichia coli), infecciones de vas urinarias, faringoamigdalitis, gonorrea, tracoma y brucelosis. Otro aspecto de primordial importancia en bacteriologa es la microbiota del cuerpo humano, en especial del tracto gastrointestinal. Se estima que en el intestino de un ser humano adulto, existe un billn (1012) de microorganismos por mililitro de contenido fecal y alberga entre 500 y 1000 diferentes especies bacterianas. La mayora de esos microorganismos pertenecen al Dominio Bacteria, que incluye tanto a bacterias gramnegativas como grampositivas. La microbiota intestinal difiere de una persona a otra y esa diversidad se ha visto en la composicin del lumen (heces) y de la mucosa (epitelial), aunque el genotipo del hospedero es ms importante en determinar la microbiota intestinal que la dieta, edad y estilo de vida. La microbiota intestinal esta implicada en una gran variedad de funciones en el hospedero, involucrando cambios en el epitelio intestinal, modulacin inmune, movimiento intestinal y el metabolismo de algunas drogas. La microbiota tambin est involucrada en la degradacin de algunas toxinas y carcingenos que se ingieren en la dieta, sntesis de micronutrientes, fermentacin de substancias del alimento, ayuda en la absorcin de electrolitos y minerales; asimismo afecta el desarrollo y diferenciacin de los enterocitos, a travs de la produccin de cidos grasos de cadena corta. Finalmente, la microbiota previene la colonizacin del intestino por bacterias patgenas como: Escherichia coli, Salmonella, Clostridium y Shigella. Actualmente se ha resaltado el papel que tiene la microbiota en la obesidad del humano. Las actividades metablicas de la microbiota intestinal facilitan la extraccin de caloras de

los alimentos ingeridos y el almacenaje de esas caloras en el tejido adiposo del hospedero, para su posterior utilizacin y proveen energa y nutrimentos para el desarrollo y proliferacin microbiana. Las diferencias en la recuperacin de energa en los individuos puede ofrecer una explicacin fisiolgica del porqu algunos pacientes presentan obesidad, pero no comen en abundancia. Se ha sugerido que la microbiota intestinal de algunas personas tiene una eficiencia metablica especfica y que ciertas caractersticas en la composicin de la microbiota pueden predisponer a obesidad. Por otra parte, las bacterias presentan un metabolismo tan diverso que les permite llevar a cabo funciones tales como: La fijacin de nitrgeno (conversin de nitrgeno gaseoso a amonio), la fijacin de una cantidad importante de CO2, la metanognesis (produccin biolgica de metano), as como la reduccin de azufre y fierro. Hay bacterias con capacidad para metabolizar los plaguicidas clorados e hidrocarburos. Actualmente se trabaja en la produccin de polmeros bacterianos biodegradables para sustituir a los plsticos sintticos. Adems, mediante a procesos vigentes a nivel industrial, las bacterias se utilizan en la produccin de antibiticos (bacitracina, cefalosporina, cloranfenicol, cicloheximida, lincomicina, nistatina, penicilina, polimixina B, estreptomicina, son algunos de ellos); vitaminas tales como la vitamina B12 y la riboflavina, cuya sntesis es ms fcil por fermentacin; aminocidos, por fermentacin directa o sntesis enzimtica, entre ellos el cido asprtico y la fenilalanina (ingredientes del aspartame), el cido glutmico (empleado como saborizante bajo la forma de glutamato monosdico), la lisina (aditivo alimentario). Por lo que respecta a enzimas microbianas, stas se producen comercialmente y se emplean en la elaboracin de jarabes edulcorantes, detergentes, ablandadores de carnes. Las aplicaciones prcticas de las bacterias en la ingeniera gentica incluyen: vacunas virales (citomegalovirus, hepatitis B, sarampin, rabia); protenas y pptidos (insulina, factor estimulante del crecimiento, interfern alfa, interfern beta, factor de necrosis tumoral y otros que an no se encuentran en el mercado); vegetales y animales transgnicos; regulacin y terapia gnicas. TIPIFICACIN BACTERIANA La tipificacin de las bacterias se basa en el estudio de sus caractersticas mediante tcnicas que oscilan entre las ms sencillas tinciones y los ms complejos estudios moleculares. Una tcnica til y de bajo costo consiste en la tincin de Gram y posterior observacin de la muestra mediante el microscopio de luz para estudiar las bacterias, su forma, tipo de agrupacin y color: grampositivas o gramnegativas. La mayor parte de las bacterias puede ser ubicada en uno de estos dos grupos o en un tercero, de acuerdo a la cido-alcohol resistencia que presenten (Ziehl-Neelsen). Algunas propiedades genticas y fisiolgicas constituyen herramientas utilizadas para definir algunas caractersticas de las cepas, como los serotipos y biotipos, determinacin de especies en algunos grupos de bacterias, produccin de toxinas. Los mtodos ms sensibles se basan en el anlisis del material gentico. Cabe mencionar que stos han diversificado sus objetivos; se emplean en la identificacin de subgrupos de genes esenciales para el crecimiento, colonizacin, adhesin e invasin bacterianos (un ejemplo

es el IVET - siglas de "in vivo expression technology"), desarrollada para seleccionar los genes activos nicamente durante la infeccin). MORFOLOGA BACTERIANA Las bacterias que tienen forma esfrica u ovoide se denominan cocos. Y si se tien de azul con el Gram, se les llama grampositivos. Cuando los cocos se agrupan en cadenas, se les denomina estreptococos y cuando lo hacen en racimos, se les llama estafilococos; tambin se pueden agrupar en pares que reciben el nombre de diplococos. Las bacterias en forma de bastn reciben el nombre de bacilos. Si al teirlos con el Gram quedan de color rojo, se les denomina gramnegativos. Los bacilos curvados que presentan espirales se llaman espirilos, rgidos; algunas bacterias en espiral presentan formas fcilmente reconocibles, como las espiroquetas, semejantes a un tornillo o sacacorchos, flexibles. Las bacterias que carecen de pared celular tienen gran plasticidad (micoplasmas) y adoptan una variedad de formas. Las bacterias esfricas tienen un tamao promedio de 1 micrmetro de dimetro, mientras que los bacilos miden 1.5 de ancho por 6 micrmetros de largo.

Diferentes formas y agrupamientos que presentan las bacterias. Imagen: Mariana Ruiz, en Wikimedia Commons. Modificada por Molina J. Ejemplos de formas y tincin bacterianas:

SEM. Staphylococcus aureus. Cocos Gram positivos. CDC/ Matthew J. Arduino, DRPH

SEM. Escherichia coli. Bacilos cortos gram negativos no esporulados, flagelados. CDC/Janice Haney Carr

Campo oscuro. Treponema Borrelia, pallidum. Se le ubica dentro Leptospira y Treponema conforman de las espiroquetas. CDC las familias de espiroquetas patgenas. CDC Formas de agrupamiento y divisin bacterianos (cocos):

SEM. Leptospira interrogans.

GENTICA BACTERIANA El genoma bacteriano consiste en uno o ms cromosomas, que contienen los genes necesarios y una gran variedades de plsmidos que generalmente codifican para genes no esenciales. El cromosoma est constituido por una doble hebra de DNA circular. Presenta dominios de superenrrollamiento debido a que se dobla y tuerce para ser almacenado en la clula, que en promedio, mide 1 micrmetro. Este genoma mide entre 1 - 6 millones de pares de bases de DNA (es decir, de 1 - 6 Mb). El nombre nucleoide sirve para identificar a este DNA no confinado por una membrana. Cuando la clula se encuentra en fase logartmica (de crecimiento rpido) pueden encontrarse varias copias cromosmicas, completas o parciales. Las bacterias son microorganismos organismos haploides y se dividen por fisin binaria, cuyo tiempo de generacin varia desde 20 minutos hasta varias horas. Las bacterias pueden intercambian material gentico mediante tres mecanismos: transformacin, conjugacin y transduccin. Plsmidos. Algunas bacterias poseen elementos genticos extracromosomales, llamados plsmidos, son pequeos fragmentos circulares de doble cadena de DNA que se mantienen en un nmero estable y contienen los genes necesarios para replicarse y para su transferencia a otras clulas, as como para sintetizar toxinas, algunas estructuras de superficie (adhesinas) y para la resistencia a antibiticos (plsmidos R). Bacterifagos, conocidos tambin como "fagos", son parsitos intracelulares (virus) de bacterias. Estn constituidos por DNA o RNA y protenas. Si lisan a la bacteria infectada se habla de una infeccin ltica; si se integran al genoma bacteriano y se encuentran en estado quiescente (profagos con el potencial de producir fagos) se habla de una bacteria en estado lisognico. Transposones e integrones. Los transposones son segmentos de DNA de gran movilidad, simples o compuestos; dan lugar a mutaciones, ya sea por insercin o prdida de genes o diseminacin de los mismos entre clulas. Cabe sealar que en los transposones se encuentran habitualmente los genes que determinan la sntesis de toxinas, factores de adhesin, virulencia o resistencia a algunos antibiticos. Mientras que los integrones son elementos genticos capaces de captar y expresar genes en casetes de resistencia a antibiticos. Tanto los transposones como los integrones pueden estar integrados en plsmidos y/o en el cromosoma bacteriano. Islas de patogenicidad. Las islas de patogenicidad son secuencias de DNA que se caracterizan por contener genes asociados a virulencia y que pueden estar tanto en plsmidos, como en el cromosoma bacteriano. Poseen tambin elementos genticos mviles, como transposasa e integrasas, que les permiten insertarse en ciertos sitios dentro del genoma bacteriano. Tienen un tamao de entre 10 y 500 kpb (miles de pares de bases). Entre los genes de virulencia asociados a virulencia asociados a estas islas de patogenicidad tenemos: adherencia, produccin de toxinas, invasividad, resistencia a antibiticos y formacin de biopelculas.

ESTRUCTURA BSICA Citoplasma: En el citoplasma se encuentran todas las enzimas necesarias para divisin y metabolismo bacterianos, asimismo, cuenta con ribosomas de menor tamao en relacin a clulas eucariotas, pero no presenta mitocondrias, retculo endoplsmico ni cuerpo de Golgi; las enzimas para el transporte de electrones se encuentran en la membrana citoplsmica. Los pigmentos requeridos por bacterias fotosintticas se localizan en vesculas debajo de la mencionada membrana. Las reservas se observan como grnulos insolubles (azufre, glucgeno, fosfatos y otros). La base del citoplasma es parecida a un gel en la que se identifican vitaminas, iones, agua, nutrimentos, desechos, el nucleoide y plsmidos.

Estructura general bacteriana BIODIDAC. Modificada. Pared celular: Con la tincin de Gram, una proporcin importante de bacterias puede dividirse en dos grandes grupos: grampositivas (se observan de color azul - debido al colorante cristal violeta) y gramnegativas (pierden el cristal violeta y conservan la safranina - se aprecian de color rojo o rosado). La tcnica se basa en las diferencias fsicas fundamentales de la pared celular y emplea colorantes catinicos (cristal violeta y safranina), que se combinan con elementos cargados negativamente. Las bacterias grampositivas cuentan con tres capas externas: cpsula (en algunos casos), pared celular gruesa y membrana citoplsmica. Las bacterias gramnegativas presentan

cpsula (algunas), una pared celular delgada, membrana externa (que equivale al lipopolisacrido) y una membrana interna (citoplasmtica). La pared celular le da forma a la bacteria y su composicin vara entre bacterias. En bacterias grampositivas, consiste de varias capas de peptidoglucano (formado por los azcares N-acetilglucosamina ms N-acetilmurmico y un tetrapptido) que retienen el cristal violeta utilizado en la tincin de Gram; otros componentes de la pared incluyen redes de cido teicoico y cido lipoteicoico. Las bacterias gramnegativas cuentan con dos membranas (una externa y una interna) as como una capa delgada de peptidoglucano entre ambas, en el llamado espacio periplsmico.

Esquema. Pared celular bacteria grampositiva. T. Uribarren B.

Esquema. Pared celular bacteria gramnegativa. T. Uribarren B.

La membrana citoplsmica: Debajo de la pared celular se encuentra la membrana citoplasmtica, la capa ms interna, compuesta por protenas y fosfolpidos (bicapa lipdica). Sus funciones son la permeabilidad selectiva y transporte de solutos (la mayor parte de las molculas que la atraviesan no lo hacen de forma pasiva), la fosforilacin oxidativa en los organismos aerbicos, la liberacin de enzimas hidrolticas y el reciclamiento de receptores. Lipopolisacrido (LPS): Formado por fosfolpidos y protenas de membrana externa. El LPS est constituido por tres partes bioqumicamente diferentes: una cadena de azcares, el polisacrido llamado antgeno somtico u O, se utiliza para tipificar cepas bacterianas, una porcin lipdica, el lpido A, que est anclado a los lpidos de la membrana) y es txica para el humano y animales. Entre ambos se encuentra el polisacrido central, llamado core. Los llamados bacilos cido-alcohol resistente (BAAR) como Mycobacterium, presentan una pared compuesta de una capa muy delgada de peptidoglucano, una gran cantidad de lpidos (60%), principalmente cidos miclicos, responsables en parte de la acido-alcohol resistencia, as como de la hidrofobicidad y de la consistencia "de cera" de estos microorganismos. Los peptidoglucanos les confieren una forma estable e impiden la

smosis ltica. La tcnica que se utiliza para teir estas bacterias, se denomina de ZiehlNeelsen y es una mezcla de fucsina bsica y fenol, calor y contraste con azul de metileno; al finalizar la tcnica, los organismos cido-alcohol resistentes se aprecian rojos, mientras que el fondo se tie de azul. Espacio periplsmico: Este espacio que se ubica entre la membrana interna y la membrana externa presente solo en las bacterias gramnegativas. Contiene protenas de unin para los sustratos especficos, enzimas proteolticas y quimiorreceptores. Es una solucin densa, con alta concentracin de macromolculas, y participa e en la regulacin de la osmolaridad con respecto al medio externo Cpsula y glicoclix: Es una cubierta de grosor vartiable formada habitualmente por unidades de polisacridos, protenas o ambos. Si est bien estructurada y se encuentra bien adherida a la clula, se le denomina cpsula; si por el contrario, tiene estructura mal definida y su adhesin es dbil, se le conoce como glicoclix. De acuerdo a su estructura qumica, puede ser flexible o rgida. La rigidez le confiere la caracterstica de una matriz impermeable. Determina la adhesin a superficies (biopelculas), constituye una barrera de proteccin contra la fagocitosis y los anticuerpos e impide la desecacin y la accin de otros agentes. Acta como barrera de difusin ante algunos antibiticos. Ejemplos de bacterias con cpsula son Streptococcus pneumoniae y Haemophilus influenzae.

Bacillus cereus. Flagelos. CDC.

Flagelos: Son apndices filamentosos y muy finos compuestos por la protena flagelina dispuesta en fibras helicoidales y con apariencia lisa, anclados a la pared celular. Presentan un gancho, que une el filamento al cuerpo basal (parte motora). Su funcin es el desplazamiento de la clula mediante movimientos variables de rotacin. Su distribucin es variable, as como su nmero. Independientemente del mecanismo de locomocin que desplieguen las

bacterias, ste les permite responder en sentido positivo o negativo a gradientes fisicoqumicos (quimiotropismo, fototropismo). Son muy antignicos. Pili y Fimbrias: Estructuras ms delgadas y cortas que los flagelos. Actan como rganos de fijacin entre clulas (bacteria - bacteria, bacteria - clula eucariota) Tambin se les relaciona con la formacin de biopelculas y la conjugacin (pilis sexuales). Factores de relevancia en la colonizacin. Ejemplo: las fimbrias de Streptococcus pyogenes contienen el principal factor de virulencia, la protena M. Espora: La espora es una estructura formada por algunas especies de bacterias grampositivas, por ejemplo: Clostridium y Bacillus. Es una estructura altamente diferenciada cuyas caractersticas le confieren gran resistencia ante el medio ambiente y agentes nocivos. En ambientes hostiles sufre cambios estructurales y metablicos que dan lugar a una clula interna en reposo, la endospora, que puede ser liberada como una espora. Son altamente resistentes a la desecacin, calor, luz ultravioleta y agentes qumicos (bacteriocidas). Son altamente resistentes a la desecacin, calor, luz ultravioleta y agentes qumicos bacteriocidas. CRECIMIENTO Y METABOLISMO La multiplicacin celular es una consecuencia directa del crecimiento y da lugar, en el caso de las bacterias, a colonias, mediante un sistema de reproduccin asexual denominado divisin binaria. Los procesos sintticos involucrados en el crecimiento bacteriano incluyen ms de 2 000 reacciones bioqumicas. La velocidad de crecimiento es el cambio en nmero de bacterias por unidad de tiempo, y se expresa como el tiempo de generacin, que es el tiempo necesario para que se duplique una bacteria o una poblacin de ellas. En un sistema cerrado o cultivo en medio no renovado se obtiene una curva de crecimiento tpica que se ha dividido en cuatro fases: fase de latencia, fase exponencial, fase estacionaria y fase de muerte. La fase de latencia se caracteriza por la adaptacin de los microorganismos, no se presenta cuando el inoculo es nuevo y si el inoculo proviene de un cultivo viejo, requiere de este periodo de adaptacin. La mayor parte de las bacterias crece de forma exponencial, aunque hay una serie de condiciones que influyen (nutrimentos en el medio, temperatura, factores genticos). En la fase estacionaria no hay una modificacin neta en el nmero de clulas, existe un frgil equilibrio que desaparece eventualmente cuando an las bacterias metablicamente activas mueren, debido a productos txicos y falta de nutrimentos (factores presentes en la fase estacionaria) aunados a enzimas liberadas por la lisis bacteriana.

Produccin de energa: En las bacterias, la conservacin intracelular de energa tambin ocurre principalmente por medio de la sntesis de ATP. Los mtodos usados por las bacterias para generar este ATP son principalmente: Respiracin aerbica: Proceso metablico en el que el oxgeno molecular es el aceptor final de electrones. El oxgeno es reducido a agua. Utilizada por bacterias aerbicas. Respiracin anaerbica: En este proceso, el aceptor final de electrones son otros compuestos, tales como nitratos o sulfatos. Utilizada por bacterias anaerobias obligadas, aunque algunas, sobre todo las de mayor importancia mdica, utilizan la fermentacin. Existen las bacterias facultativas, que pueden utilizar los dos tipos de respiracin aerbica y anaerbica. Fermentacin: Aqu un intermediario orgnico derivado de un sustrato capaz de ser fermentado, es el aceptor final de electrones. Un ejemplo: la fermentacin de glucosa (sustrato) a cido lctico; un producto intermediario, el piruvato, es el aceptor final de electrones