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P.

cinnabarinus

P. cinnabarinus

Expression des laccases chez le champignon lignolytique Pycnoporus sp.

Mahdia ABDELOUAHAB, S. Vanhulle, S. Declerck

Equipe Biotechnologie, Unité de Microbiologie MBLA, Faculté des Sciences Agronomiques et Ingéniérie Biologique, Université catholique de
Louvain-la-Neuve UCL.
Le projet – acronyme SENSOLAC – est de type FIRST Doctorat Entreprise, majoritairement soutenu par la Région Wallone, et par la société
Wetlands Engineering SPRL.
Le système enzymatique des WRF comprend des phénol oxydases (laccases) et des
Champignons lignolytiques peroxydases (lignine peroxydase et manganèse peroxydase).
(White Rot Fungi, WRF) :
basidiomycètes saprophytes
qui dégradent la lignine…
•Les laccases (benzènediol : oxygène
oxydoréductase, EC.1.10.3.2) sont des
phénoloxydases de la famille des oxydases
bleues multi cuivriques ;

• Ces enzymes nécessitent comme co-


substrat la présence d’oxygène moléculaire
mais pas de manganèse ni de peroxyde
d’hydrogène ;

• Elles sont généralement plus thermostables


que les lignine peroxydases ou les
manganèse peroxydases ;

Dégradation de la lignine par les champignons basidiomycètes (ex. Phlebia radiata). Ces champignons utilsent
• De par leur très faible spécificité, leur large
préférentiellement les sucres et les résidus acétate, issus de l’hemicellulose, comme source de carbone et d’énergie. La gamme de substrats et leur haut potentiel
lignine est dégradée par ‘’combustion enzymatique’’ et la majeure partie de la cellulose reste faiblement utilisée. Ce d’utilisation, les laccases sont aujourd’hui des
processus de dégradation confère au bois l’aspect caractéristique de la pourriture blanche (modifié d’après Hofrichter, M.,
Structure d’une laccase multi cuivrique.
2000, BioSpektrum 6: 198-199). enzymes très largement étudiées. Au centre, les atomes 1T1, 1T2, 2T3 de
http://www.kolumbus.fi/ilona.barlund/ilona.barlund/MartinsProjects.html cuivre.

Fonctions biologiques
Applications des laccases
• Présente chez les végétaux et les espèces fongiques
• Dégradation de la lignine et blanchiment de la pâte à papier ;
• Morphogenèse
• Modification enzymatique et décoloration des fibres dans les industries • Formation des organes de fructification, pigmentation, cicatrisation
du textile et du colorant ;
• Interaction plante-pathogène / interaction avec l’hôte
• Détoxification des hydrolysas de lignocellulose lors de la production d’éthanol ;
• Réponse au stress induit par les substances chimiques et les espèces antagonistes
• Traitement des effluents industriels et décontamination des sols ; • Dégradation de la lignine
• Élimination des composés phénoliques des boissons ;
La laccase : une enzyme dont l’expression est régulée
• Élaboration de biosenseurs.
•A l’état constitutif la laccase est produite en faible quantité. Sa synthèse est augmentée sous l’effet
Projets et applications au sein de l’unité de molécules qui induisent l’expression du gène.

• Les inducteurs peuvent être des molécules d’origine biologique, des xénobiotiques (ex. métaux
Régulation de Synthèses de molécules à
haute valeur ajoutée:
lourds, solvants, colorants) ou des facteurs de stress.
l’expression enzymatique
colorants, arômes…
• Les laccases existent sous forme d’isoenzymes. Cette diversité biochimique est dûe à la multiplicité
WRF* des gènes de laccase (au sein d’un même organisme), ainsi qu’aux modifications post
Laccases transcriptionnelles.

Communication Traitement des eaux usées Stress oxydatif Éthanol - Isopropanol


inter-fongique

WRF* : White Rot Fungi ou champignons de la pouriture blanche Mn² + Cu² +
Unité de Microbiologie MBLA Ca² + Réponse heat-shock
Objectif du travail
Microbiolgie appliquée à l’agroalimentaire et à
l’environnement  Etude de la régulation de Metal
Metal response
response
Réponse aux métaux
Hôte de la Mycothèque MUCLTM/BCCM (champignons,
l’expression des laccases de
levures et moisissures) InductionInduction
Laccase de Laccase
Pycnoporus sp.
• 4eme plus grande collection à l’échelle mondiale  Evaluation de la diversité cAMP
AMPc
• 26 000 souches fongiques filamenteuses et levures, biochimique et génétique des
vivantes Reconnaissance de substrats
laccases produite
• 40 000 specimens en herbier AMPc
• International Depositary Authority (IDA) – traité de  Production naturelle et sélective de
Budapest ces laccases.

Méthodologie
• Sélection de molécules capables d’induire des activités laccase significatives ;
• Évaluation et caractérisation des isoenzymes de laccase(s) produites ;
• Quantification des transcrits (ARNm) produits, recherche et amplification des gènes correspondants P. cinnabarinus in vitro
P. sanguineus