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CAPITULO 4 Estructura y funcin de la membrana plasmtica

de de colisiones al azar. En la pgina 61 del captulo 2 se hizo notar que la unin de enzimas en complejos multienzimticos facilita mucho la secuencia de una reaccin, debido a que cada enzima se sita en el lugar correcto en el momento adecuado. De igual manera, las membranas suministran a la clula una extensa armazn o andamiaje dentro del cual se pueden ordenar los componentes para una interaccin eficaz. Una parte significativa de los mecanismos enzimticos de una clula se relaciona con sus diferentes membranas. 7. Transduccin de energa. Las membranas participan estrechamente en los procesos que convierten un tipo de energa en otro (transduccin de energa). La ms fundamental transduccin de energa ocurre durante la fotosntesis, cuando los pigmentos unidos a la membrana absorben energa de la luz solar, la convierten en energa qumica y la almacenan en carbohidratos. Las membranas tambin participan en la transferencia de energa qumica de grasas y carbohidratos al ATP. En eucariotes, los mecanismos para estas conversiones energticas se encuentran dentro de las membranas de los cloroplastos y las mitocondrias. Las membranas tambin sirven como sitios para almacenar energa cuando mantienen concentraciones diferentes de iones especficos o de otros solutos a travs de su superficie. La energa almacenada en estos gradientes es igual a la acumulada en una pila elctrica y se emplea para ejecutar muchas de las actividades ms importantes de la clula. Este captulo se refiere principalmente a la estructura y funciones de la membrana plasmtica, con excepcin de su papel mediador en las interacciones intercelulares, que analizaremos en el captulo 7. La estructura y funciones de las membranas citoplsmicas se estudian en el captulo 8.

Bicapa de lpidos. El centro de una membrana contiene una capa bimolecular de fosfolpidos orientada con sus grupos hidrosolubles hacia el frente de la superficie externa y sus colas de cidos grasos hidrfobos hacia el interior.

Conceptos generales de la estructura de la membrana plasmtica

Desde hace ms de 50 aos se sabe que la membrana est compuesta principalmente por lpidos y protenas. El verdadero ncleo de la membrana consiste en una vaina de fosfolpidos dispuestos un una capa bimolecular, una bicapa de lpidos (fig. 4-3). Las bicapas de lpidos sirven principalmente como armazn estructural para la membrana y como barrera que impide movimientos desordenados de materiales hidrosolubles hacia adentro y afuera de la clula. Las protenas de la membrana, por otra parte, efectan la mayor parte de las funciones especficas resumidas en la seccin previa. . Los primeros modelos de la estructura de la membrana, en particular el propuesto en 1935 por Hugh Davson, del University College de Londres, y por James Danielli, de la Universidad de Princeton, propusieron que las protenas de la membrana se encontraban en la superficie externa de la bicapa de lpidos. Los experimentos efectuados a fines del decenio de 1960 condujeron a un concepto radicalmente diferente de la estructura de la membrana, segn se detall en el modelo de mosaico fluido propuesto, en 1972, por S. Jonathan Singer y Garth Nicolson, de la Universidad de California. En el modelo de mosaico fluido, el "dogma cen-

tral" de la biologa de la membrana durante ms de dos decenios, la bicapa de lpido se retiene como ncleo de la membrana, pero se presta gran atencin al estado fsico de los lpidos (fig. 4-4). En vez de consistir en una bicapa inmvil esttica, las molculas de lpido se presentan en estado lquido capaces de girar y efectuar desplazamientos laterales dentro de la membrana. La estructura y disposicin de las protenas de la membrana en el modelo de mosaico fluido son notablemente diferentes de las propuestas en modelos previos. Las protenas del mosaico fluido se presentan como "un mosaico" de partculas discontinuas que penetran profundamente hacia el interior y atraviesan por completo la capa de lpidos (fig. 4-4). Pero lo ms importante del modelo de mosaico fluido es que considera las membranas celulares como estructuras dinmicas cuyos componentes son movibles^ con capacidad para reunirse y participar en interacciones transitorias o semipermanentes de diferentes tipos. En las siguientes secciones examinaremos parte de las pruebas empleadas para formular y apoyar este modelo dinmico de la estructura de la membrana y consideraremos algunos datos recientes que an confirman este modelo.

Composicin de la membrana
Todas las membranas son estructuras de lpidos. y protenas cuyos componentes se mantienen unidos formando una delgada capa por medio de enlaces no covalentes. Adems

CAPITULO 4 Estructura y funcin de la membrana plasmtica

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Protena integral

FIGURA - 1 - 1 Estructura de la membrana plasmtica, a) Modelo del mosaico fluido de la estructura de la membrana segn lo propusieron inicialmente Singer y Nicolson, en 1972. A diferencia de modelos previos, las protenas penetran y atraviesan la bicapa de lpidos. b) Representacin actual de la membrana que muestra la misma organizacin bsica propuesta por Singer y Nicolson. Ahora se sabe que la superficie externa de la mayor parte de las protenas de la membrana, y tambin un pequeo porcentaje de los fosfolpidos, contienen cadenas cortas de azcares (cadenas con cuentas amarillas y verdes) que constituyen glucoprotenas y glucolpidos. Estas porciones de las cadenas de polipptidos se extienden a travs de todo el espesor de la bicapa de lpidos; en condiciones tpicas se presentan como hlices alfa compuestas de aminocidos hidrfobos, (a: Reimpreso con permiso de S.). Singer y G.L. Nicolson, Science 175:720, 1972. American Association for Advancement of Science.)

de lpidos y protenas, la membrana tambin contiene carbohidratos (fig. 4-4, b). La proporcin entre lpidos y protenas vara considerablemente (cuadro 4-1) segn el tipo de membrana celular (plasmtica, reticuloendoplsmica, complejo Golgi), tipo de organismo (procarote, vegetal, animal) y tipo de clula (cartilaginosa, muscular, heptica). Por ejemplo, en la membrana interna de las mtocondrias, la relacin protena/lpidos es muy alta en comparacin con la membrana plasmtica del eritrocito, que a su vez es alta comparada con las membranas de la vaina de mielina

que rodean una clula nerviosa. Estas diferencias pueden correlacionarse en gran medida con la funcin particular de estas membranas. La membrana interna de las mitocondrias contiene protenas transportadoras de la cadena de transporte de electrones y su contenido de lpidos es menor en relacin con otras membranas. La mejor manera de describir la vaina de mielina es como un aislante elctrico que envuelve la neurona (fig. 4-5),_juna funcin que es mejor realizada por una gruesa capa de lpidos de resistencia elctrica elevada y contenido mnimo de protenas.

120

CAPITULO 4 Estructura y funcin de la membrana plasmtica CUADRO 4-1. Contenido de lpidos y protenas de las membranas Membrana Mielina Membranas plasmticas Clula heptica Ascitis de Ehrlich Vellosidad intestinal Fastasma de eritrocito Retculo endoplsmico Mitocondrias Membrana externa Membrana interna Bastoncillos de la retina Laminillas del cloroplasto Bacterias Grampositivas Gramnegativas Micoplasrna Halfila Protena/lpidos (peso/peso) Colesterol/Ipidos polares (mol/mol) 0.7-1.2 0.3-0.5 0.5-1.2 0.9-1.0 0.03-0.08 0.03-0.09 0.02-0.04 0.13 0 Principales lpidos polares*
Cer, PE, PC PC, PE, PS, Efm

0.25

1.0-1.4
2.2 4.6 1.5-4.0 0.7-1.2 1.2 3.6 1.5 0.8
2.0-4.0

Efm, PE, PC, PS PC, PE, Efm

DPG, PC, PE, Pas

PC, PE, PS GalDG, SL, PS

DPG, PG, , PE, aaPG PE, PG, DPG, AP PGP anlogo del ter

2.3 1.8

0 0 0 0

* Las abreviaturas son: Cer, cerebrsidos: DPG, difosfatidilglicerol, GalDG, galactosildiglicrido; AP, cido fosfatdico; PC, fosfatidilcolina; PE, fosfatidiletanolamina: aaPG, esteres aminoacil de fosfatidilglicerol; Pas, plasmalgeno; SL, sulfolpido; Efm, esfingomielina. FUENTE: E.D. Korn, Reproducido, con permiso, de ANNUAL REVIEW OF B1OCHEMISTRY, val 38, 1969, por Annual Reviews Inc.

Lpidos de la membrana

Las membranas contienen varios tipos de lpidos, todos anfipticos; o sea, contienen regiones hidrfilas e hidrfobas (como se ilustra en la figura 4-3). La mayor parte de los lpidos de la membrana contienen un grupo fosfato, y las principales excepciones son colesterol y glucolpidos. Puesto que casi todos los fosfolpidos de la membrana poseen un esqueleto glicerol, se les denomina fosfoglicridos (fig. 4-6). A diferencia de los triglicridos, que poseen tres cidos grasos (pg. 47, cap. 2), los glicridos de la membrana son diglicridos: slo dos grupos hidroxilo del glicerol se esterifican para formar cidos grasos; el tercero se esterifica para formar un grupo fosfato. La molcula sin otras sustituciones, adems del fosfato y las dos cadenas lpidas acilo, se denomina cido fosfatdico y prcticamente est ausente en la membrana. En vez de esto, los diglicridos de la membrana contienen un grupo adicional unido al fosfato, por lo general en forma de colina (para formar la fosfatidilcolina), etanolamina (la fosfatidiletanolamina), serina (la fosfatidiserina), o nositol (el fosfatidilinositol). Cada uno de estos grupos es pequeo e hidrfilo y, junto con el fosfato elctricamente cargado al cual se unen, forman un dominio muy hidrosoiuble en un extremo de la molcula denominado grupo de la cabeza. Por lo contrario, las cadenas lpidas acilo son largas, no ramificadas, formadas por hidrocarburos hidrfobos (fig. 4-6). Un cido graso de la membrana puede estar completamente saturado (o sea, carecer de dobles enlaces), monoinsaturado (un solo doble enlace) o poliinsaturado (ms de un doble enlace). A menudo los fosfoglicridos contienen una cadena lpida acilo insaturada y una saturada.

FIGURA 4-5, Vaina de mielina. Micrografa electrnica del axn de una clula nerviosa rodeada por una vaina de mielina que consta de capas concntricas de membrana plasmtica. La vaina de mielina aisla la clula nerviosa de su entorno y como resultado aumenta la velocidad a la cual pueden viajar los impulsos a lo largo del axn (analizado en la pgina 156). (Tomado de Leonard Napolitano, Francis LeBaron y Joseph Scaletti, }. Cell Biol. 34:820, 1967. Con permiso de Rockefeller University Press.)

CAPITULO 4 FIGURA 4-0. Estructura qumica de los lpidos de la membrana, a) Estructura de ios lpidos derivados de glicerol, todos los cuales son fosfolpidos (vase tambin figura 2-22). b) Lpidos derivados de esfingosina. La csfingomielina es un fosfolpido, los ganglisdos son glucolpidos. Un tercer lpido de la membrana es el colesterol, que se muestra en la siguiente figura (R = cadena lipoacil).

Un tipo menos abundante de lpidos de membrana, denominados esfingolpidos, se derivan de esfingosina, un alcohol aminadp que contiene una larga cadena de hidrocarburo (fig. 4-6). Los esfingolpidos contienen esfingosina unida a un cido graso (R en la figura 4-6, b) a travs de su grupo amino. Esta molcula es un ceramido. Los diferentes lpidos formados por esfingosina contienen grupos adicionales esterificados en el alcohol terminal de la fraccin esfingosina. Si el resultado de la sustitucin es la introduccin de un grupo fosforilcolina, entonces la molcula es una esfingomielina, el otro fosfolpido de la membrana. La molcula ser un glucolpido si la sustitucin introduce un carbohidrato. Si el carbohidrato es un azcar simple, el glucolpido se denomina cerebrsido; si es un oligosacrido, el glucolpido se llama ganglisido. Puesto que todos los esfingolpidos tienen dos largas cadenas de hidrocarburos hidrfobas en un extremo y una regin hidrfla en el otro, tambin son anfipticos y con estructura total bsicamente similar a la de fosfoglicridos. Otro componente lpido de ciertas membranas es el esterol colesterol (vase fig. 2-9), que en ciertas clulas animales puede constituir hasta 50% de las molculas pidas de la membrana plasmtica. Las membranas plasmticas de la mayor parte de las clulas vegetales y de todas las clulas bacterianas carecen de colesterol. El colesterol es ms pequeo que los otros lpidos de la membrana y menos antiptico. Como se muestra en la figura 4-7, las molculas de colesterol se orientan con sus grupos hidroxilo hidrfobos hacia la superficie de la membrana y su extremo hidrfobo integrado a la bicapa de lpidos. Ms adelante analizaremos el efecto de estas molculas sobre las propiedades de la bicapa. En el cuadro 4-2 se presentan los lpidos que componen diferentes membranas. Bicapa de lpidos. En 1925, dos cientficos holandeses, E. Gorter y F. Grendel, propusieron por primera vez que las membranas celulares podan contener una bicapa de lpidos. Estos investigadores extrajeron lpidos de eritrocitos humanos y midieron la superficie cubierta por dichos lpidos al extenderlos sobre la superficie del agua (fig. 4-8, a). Puesto que los eritrocitos de mamfero carecen de ncleo y de organelds citoplsmicos, la membrana plasmtica es la nica estructura que contiene lpidos; por lo tanto, se puede asumir que todos los lpidos del eritrocito corresponden a la membrana plasmtica (pgina 140). La proporcin entre la superficie de agua cubierta por los lpidos extrados de eritrocitos y 3a superficie calculada para los eritrocitos de los cuales se extrajeron dichos lpidos vari entre 1.8 y 2.2 a 1. Gorter y Grendel concluyeron que la verdadera proporcin era 2:1 y que la membrana plasmtica contena una capa bimolecular de lpidos o simplemente una bicapa de lpidos. Tambin sugirieron que los grupos polares de cada capa molecular (hoja) se dirigen al exterior de la bicapa (como se muestra en la figura 4-8, b). Esta sera la dispo-

H 2 C-0-O (CH;)7CH>CHCH,),CH, i 9 HC-0-C-(CH2)7CH.CH(CH;)7CH3

Acido dioleoil fosfatdico Acido fosfatdico Fosfatidilcolina (lecitina) Fosfatidilserina Fosfatidiletanolamina (cefalina) Fosfatidilinositol
H OH H-

O--P-O-CH; -

o
HjC-0-C-R
| O HC-O-C-R 1

COQHj-CH f CH r

O-P-O-CH-,

<r

o
H,C-0-C-R HC-O-C-R

Difosfatidilg (i cero I (cardiolipina)

CH i ' ;-0-P-0-CH, i ' HO-O-H o0*

! !

CH,-0-P-0-CH, 1 ' O HC-O-C-RI O C-O-C-RH,

(a)
H H

Esfingosina

HO-CH,-C C NH, OH H H

Ceramida

HO-CHr - CNH OH 0*C - R H

Esfingomielina
H H 0C R

Un cerebrsido
Un ganglisido (Givra)

(b)

122

CAPITULO 4 Estructura y funcin de la membrana plasmtica

FIGURA 4-7. Las molculas de colesterol de una membrana se orientan con sus extremos hidrfilos pequeos hacia la superficie externa de la bicapa y la masa de su estructura empacada dentro de las colas de cidos grasos de los fosfolpidos. La colocacin de las molculas de colesterol impide el apretado empacamiento de los fosfolpidos, que tiende a incrementar la fluidez de la bicapa.

sicin termodinmicamente favorecida, puesto que los grupos polares de la cabeza de los lpidos podan interactuar con las molculas de agua que los rodean, en tanto que las cadenas hidrfobas de ipidos acilo estaran protegidas del medio acuoso. Por lo tanto, los grupos de las cabezas polares enfrentan al citoplasma en un borde y el plasma sanguneo en el otro. Aunque Gorter y Grendel efectuaron varios clculos errneos (compensados entre s por casualidad), llegaron a la conclusin correcta de que las membranas naturales contienen una bicapa de lpidos. La presencia en las membranas de una capa bimolecular de molculas lpidas anfipticas tiene consecuencias importantes para las propiedades fisiolgicas de la membrana. Esto se manifiesta claramente cuando se comparan las propiedades de una bicapa artificial de lpidos con las propiedades de una membrana celular verdadera. En el aparato cuyo diagrama se muestra en la figura 4-9, a, se puede

preparar con facilidad una bicapa artificial. Los lpidos empleados se recogen con la punta de un pincel fino y luego se aplican en los pequeos agujeros de una hoja de plstico que separa dos cmaras acuosas. Los lquidos colocados a travs de las aberturas forman una delgada pelcula que espontneamente se adelgaza hasta un espesor menor de 10 nm (fig. 4-9, b). Muchos criterios demuestran que esta pelcula es una bicapa de lpidos con la misma organizacin mostrada en la figura 4-3. La formacin espontnea de una bicapa indica que esta disposicin de las molculas lpidas es la organizacin termodinmicamente preferida. Las bicapas artificiales tambin pueden adoptar la forma de vesculas esfricas llamadas liposomas; segn el mtodo de formacin, pueden consistir en un nido de esferas membranosas concntricas o en una simple bicapa continua de lpidos que rodea un compartimiento acuoso (fig. 4-10). Los liposomas son invaluabies para investigar las propiedades de las membranas. Se pueden introducir protenas de la membrana en los liposomas y estudiar su funcin en un ambiente mucho ms simple que el de una membrana natural, Tambin se han probado liposomas que contienen DNA o diferentes frmacos dentro de su compartimiento central como sistemas potencialmente transportadores para entregar materiales a clulas especficas del cuerpo (pgina 153). En el cuadro 4-3 se comparan las propiedades de una bicapa artificial de lpidos con las de una membrana natural. Es evidente que son notablemente similares. Incluso el aspecto de una bicapa artificial en el microscopio electrnico (fig. 4-9, c] revela la misma imagen de tres capas observada en las membranas naturales. Sin duda, gran parte de la estructura y comportamiento de las membranas es resultado de la presencia de una bicapa de lpidos. Las propiedades no similares entre las dos, en particular de permeabilidad y resistencia elctrica, se atribuyen a las protenas de la membrana. La presencia de una bicapa de lpidos tiene muchas consecuencias en la estructura y funcionamiento de a clula. Debido a la cohesin y formacin espontnea de las bicapas nunca se observan membranas con bordes libres; siempre son estructuras ntegras continuas. Como resultado, las membranas forman extensas redes interconectadas que se

CUADRO l-'2. Composicin de los lpidos de algunas membranas biolgicas*

Lpido3 Eritrocito humano Mielina humana Mitocondrias de corazn de ternera

E. coli
0 0

Acido fosfatdico Jico Fosfatidilcolina na lolamina Fosfatidiletanol ?rol Fosfatidilglicero Fosfatidilserina na Cardiolipina Esfingomielina la Glucolpidos Colesterol

1.5 19 18 0
8.5

0.5 10
20 0

0
17.5

10 25

8.5 0 8.5 26 26

0 39 27 '0 0.5
22.5 0 0

65 18 0 12 0

0
0

* Los valores expresados son porcentaje en peso de los lpidos totales. FUENTE: C. Tanford, The Hydrophobic Effect, p. 109, Wiley, 1980.

CAPITULO 4

123

FIGURA 4-i Clculo de la superficie de una preparacin de lpidos. a) Cuando se disuelve una muestra de fosfolpidos en un solvente orgnico, como el hexano, y se extiende sobre una superficie acuosa, las molculas de fosfolpidos forman una capa sobre el agua cuyo espesor es de una sola molcula: capa monomolecular. En esta capa las molculas se orientan con sus grupos hidrfilos enlazados a la superficie del agua y sus cadenas hidrfobas dirigidas al aire. Para estimar la superficie que los lpidos cubriran si fueran parte de una membrana, se comprimen las molculas de dichos lpidos en el rea ms pequea posible por medio de barreras desplazables. Mediante este tipo de aparato, Gorter y Grendel concluyeron que los eritrocitos contenan suficientes lpidos para formar una capa sobre su superficie de dos molculas de espesor: una bicapa. b) Naturaleza de la bicapa de lpidos, segn la propusieron Gorter y Grendel. Los grupos polares se dirigen hacia afuera y las colas de cidos grasos hacia adentro.

Barrera fija

Lpidos

\a \e

Agua limpia

(a)

(b)

Distribucin inicial de la solucin de lpidos

Procedimiento experimental para la preparacin de bicapas artificiales, a) Los lpidos disueltos en un solvente se aplican con una brocha a travs de un agujero practicado en una placa que separa dos cmaras acuosas, b) Inicialmente, la capa de lpidos es gruesa pero pronto se adelgaza de manera espontnea para formar la bicapa. c) Micrografa electrnica de una bicapa artificial de lpidos fijada con permanganato de potasio y nitrato de lantano que muestra el aspecto trilaminar en ausencia de protenas. El borde oscuro y las lneas exteriores al parecer son los sitios de las cabezas polares, (c: Cortesa de Cien L. Decker.)

Detalle de la membrana

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CAPITULO 4 Estructura y fundn de a membrana plasmtica

mocin (fig. 4-11, a) o la divisin celular (fig. 4-11, b). Se cree que la bicapa de lpidos facilita la fusin o el desdoblamiento de las membranas. Por ejemplo, durante la secrecin, cuando las vesculas citoplsmicas se funden con la membrana plasmtica, o la fertilizacin, cuando dos clulas se unen para formar una sola clula {fig. 4-11, c], participan procesos en los cuales dos membranas separadas se renen para constituir una capa continua. La formacin espontnea de bicapas de lpidos tambin es importante en las teoras de la evolucin celular. Una capa externa que contiene lpidos proporciona la barrera necesaria para aislar el medio interno viviente cuyas propiedades son muy diferentes a las del medio externo. Segn estudios de bicapas artificiales, puede esperarse que dicha barrera se forme de manera espontnea. La formacin de una'barrera alrededor del primer conjunto de molculas autoduplicantes, al parecer fue el primer paso esencial en la evolucin de las clulas.
Carbohidratos de la membrana

FIGURA 4-10. Un liposoma. Micrografa electrnica de un liposoma, que es una vescula esfrica cuya pared externa est compuesta de una sola bicapa continua de lpidos que rodea una cmara llena de lquido. Los liposomas se forman al suspender fosfolpidos en solucin acuosa y luego sometiendo la suspensin a sonicacin, lo que provoca que los lpidos se autoensamblen formando esas vesculas cerradas. (Cortesa de Walter Stoeckenius.)

ramifican a travs de las clulas. Gracias a la flexibilidad de la bicapa de lpidos, las membranas son deformables y pueden cambiar toda su forma, como ocurre durante la loco-

Las membranas plasmticas de clulas eucariotas poseen carbohidratos unidos mediante enlaces covalentes a los componentes lpidos y protenicos (fig. 4-4, b). Segn la especie y el tipo de clula, el contenido de carbohidratos de la membrana plasmtica vara entre 2 y 10% del peso. Por ejemplo, la membrana plasmtica del eritrocito, mostrada en la figura 4-1, a, contiene alrededor de 52% de protena, 40% de lpidos y 8% de carbohidratos. Del 8% de carbohidratos, cerca de 7% se une a lpidos mediante enlaces covalentes para formar glucolpidos, y el restante 93% se une a protenas con enlaces covalentes para formar glucoprotenas. Como se indica en la figura 4-4, b, todos los carbohidratos de la membrana plasmtica se enfrentan en el espacio extracelular. Los carbohidratos de las membranas celulares internas tambin suelen alejarse del citosol (la razn de esta orientacin se ilustra en la figura 8-10). En las glucoprotenas, el carbohidrato se presenta como un oligosacrido corto ramificado que en condiciones tpicas posee menos de 15 azcares por cadena. Los azcares

CUADRO 4-3. Propiedades fsicas de las membranas biolgicas y de las bicapas de lpidos simples no modificadas Propiedades Espesor (): Por microscopa electrnica Por difraccin de rayos X Por mtodo ptico Por capacitancia y constante dielctrica Resistencia (Q/cm) Capacitancia (wF/cm2) Potencial de reposo fmV) Voltaje de desintegracin (mV) ndice de refraccin Tensin interfacial (ergios/cm2) Permeabilidad al agua (10~4 cm/seg) Membranas biolgicas 60-130 75-100 30-150 102-105 0.5-1.3 10-90 100 1.6 0.03-3.0 0.25-58
Bicapa

60-90 40-80 40-130 10-10R 0.3-1.3 0-140 100-550 1.56-1.66 0.2-6.0 2.3-24

FUENTE: F. Vandenheuvel, Adv. Lipid Res. 9:173,1971.

CAPITULO 4 Estructura y funcin de la membrana plasmtica

125

--

(a)
FIGURA 4-11. Propiedades dinmicas de la membrana plasmtica, a) El borde delantero de una clula en movimiento casi siempre contiene sitios donde la membrana plasmtica muestra surcos ondulantes, b) La divisin de una clula se acompaa de deformacin de la membrana plasmtica conforme es tirada hacia el centro de la clula. A diferencia de la mayor parte de las clulas en etapa de divisin, el surco de desdoblamiento de este huevo ctenforo en divisin comienza en un polo y se desplaza undireccionalmonte a travs del huevo, c) Las membranas pueden fusionarse con otras membranas. Este espermatozoide se encuentra en el proceso de fusionar su membrana plasmtica con la del vulo, (a: Cortesa de Jean Paul Revel; b: cortesa de Ganj Freeman; c: cortesa de A.L. y L.H. Colivin.)

observados con mayor frecuencia en estas cadenas de carbohidratos se muestran en la figura 4-12, a. El cido silico por lo comn es el azcar terminal de los oligosacridos y confiere carga negativa a las cadenas de carbohidratos. Los oligosacridos pueden unirse a diferentes aminocidos mediante dos tipos principales de ligaduras (fig. 4-12, b). Se piensa que estos carbohidratos ramificados participan en la mediacin de las interacciones de la clua con otras clulas y tambin con su entorno no viviente (esto se analiza en el captulo 7). Todava no se comprenden bien las funciones de los glucolpdos de la membrana, aunque se les pueden asignar ciertas propiedades. Por ejemplo, los carbohidratos de los glucolpidos de la membrana plasmtica de eritrocitos determinan si el grupo sanguneo de una persona es A, B, AB u O. Los determinantes ABO son cadenas cortas ramificadas de oligosacridos (fig1. 4-13). La persona con tipo sanguneo A posee una enzima con una -acetilgalactosamina en el extremo de la cadena, en tanto que una persona con sangre tipo B tiene una enzima que se une a galactosa en la cadena terminal. Las personas con tipo sanguneo AB poseen ambas enzimas, en tanto que las personas con sangre tipo O carecen de enzimas capaces de unirse a cualquier azcar terminal. Tambin se ha demostrado que los glucolpidos participan en ciertas enfermedades infecciosas; la toxina del clera y el virus de la influenza penetran en su clula especfica unindose primero a los ganglisidos de la superficie celular. Si los glucolpidos pueden funcionar como "compuertas" para la entrada de patgenos, tal vez tengan algn tipo de funcin receptora en las clulas normales. En contraste con la mayor parte de los carbohidratos de peso molecular elevado (como glucgeno, almidn o celulosa), los cuales son polmeros de un solo azcar, los oligosacridos unidos a protenas y lpidos de la membra-

na muestran considerable variabilidad estructural. Por consiguiente, estas cadenas de oligosacridos pueden mostrar especificidad en sus propias interacciones y con otros tipos de molculas.
Protenas de la membrana

Segn el tipo de clula y el organelo particular del interior de dicha clula, una membrana puede contener desde una docena hasta ms de 50 protenas diferentes. Estas protenas no se disponen al azar dentro de la membrana, sino que cada una se localiza y orienta en una posicin particular respecto de la bicapa de lpidos. Es digno de notar que todas las protenas de la membrana se sitan asimtricamente de modo que las propiedades de la porcin externa de la membrana son muy diferentes a las de la porcin interna. Como resultado de esta "lateralidad" de la membrana, las protenas de partes de la membrana que interactan con otras clulas o con Hgandos extracelulares, como hormonas o factores de crecimiento, se enfrentan al exterior, en tanto que las protenas de las partes de la membrana que interactan con molculas citoplsmicas, como protenas G o proteincinasas (captulo 15), enfrentan el interior de la clula. Las protenas de la membrana se pueden agrupar en tres tipos distintos segn la intimidad de su relacin con la bicapa de lpidos (fig. 4-14). Estos grupos son: 1. Protenas integrales, que penetran en la bicapa de lpidos. En realidad, prcticamente todas las protenas integrales atraviesan por completo la bicapa de lpidos y por lo tanto tienen dominios que sobresalen en ambos lados de la membrana, el extracelular y el citoplsmico. 2. Protenas perifricas, que se localizan por completo fuera de la bicapa de lpidos, sobre la superficie extracelular o citopsmica, pero todava relacionadas con la

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CAPITULO 4 Estructura y funcin de la membrana plasmtica FHJL'KA -1-12. Carbohidratos de la membrana, a) Estructura qumica de los azcares predominantes en la membrana, b) Los dos tipos de enlace que unen azcares a una cadena de polipptidos. La unin N-glucosdica entre asparagina y N-acetilglucosamina es ms comn que la unin O-glucosdica entre serina o treonina y N-acetilgalactosamina.

CH2OH

CH2OH

OH

D-glucosa CH2OH

HO
OH H

superficie de la membrana mediante enlaces no covalentes. 3. Protenas ancladas a lpidos, localizadas fuera de la bicapa de lpidos, pero unidas mediante enlaces cova1 en tes a una molcula pida situada dentro de la bicapa.
l-fucosa CH2OH

H
CH2OH

OH

D-galactosa

NH

/V-acetil-D-glucosamina

/V-acetil-D-galactosamina CH2OH CHOH

O H CHOH fi H | ) CH,-C-N

Protenas integrales de la membrana. Igual que los fosfolpidos de la bicapa, las protenas integrales de la membrana tambin son antipticas y presentan porciones hidrfilas e hidrfobas. A diferencia de las protenas solubles del citoplasma, que tienden a presentar un ncleo hidrfobo y una superficie hidrfila (fig. 2-28}, las protenas integrales de la membrana contienen residuos no polares en gran parte de su superficie expuesta. Estas regiones no polares de la protena se integran al interior de la bicapa de ipidos donde pueden sufrir interacciones hidrfobas con cadenas lpidas acilo (fig. 4-14}. La funcin de estos dominios hidrfobos para introducir protenas en la "pared" lpida de la membrana es muy parecida a la de ganchos que pueden introducirse en los orificios de un perchero. El resto de una protena integral se compone principalmente de aminocidos inicos y polares no integrados a la bicapa que sobresa-

OH

(a)

Acido /V-acetilneuramnico (cido silico) Antgeno O

Asparagina

CH2OH

N-C-CH2-CH

H u

L, O

NH

O
H

C=0
H
NHCOCH3
Esqueleto poiipeptfdico

Antgeno A

A/-acetilgucosamina
Serina |X = H)

Treonina |X=CH 3 ]

Antigeno B
CH2OH

NH

0-HCH

H
H NHCOCH3 A/-acetlgalactosamna

c-o

(i')

FIGI'IA -1-13. Antgenos de los grupos sanguneos. El tipo sanguneo de una persona (A, B, AB u O) es determinado por una corta cadena de azcares unidos mediante enlace covalente a lpidos y protenas de la membrana del eritrocito. Aqu se muestran los oligosacridos unidos a los lpidos de la membrana (que forman un gaiiglisido) que producen los tipos sanguneos A, B y O. Una persona con tipo sanguneo AB tiene ganglisidos con ambas estructuras, A yB.

CAPITULO 4 Tres clases de protenas de la membrana, a) Protenas integrales que pueden contener una o ms hlices que atraviesan la membrana, b) Protenas perifricas de la superficie interna de la membrana que mantienen uniones no covalentes con los grupos polares de la bicapa de lpidos o con alguna protena integral de la membrana, c) Protenas ancladas en lpidos, las cuales pueden enlazarse en forma covalente a un fosfolpido o a un cido graso integrado en la bicapa de lpidos.

127

len del borde de la bicapa en uno o ambos lados o forman un canal acuoso a travs de la misma. Estos dominios hidrfilos son las partes de una protena integral que pueden interactuar con sustancias hidrosolubles (iones, sustratos de bajo peso molecular, hormonas y otras protenas) en la superficie de la membrana o dentro de un canal central. Como veremos ms adelante, no es necesario que las protenas integrales sean estructuras fijas, sino ms bien deben tener capacidad para desplazarse lateralmente dentro de la propia membrana. Debido a su superficie hidrfoba, las protenas integraes de la membrana son difciles de extraer y de estudiar. La extraccin de estas protenas de membrana de ordinario se logra con ayuda de un detergente. Los detergentes son compuestos anfipticos (fig. 2-20) con un extremo polar y una cadena no polar de carbohidratos. Gracias a esta estructura, los detergentes pueden sustituir a los fosfolpidos estabilizantes de las protenas integrales en tanto mantienen su solubilidad en solucin acuosa. Una vez que las protenas se solubilizan por accin del detergente, se pueden efectuar varios procedimientos analticos para determinar los aminocidos que componen a la protena, su peso molecular, la secuencia de aminocidos, y algo ms. La orientacin de una protena dentro de la membrana se puede determinar experimentalmente utilizando agentes no penetrantes, como marcadores o modificadores de las protenas. Consideremos lo que ocurre cuando se trata una preparacin de clulas intactas con una enzima proteoltica como la tripsina, demasiado grande para atravesar la membrana plasmtica (fig. 4-15, a, recuadro superior). Las partes de las protenas de membrana situadas en el lado externo de la bicapa de lpidos sern digeridas por la enzima aadida, pero las partes situadas entre la bicapa o en la cara de la membrana enfrentada al citoplasma no sern afectadas. El efecto del tratamiento puede determinarse extrayendo las protenas y sometindolas a electroforesis en gel de poliacrilamida y dodecilsulfato de sodio (fig. 4-15, b). La protena con parte de su estructura digerida se desplaza a una posicin diferente en el gel cuando se compara con la misma protena de una membrana no tratada. Para determinar si una parte de la protena sobresale de la cara citoplsmica de la membrana se puede incrementar la permeabilidad de las clulas mediante tratamiento con detergentes no inicos o por choque osmtico {fig. 4-31, b). En estas condiciones, la membrana plasmtica ya no acta como barrera para la penetracin de las enzimas proteolticas, de modo que las partes citoplsmicas de la protena tambin sufrirn la digestin enzimtica (parte inferior de la figura 4-15, a,b). Una manera alternativa de predecir la organizacin de una protena integral de membrana es a partir de la secuen-

(b)

(c)

128

CAPITULO 4 * Estructura y funcin de la membrana plasmtica

Clula ( intacta I

Se aade tripsina

Arriba
4 5

i Abajo

Exterior Bicapa de lpidos Interior

I I I

Testigo

I II
i i

Tratamiento de la clula testigo con tripsina

3 2

I I I
il

Tratamiento de la clula permeabilizada con tripsina

II

Clula permeabilizada

Aadir tripsina

(a)
FIGURA 4-15. Procedimiento experimental para determinar la orientacin de las protenas dentro de una membrana plasmtica. La hipottica membrana estudiada contiene cinco protenas distintas, a) Las clulas intactas se tratan con tripsina, una enzima no penetrante, para digerir las partes de la protena proyectadas al medio externo. Por to contrario, si la clula se vuelve permeable (por extraccin con detergentes no inicos o exposicin a un medio hipotnico), las partes de las protenas de membrana proyectadas al interior del citoplasma tambin son accesibles a la digestin proteoltica. b) Esquema de los resultados de la electroforesis en gel de poliacrilamida con dodecilsulfato de sodio (EGPADSS) que muestra el patrn de bandas que se obtiene en el experimento descrito en a. La velocidad de migracin de las protenas durante la electroforesis es inversamente proporcional a su peso molecular. Por lo tanto, las protenas a las que se suprime una parte se desplazan con mayor rapidez a travs del gel. Al concluir el expsrirnento, estas protenas estn ms cerca del borde inferior del gel, o sea, recorren una mayor distancia en comparacin con la que hubieran recorrido si no fueran tratadas con la enzima.

ca de aminocidos de dicha protena, que puede deducirse de la secuencia de nucletidos de un gen aislado. En condiciones tpicas se puede predecir que los segmentos de una protena que atraviesan la membrana constan de una cadena de 20 a 25 aminocidos no polares que tal vez formen una hlice alfa. Esta suposicin depende de numerosos estudios, os cuales han demostrado que esos segmentos de protena que atraviesan la bicapa de lpidos, los segmentos transmembrana, de ordinario consisten en aminocidos no polares organizados en conformacin alfa helicoidal. La glucoforina A, principal protena de la membrana plasmtica del eritrocito, es un ejemplo de protena integral con una sola hlice alfa hidrfoba transmembrana {fig. 4-16). Sin embargo, hay una importante excepcin a la rega de las hlices transmembrana predominantemente hidrfobas. Muchas protenas integrales de la membrana contienen un canal acuoso para permitir el paso de iones o de solutos polares a travs de la bicapa de lpidos. Se cree que las paredes de estos canales acuosos contienen: 1) hlices

anfipticas en las cuales una cara de cada hlice consta de aminocidos no polares enfrentados a la bicapa de lpidos, en tanto que la cara opuesta contiene principalmente residuos polares enfrentados al poro (fig. 4-17), o 2) un borde de lminas beta muy similar al barril beta ilustrado en la figura 5-3. Las protenas integrales se pueden clasificar de la siguiente manera: 1. Protenas monotpicas integradas a la bicapa de pidos y expuestas en una sola superficie de la membrana. Estas protenas son raras, si en realidad existen. Se cree que el citocromo b$, una proteina de las membranas citoplsmicas, es una protena monotpica, pero no hay acuerdo unnime. 2. Protenas bitpicas que poseen un segmento dentro de la membrana y por lo tanto la atraviesan una sola vez y estn expuestas en ambos lados de la membrana (fig. 4-16). Esta clase incluye gran variedad de receptores de

CAPITULO 4 Estructura y funcin de la membrana plasmtica

129

Superficie exterior

FIGURA 4-16. Glucoforina A, una protena integral con un solo dominio transmembrana. La hlice a simple que atraviesa la membrana contiene predominantemente residuos hidrfobos. (Los aminocidos de la hlice se muestran con un color codificado segn el carcter de su grupo R, igual que en la figura 2-26.) Se cree que los cuatro aminocidos con carga positiva del dominio citoplsmico de la protena de membrana forman enlaces inicos con grupos cargados negativamente en las cabezas de los lpidos. Los carbohidratos estn unidos a ciertos residuos de aminocidos en la superficie externa de la protena. Todos los oligosacridos, excepto uno, mantienen enlaces O (la excepcin es el oligosacrido unido al residuo de asparagina en la posicin 26). En la pgina 139 se analiza el papel de la glucoforina en la membrana del eritrocito.

Bcapa

Pro ,

Ser 'Lis t Lis 100

ArgiArg

Superficie interior (citoplasma)

(\\eiileu--

la membrana plasmtica que enlazan diferentes ligandos en su superficie externa (p. ej., un factor de crecimiento, un pptido hormona o un antgeno) y transmiten un mensaje a travs de la membrana hacia el citoplasma por medio del segmento que atraviesa dicha membrana (fig. 15-25). 3. Protenas politpicas que poseen ms de un segmento dentro de la membrana y por lo tanto se entrelazan avanzando y retrocediendo a lo largo de la membrana. Esta clase incluye las protenas que forman canales para el paso de iones y solutos a travs de la membrana plasmtica y tambin protenas con otras funciones (p. ej., el receptor para la partcula seal del receptor del retculo endoplsmico, el receptor adrenrgico que se enlaza a la epinefrina, el pigmento fotosensible de los bastoncillos de la retina, y los polipptdos M y L del centro de reaccin fotosinttica de las bacterias, que se muestra en la pgina 115). El centro de reaccin bacteriana contiene protenas integrales cuya disposicin precisa dentro de la membrana fue descrita por primera vez mediante cristalografa de rayos X. Protenas perifricas de la membrana. Las protenas perifricas se unen a la membrana mediante dbiles enlaces electrostticos, sea a grupos hidrfilos de la cabeza de los lpidos o a porciones hidrfilas de las protenas integrales que sobresalen de la bicapa (fig. 4-14). Las protenas perifricas de ordinario se solubilizan mediante extraccin con soluciones acuosas salinas concentradas o pH alcalino, En realidad, la distincin entre protenas integrales y perifricas es incierta, porque muchas protenas de membrana contienen varios polipptidos, algunos de los cuales penetran en la bicapa de lpidos y otros permanecen en la periferia.

Las protenas perifricas mejor estudiadas (principalmente de la familia espectrina) se localizan en la superficie interna de la membrana plasmtica (fig. 4-31). Estas protenas forman una red fibrilar que acta como "esqueleto" flexible para suministrar apoyo mecnico a la membrana cuando se producen cambios rpidos en la morfologa celular y tambin para fijar las protenas integrales de la membrana. Otras protenas perifricas sobre la superficie interna de la membrana funcionan como enzimas o factores transmisores de seales a travs de la membrana. La superficie

FIGURA 4-] 7. Representacin esquemtica de cuatro hlices a originadas como un haz dentro de la membrana. Los crculos pequeos en azul representan cadenas laterales polares (grupos R) asociadas al centro del complejo, en tanto que los pequeos crculos rojos representan residuos no polares relacionados con la bicapa de lpidos que los rodean. Ntese que las cadenas laterales en realidad se proyectan desde el esqueleto en toda lo longitud de cada hlice a diferentes niveles; para representarlos en la figura se reducen a un solo plano.

130

CAPITULO 4 Estructura y funcin de la membrana plasmtica

Exterior

Superficie de fractura E Superficie de fractura P

Sin relieve

Con relieve

Citoplasma

(a)

0.3 om

FIGURA 4-18.Fractura por congelacin: tcnica para investigar la estructura de la membrana celular, a) Cuando se golpea un bloque de tejido congelado con una hoja cortante, el plano de fractura que atraviesa el tejido casi siempre pasa por enmedio de la bicapa de lpidos. El plano de fractura rodea las protenas en vez de romperlas a la mitad y las separa en una de las dos mitades de la bicapa. b) Esta micrografa muestra la superficie de un eritrocito congelado y luego fracturado, pero en vez de preparar una rplica, se dej derretir y el tejido se colore con un marcador para los grupos carbohidratos que sobresalen en la superficie externa de la protena integral glucoforina (fig. 4-16). Se puede observar que la glucoforina al separarse muestra preferencia por la mitad externa de la membrana, (b: Segn Pedro Pinto da Silva y Mara R. Torrisi, ]. Cell Biol. 93:467, 1982; con permiso de Rockefeller University Press.)

extracelular de la membrana plasmtica tambin puede contener protenas perifricas, pero estas protenas estn menos bien definidas. Protenas de membrana ancladas a lpidos. Se distinguen dos tipos de protenas de membrana ancladas a lpidos, segn los tipos de anclaje al lpido y la superficie de la membrana sobre la cual estn expuestos. Varias protenas presentes en la cara externa de la membrana plasmtica se enlazan a sta mediante un oligosacrido corto unido a una molcula de glucofosfatidilinositol (GFI) integrada a la hoja externa de la bicapa de lpidos (fig. 4-14, c). La presencia de estas protenas ancladas al GFI fue descubierta cuando se demostr que ciertas protenas de la membrana podan liberarse mediante una fosfolipasa que reconoca y rompa especficamente a los fosfolpidos que contienen inositol.

FIfl'RA 4 - l < > . Efecto de la tcnica al "aguafuerte" sobre una preparacin de fractura por congelacin, a) En tanto el procedimiento de fractura expone el interior de la membrana (las superficies de fractura E y P, EF y PF), el proceso al aguafuerte expone una parte de las superficies interna y externa de la membrana (superficies E y P, ES y PS). b) Rplica de una parte del eritrocito humano tratado con la tcnica de fractura por congelacin. Se observa que la superficie de fractura P est cubierta con partculas de 8 nm de dimetro, aproximadamente. Un pequeo surco (flecha) marca el sitio ce unin de la superficie cubierta de partculas y el hielo que la rodea, c) Rplica de un eritrocito fracturado por congelacin y cuyo relieve se fij con tcnica al "aguafuerte". Durante el proceso, la sublimacin del hielo expone una superficie lisa (S) claramente demarcada en la superficie interna P de fractura, (a: Segn Pedro Pinto da Silva y Daniel Branton, J. Cell Biol. 45,599, 1970: b-c: segn Tilomas W. Tillack y Vinccnt T. Marchesi, J. Cell Biol. 45:649, 1970; con permiso de Rockefeller University Press,)

CAPITULO 4 Estructura y funcin de la membrana plasmtica

131

Otro grupo de protenas presentes en el lado dtoplnsmico de la membrana plasmtica se encuentra anclado a la membrana mediante largas cadenas de hidrocarburos integradas a la hoja interna de la bicapa de lpidos (fig. 4-14, c). AI menos dos protenas relacionadas en esta forma con la membrana plasmtica (Src y Ras) han sido implicadas en la transformacin de clulas normales a estados malignos.
Distribucin de las protenas integrales: anlisis de fracturas por congelacin y de imgenes por congelacin "al aguafuerte"

El concepto de que las protenas pueden atravesar todo el espesor de la membrana en vez de limitarse simplemente al exterior de la bicapa se origin principalmente de los resultados de una tcnica llamada duplicacin por fractura de muestras congeladas (vase seccin 17-2). En este procedimiento, el tejido se solidifica por congelacin y luego se golpea el bloque congelado con una hoja afilada para fracturarlo en dos pedazos. El plano de fractura se sita con mayor frecuencia entre las dos hojas de la bicapa de lpidos (fig. 4-18). Una vez abierta la membrana en esta forma se depositan metales sobre las superficies expuestas para formar una replica en relieve que puede observarse con el microscopio electrnico. Como se muestra en la figura 4-19, esta rplica parece un camino regado de grandes pedruzcos llamados partculas relacionadas con la membrana. Puesto que el plano de fractura pasa a travs del centro de la bicapa, estas partculas corresponden a protenas integrales de la membrana extendidas cuando menos hasta la mitad del espesor de la capa de lpidos situada en el centro de la membrana. Cuando el plano de fractura alcanza a determinada partcula, la rodea en vez de romperla a la mitad. En consecuencia, cada protena (partcula) se separa unida a una mitad de la membrana plasmtica y deja el correspondiente "hoyuelo" en la otra mitad. En la figura 4-19, a, se muestra la relacin entre fracturas en la cara interna P (protoplsmica] y fracturas en la cara externa E (ectoplsmica). En la figura 4-19, b, se muestra la naturaleza particular de la cara con fracturas P en la membrana del eritrocito humano. La tcnica de fractura por congelacin no slo permite visualizar las protenas integrales de la membrana, sino que tambin se puede modificar para revelar protenas perifricas o partes de las protenas integrales presentes en la superficie de las membranas interna (P) o externa (E). Para examinar las superficies de !a membrana se debe efectuar un paso adicional en el procedimiento antes de cubrir las caras fracturadas con metal (sombreado) para observarlas en el microscopio electrnico. La muestra congelada y fracturada se expone al vaco durante un corto tiempo, durante el cual una delgada capa de hielo de ambas superficies, superior e inferior, de la membrana se evapora sin pasar por el estado lquido (sublimacin) (fig. 4-19, n). Al cubrir esta superficie con el metal se puede observar su textura en la rplica (porcin marcada con S en la figura 4-19, c). Este procedimiento de sublimacin se denomina congelacin al "aguafuerte". El gran valor de las tcnicas de fractura por congelacin y congelacin al "aguafuerte" es que permiten investigar la heterogeneidad microscpica de la membrana. En la rplica aparecen y pueden identificarse diferencias localizadas en partes de la membrana, como se muestra en la figura 4-20

FIGURA 4-20. Distribucin heterognea de las protenas integrales de membrana. Cuando se expone la membrana plasmtica del flagelo de un espermatozoide de mamfero durante fractura por congelacin, se puede observar que contiene una doble fila de partculas denominadas "cierre automtico" (flecha). La tcnica de fractura por congelacin es ideal para revelar este tipo de heterogeneidad microscpica dentro de una membrana. En la figura 4-30 se muestra la distribucin de protenas especficas en la membrana del espermatozoide a una escala mayor. (Cortesa de Daniel 5. Friend.)

de una pequea porcin de! espermatozoide. A diferencia del anlisis bioqumico, las observaciones microscpicas no promedian a todos los individuos de la poblacin, sino que los muestran tal como pueden apreciarse.

4-3 Lpidos y fluidez de la membrana

El estado fsico de los lpidos de una membrana puede describirse por su fluidez (o viscosidad).1 Igual que muchas otras sustancias, los lpidos pueden existir en fase slida cristalina o en fase lquida de viscosidad variable, segn la temperatura. Por ejemplo, consideremos una sencilla bicapa artificial hecha de fosfatidilcolina y fosfatidiletanolamina cuyos cidos grasos son principalmente insaturados. Si la temperatura de la bicapa se mantiene relativamente alta (p. ej., 37C), el lpido existe en estado relativamente fluido,
1 Fluidez y viscosidad guardan relacin inversa; la fluidez es una medida de la facilidad para fluir y viscosidad es la resistencia a fluir,