FACULTAD DE MEDICINA HUMANA

DEPARTAMENTO ACADMICO DE CIENCIAS BSICAS MDICAS

Gua de prcticas BIOLOGA CELULAR Y MOLECULAR 2007-II

Responsable de Prcticas: Dr Luis Rodrguez Delfn Profesores de Prctica : MSc Jhon W. Garca Lpez Dr. Nestor Alayo Rodrguez MSc Gonzlez Esparza Paola

PRACTICA N 5
OBSERVACIN Y RECONOCIMIENTO DE CLULAS EUCARIOTAS

I. FUNDAMENTO En 1939, en base a observaciones realizadas por los cientficos alemanes Schleiden y Schwan, se plasm la teora celular, la cual produjo un cambio radical en las ciencias biolgicas. Esta teora postula que los cuerpos de todos los animales y vegetales estn formados de clulas y que solo pueden aparecer nuevas clulas por divisin de las clulas preexistentes. De ah que los organismos por muy sencillos que sean estn constituidos por unidades vivas denominadas clulas. La clula eucariota es ms compleja que la clula procariota y contiene, a diferencia de esta ltima, ncleo celular. Los organismos ms simples (protozoarios) estn constituidos de una sola clula eucariota mientras que los ms complejos o multicelulares estn formados por un gran nmero de clulas eucariota que se hallan organizadas en tejidos, rganos y sistemas. II. OBJETIVOS

Observar y caracterizar clulas eucariotas de tipo vegetal (epidermis de cebolla y mucosa bucal). Observar y caracterizar clulas eucariotas de tipo animal (epitelio bucal, tejido adiposo y sangre).
III. MATERIALES Encontrars en el laboratorio Microscopio ptico Cubeta de tincin Lugol Frasco lavador Mechero de Alcohol Alcohol absoluto Debers traer de casa Cebolla Hisopos Tocino Agua estancada en frasco oscuro Materiales de diseccin: tijera, pinza, estilete. IV. PROCEDIMIENTO

Lanceta estril Hematoxilina Formol Eosina Sudan III

Lminas portaobjeto y cubreobjeto Gotero Bistur u hoja de afeitar Levadura de pan

4.1. Observacin de clulas vegetales (Clulas epiteliales de Allium cepa) Las clulas de la epidermis de las hojas internas del bulbo de la cebolla, son de forma alargada y bastante grande. La pared celular celulsica se destaca muy clara teida por el colorante. Los ncleos son grandes y muy visibles. En el citoplasma se distinguen algunas vacuolas grandes dbilmente coloreadas. 1Separe una de las capas del bulbo de la cebolla. Con ayuda de una pinza desprenda la membrana epidrmica que cubre la parte interna de la cebolla y extindala en el portaobjetos. 2Utilizando una hoja de afeitar obtenga una porcin de medio centmetro cuadrado, cbrala con una

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gota de lugol, coloque cuidadosamente el cubreobjeto y observe en el microscopio. 3Reconozca las partes de la clula vegetal. 4.2. Observacin de organismos unicelulares 1 Coloque una gota de agua estancada sobre un porta objeto y cubran con una laminilla. 2 Observe con el objetivo de menor aumento. 3 Ajuste el diafragma para incrementar el contraste. 4 Observe la forma, tamao y movimiento de los organismos unicelulares (ver figura adjunta).

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Protozoarios ms representativo

4.3. Observacin de levaduras del pan

1 Diluya un trocito de levadura de pan (Saccharomyces cerevisiae) con agua destilada, en un tubo de
ensayo. 2 Observe con el objetivo de mayor aumento. 3 Ajuste el diafragma para incrementar el contraste. 4 Observe la forma y tamao de estos organismos. 4.4. Observacin de clulas animales (Epitelio bucal) El azul de metileno tie intensamente el ncleo y con menos color el citoplasma de las clulas. ste suele ser algo granuloso. 1Con un hisopo limpio extraiga suavemente la mucosidad de la cavidad bucal. 2Deposite la mucosidad extrada en el centro de una lmina portaobjetos y extindalo con un frotis. 3Agregue unas gotas de AZUL de metileno y espere 3 minutos. 4Elimine el exceso de colorante utilizando agua y coloque un cubreobjetos. 5Observe la muestra a menor aumento y localice: clulas asociadas y dobladas. 6Luego visualice a mayor aumento y reconozca los componentes celulares.

4.5. Observacin de clulas animales (Tejido adiposo) El Sudan III es un compuesto que tie lpidos de color rojo intenso. En el tejido adiposo, que contiene gran cantidad de grasas, se observarn los adipocitos teidos por el Sudan III. 1Con ayuda de un bistur, cortar una fina capa de grasa de tocino 2Colocarla en un portaobjetos y cubrirla con unas gotas de formol. Dejar actuar 4 minutos. 3Lavar la muestra con agua y cubrirla con unas gotas de Sudn III. Dejar actuar unos 5 minutos. 4Volver a lavar la preparacin con agua, cubrirla con un cubreobjetos 5Observar al microscopio. 4.6. Observacin de clulas animales (Sangre) Al microscopio las clulas sanguneas se vern predominantemente los glbulos rojos, hemates o eritrocitos teidos de color rojo por la eosina. No tienen ncleo y son ms delgados por el centro que por los bordes. Los glbulos blancos o leucocitos se identifican fcilmente por la presencia de ncleo, teido de morado por la hematoxilina. Hay varias clases de leucocitos: Linfocitos: de tamao aproximado al de los glbulos rojos, tienen un solo ncleo que ocupa casi todo el glbulo. -Monocitos: son los leucocitos mayores, poco frecuentes normalmente, ncleo grande, redondo, son los ms mviles y su funcin principal es la fagocitosis. -Polimorfonucleares: ncleo fragmentado o arrosariado. Pueden ser eosinfilos, con abundantes granulaciones teidas de rojo por la eosina, neutrfilos y basfilos.

Los eosinfilos, con granulaciones abundantes de

color rojizo y el ncleo teido de color azul marino. Estos glbulos aumentan su nmero en caso de parasitosis o procesos alrgicos.

Los basfilos presentan un ncleo teido de rojo y

las granulaciones del citoplasma de color muy oscuro. -Las plaquetas no son visibles ya que precisan una tcnica especial de tincin.

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Efecta los siguientes pasos para ambas coloraciones, Wright y Hematoxilina-Eosina:

1 Con ayuda de una lanceta desechable, realice una puncin del pulpejo del dedo anular de la mano
izquierda, previa desinfeccin con algodn y alcohol. 2 Tome una gota de sangre y haga un frotis fino sobre el portaobjeto 3 Colocar el frotis extendido ya seco, sobre una base plana en posicin totalmente horizontal. Para la coloracin de Wright:

1Coloree con unas gotas de colorante Wright, inmediatamente agregar sobre el colorante el mismo numero de gotas de agua destilada y mezclar rpidamente, soplando suavemente hasta que se forme una capa plateada . 2 Dejar reposar la mezcla por 8 - 10 minutos, observando la intensidad de color. 3Lave con agua corriente y dejar secar al medio ambiente, si es posible con la lamina en forma vertical. 4Observe al microscopio. Utilice el objetivo de 100X para la observacin de las clulas y ncleos. 5Diferencie las diferentes formas de ncleo en los neutrfilos, basfilos , eosinfilos, monocitos y linfocitos. 6Dibuje cada forma de ncleo.
Para la coloracin de Hematoxilina-Eosina: 1Colocar el frotis de sangre sobre la cubeta de tincin y aadir unas gotas de alcohol absoluto y dejar que el alcohol se evapore para fijar la preparacin. 2Cubrir con unas gotas de hematoxilina y dejar actuar durante 15 minutos. Evitar la desecacin del colorante agregando ms lquido. 3Lavar la preparacin y aadir unas gotas de eosina dejndola actuar 1 minuto. 4Volver a lavar hasta que no queden restos de colorante. 5Dejar secar aireando el porta o bien al calor muy lento de la llama del mechero. 6Observar al microscopio. Utilice el objetivo de 100X para la observacin de las clulas y ncleos. Diferencie las diferentes formas de ncleo en los neutrofilos, basofilos, eosinofilos, monocitos y linfocitos. Dibuje cada forma de ncleo.

CUESTIONARIO 1Qu diferencias observ entre la clula vegetal y la animal? 2 Disee un cuadro donde aparezcan las principales diferencias entre las clulas bacterianas y las animales. 3Aliste 10 organismos unicelulares patgenos para el ser humano 4Qu es un protozoario?. Cules son sus caractersticas mas importantes? 5Qu protozoarios patgenos son responsables de las siguientes enfermedades?. Especificar cual es el agente etiolgico, agente vector, y en que consiste cada uno de ellos. a) Malaria terciaria. b) Disentera. c) Trychomonas o vaginitis. d) Uta o espundia e) Enfermedad de Chagas. 6Por qu los eritrocitos se tien con eosina y leucocitos con hematoxilina? 7Por qu hay que teir las clulas adiposas con Sudn III? Para qu sirve el formol?

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