CRESCIMENTO MICROBIANO -mais detalhes-

Prof. IVAna

Crescimento Microbiano

CRESCIMENTO MICROBIANO:

Em microbiologia, o termo crescimento refere-se a um aumento do nmero de clulas e no ao aumento das dimenses celulares.
Crescimento Microbiano = associado ao crescimento de uma populao de clulas (uma clula dar origem a duas ao fim de um certo tempo, tempo de gerao ou de duplicao.)

Fatores fsicos

1. TEMPERATURA:
A maioria dos microrganismos cresce bem nas temperaturas ideais para os seres humanos.

Temperatura de crescimento mnima: Temperatura de crescimento tima: Temperatura de crescimento mxima:

Temperatura onde a espcie capaz de crescer onde a espcie apresenta melhor crescimento temperatura, onde ainda possvel o crescimento

Figura 1. Taxa de crescimento vs. temperatura

Bactria: Bacillus cereus Respirao: aerbico facultativo Incubao: 1-6 horas (casos de vomito) 6-24 (casos de diarria) Principais Alimentos Associados: arroz cozido Observaes: produz esporos e toxinas

Bactria: Clostridium botulinum Respirao: anaerobico Incubao: 12-36 horas Principais Alimentos Associados: alimentos em conservas e embutidos de carne Observaes: produz esporos e toxinas termolbeis

Bactria: Clostridium perfringens Respirao: anaerobico Incubao: 10-12 horas Principais Alimentos Associados: carnes aquecidas e reaquecidas em temperaturas inadequadas Observaes: produz esporos e toxinas comum em alimentos servidos em escolas, hospitais e presdios
Bactria: Listeria monocytogenes Respirao: aerobica Incubao: 3 semanas Principais Alimentos Associados: derivados lacteos, frutos do mar e ostras Observaes: nao forma esporos mas resistente ao congelamento, secagem e calor

Bactria: Staphyloccus aureus Respirao: aerbico Incubao: 2 - 4 horas Principais Alimentos Associados: alimentos com alto grau de manipulao que permaneam por muito tempo em temperatura ambiente Observaes: produz toxina termoestavel

Bactria: Streptococcus spp (grupo A e D) Respirao: aerobico Incubao: grupo A 1-3 dias horas, grupo D 2-36 horas Principais Alimentos Associados: leite no pasteurizados e alimentos preparados por pessoas infectadas Observaes: Grupo A causa faringite estreptococica, Grupo D causa a sindrome semelhante a Staphylococcus

Microrganismos so classificados em 3 grupos:

Psicrfilos: Mesfilos: Termfilos: Termfilos extremos
crescem em baixas temperaturas (-10 a 15 C) crescem em temperaturas moderadas (10 a 50 C) crescem em altas temperaturas (40 a 70 C) Temperaturas (68 a 110 C)

Figura 2. Curva de crescimento caracterstica de diferentes microrganimos

2. pH:

Refere-se a acidez ou a alcalinidade de uma soluo;

Excees:

Maioria dos microrganismos cresce melhor perto da neutralidade (pH 6,5 7,5); Poucas bactrias so capazes de crescer em pH cido (como pH 4,0)

Bactrias acidfilas: alto grau de tolerncia acidez (Thiobacillus de 0,5 a 6,0 com timo entre 2 e 3,5) - Bactrias alcaliflicas: (Bacillus e Archaea) (pH 10 11). Fungos - tendem a ser mais acidfilos que as bactrias (pH <5).

3. PRESSO OSMTICA
No Halfilos: no necessitam de sal e no toleram a presena no meio. Halotolerantes:

no necessitam de sal mas toleram a presena no meio.

Halfilos: necessitam de sal em uma concentrao moderada Halfilos extremos: necessitam de sal em altas concentraes.

Figura 3. Taxa de crescimento de alguns microrganimos vs. a concentrao de sal.

Fatores Quimicos

1. FONTES DE CARBONO, NITROGNIO, ENXOFRE E FSFORO:

CARBONO:
Essencial para a sntese de todos os compostos orgnicos necessrios para a viabilidade celular (elemento estrutural bsico para os seres vivos) organismos quimio-heterotrficos: obtm C a partir de materiais orgnicos como protenas, carboidratos e lipdeos. organismos quimioautotrficos organismos fotoautotrficos

NITROGNIO, ENXOFRE E FSFORO:

NITROGNIO

Obteno de N:

- N, S: sntese de protenas

Decomposio de materiais orgnicos (protenas, aminocidos) utilizado para sintetizar os grupos aminos presentes nos aminocidos.

- N, P: sntese de DNA e RNA, ATP

Peso seco de uma clula bacteriana: 14 % N, 4 % S, P

Amnia (NH4 +)

Nitrato (NO3-)

Fixao de N: algumas bactrias so capazes de utilizar N gasoso diretamente da atmosfera. Microrganismos do solo (ex. bactrias dos gneros Rhizobium e Bradyrhizobium) utilizam este processo para obteno de N, tanto para elas como para as plantas que convivem simbioticamente (algumas leguminosas soja, feijo). Cultivo de leguminosas: > fertilidade do solo sem a necessidade de implementao de fertilizantes qumicos

1. FONTES DE CARBONO, NITROGNIO, ENXOFRE E FSFORO:

ENXOFRE
utilizado na sntese de aminocidos contendo S e de vitaminas (tiamina e biotina)

FSFORO
essencial para a sntese dos cidos nuclicos e para os fosfolipdios componentes da membrana celular.

2. GUA:
Essencial para os microrganismos - Disponibilidade varivel no ambiente

Desenvolvem mecanismos para obter gua

Ambiente com < concentrao de gua:

atravs do aumento da concentrao de solutos internos seja pelo bombeamento de ons para o interior celular ou pela sntese de solutos orgnicos (acares, alcois ou aminocidos).

3. OXIGNIO:

Extremamente importante no desenvolvimento microbiano Os organismos classificados em:

1. AERBIOS
Estritos (obrigados): necessitam de O2 Facultativos: no necessitam de O2 mas crescem melhor com O2 Microaerfilo: necessitam de O2 mas em nveis menores

2. ANAERBIOS
Aerotolerantes: no necessitam de O2 mas crescem melhor sem O2 Estritos (obrigados): no toleram O2 (letal)

AERBIO ESTRITOS

ANAERBIO AERBIO ANAERBIO MICRO ESTRITO FACULTATIVO AERFILO AEROTOLERANTES

Catalase e a superxido dismutase reduzem para H2O os compostos txicos.

alta [O2] catalase SOD

sem O2 ausncia: catalase SOD

alta e baixa [O2] catalase SOD

baixa [O2]

alta e baixa [O2] SOD

Figura 4. Efeito do oxignio sobre o crescimento de vrios tipos de bactrias.

Meios de cultura

meio de cultura: material nutriente preparado no laboratrio para o crescimento de microrganismos. cultura: microrganismos que crescem e se multiplicam no meio de cultura. meio definido:

toda a composio qumica conhecida meio complexo:

composio qumica no conhecida (composto por nutrientes como extrato de levedura, de carne ou de plantas)

MEIO SELETIVO: favorece o crescimento de uma determinada bactria de interesse, impedindo o crescimento de outras bactrias. ex: gar sabouraud dextrose, ph 5,6, utilizado no crescimento de fungos que so favorecidos, em relao as bactrias, pelo baixo ph. MEIO DIFERENCIAL: facilita a identificao de um determinado organismo. ex: meio gar-sangue, utilizado para a identificao de bactrias capazes de destruir clulas sangneas (anel claro em torno da colnia). MEIO DE ENRIQUECIMENTO: favorece o desenvolvimento de uma populao bacteriana que esta em desvantagem entre outras populaes.

MEIOS REDUTORES: meios com reagentes, como o tioglicolato de sdio, que capaz de se combinar com o oxignio dissolvido eliminando este elemento do meio de cultura (especfico para microrganismos anaerbicos).

CRESCIMENTO DAS CULTURAS BACTERIANAS

DIVISO BACTERIANA:

FISSO BINRIA TEMPO DE GERAO FASES DE CRESCIMENTO: FASE lag FASE log FASE ESTACIONRIA FASE DE MORTE CELULAR

Figura 5. Fisso binria bacteriana.

 o tempo necessrio para uma clula se dividir (e sua populao dobrar de tamanho).

tempo varia de acordo com o organismo; depende das condies ambientais (nutricionais, temperatura, etc); maioria das bactrias: 1 3 h

FASE lag: Pouca ou ausncia de diviso celular (fase de adaptao) - 1 hora (estado de latncia, com intensa atividade metablica) FASE log: Incio do processo de diviso (perodo de crescimento ou aumento logaritmo). Reproduo celular extremamente ativa, sensveis as mudanas ambientais (* EFEITO DE ANTIBITICOS) FASE ESTACIONRIA: Velocidade de crescimento diminui o n de clulas vivas = n de clulas mortas FASE DE MORTE CELULAR: O n de clulas mortas excede o de clulas novas.
Figura 6. Curva de crescimento bacteriano mostrando as 4 fases tpicas.

QUANTIFICAO DIRETA:
CONTAGEM EM PLACAS FILTRAO MTODO DO NMERO MAIS PROVVEL CONTAGEM DIRETA AO MICROSCPIO

QUANTIFICAO INDIRETA:
TURBIDIMETRIA ATIVIDADE METABLICA PESO SECO

QUANTIFICAO DIRETA:

CONTAGEM EM PLACAS
tcnica mais utilizada na determinao do tamanho da populao bacteriana;

VANTAGEM: qualificao de clulas viveis

DESVANTAGEM: tempo (24 h para o aparecimento das colnias) Clculo:
n de colnias na placa x ndice de diluio da amostra = n de bactrias/mL DILUIO SERIADA MTODO DE ESPALHAMENTO EM PLACA

Figura 7. Contagem em placas e diluio seriada

(2) FILTRAO

n de bactrias = pode ser utilizado o mtodo de filtrao para a sua contagem.

concentrao de bactrias sobre a superfcie de uma membrana de filtro de poros muito pequenos aps a passagem de um volume de 100 mL de gua. filtro posteriormente transferido para uma placa de Petri contendo meio slido.

(3) O MTODO DO NMERO MAIS PROVVEL (NMP)

utilizado para microrganismos que no crescem bem em meio slido.

A) diluio a partir de um alto volume de inculo (ex. 10 mL)

B) diluio a partir de um mdio volume de inculo (ex. 1 mL)

c) diluio a partir de um baixo volume de inculo (ex. 0,1 mL) d) contagem do n de tubos positivos

e) estimativa do n de clulas/mL de bactrias

Figura 8. Mtodo do nmero mais provvel (NMP)

Figura 8. Mtodo do nmero mais provvel (NMP)

(4) CONTAGEM DIRETA AO MICROSCPIO

um volume conhecido de suspenso bacteriana colocado em uma rea definida da lmina de microscpio.

a amostra pode ser corada ou analisada a fresco. utilizam cmaras de contagem DESVANTAGENS:
no separa clulas mortas e vivas pode haver erros de contagem difcil contagem para bactrias mveis

Figura 9. Utilizao da cmara de contagem Petroff-Hausser.

QUANTIFICAO INDIRETA:

(1) TURBIDIMETRIA

(2) ATIVIDADE METABLICA

monitoramento do crescimento bacteriano atravs da turbidez espectrofotmetro (540 - 660 nm)

quantidade de um certo produto (como cido ou CO2) diretamente proporcional ao nmero de clulas bacterianas.

A quantidade de luz que atravessa o detector inversamente proporcional ao n. de bactrias. Quanto > o n. de bactrias < a quantidade de luz que transmitida Figura 10. Determinao do n de bactrias por turbidimetria.

(3) PESO SECO

principalmente para fungos filamentosos a) fungo removido do meio por filtrao b) seco em dessecador c) posterior pesagem

Agora laboratrio