Clonacin molecular La clonacin molecular se utiliza en una amplia variedad de experimentos biolgicos y las aplicaciones prcticas van desde

la toma de huellas dactilares a produccin de protenas a gran escala. En la prctica, con el fin de amplificar cualquier secuencia en un organismo vivo, la secuencia a clonar tiene que estar vinculada a un origen de replicacin; que es una secuencia de ADN. Transfeccin Se introduce la secuencia formada dentro de clulas. Seleccin Finalmente se seleccionan las clulas que han sido transfectadas con xito con el nuevo ADN. Inicialmente, el ADN de inters necesita ser aislado de un segmento de ADN de tamao adecuado. Posteriormente, se da el proceso de ligacin cuando el fragmento amplificado se inserta en un vector de clonacin: El vector se linealiza (ya que es circular),usando enzimas de restriccin y a continuacin se incuban en condiciones adecuadas el fragmento de ADN de inters y el vector con la enzima ADN ligasa. Tras la ligacin del vector con el inserto de inters, se produce la transfeccin dentro de las clulas, para ello las clulas transfectadas son cultivadas; este proceso, es el proceso determinante, ya que es la parte en la que vemos si las clulas han sido transfectadas exitosamente o no. Tendremos que identificar por tanto las clulas transfectadas y las no transfectadas, existen vectores de clonacin modernos que incluyen marcadores de resitencia a los antibiticos con los que slo las clulas que han sido transfectadas pueden crecer. Hay otros vectores de clonacin que proporcionan color azul/ blanco cribado. De modo, que la investigacin de las colonias es necesaria para confirmar que la clonacin se ha realizado correctamente. Clonacin celular Clonar una clula consiste en formar un grupo de ellas a partir de una sola. En el caso de organismos unicelulares como bacterias y levaduras, este proceso es muy sencillo, y slo requiere la inoculacin de los productos adecuados. Sin embargo, en el caso de cultivos de clulas en organismos multicelulares, la clonacin de las clulas es una tarea difcil, ya que estas clulas necesitan unas condiciones del medio muy especficas. Una tcnica til de cultivo de tejidos utilizada para clonar distintos linajes de clulas es el uso de aros de clonacin (cilindros). De acuerdo con esta tcnica, una agrupacin de clulas unicelulares que han sido expuestas a un agente mutagnico o a un medicamento utilizado para propiciar la seleccin se ponen en una alta dilucin para crear colonias aisladas; cada una proviniendo de una sola clula potencialmente y clnicamente diferenciada. En una primera etapa de crecimiento, cuando las colonias tienen slo unas pocas clulas; se sumergen aros estriles de poliestireno en grasa, y se ponen sobre una colonia individual junto con una pequea cantidad de tripsina. Las clulas que se clonan, se recolectan dentro del aro y se llevan a un nuevo contenedor para que contine su crecimiento en forma natural. Clonacin de organismos de forma natural La clonacin de un organismo es crear un nuevo organismo con la misma informacin gentica que una clula existente. Es un mtodo de reproduccin asexual, donde la fertilizacin no ocurre. En trminos generales, slo hay un progenitor involucrado. Esta forma de reproduccin es muy comn en organismos como las amebas y otros seres unicelulares, aunque la mayora de las plantas y hongos tambin se reproducen asexualmente.

Tambin se incluye la obtencin de gemelos idnticos de manera natural. Se considera como una alteracin espontnea durante el desarrollo embrionario, ignorndose su causa, aunque existe una correlacin familiar estadsticamente significativa. Gemelacin artificial Este tipo de clonacin consiste en tomar un embrin de hasta 8 clulas y generar embriones idnticos preimplantatorios (se podran generar hasta 8 embriones idnticos, uno a partir de cada blastmera). Las blastmeras biopsiadas del embrin original se introducen individualmente o de dos en dos en una zona pelcida vaca (puede proceder de otro animal, pues despus el embrin sale de ella), o en una cubierta artificial (ZPA), y de cada uno se generan embriones idnticos al original (clones). En veterinaria se lleva haciendo ms de 30 aos (para preservar las razas puras y mantener los caracteres deseados de un determinado animal), sin embargo, al considerarse una clonacin, est totalmente prohibido en humanos, principalmente porque los embriones humanos pueden morir durante el proceso. Si se legalizase esta tcnica, el rendimiento por ciclo de fecundacin in vitro (FIV) aumentara espectacularmente, pues se podran obtener muchos ms embriones y fcilmente; adems ya no sera necesario someter a las mujeres a tratamientos fuertes de estimulacin ovrica, pues a partir de un slo embrin podran obtener hasta 8 clones: se transfiere uno y los otros se congelaran, para poder ser transferidos aos despus o como reserva de seguridad, por si el hijo necesita clulas madre para el tratamiento de alguna enfermedad. En la pelcula Los nios del Brasil se explica lo que la Ciencia saba en los aos 80 sobre la clonacin. Separacin de blastmeras para estudios de diagnstico prenatal En algunas especies, como los equinos, se ha utilizado la separacin de blastmeros de embriones previos a su implantacin para efectuar estudios de diagnstico de enfermedades genticas. En ellos se ha determinado la viabilidad de los embriones analizados despus de su transferencia en hembras receptoras, encontrndose tasas de gestacin de 21%. La tcnica de separacin de los blastmeros implica la remocin de la zona pelcida, ya sea por mtodos qumicos, mecnicos o enzimticos, para posteriormente obtener los blastmeros mediante aspiracin, extrusin o disminucin de sus interacciones en soluciones libres de Ca2+ y Mg2+. En humanos la separacin y cultivo de blastmeros aislados tambin han sido utilizados en estudios de biopsias de embriones en diferentes etapas de segmentacin con la finalidad de dar alternativas a los estudios de diagnstico prenatal, evaluando a su vez el desarrollo embrionario in vitro con el propsito de que se seleccionen los mejores embriones capaces de desarrollarse en blastocistos y congelarlos mientras se evalan sus blastmeros aislados. Clonacin reproductiva Es impreciso distinguir entre clonacin humana reproductiva y otro tipo de clonacin debido a que toda clonacin humana es reproductiva, pues siempre se produce un embrin humano. La diferencia realmente reside en el destino que se le d a ese embrin. 3 Este tipo de clonacin se basa en la creacin de una copia genticamente idntica a una copia actual o anterior de un ser humano o animal. Es tcnicamente posible, pues se ha conseguido en animales, aunque tiene bajo rendimiento y conlleva ciertos riesgos, como por ejemplo, problemas epigenticos (sndrome LOS: el clon crece mucho ms, que el animal original) y de senescencia. Este tipo de clonacin est absolutamente prohibido en humanos, pues no tiene ningn sentido teraputico, aparte de que al no ser una tcnica perfeccionada, pueden morir los embriones humanos en el proceso. En 1996, fue clonada la oveja Dolly. Fue el primer mamfero clonado a partir del ADN derivado de un adulta en vez de ser utilizado el ADN de un embrin. Pero aunque Dolly tenia una apariencia saludable, se cuestionaba que envejeciera

antes que una oveja normal, es decir, que la fuente (Dolly) trasmitio su edad celular al clon. Adems fueron necesarios 277 embriones para producir este nacimiento. Sin embargo, algunos han especulado que haba un factor agravante al deceso de Dolly y era que tena una edad gentica de seis aos, la misma edad de la oveja de la cual fue clonada. Una base para esta idea fue el hallazgo de sus telmeros cortos, que son generalmente el resultado del proceso de envejecimiento. Sin embargo, el Roslin Institute ha establecido que los controles intensivos de su salud no revelaron ninguna anormalidad en Dolly que pudieran pensar en envejecimiento prematuro. Clonacin teraputica (o androptica) La clonacin teraputica s est legalizada actualmente, puesto que tiene fines mdicos, el tratamiento de enfermedades. Este tipo de clonacin consiste en fusionar el ncleo de una clula adulta (madre o diferenciada) y un ovocito enucleado para crear un embrin a partir del que se aislan clulas madre embrionarias compatibles con el futuro receptor del tejido. Las clulas madre se aislan de la masa celular interna del embrin clonado una vez alcanzado el estado de blastocisto. Estas clulas madre poseen la misma dotacin gentica que el paciente del que se tom la clula adulta, por lo que expresar su misma dotacin antignica (protenas superficiales de reconocimiento), de forma que podremos evitar una reaccin inmunolgica de rechazo al trasplantarle el tejido obtenido a partir de ellas (se puede inducir la diferenciacin de estas clulas madre hasta el tipo celular deseado, para formar un tejido determinado). Una vez que se han extrado las clulas madre de la masa celular interna, se destruye el embrin clonado.

En enero de 2008, se anunci que se haban creado 5 embriones clonados a partir de clulas de piel humana, con vistas a proporcionar una fuente viable de clulas madre embrionarias para el tratamiento de enfermedades; valindose de la misma tcnica que dio origen a la oveja Dolly, cientficos de la empresa californiana Stemagen Corporation (con sede en La Jolla, California), encabezados por Andrew French, han empleado las clulas de la piel de dos varones adultos as como los vulos de tres mujeres jvenes (entre 20 y 24 aos) que se estaban sometiendo a un tratamiento de fertilidad.4 El objetivo de la investigacin de la clonacin humana nunca ha sido el de clonar personas o crear bebs de reserva.5 La investigacin tiene como objetivo obtener clulas madre para curar enfermedades.6 Clonacin de sustitucin Un cuarto tipo de clonacin sera la llamada clonacin de sustitucin que sera una combinacin de la clonacin reproductiva y la clonacin teraputica. En este tipo de clonacin se producira la clonacin parcial de un tejido o una parte de un humano necesaria para realizar un trasplante.