Resumos laboratoriais de Qumica Farmacutica II

Prof. Madalena Pinto Prof. Maria Emlia Sousa Prof. Carla Fernandes

Joana Pereira, 120601005

MICF 2012/2013

Trabalho 1 A) Identificao do Norgestrel e Etinilestradiol em drageias B) Doseamento do Norgestrel em drageias

Parte A 1. As solues padro foram previamente preparadas 2. Pulverizar 3 drageias no almofariz at obter p fino e transferir para um papel vegetal 3. Transferir o p para um tubo com rolha e adicionar 5 mL de diclorometano (com proveta e funil) 4. Agitar energicamente para extrair a substncia ativa de modo a obter uma suspenso (excipientes) 5. Centrifugar (3 min; 1000-1500 r/min) para separar a suspenso; se for necessrio aumentar o peso adicionar diclorometano 6. Transferir o sobrenadante para outro tubo com pipeta de Pasteur, deixando um pouco para a segunda extrao 7. Repetir os passos 3 a 6 8. Concentrar a soluo, evaporando o solvente em banho de gua at ter s um pouco de soluo 9. Cromatografia a. Preparar a fase mvel clorofrmio e lcool (9,6:0,4), medindo o clorofrmio numa proveta com rolha e adicionando o lcool medido com pipeta graduada e colocar na cmara previamente para saturar b. Preparar a placa de slica gel e fazer aplicaes equidistantes com capilares (ou 10 L com pipeta automtica), com amostra no centro para facilitar a comparao, deixando-as secar entre cada aplicao c. Por a placa a eluir at quase ao cimo d. Retirar a placa e deix-la secar ao lado da cmara e. Revelar com o revelador previamente preparado e secar na estufa durante 10 minutos Parte B 1. O peso mdio foi previamente calculado 2. Pulverizar 2 drageias a p fino e pesar depois (p1) com 2 vidros de relgio na balana de preciso 3. Transferir o p para um balo de 50,0 mL com um funil de slidos e adicionar 10 mL de gua (lavando os vidros de relgio e o funil) 4. Agitar energicamente, sem inverter, durante 20 minutos 5. Adicionar 30 mL de etanol e agitar sem inverter; perfazer o volume com etanol e agitar com inverso 6. Filtrar a soluo de modo a retirar algum slido que a soluo possa conter com filtro de pregas (com ajuda de uma vareta) 7. Medir a absorvncia da soluo, usando como branco o etanol a. Ligar o aparelho com antecedncia b. Abrir o programa c. Verificar as condies da clula d. Colocar o comprimento de onda e calibrar (setup), lavando as clulas de quartzo antes de encher para fazer a medio e. Medir a absorvncia da amostra

OBJETIVOS Identificar, como substncias ativas do Microginom, o Etinilestradiol e o Norgestrel Proceder ao doseamento do Norgestrel nas mesmas drageias Fazer uma comparao dos valores obtidos com os valores obtidos com os prescritos na USP 25 (90-110%)

METODOLOGIAS A. Identificao do Norgestrel e Etinilestradiol em drageias a. Extrao das substncias ativas por extrao mltipla slido-lquido com diclorometano b. Ensaio qualitativo por cromatografia em camada fina como auxiliar da identificao por comparao com padres, em que a fase estacionria o gel de slica HF254 e a fase mvel uma mistura de clorofrmio e lcool (9,6:0,4) c. Revelao qumica, irreversvel, especfica e colorimtrica da placa com uma mistura de cido sulfrico e metanol (80:20) B. Doseamento do Norgestrel em drageias a. Extrao simples slido-lquido da substncia ativa com lcool b. Determinao direta da absorvncia por espectrofotometria no espectro UV (mximo de 241 nm) com clulas de quartzo, usando o etanol como soluo de compensao (revelao fsica) c. Clculo do teor da substncia ativa por drageia e comparao com os valores prescritos na USP 25 REAES QUMICAS

RESULTADOS E /OU CLCULOS Parte A A P B A padro A (Norgestrel) A amostra/problema (drageias Microginom)

. .

B padro B (Etinilestradiol)

Parte B (Norgestrel) = 550

dosagem = 0,150 mg b = 1 cm = 0,09105 g p1 ( 2p) = 0,1568 g V = 50,0 mL

1 leitura = 0,3029 2 leitura = 0,3030 3 leitura = 0,3033 A (mdia) = 0,3031

CONCLUSES A colorao e o valor dos Rf da amostra, na CCF, coincidem com as mesmas nos padres. Os valores obtidos para o teor esto contidos no valor prescrito pela USP 25 (90110%). 4

Como todos os resultados vo de encontro ao expectvel, considera-se que o trabalho prtico foi bem sucedido.

NOTAS Em pesagens em vidro de relgio, utilizar um segundo para tapar, tendo o cuidado de incluir os dois na pesagem e de levar os dois para no haverem perdas Levantar sempre o material para pr o menisco ao nvel dos olhos Nunca colocar pipetas de Pasteur em frascos; por num tubo de ensaio se possvel Ao pipetar, aspirar um volume superior ao pretendido e limpar o exterior das pipetas antes de mergulhar para dispensar Em medies envolvendo provetas em ensaios qualitativos no interessa se o volume ultrapassa o desejado Material esmerilado precisa sempre de um funil Ao utilizar um funil levant-lo sempre para haver entrada de ar Para extravasar slidos usar funil de fundo largo Ao transvazar colocar sempre o rtulo para cima Para misturar s quando para perfazer o volume que se deve inverter Antes de filtrar humedecer sempre o filtro com a mesma soluo Em ensaios qualitativos (como neste caso) mais vale deixar sobrenadante do que contaminar a amostra com o resduo Para contrapor o peso na centrfuga usar gua e areia Uma placa de gel de slica HF254 impregnada com indicador de fluorescncia para 254 nm Na placa de slica identificar os pontos de aplicao em cima para no contaminar Os pontos de aplicao devem ser feitos acima do nvel do eluente Manusear a placa de slica com uma pina para no contaminar a fase estacionria Ao revelar, usar pouca quantidade e a uma certa distncia sem enxarcar No final da cromatografia, as cmaras ficam nas bancadas depois de secas com um papel

Trabalho 2 - Doseamento do Etinilestradiol em drageias

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. O peso mdio foi previamente calculado e a soluo padro de etinilestradiol preparada Pulverizar 3 drageias a p fino e pesar depois (p1) com 2 vidros de relgio na balana de preciso Transferir o p para uma ampola de decantao, com o auxlio de um funil de slidos e 5 mL de gua, agitando durante 1 minuto Adicionar 1 mL de cido actico glacial Adicionar 10 mL de clorofrmio (com proveta e funil) Agitar com cuidado (em 8), para evitar a formao emulses, aliviando a presso ao longo do processo Transferir a fase clorofrmica (a de baixo) para outra ampola, deixando um pouco para as seguintes extraes Repetir os passos 5 a 7 mais 2 vezes Concentrar a soluo obtida com ar comprimido at se ter menos um pouco de metade do que se tinha inicialmente, com a palma da mo envolvendo a ampola (para ajudar a concentrao a ser mais rpida) e a boca da ampola virada para a parede da hotte

10. Transferir 3,0 mL com uma pipeta graduada da soluo padro previamente feita para uma ampola de decantao 11. Identificar cada uma das ampolas e trata-las paralelamente 12. Adicionar 50 mL de isooctano com proveta 13. Adicionar 6 mL de NaOH 1M (com proveta e funil) 14. Agitar energicamente 15. Transferir a fase aquosa (a de baixo) para um recipiente, deixando um pouco para as seguintes extraes 16. Repetir os passos 13 a 15 mais 2 vezes 17. Filtrar para um balo de 25,0 mL com um algodo previamente lavado com NaOH e perfazer o volume com NaOH 1M 18. Adicionar 5,0 mL das solues, com uma pipeta, lenta e cuidadosamente, a 15,0 mL de cido sulfrico colocados num matraz com pipeta, em banho de gelo, com agitao magntica; deixar agitar durante mais 2 minutos 19. Medir a absorvncia da soluo problema e do padro, usando como branco a gua a. Ligar o aparelho com antecedncia b. Abrir o programa c. Verificar as condies da clula d. Colocar o comprimento de onda e calibrar (setup), lavando as clulas de quartzo antes de encher para fazer a medio e. Medir a absorvncia das solues

OBJETIVOS Proceder ao doseamento do etinilestradiol em drageias de Microginom Fazer uma comparao dos valores obtidos com os prescritos pela USP 25 (90-110%)

METODOLOGIAS 1. Extrao da substncia ativa por extrao mltipla quantitativa lquido-lquido com clorofrmio (fsica) e com NaOH 1M (qumica) em ampolas de decantao, com adio de cido actico glacial (para manter a soluo cida e lquida) 2. Determinao direta da absorvncia por espectrofotometria no espectro visvel (mximo de 536 nm) com clulas de vidro, usando gua como solvente de compensao (efeitos batocrmico e hipercrmico) 3. Clculo do teor da substncia ativa por drageia e comparao com os valores prescritos na USP 25 REAES QUMICAS

RESULTADOS E /OU CLCULOS dosagem = 0,03 mg = 0,09105 g p1 ( 3p) = 0,2681 g

1 leitura = 0,0916 2 leitura = 0,0921 3 leitura = 0,0924 Apadro (mdia) = 0,0920

1 leitura = 0,0923 2 leitura = 0,0945 3 leitura = 0,0946 Aproblema (mdia) = 0,0938

X = 0,0306 mg

Y = 0,153 mg

CONCLUSES O valor calculado para o teor de etinilestradiol muito mais alto do que seria expetvel. Isto poder ter acontecido por variadas razes como ter-se adicionado emulses s solues recolhidas nas extraes (que poderiam conter substncia ativa que no entrou na medio), tempo extenso demais entre o fim da agitao e a medio da absorvncia, entre outras. Como o resultado no foi o esperado, considera-se que a experincia no foi bem sucedida.

NOTAS Ao adicionar a gua ampola de decantao, adicionar um pouco antes do slido de modo a que este no solidifique no fundo da ampola Verificar se a torneira e a rolha da ampola de decantao esto em condies antes de a utilizar 7

Nunca segurar no vidro da ampola de decantao (para no aquecer a soluo), mas sim no esmerilado e na torneira Como no laboratrio no h clulas de vidro, podem utilizar-se de plstico ou de quartzo; neste caso quartzo porque, como a soluo cida, pode corroer o plstico Por falta de pipetas de 15,0 mL utilizada uma bureta para colocar o cido sulfrico nos matrazes Aps a preparao das solues, a determinao das absorvncias deve ser feita nos 10 a 15 minutos seguintes

Trabalho 3 Sntese e identificao da Sulfanilamida (Parte A Sntese da p-acetamidobenzenosulfonamida)

1. 2. 3. Pesar diretamente num matraz, em balana analtica, 2,0 g de cloreto de pacetamidobenzenosulfonilo Adicionar lentamente 10 mL de soluo de amnia concentrada com uma proveta, na hotte (medida no rigorosa pois o reagente est em excesso) Aquecer em banho de vapor com refluxo durante 10 minutos a. Retirar a primeira argola e pousar o matraz na segunda b. Colocar um funil de vidro no topo quando comear a ebulio ( refluxo) c. Se se formarem pedras levantar o funil e desfazer com uma vareta Arrefecer em banho de gelo Adicionar, lentamente, com pipeta de Pasteur, cido sulfrico diludo at reao cida ao papel do Congo a. Retirar o papel de Congo da embalagem com uma pina e coloca-lo sobre papel vegetal b. Por a soluo em contato com o papel de Congo com uma vareta c. A reao cida demonstrada pela obteno de cor azul Colocar em banho de gelo tubos com gua para lavar o filtro e o insolubilizado Recolher o precipitado por filtrao a presso reduzida a. Prender o kitasato com uma garra b. Colocar o funil de Bchner com o filtro c. Aderir o filtro com a gua gelada d. Filtrar a soluo, lavando o matraz repetidamente com gua gelada e pipeta de Pasteur (principalmente a boca, para evitar perdas) e. Comear por vazio parcial (utilizando o T) f. Colocar um pouco de papel no T, comeando por tapar s um pouco e tapando depois completamente Rejeitar as guas-mes Secar o precipitado a. Retirar o T, para passar para vazio total b. Colocar papel de alumnio com orifcios (feitos com pipeta de Pasteur) por cima do Bchner e secar com secador a uma certa distncia de segurana Pesar o precipitado por diferena, pesando previamente 2 vidros de relgio e cristalizar do etanol a. Retirar 2 ou 3 microesptulas de amostra e pesar b. Colocar o resto num tubo com parafilm e identificao c. Adicionar um pouco de etanol frio com pipeta de Pasteur d. Dissolver a quente em banho de gua (intermitente; tirar, limpar e agitar) e acrescentar etanol at dissolver ( soluo saturada) e. Filtrar rapidamente por gravidade com filtro de colo curto e um pouco de algodo (lavado previamente com etanol quente) 8

4. 5.

6. 7.

8. 9.

10.

11. 12.

13. 14.

15.

16.

f. Arrefecer gradualmente (ambiente gua gelo) g. Se necessrio, induzir a cristalizao i. Frico das paredes do tubo superfcie do lquido com uma vareta; libertao de partculas de vidro que podem atuar como ncleos de crescimento dos cristais ii. Se houver substancia padro disponvel, colocar um cristal (ncleo de crescimento de cristais) na soluo saturada, mantendo-se esta em banho de gelo iii. Poder ser necessrio um arrefecimento mais prolongado, colocando a soluo no congelador por algumas horas iv. Se a soluo no tiver sido devidamente saturada, dever-se- aquecer novamente para reduzir a quantidade de solvente at chegar ao ponto de saturao Colocar 2 tubos de etanol em gelo Filtrar por funil de prego com presso reduzida a. Comear por vazio parcial (utilizando o T) b. Colocar um pouco de papel no T, comeando por tapar s um pouco e tapando depois completamente Lavar com etanol frio Secar a. Retirar o T, para passar para vazio total b. Rejeitar as guas-mes c. Colocar papel de alumnio com orifcios (feitos com pipeta de Pasteur) por cima do funil d. Secar com secador a uma certa distncia de segurana Determinar o ponto de fuso pelo mtodo do tubo capilar a. Com ajuda da microesptulas inserir aos poucos o precipitado b. Fazer descer o precipitado por gravidade c. Repetir at encher cerca de do tubo capilar Calcular o rendimento

OBJETIVOS Sintetizar a p-acetamidobenzenosulfonamida Isolar e purificar o composto sintetizado Identificar e avaliar a pureza do composto Calcular o rendimento da reao de sntese

METODOLOGIAS 1. Sntese por reao do cloreto de p-acetamidobenzenossulfonilo com amonaco concentrado em banho de vapor e com sistema de refluxo 2. Isolamento por insolubilizao em meio cido com cido sulfrico diludo adicionado lentamente aps arrefecimento em gelo e recolha do insolubilizado por filtrao em funil de Bchner sob presso reduzida 3. Purificao por cristalizao usando lcool como solvente 4. Controlo do produto final obtido pela determinao do ponto de fuso da substncia pelo mtodo do tubo capilar, sendo usado como critrio de pureza e auxiliar na identificao (Fp-acetamidabenzenossulfonamida = 219C) 5. Clculo do rendimento da sntese

REAES QUMICAS

Reao de neutralizao: RESULTADOS E /OU CLCULOS Ponto de fuso

Fcalculado = 210-220 C Clculo do rendimento

M (cloreto de p-acetamidobenzenosulfonilo) = 233,67 g/mol M (p-acetamidobenzenosulfonamida) = 214,165 g/mol

m (cloreto de p-acetamidobenzenosulfonilo) = 2,0037 g

mreal = 0,2910 g

CONCLUSES O valor que se obteve para o ponto de fuso tem um intervalo muito grande, pelo que no podemos usar este valor como auxiliar na identificao, visto que este intervalo d a entender que o composto que obtivemos no est puro. Isto s aconteceria caso o intervalo fosse de 2C e s nessa situao este valor poderia ser utilizado como prova de pureza e como auxiliar da identificao. Uma diminuio do ponto de fuso em relao ao esperado tambm pode indicar a presena de impurezas. A realizao de uma nova purificao ou de um ponto de fuso misto (com o padro e o composto em propores diferentes) poderia resolver a situao.

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Quanto ao rendimento, o valor extremamente baixo que se obteve est relacionado no s com as inmeras perdas que se tem de considerar normalmente, bem como com a perda de parte da soluo na etapa do aquecimento em banho de gua com refluxo. Alm disso tm que se considerar as impurezas presentes aquando da pesagem, que aumentam este rendimento.

NOTAS A primeira etapa da sntese da sulfanilamida inclui a acetilao da anilina (reao de substituio nucleoflica), com eliminao do cido actico, seguida de sulfonao da acetilanilida com o cido clorossulfnico (reao de substituio eletroflica aromtica), com subsequente formao do cloreto de p-acetamidobenzenossulfonilo A funo do cido sulfrico diludo eliminar o amonaco que no tenha reagido e regenerar a sulfonamida obtida que insolubiliza em meio aquoso Ao lavar o matraz inclinado, ter o cuidado de lavar sempre a boca do mesmo antes de levantar o tubo A cristalizao tem o objetivo de purificar A filtrao a quente elimina impurezas insolveis As impurezas solveis so eliminadas por filtrao aps a formao de cristais Neste caso, a filtrao feita em funil de prego e no de Bchner porque os cristais so pequenos e em pouca quantidade O filtrado obtido chamado de gua-me da cristalizao Depois de concentrar este filtrado, poderamos obter cristais de segunda gerao, por uma cristalizao semelhante feita; os cristais de segunda gerao tm um grau de pureza e tamanho menores do que os cristais de primeira gerao

Trabalho 4 Sntese e identificao da Sulfanilamida (Parte B Sntese da p-aminobenzenosulfonamida)

1. Pesar a substncia obtida na aula anterior 2. Colocar num balo esmerilado de fundo redondo de 50 mL 3. Adicionar duas vezes o seu peso de cido clordrico diludo (1:1) a. Medir o volume aproximado (relao da gua) 4. Aquecer em manta de aquecimento com refluxo durante 20 minutos a. Adicionar uma apara de porcelana, para evitar uma ebulio tumultuosa b. Montar o condensador (contracorrente baixo cima) c. Ligar a manta (posio 6 e reduzir se a ebulio ficar muito tumultuosa) d. Se for preciso, adicionar mais cido e. Desligar a manta, sem tirar o condensador imediatamente 5. Diluir a soluo em igual volume de gua 6. Transferir para um gobel e adicionar carbonato de sdio anidro, pouco a pouco, at parar de se visualizar gs 7. Controlar a reao alcalina ao papel vermelho de tornassol (colorao azul) 8. Se a soluo ficar pastosa adicionar mais gua 9. Colocar em banho de gelo durante alguns momentos 10. Colocar um tubo em banho de gelo 11. Recolher o precipitado por filtrao a presso reduzida a. Prender o kitasato com uma garra b. Colocar o funil de Bchner com o filtro c. Aderir o filtro com a gua gelada

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d. Filtrar a soluo, lavando o matraz repetidamente com gua gelada e pipeta de Pasteur (principalmente a boca, para evitar perdas) e. Comear por vazio parcial (utilizando o T) f. Colocar um pouco de papel no T, comeando por tapar s um pouco e tapando depois completamente 12. Rejeitar as guas-mes 13. Secar o precipitado a. Retirar o T, para passar para vazio total b. Colocar papel de alumnio com orifcios (feitos com pipeta de Pasteur) por cima do Bchner e secar com secador a uma certa distncia de segurana 14. Pesar o precipitado por diferena, pesando previamente 2 vidros de relgio 15. Dissolver o slido obtido em pelo menos 15 vezes o seu peso em gua fervente a. Se formar papa pr mais gua 16. Adicionar uma microesptulas de carvo ativado e agitar 17. Filtrar de imediato, com filtro de pregas a. Aderir o filtro com gua fervente 18. Arrefecer em gelo 19. Recolher os cristais por filtrao reduzida a. Prender o kitasato com uma garra b. Colocar o funil de Bchner com o filtro c. Aderir o filtro com a gua gelada d. Filtrar a soluo, lavando o matraz repetidamente com gua gelada e pipeta de Pasteur (principalmente a boca, para evitar perdas) e. Comear por vazio parcial (utilizando o T) f. Colocar um pouco de papel no T, comeando por tapar s um pouco e tapando depois completamente 20. Rejeitar as guas-mes 21. Secar o precipitado a. Retirar o T, para passar para vazio total b. Colocar papel de alumnio com orifcios (feitos com pipeta de Pasteur) por cima do Bchner e secar com secador a uma certa distncia de segurana 22. Cromatografia a. Preparar a fase mvel clorofrmio, metanol e cido frmico (7:3:0,1), medindo o clorofrmio numa proveta com rolha, o metanol com pipeta graduada e o cido frmico com uma pipeta de Pasteur e colocar na cmara previamente para saturar b. Preparar os padres e a amostra 1 microesptula e dissolver em acetona a olho c. Preparar a placa de slica gel e fazer aplicaes equidistantes com capilares d. Por a placa a eluir at quase ao cimo e. Retirar a placa e deix-la secar ao lado da cmara f. Revelar com o revelador previamente preparado e secar na estufa durante 10 minutos 23. Calcular o rendimento

OBJETIVOS Sintetizar a p-aminobenzenosulfonamida a partir da p-acetamidobenzenosulfonamida Isolar e purificar o composto Identificar e avaliar a pureza da substncia por cromatografia em camada fina Determinar o rendimento da reao

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METODOLOGIAS 1. Sntese por reao da p-acetamidobenzenosulfonamida com cido clordrico diludo em manta de aquecimento com sistema de refluxo 2. Isolamento por insolubilizao em meio alcalino, por adio do carbonato de sdio anidro 3. Purificao por cristalizao, usando como solvente a gua fervente e uma pequena poro de carvo ativado 4. Anlise qualitativa do composto por cromatografia de camada fina, como auxiliar da identificao por comparao com padro, em que a fase estacionria o gel de slica HF254 e a fase mvel uma mistura de clorofrmio, metanol e cido frmico (7:3:0,1) 5. Revelao fsica, reversvel e por contraste por UV a 254 nm 6. Determinao do rendimento da reao REAES QUMICAS

Reao de neutralizao: RESULTADOS E /OU CLCULOS Cromatografia 1 A 2 1 padro de sulfanilamida A amostra

Clculo do rendimento

. .

2 padro de p-acetamidobenzenosulfonamida B (Etinilestradiol)

M (p-acetamidobenzenosulfonamida) = 214,165 g/mol m (p-acetamidobenzenosulfonamida) = 0,5255 g

M (p-aminobenzenosulfonamida) = 171,21 g/mol m (p-aminobenzenosulfonamida) = 0,0239 g

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CONCLUSES Quanto cromatografia, no foi possvel tirar quaisquer concluses, visto que aconteceu o fenmeno tailing (arrastamento). Isto poderia resolver-se diluindo a amostra ou aplicando menos quantidade, visto que resulta de uma concentrao elevada da aplicao. O que seria de esperar seria uma placa com uma mancha semelhante no padro 1 e na amostra e uma mancha mais alta no padro 2. A pureza determinada pela presena de uma s mancha na amostra (o que pode tambm indicar vrios compostos com afinidade semelhante). Para complementar este processo poderamos efetuar uma nova cromatografia com um eluente diferente e uma prova cruzada (cristais, mistura e padro; se for mistura aparece apenas uma mancha sem desdobramentos). Quanto ao valor baixo obtido para o rendimento deve-se no s s impurezas que o composto j continha (provenientes da aula anterior), mas tambm pouca quantidade de amostra disponvel e perdas normais da filtrao e do restante processo.

NOTAS O cido clordrico diludo adicionado no vai interferir na reao se tiver em maior quantidade, visto que o reagente em excesso A adio do carbonato de sdio promove a neutralizao do excesso de cido e a regenerao da amina, insolvel no meio reacional O carvo ativado tem como funo eliminar as impurezas Ao utilizar o carvo ativado, deve-se abrir a tampa previamente, deixando a tampa pousada e s depois levantar a tampa e retirar a quantidade necessria Se os cristais ficarem cinzentos, o carvo ativado est em excesso e fica no interior da rede cristalina e pode ainda absorver o composto em estudo Usa-se o filtro de pregas porque mais eficiente que o filtro normal

Trabalho 5 Identificao e doseamento da Ampicilina em comprimidos

Identificao 1. Soluo de ampicilina e soluo padro previamente preparadas 2. Cromatografia a. Preparar a fase mvel acetona, gua, tolueno e cido actico glacial (6,5:1:1:2,5), medindo a acetona numa proveta com rolha e adicionando os restantes reagentes com pipeta graduada e colocar na cmara previamente para saturar b. Preparar a placa de slica gel c. Aplicar 5 L com uma micropipeta, com amostra no centro para facilitar a comparao, deixando-as secar entre cada aplicao d. Por a placa a eluir at quase ao cimo e. Retirar a placa e deix-la secar ao lado da cmara f. Revelar a luz ultravioleta nos comprimentos de onda 254 e 365 nm

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g. Revelar com uma soluo de ninidrina em etanol a 3 mg/mL (revelador), previamente preparada, e secar na estufa durante 15 minutos h. Determinar as dimenses, a colorao e os Rf's das manchas principais Doseamento 1. 2. 3. 4. 5. 6. Medir para dois matrazes rolhados de 50 mL, 2,0 mL de soluo padro e soluo problema Adicionar 2,0 mL de hidrxido de sdio 1,0 N Agitar e deixar em repouso durante 15 minutos Adicionar 2,0 mL de cido clordrico 1,2 N e 10,0 mL de soluo de iodo 0,01N VS Tapar imediatamente e deixar em repouso durante 15 minutos no escuro Titular com soluo de tiossulfato de sdio 0,01N VS usando como indicador 1 gota de cozimento de amido a. Cozimento de amido 1 micro esptula de amido num tubo e gua at meio do tubo; aquecer chama at ebulio; deixar arrefecer Ensaio a branco a. Medir para dois matrazes rolhados de 50 mL, 2,0 mL de soluo padro e soluo problema b. Adicionar sucessivamente, a ambos os tubos, 10,0 mL de soluo de iodo 0,01N VS e 0,1 mL de cido clordrico 1,2N c. Titular imediatamente, com soluo de tiossulfato de sdio 0,01N VS, usando como indicador 1 gota de cozimento de amido

7.

OBJETIVOS Identificar a ampicilina por cromatografia em camada fina em comprimidos de Britacil Dosear o composto nos mesmos comprimidos atravs do mtodo iodomtrico

METODOLOGIAS 1. Extrao slido-lquido do composto a identificar numa mistura de acetona e cido clordrico 0,1N (4:1) 2. Ensaio semiquantitativo por cromatografia analtica em camada fina como auxiliar de identificao por comparao com padro, em que a fase estacionria o gel de slica HF254 e a fase mvel uma mistura de acetona, gua, tolueno e cido actico glacial (65:10:10:2,5) 3. Revelao fsica, reversvel, por luz ultravioleta a 254 nm (por contraste) e a 365 nm (por fluorescncia direta) e revelao qumica, irreversvel, especfica e colorimtrica com ninidrina em etanol a 3mg/mL 4. Titulao iodomtrica, de complexao e de retorno com tiossulfato de sdio 0,01N VS, usando cozimento de amido como indicador, das solues padro e problema (solues inativadas) e dos brancos (solues ativadas) 5. Clculo do teor de ampicilina por comprimido, usando as frmulas fornecidas no protocolo, e comparao com os valores prescritos na USP 12 (90-120%) REAES QUMICAS

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Reao de neutralizao: Titulao do excesso de iodo:

RESULTADOS E /OU CLCULOS Identificao A B A B A B A amostra

Revelao UV a 254 nm

. .

Revelao UV a 365nm

. .

A branco

Revelao com ninidrina em etanol a 3 mg/mL

. .

Doseamento

Onde: F g equivalente de ampicilina (g/mL2) C concentrao do padro (mg/mL) 1,25 mg/mL P potncia do padro/ g em mg de ampicilina (mg) 1000 mg B volume do tiossulfato de sdio 0,01N consumido na titulao do branco (mL) I volume do tiossulfato de sdio 0,01N consumido na titulao da amostra (mL) T dosagem/mg de ampicilina por comprimido (rtulo) 1000 mg D concentrao da soluo problema, baseada na quantidade presente em cada comprimido em funo da diluio (mg/mL) 1,25 mg/mL

V volume de tiossulfato gasto na titulao

V (branco problema) = 10,30 mL V (amostra problema) = 4,20 mL V (branco padro) = 10,05 mL V (amostra padro) = 4,15 mL 16

CONCLUSES Da revelao da cromatografia com a ninidrina e por UV a 254 nm obtivemos manchas com Rf's, colorao e dimenses semelhantes, pelo que podemos concluir que a substncia a identificar a ampicilina e que a concentrao das solues semelhante. Da revelao por UV a 365 nm podemos concluir que ambas as solues possuem compostos que no a ampicilina. Em relao ao doseamento, o valor obtido para o teor (105%) est dentro do valor que deveramos obter, segundo a USP 12 (90-120%). Em concluso, podemos concluir que todos os resultados esto de acordo com o que seria esperado.

NOTAS O cido actico glacial, na fase mvel, bloqueia a ionizao da soluo Para revelar, utilizada a ninidrina porque um revelador qumico adequado para molculas com grupos amina (como o caso) As revelaes devem dar manchas com dimenses, Rf's e coloraes semelhantes entre o padro e a amostra O cido clordrico tem a funo de regular o pH Neste caso usado o mtodo iodomtrico, visto que as penicilinas (como a ampicilina) no consomem iodo em soluo aquosa, ao contrrio dos seus derivados formados por rutura do anel -lactmicos (derivados do cido peniciloico) a partir da hidrlise alcalina ou da hidrlise enzimtica A diferena entre os consumos de iodo antes e aps ao de meio alcalino dever ser diretamente proporcional quantidade quantidade da penicilina original intacta O cozimento de amido s deve ser adicionado quando a colorao da soluo for amarelo palha; a adio no incio levaria a um aumento do consumo de iodo e iria adulterar os resultados

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