REPBLICA DE VENEZUELA MINISTERIO DE EDUCACIN UNIVERSIDAD CENTRAL DE VENEZUELA POSTGRADO DE CIENCIAS FISIOLGICAS BIOLOGA CELULAR

LA MITOCONDRIA:
ASPECTOS ESTRUCTURALES, FUNCIONALES Y PATOLGICOS

Pascuzzo Lima, Carmine

Caracas, 2001
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La Mitocondria

INTRODUCCIN
La clula eucaritica bsica est formada por varios componentes: una membrana plasmtica (ms un glucocalix, o componentes externos a la misma); un medio interno coloidal, el citoplasma; una imbricada estructura proteica que le da forma y le permite movilidad interna y externa (citoesqueleto, microfilamentos, microtbulos, etc.) y, por ltimo, la presencia de las caractersticas organelas subcelulares envueltas en membrana, incluyendo el ncleo celular, del cual proviene la denominacin de este tipo de clula. Despus del ncleo, uno de los organelos de mayor tamao es la mitocondria, mismo que, aparentemente derivado de otras clulas por medio de un proceso endosimbitico, constituye la central energtica celular, gracias a una nica disposicin de protenas que permiten una mayor extraccin de energa a partir del metabolismo. Aparte de su funcin energtica, la mitocondria cumple con otras importantes tareas, las cuales la convierten en un organelo nico, del cual tratar esta revisin.

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ESTRUCTURA DE LA MITOCONDRIA
La mitocondria es un organelo apenas visible al microscopio ptico, formado por dos membranas, interna y externa, que determinan la existencia de dos compartimientos (ver representacin esquemtica adjunta), de los cuales el mayor y ms interno se conoce como matriz mitocondrial, la cual presenta una densidad mayor que el espacio intermembrana a la microscopa electrnica (Childs, 1998; Farabee, 2001; Finol, 2000; Latham y col, 2001). Tiene una forma variable y se presenta como bastones, grnulos o filamentos, siendo la primera de las mencionadas la forma ms comn (forma de salchicha). Su tamao vara ampliamente segn la especie y el tipo celular, pudiendo oscilar entre 0,2 y 10 m. La membrana interna presenta mltiples reticulaciones o invaginaciones llamadas crestas mitocondriales (lamelares, tubulares o reticulares), que permiten aumentar la superficie para realizar diversas reacciones y que se encuentran tapizadas de pequeos salientes llamados partculas elementales, que corresponden a molculas de sintetasa de ATP (Childs, 1998); esta doble membrana es parte de la evidencia que llev a la hiptesis endosimbitica de origen de estos organelos. Las mitocondrias poseen su propio material gentico (ADN mitocondrial o ADNmt) y sus propios ribosomas, los cuales son ms semejantes a los bacterianos que a los eucariticos; en particular, es de destacar que, aunque pueden presentarse algunas copias en forma lineal, el ADNmt es generalmente circular y no se relaciona con protenas de tipo histona y se presenta en pequeos acmulos puntiformes de 4-5 copias que se conocen como nucleoides (Childs, 1998; Kimball, 2001).

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Dada la alta tasa de mutacin del ADNmt, a veces se produce una condicin conocida como heteroplasmia, con coincidencia de genomas salvajes y mutantes (Zaviani y col, 1998). El genoma de las mitocondrias humanas contiene unos 17 Kbp de ADN, con organizacin circular; este material codifica para los siguientes productos (Childs, 1998; Kimball, 2001): 2 molculas de ARN ribosomal (12S, 16S). 22 molculas de ARN de transferencia 13 polipptidos, que participan en la composicin de diversos complejos protenicos de la membrana mitocondrial interna:
o 7 subunidades que contribuyen a la formacin de la NADH-CoQ reductasa mitocondrial o Subunidades 1, 2 y 3 de la Citocromo oxidasa o 2 subunidades de ATP sintetasa o Apocitocromo b

Todos estos productos genticos son usados en la mitocondria, pero la misma requiere tambin de protenas codificadas por genes nucleares (citocromo c, polimerasas, etc.), que son sintetizadas en el citosol, requiriendo de sofisticados procesos de importacin, los cuales son tambin necesarios para la obtencin de la mayor parte de los lpidos y para obtener una fraccin ribosomal 5S, cuya funcin se desconoce an (Childs, 1998; Kimball, 2001). La distribucin de las mitocondrias dentro de las clulas es generalmente bastante uniforme y aunque existen en promedio unas 2000 por clula en aquellas clulas que desarrollan trabajos muy intensos, como las musculares, tienen un nmero mucho mayor.

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Importacin de protenas a la mitocondria La membrana externa de la mitocondria contiene una protena porina, la cual forma un canal acuoso que permite el paso de molculas de hasta 10.000 Da, por lo que se puede considerar que hay un real equilibrio entre el espacio intramembrana y el citosol. Sin embargo, lo propio no ocurre respecto a la membrana interna, la cual es virtualmente impermeable por su contenido de cardiolipina (Bauer y col, 2000; Finol, 2000). As pues, el transporte de protenas (estrictamente hablando, de precursores) hacia la matriz requiere la accin concertada de varios mecanismos translocadores (Childs, 1999; Bauer y col, 2000): o Complejo TOM (Translocator outer membrane): situado en la membrana mitocondrial externa y compuesto por al menos seis protenas de membrana. o Complejos TIM (Translocator Inner Membrane): TIM23 y TIM22, situados en la membrana mitocondrial interna, con cooperacin dinmica en la traslocacin de preprotenas.

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ORIGEN DE LA MITOCONDRIA
En los aos ochenta, Lynn Margulis propuso la teora de la endosimbiosis para explicar el origen de las mitocondrias; segn sus ideas, un procariote de gran tamao (o un eucariote primitivo) habra rodeado a un procariote aerbico de menor tamao, hace unos 700-1500 millones de aos, formando una simbiosis con el mismo, en lugar de digerirlo (Gray y col, 1999; Kimball, 2001). Esto explicara, como se ve en la figura anexa, el hecho de que la mitocondria sea un organelo de doble membrana: la membrana externa habra sido originada por la membrana de la clula receptora, mientras que la membrana interna estara constituida por la membrana de la clula pequea; una evidencia composicin ambas adicional viene de es dada por el hecho de que la bioqumica membranas

marcadamente diferente, con la interna poseyendo una alta proporcin de cardiolipina, lo que la hace prcticamente impermeable a iones (Finol, 2000). Es de destacar que, en apoyo a esta hiptesis, la mitocondria posee un material gentico propio (ADNmt), que difiera profundamente del ADN nuclear, pero que, sin embargo, es notablemente similar al de algunas bacterias actualmente existentes (Rickettsias sp), lo que permite suponer que los organismos que dieron origen a estos organelos estaban filogenticamente emparentados con las mismas (Gray y col, 1999; Kimball, 2001). Segn que el ADNmt difiera ms o menos del supuestamente precursor bacteriano, el mismo se conoce como ancestral o derivado (Gray y col, 1999).

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Es importante destacar que, aunque gran parte del material proteico requerido para la formacin y/o funcin de las mitocondrias tiene origen en el ADN nuclear, este, por s slo, no es suficiente para producir estos organelos, por lo que las mitocondrias slo pueden originarse de mitocondrias preexistentes (Kimball, 2001; Latham y col, 2001). Es obvio que en este proceso de endosimbiosis, los dos organismos precursores resultaron beneficiados, ya que, a cambio de una mayor extraccin de ATP de los alimentos, el organismo mayor provee al endosimbionte de metabolitos diversos y un entorno mucho ms estable (Farabee, 2000). Otras estructuras celulares que podran tener origen endosimbitico incluyen a los cloroplastos, los cilios y los flagelos (Kimball, 2001).

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CICLO DE VIDA DE LA MITOCONDRIA

La mitocondria es capaz de dividirse, en un proceso que remeda ligeramente a la mitosis, con formacin de un tabique a partir de la membrana interna, perpendicular al eje mayor del organelo (Childs, 1998; Finol, 2000). Este proceso de replicacin se asemeja mucho al bacteriano: cuando las mitocondrias se tornan demasiado grandes, replican su material gentico, pasando luego por un proceso de fisin, que afecta primero a la membrana interna y luego a la externa (ver esquema), con produccin de dos mitocondrias hijas (Childs, 1999). El nmero de mitocondrias se controla por autofagia lisosomal, que comienza por la formacin de envolturas de retculo plasmtico alrededor de la mitocondria senescente; luego un cierto nmero de vesculas proveniente del aparto de Golgi se unen a la vacuola autofgica, liberando, gracias al pH cido, hidrolasas previamente vinculadas a receptores de manosa-6-fosfato; as comienza la degradacin mitocondrial propiamente dicha (Childs, 1998). La replicacin mitocondrial ocurre en el proceso normal de recambio de los componentes celulares, pero tambin en conjuncin con los procesos mitticos; dada la diferencia de contenido mitocondrial del oocito y el espermatozoide (100000:100), casi todo el material gentico mitocondrial de los mamferos es de origen materno (Childs, 1998; Zaviani y col, 1998).

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FUNCIONES DE LA MITOCONDRIA
La funcin ms caracterstica que se asocia a estos organelos es la de la produccin aerbica de la energa, a travs de la oxidacin completa del AcetilCoA (ciclo de Krebs) y una subsecuente cascada de reacciones de oxido-reduccin y transporte electrnico conocidas como fosforilacin oxidativa, las cuales generan un gradiente de protones en la membrana mitocondrial interna que se utiliza como fuerza motriz para la sntesis de ATP (Kowaltowski, 2000; Saraste, 1999). Este proceso no slo genera la energa necesaria para mantener el metabolismo celular a travs de la produccin de ATP, sino que media el mantenimiento del propio metabolismo mitocondrial en formas que, en su mayor parte, estn asociados a los mismos gradientes protnicos que generan la fosforilacin (Bernardi y col, 1999). Sin embargo, a pesar lo indiscutible de esta funcin como la principal ejercida por las mitocondrias, estos organelos poseen otras que son dignas de mencin (Kowaltowski, 2000). Entre ellas, se encuentra la termognesis, funcin que se da aparentemente a travs del desacoplamiento parcial de la cadena respiratoria, mediado por protenas desacopladoras especficas y que se manifiesta principalmente en el neonato. En segundo lugar, aparte de mantener el eflujo de energa necesario para mantener el intercambio de calcio con el medio extracelular y mantener la concentracin intracelular a niveles relativamente constantes, la mitocondria participa directamente en la homeostasis de este in, por medio de intercambiadores con protones. Como consecuencia del transporte electrnico, la mitocondria es el principal sitio celular de origen de especies reactivas de oxgeno, las que pueden participar en el desencadenamiento de la muerte en las clulas necrticas. Adems, las mitocondrias tienen una participacin muy activa en el proceso de muerte celular programada, la apoptosis (Susin y col, 1998). Papel de las Mitocondrias en la Obtencin de Energa: Ciclo de Krebs Fosforilacin Oxidativa.

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El producto ms importante de la degradacin de carbohidratos, lpidos y protenas es el acetil-CoA, que contina su proceso de oxidacin hasta convertirse en CO2 y H2O, mediante un conjunto de reacciones que constituyen el ciclo de Krebs, punto central donde confluyen todas las rutas catablicas de la respiracin aerobia. Este ciclo se realiza en la matriz de la mitocondria. En este ciclo se consigue la oxidacin total de los dos tomos de carbono del resto acetilo, que se eliminan en forma de CO2; los electrones de alta energa obtenidos en las sucesivas oxidaciones se utilizan para formar NADH Y FADH2, que luego entrarn en la cadena respiratoria. Debe destacarse que los equivalentes reductores en forma de NADH derivados de la gliclisis citoslica pueden pasar tambin a la cadena respiratoria, a travs de un mecanismo especial de intercambio conocido como la lanzadera del malato. Para que se pueda sntesis de ATP la oxidacin del NADH reduccin del O2, se que se produzca la de los siguientes pasos (Latham y col, 2001; 1999): o Transferencia de electrones desde el NADH, a travs de una serie de transportadores, hasta el oxgeno molecular. Estos transportadores de electrones son protenas incluidas en la membrana mitocondrial interna, a saber: NADH-Q reductasa, Ubiquinona (Q), citocromo reductasa, citocromo c, y citocromo oxidasa. producir la acoplada a y la requiere secuencia clave Saraste,

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o Generacin de un gradiente protnico a travs de la membrana mitocondrial interna, lo que se logra gracias al hecho de que tres de los componentes de la cadena de transporte (NADH-Q reductasa y citocromo oxidasa) funcionan tambin como bombas protnicas. o Difusin exergnica de protones hacia la matriz mitocondrial, acoplada a la sntesis de ATP (esquema) Papel de las Mitocondrias en la Homeostasis del Calcio. En primera instancia, las mitocondrias tienen participacin en la homeostasis celular del Calcio por medio del aporte de energa para los intercambiadores de la membrana plasmtica y del retculo endoplsmico. Sin embargo, tambin pueden tener un papel directo en la homeostasis del in, ya que la mitocondria puede acumular Calcio gracias a un la presencia de un unitransportador, cuya energa viene aportada por un adecuado potencial de membrana. (Kowaltowski, 2000). Papel de las Mitocondrias en la Termorregulacin. Las mitocondrias en el tejido adiposo pardo se comportan de manera diferente a las de otros tejidos, ya que sus membranas internas son especialmente permeables a los protones, por la presencia de protenas desacopladoras (UcP); esto hace que parte de la energa almacenada por el transporte electrnico y almacenada como potencial de membrana se libere en forma de calor al regresar los protones a la mitocondrial, con disminucin de ATP (Kowaltowski, 2000). Papel de las Mitocondrias en la En general, la apoptosis se puede Apoptosis. considerar matriz sntesis de

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como dividida en cuatro fases principales, aunque las mismas ocurren realmente sin solucin de continuidad, en el curso de 30 a 60 minutos (Amarante y Green, 1999; Green y Reed,1998). Estas fases son las siguientes:
Inicio de seales de estrs, proceso que incluye la sensibilizacin de un arreglo muy diverso de molculas regulatorias que ulteriormente transmitirn esas seales hacia la mitocondria. Decisin a nivel molecular en la mitocondria acerca de la muerte o no de la clula; este paso est mediado por el grupo especial de protenas de la familia Bc1-2 La (Adams y Cory, 1998). Esta decisin es irreversible. La tercera fase est mediada por los ejecutores de la apoptosis, las caspasas (Cohen, 1997; Thornberry y Lazebnik, 1998), que inducen cambios morfolgicos y bioqumicos que a su vez originan una sealizacin mltiple que permite a las clulas vecinas el reconocer a la clula apopttica como material fagocitable. La ltima fase, rpida y difcil de observar in situ, es la remocin de la clula apopttica, producida sin desencadenar respuesta inflamatoria.

La apoptosis puede desencadenarse por procesos inductores , como la liberacin de mediadores (TNF-alfa, corticoides, neurotransmisores como la glutamina y el NMDA), el shock trmico, infecciones, activacin de oncogenes y diversos efectos txicos de drogas (quimioterpicos diversos, etanol, pptido beta-amiloide); tambin puede inhibirse por factores mltiples, como factores de crecimiento o de hormonas sexuales, la accin de algunos genes virales (adenovirus E1B, Baculovirus) y ciertos agentes farmacolgicos (Hidalgo y Vieiro, 1999). Los mecanismos generales por los cuales las mitocondrias median la muerte celular son los siguientes (Green y Reed, 1998):
Disrrupcin del transporte electrnico y del metabolismo energtico: esto implica la cada de la produccin de ATP, aunque es un evento relativamente tardo en la apoptosis, ocurriendo mucho despus de la disrrupcin propiamente dicha.
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Liberacin de protenas activadoras de caspasas: entre otras, el citocromo C, que formar parte luego de los apoptosomas (cuerpos citoslicos vesiculares), que adems contienen Apaf-1 (factor 1 activador de proteasas antiapoptticas) y procaspasa-9. La liberacin masiva de Citocromo c es el punto de no retorno de la apoptosis.

Alteracin del potencial redox celular: lo que incluye el aumento de la generacin de especies reactivas de oxgeno.

Transicin de Permeabilidad La transicin de permeabilidad es un sbito y generalizado incremento de la permeabilidad de la membrana mitocondrial interna hacia solutos con peso molecular de hasta 1500 Da (Bernardi y col, 1999; Lemasters y col, 1998), en la fase premitocondrial de la apoptosis (Susin y col, 1998). La consecuencia inicial de la apertura de este canal (3 nm) es la despolarizacin de membrana, impidiendo los gradientes protnicos necesarios para la fosforilacin oxidativa y el mantenimiento del metabolismo mitocondrial; adems, permite un aumento importante del volumen mitocondrial, por procesos osmticos. Si bien el aumento de permeabilidad mitocondrial permite liberar de una caspasa mitocondrial y de Citocromo c, la liberacin de este ltimo slo corresponde a un 10-15 % de la producida en la apoptosis, por lo que otros eventos deben ocurrir antes de su liberacin masiva (Bernardi y col, 1998). Hay evidencias de que la transicin de permeabilidad participa en los procesos de necrosis y autofagia (Lemasters y col, 1998). Protenas involucradas en la muerte celular
Familia BC1-2: formada por al menos 14 miembros, incluyendo algunos con propiedades antiapoptticas (BC1-2, BC1-XL, BC1-W y Mc1-1) y otros de carcter proapopttico (Bax, Bak, Bok y otros), que se diferencian principalmente en un

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dominio conocido como BH3. Algunas de estas protenas (BAX) pueden mediar muerte independiente de caspasas (Adams y Cory, 1998; Reed y col, 1998). Citocromo c: es capaz, en presencia de dATP, de activar a la procaspasa-9, lo que se sigue por reclutamiento y activacin de procaspasa-3. Su liberacin al citoplasma, mediada por la transicin de permeabilidad y el edema mitocondrial, lo convierte luego en parte de los apoptosomas (Bernardi y col, 1999). A1F: vnculo entre la degradacin del ncleo (condensacin de cromatina + fragmentacin de ADN) y la apertura del canal de transicin de permeabilidad, ya que es una proteasa que sufre activacin por una endonucleasa nuclear (Bernardi y col, 1999). Caspasas: familia de unos 10 miembros, de proteasas muy especficas y eficientes, producidas como proenzimas. En la apoptosis funcionan como efectores (disrrupcin del ensamblamiento celular) e iniciadores (iniciacin de la disrrupcin en respuesta a seales proapoptticas). Entre los sustratos de las caspasas estn: PARP, DNA-PK, laminas, U1-70 KDa, fodrina y la proteincinasa C (Cohen, 1997).

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PATOLOGA MITOCONDRIAL
Las mutaciones en el ADNmt causan enfermedades, ya que es una secuencia muy corta con alta densidad de informacin. Generalmente, el efecto de mutaciones puntuales puede diluirse por la presencia de cientos de mitocondrias y miles de copias del genoma. As, los rganos ms afectados seran los ms dependientes del metabolismo aerbico, lo que sera menos notable en personas jvenes (Casiday y col, 2000; Childs, 1998). Las enfermedades mitocondriales tienen gran variedad de patrones de herencia: materno, mendeliano, o su combinacin; adems, los fenotipos de estas enfermedades son muy diversos y de amplio solapamiento: las mismas mutaciones pueden producir distintos fenotipos, mientras que mutaciones diferentes pueden generar fenotipos similares (Wallace, 1999). Las manifestaciones ms comunes de los trastornos mitocondriales incluyen las siguientes (Wallace, 1999): Neurolgicas: ptosis, oftalmopleja, intolerancia al ejercicio, fatiga, miopata, ataxia, convulsiones, demencia, neuropata, etc. Manifestaciones sistmicas: cardiomiopata, talla baja, cataratas, retinopata, acidosis metablica, hepatopata, nefropata, seudoobstruccin intestinal, pancitopenia, diabetes, hipoparatiroidismo, etc. Entre los sndromes mitocondriales especficos se encuentran los siguientes (Wallace, 1999): Mutaciones de ADNmt o Grandes rearreglos de ADNmt, con delecciones parciales mltiples y, a veces, duplicaciones parciales: Sndrome de Kearns-Sayre: oftalmopleja progresiva externa producido por un gran reordenamiento de ADN, con delecciones parciales mltiples.
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Oftalmopleja progresiva externa espordica. Sndrome pancretico-medular de Pearson.

o Mutaciones puntuales del ADNmt: Encefalopata mitocondrial Epilepsia mioclnica con fibras rojas rasgadas Debilidad neurognica, ataxia, retinitis La neuropata ptica de Leber (degeneracin del nervio ptico, con ceguera progresiva) Defectos de la sealizacin ncleo-mitocondrial o Alteraciones cualitativas: Deleccin mltiple familiar.

o Alteraciones cuantitativas: Deplecin de ANDmt.

Defectos genticos nucleares o Sndrome de Leigh: encefalopata necrotizante subaguda

El diagnstico de estos trastornos se basa en consideraciones clnicas, morfolgicas, bioqumicas y estudios genticos moleculares; el hallazgo de transmisin materna debe ser un indicio importante para sospechar estas enfermedades cuando existan sndromes clnicos (Zeviani y col, 1998).

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REFERENCIAS
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