UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE CIENCIAS E.A.P.

BIOLOGIA EN ACUICULTURA

EFECTO DE DIFERENTES CONCENTRACIOENS DE SALINIDAD EN EL CRECIMENTO POBLACIONAL DE Scenesmus acutus

2013

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EFECTO DE DIFERENTES CONCENTRACIOENS DE SALINIDAD EN EL CRECIMENTO POBLACIONAL DE Scenesmus acutus

I.

INTRODUCCION

Las plantas pueden ajustar su metabolismo a diferentes condiciones negativas ya sea de extrema salinidad, en ambientes contaminados con elementos pesados o en presencia de residuos industriales. Dicha adaptacin ocurre en muchas familias microalgales. Existen varios mecanismos de tolerancia de las algas frente a un exceso de iones y metales pesados en el ambiente. Entre ellos, junto con lograr un impedimento de ingreso al citosol, existe fijacin de metales en las paredes celulares, formacin de complejos inorgnicos, inmovilizacin por protenas especficas (fitoquelatinas), unin e inactivacin con cidos carboxlicos, (uniones a malato, citrato, oxalato) y fijacin a varios compuestos orgnicos a acumularse en la vacuola. El estrs salino, como otros tipos de estrs, inhibe el crecimiento de la planta, de hecho el bajo crecimiento de la microalgas en zonas salinas es una caracterstica adaptativa de las plantas para sobrevivir a este tipo de estrs. En la naturaleza la capacidad de tolerar la salinidad parece estar inversamente relacionada a la tasa de crecimiento. Una causa de la reduccin del crecimiento es la inadecuada fotosntesis trae como consecuencia la limitacin de la entrada de CO2. Ms importante es, sin embargo, que el estrs inhibe la divisin celular y la expansin directamente. II. General Determinar el efecto de diferentes concentraciones de salinidad en el crecimiento poblacional de Scenedesmus acutus. OBJETIVOS

Particulares: Cultivar Scenedesmus acutus, en diferentes concentraciones de salinidad Determinar curvas de crecimiento para Scenedesmus acutus en cada una de los medios de cultivo. Comparar el crecimiento de S. acutus en los medios de cultivo con salinidad con un medio de cultivo alternativo HM.

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III.

MATERIALES Y METODOS nutrientes con las algas. En cuanto a la iluminacin fue constante un tubo fluorescente ubicado a 05 cm de los cultivos algales y a una altura prudencial, logrando que la luz llegue a todas las botellas. El medio del cultivo control, con 1000ml de inoculo y sin agregacin de Sal Industrial. Los tratamientos utilizados en el siguiente trabajo de investigacin consisti en 3 grupos experimentales y un tratamiento control, con dos repeticiones cada uno. Determinacin del crecimiento microalgal Haciendo uso de una pipeta se extrajo una gota de las solucin algal la cual se coloc en una lmina y se cubri con una laminilla para luego ser observada a 10x en el microscopio ptico. El conteo se hizo en cinco campos tomados al azar. Para cada repeticin se carg una sola vez, obteniendo el nmero de clulas, luego se obtuvo el promedio que corresponde a la densidad celular en base a las clulas por campo. El crecimiento de los cultivos se evalu cada 24 horas determinando sobre la base del aumento en el nmero de clulas.

Material biolgico La cepa de la microalga Scenedesmus acutusfue proporcionada por el laboratorio de Cultivos Auxiliares de la Escuela Acadmico Profesional de Biologa en Acuicultura. Mantenida y enriquecida con medio HM, bajo condiciones controladas de luz y temperatura y diferentes salinidades. Preparacin y volumen del inoculo Para el desarrollo del presente trabajo el inoculo fue tomado de las practicas anteriores. La densidad del inoculo fue de 24 clulas/campo, con un volumen de 1000 ml para cada botella. Preparacin Experimentales de Unidades

Se utilizaron 7 botellas plsticas de 2000 ml para evaluar los tratamientos. Los cultivos algales se iniciaron con un promedio de 24 clulas/campo, determinndose diariamente el crecimiento poblacional en cada tratamiento. Dentro de cada botella se insert una manguera de acuario y en los terminales de estas mangueras se colocaron pali globos, para lograr que la aireacin sea desde el fondo de la botella, evitando la sedimentacin algal y favorecer la constante exposicin de las algas a la luz e incrementando el contacto de los

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Tabla N 01: Diseo experimental de la investigacin. Tratamientos Inoculo (ml) Salinidad Botella 1 Botella 2 Botella 3 Botella 4 0 5 15 30 1000 1000 1000 1000 0 5 15 30 2 2 2 2 Sal industrial (g/L) Repeticiones

PARA CALCULOS RESULTADOS

DIAS 0 20 20 20 20 1 34 32 22 16 2 36 36 25 35 3 42 40 38 42 4 46 45 40 46 5 55 60 47 50

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Figura N1: efecto de diferentes concentraciones de salinidad (0 , 5, 15 y 30 ) en el crecimiento poplacional de Scenedesmus acutus. Se observo el mayor crecimiento poblacional en el tratamiento con 5 , superando al tratamiento control, con una tasa crecimiento especifico de .. y de duplicaciones diarias. Se observo un ligero creciemnto en los tratamientos con 15, 25 y 30 con un crecimineto especifico de respectivamente. Sin embargo no se encontraron crecimentos en el tratamiento con 30

IV.

DISCUCIONES

El mayor efecto de la salinidad en S. acutus, se vio reflejado por los cambios morfolgicos que presento, ya que conforme aumentaba la salinidad, las microalgas tendan a ser mucho ms grandes que el tratamiento control. Esto se debe a que para adaptase al medio salino, las microalgas activan mecanismos defensivos o de respuesta que conduce a la acomodacin de las nuevas condiciones, a la activacin de los procesos de reparacin de la maquinaria celular daada y a la expresin de adaptaciones morfologas, ya antes mencionadas. En el experimento se observa, en el primer da de cultivo como los tratamientos con 5, 15, 30 de salinidad hay una fase de mortalidad, esto debido a la aclimatacin de los organismos que est referida al nivel de estrs al que estn expuestos, observndose tambin la declinacin del cultivo en los tratamientos con salinidades de 15 y 30, en donde la disminucin del crecimiento es mayor, por el contrario Moronto et al. (2004) al trabajar con Chlorella sorokiniana (cultivada en condiciones axenicas) determino que esta microalga dulceacucola tubo una fase de crecimiento aun en el tratamiento con 35, al contrario de nuestra experiencia en donde la salinidad produjo un efecto inhibitorio en el crecimiento de S. acutus. Nuestros resultados se comparan con los obtenidos con Mora et al. (2002) En la microalga dulceacucola Chlorella sp., en la que observaron que puede seguir creciendo en salinidades de 15 y 35 ups sin embargo disminuye el crecimiento respecto al tratamiento control, difiriendo en este punto con nuestros resultados, ya que Scenesmus acutus a una salinidad de 5 tuvo un mejor crecimiento que el tratamiento control. Esto puede deberse a que la salinidad estimula una mayor tasa fotosinttica; la cual induce una produccin de compuestos orgnicos relacionados con la capacidad osmorreguladora de la microalga como el glicerol.

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El los tratamientos con 15 y 25 de salinidad se obtuvieron los ms bajos crecimiento, con excepcin del tratamiento con 30 (en el cual no hubo crecimiento), este se debe a que a concentraciones salinas altas la solubilidad del CO2 disminuye, siendo este un factor limitante para el crecimiento de las poblaciones algales, ya que disminuye la sntesis celular y por ello la actividad reproductiva tanto asexual como sexual (Martnez et la., 1995). En la mayor salinidad ensayada (35%) hubo una gran disminucin en el nmero de clulas probablemente debido a mortalidad por shock osmtico ya que se detectaron numerosas clulas rotas. Serpa & Caldern (2005) encontraron que la menor densidad final promedio en las cuatro cepas de D. salina se produjo a la mayor salinidad (4.5 M), coincidiendo con nuestros resultados, ya que S. acutus obtuvo el menor crecimento con la mayor salinidad (35 ). As la disminucin del crecimiento se debe a una respuesta al estrs salino en el ajuste de concentraciones intracelulares de glicerol. Sin embargo este proceso demanda un gasto de energa mayor que el que se utiliza para los requerimientos energticos para la biosntesis de protenas, cidos nucledos y otros compuestos. As, la energa disponible para el crecimiento se ve disminuida cuando se incrementa la salinidad. Para que las microalgas puedan soportan cambios tan grandes de salinidad Gonzlez & Pea (2002) nos explican que las algas sintetizan solutos orgnicos compatibles que permite un alto grado de adaptabilidad de las clulas a los cambios de la concentracin de sal en el medio. Siendo uno de estos solutos, el glicerol, que minimiza el estrs osmtico y la deshidratacin a la cual est sujeta la clula. As, una estrategia desarrollada por las algas, plantas y en general por todos los organismos vivos, para evitar la muerte causada por el estrs salino y facilitar la absorcin de agua y restaurar el estrs hiperosmtico; ha sido la sntesis y acumulacin de compuestos osmticamente activos llamados osmolitos biocompatibles. Los osmolitos ms comunes incluyen azcares, polioles, cidos grasos y sus derivados (Fuente et al., 2008). En general existe una correlacin inversa entre la salinidad y la densidad celular. Ocurre una disminucin en las densidades celulares finales cuando se aumenta la salinidad del medio de cultivo (Borowitzka, 1988). Este estrs de salinidad influencia la capacidad para adquirir las fuentes necesarias para su crecimiento y productividad. Tpicamente, la fijacin de carbono por fotosntesis se retarda en clulas expuestas a una variedad de estreses. V. CONCLUSIONES

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La menor concentracin de saliniadad ensayada (5 ) ensayada es la que permiti obtener mejores crecimientos (k=), superando al tratamiento control (HM). Se observaron cambios morfolgicos en S. acutus conforme aumentaba la salinidad, las microalgas tendan a ser mucho ms grandes que las clulas del control. S. acutus no es capaz de crecer en salinidades de 30 , ya que no presento ningn crecimiento en el tiempo que duro el ensayo.

VI.

RECOMENDACIONES

1. Es conveniente que se realicen ms ensayos con concentraciones de salinidad que no superen los 15 pero estn el rango de 2.5 a 15 , para observar a que salinidad final S. acutus tiene un mejor crecimiento, ya que en este experimento el tratamiento con 5 supero al tratamiento control. 2. Realizar anlisis bromatolgicos de S. acutus, para observar el efecto de las diferentes concentraciones de salinidad en su composicin qumica. VII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

Almoduena, V. 2010. Respuestas fisiolgicas de los ctricos sometidos a condiciones de estrs bitico y abitico. Aspectos comunes y especficos. Tesis doctoral Ingeniera Agrnoma. Universidad Jaume. Espaa. 196 p. Borowitzka, M. & Borowitzka L. 1988. Dunaliella. In Microalgal Biotechnology. Cambridge University Press, Cambridge: 27-58. Gonzales, H. & A. Pea. 2002. Estrategias de adaptacin de microorganismos halfilos y Debaryomyces hansenii. Revista Latinoamericana de Microbiologa, 44 (3-4): 137- 156. Fuente, A., M. Sosa & Y. Perez. 2008. Aspectos fisiologicos y biuoquimicos del estrs salino en polantas. Universidad de Matanzas Camilo Cienfuegos. Martnez, G., A. Silva, M. Gonzlez & O. Parra. 1995. Efecto de la salinidad en la actividad sexual de Dunaliella salina (Dunal) Teodoresco, cepa CONC-006. Revista Chilena de Historia Natural, 68: 131-138.

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Mora, R., N. Ortiz, Y. Clemente, J. Bermdez, D. Avenado & E. Morales. 2002. Efecto del nitrato, irradiancia y salinidad sobre la produccin de clorofila a de microalgas cultivadas y aisladas en la regin noroccidental de Venezuela. Ocanides, 17 (2): 73-83. Moronto, R., E. Morales & R. Morales. 2004. Respuesta de la microalga Chlorella sorokiniana al pH, salinidad y temperatura en condiciones axnicas y no axnicas. Revista de la Facultad de Agronoma de La Universidad del Zulia , 23 (1): 27-41 Serpa, F. & A. Caldern. 2005. Efecto del estrs por salinidad en cuatro cepas de Dunaliella salina TEOD. En el Per. Ecologa aplicada, 4 (1,2): 127-133.

VIII.

ANEXOS

Tabla N1: Parmetros de cintica de crecimiento de Scenedesmus acutus crecida a diferentes concentraciones salinidad
Tratamientos T1 =5 T2 = 15 T3 = 30 Tc = HM, 0 Divisiones por da k Tasa de crecimiento especifico ()