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JUNTA DIRECTIVA
JUAN ANTONIO NIETO ESCALANTE Secretario Distrital de Ambiente INOCENCIO BAHAMN CALDERN Rector Universidad Distrital Francisco Jos de Caldas NORA LEN RODRGUEZ Directora Instituto de Estudios Ambientales -IDEAUniversidad Nacional de Colombia NGEL GUARNIZO VSQUEZ Persona Natural
COMIT DIRECTIVO
EDGAR MAURICIO GARZN GONZLEZ Director JULIA DEL AMPARO MORALES AMADOR Secretaria General CLAUDIA ALEXANDRA PINZN Subdirectora Cientfica TANIA ELENA RODRGUEZ ANGARITA Subdirectora Educativa y Cultural CLAUDIA MARCELA SERRANO Subdirectora Tcnica y Operativa CAROLD EDITH GMEZ FINO Jefe Oficina Asesora Jurdica ALEXANDER SENZ SIERRA Jefe Oficina Asesora de Planeacin JULIA DEL AMPARO MORALES AMADOR (E) Jefe Oficina de Control Interno MOISS PALACIOS Jefe Oficina de Arborizacin JUAN MUELAS TRCHEZ Coordinador Programa Agricultura Urbana
DIANA CAROLINA CORZO Ingeniera Agroindustrial Investigadora en el rea de transformacin dianacorbarra1@gmail.com SERGIO LEONARDO CRDOBA Ingeniero Agroecolgico Investigador en el rea de propagacin tradicional trichogramma91@gmail.com HCTOR LANCHEROS Bilogo, candidato a M.Sc. en Fisiologa de Cultivos Investigador en el rea de ecofisiologa holancheros@gmail.com ANDREA DEL PILAR MARTNEZ Bioqumica Industrial, M.Sc. en Gestin Ambiental Investigadora en el rea de transformacin andre01_81@hotmail.com BELKYS PREZ Ingeniera de Produccin Biotecnolgica Investigadora en el rea de propagacin in vitro belkysperezmartinez@gmail.com MNICA PINEDA FORERO Biloga Investigadora en el componente de etnoecologa monicapineda@gmail.com RIKA ANDREA PLAZAS Qumica, M.Sc. en Qumica Investigadora en el rea de fitoqumica erikaandrea.plazasgonzalez@gmail.com VIVIANA RODRGUEZ Estudiante de Licenciatura en Biologa viviverde86@yahoo.com INGRITH ZRATE Estudiante de Licenciatura en Biologa ingrithzar@gmail.com Revisin de contenidos DUBN CANAL MARA EUGENIA TORRES Diseo y diagramacin PILAR ANDREA ORTZ SANABRIA CAROLINA GARCA GUEVARA
AUTORES
Contenido
Presentacin Introduccin Captulo 1. Plantas tiles de la Localidad de Sumapaz,Bogot D.C., Colombia Mnica Pineda Forero Captulo 2. Observaciones sobre la morfologa y la anatoma de las especies estudiadas Hctor Lancheros Captulo 3. Curva diaria de transpiracin y fotosntesis de Cavendishia bracteata en el corregimiento de Nazareth de la localidad de Sumapaz Hctor Lancheros Captulo 4. Anlisis de las curvas diarias de transpiracin y fotosntesis de Bomarea multiflora Hctor Lancheros Captulo 5. Comparacin de la respuesta de la conductancia estomtica y el rendimiento fotosinttico de Bomarea multiflora, Cavendishia bracteata y Rubus acanthophyllos en relacin con las variables luz y temperatura Hctor Lancheros Captulo 6. Micorrizas observadas en Bomarea multiflora, Cavendishia bracteata y Rubus acanthophyllos Hctor Lancheros, Ingrith Zrate y Viviana Rodrguez Captulo 7. Estudio qumico preliminar y evaluacin de actividad antibacteriana de Bomarea multiflora Erika Andrea Plazas Gonzlez
Captulo 8. Actividad antibacteriana de Rubus acanthophyllos Andrea del Pilar Martnez Captulo 9. Obtencin de antocianinas a partir de las hojas jvenes de Cavendishia bracteata Andrea del Pilar Martnez Captulo 10. Transformacin y uso de Bomarea multiflora Diana Carolina Corzo Captulo 11. Propagacin de Bomarea multiflora Sergio Leonardo Crdoba Captulo 12. Establecimiento in vitro de Rubus acanthophyllos Belkys Prez
Presentacin
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La regin de Sumapaz se encuentra en la cadena montaosa de los Andes y por tener una representacin de ms de 200 gneros de plantas vasculares y un buen porcentaje de plantas endmicas, es considerada uno de los grandes centros de diversidad de plantas del mundo. An as, son muchos los sectores que requieren exploracin en Sumapaz (Hospital de Nazareth, 2007). A pesar de que la regin es una zona que alberga importantes ecosistemas y una alta diversidad de flora, las reas de cultivo y ganadera reducen las reas disponibles para la conservacin y, por lo tanto, la prdida de biodiversidad. Entre otras consecuencias, estos procesos conllevan a la disminucin de las poblaciones de especies silvestres, dentro de las cuales existen especies vegetales que presentan amplios potenciales de uso (Jardn Botnico Jos Celestino Mutis, 2008). Es indispensable hacer esfuerzos para evitar la prdida definitiva del conocimiento tradicional sobre plantas tiles en la regin, no solo para preservar esta herencia cultural, sino tambin para registrar la informacin sobre ciertas especies que podran ser relevantes para el desarrollo de nuevas fuentes de alimento, medicamentos, industria u otros beneficios (Akerele, 1993; Katewa et al., 2004). La informacin bsica que puede obtenerse en este tipo de estudios, sobre especies econmicamente importantes y con potenciales de uso y aprovechamiento, constituye una herramienta importante para la implementacin de medidas adecuadas para su conservacin efectiva y manejo a largo plazo (Araujo-Murakami y Zenteno, 2006). El objetivo del estudio fue contribuir a la caracterizacin etnobotnica de la flora til de la localidad de Sumapaz. Se obtuvo un inventario de las especies con potencial de uso de la zona y se recopil informacin cultural respecto a su uso y manejo, por parte de los pobladores de la localidad. Edgar Mauricio Garzn Director
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Introduccin
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Existe una gran diversidad de especies vegetales potencialmente tiles para un uso sostenible, entre ellas se destacan las especies alimentarias y aquellas con propiedades medicinales. Muchas de estas especies se hacen progresivamente ms vulnerables debido a la extensin de las actividades humanas, las cuales han causado una alteracin en la mayora de las comunidades vegetales. La regin Andina de Colombia cuenta con un extenso recurso fitogentico que puede ser utilizado a niveles industrial, medicinal y alimenticio; sin embargo, tambin es una de las zonas ms amenazadas debido a los procesos de intervencin antrpica, tales como el aumento de la industrializacin, la expansin de la zona urbana y el continuo desplazamiento de pobladores. Las investigaciones sobre el manejo y el aprovechamiento de especies vegetales potencialmente tiles en reas rurales del Distrito Capital se encuentran en un nivel muy bajo; este dficit se refleja principalmente en la falta de trabajos enfocados al conocimiento de la produccin y el comportamiento fisiolgico de especies que presentan un buen potencial econmico, como es el caso de las especies de frutales silvestres, principalmente de las familias Ericaceae y Rosaceae. La desaparicin gradual de estas especies causara la prdida de un recurso que, bien manejado, podra ocupar un rengln en el mbito econmico del pas al incrementar la competitividad a nivel externo y ofrecer nuevos productos. El deterioro de los ecosistemas, la disminucin y el desconocimiento del uso y aprovechamiento de las especies vegetales nativas del Distrito Capital y la regin, limita el crecimiento econmico, el mejoramiento de la calidad de vida y el bienestar social de las poblaciones periurbanas y rurales. Como una alternativa para disminuir este deterioro gradual, se plantea la necesidad de crear un enfoque dirigido a un desarrollo sostenible basado en el uso racional de los recursos vegetales. El presente trabajo se realiz en el corregimiento de Nazareth de la localidad de Sumapaz (Bogot D.C.), en un rea de la cuenca del ro Blanco caracterizada por la presencia de vegetacin tpica de ambientes de bosque andino y altoandino. La Localidad de Sumapaz se encuentra ubicada sobre la Cordillera
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Oriental, entre 2.600 y 4.320 metros de elevacin, a 30 kms al sur del casco urbano de Bogot (Hospital de Nazareth, 2007). Ocupa un rea total de 78.095 has. correspondiente al 42% del rea total del Distrito (DAPD, 2004). El corregimiento de Nazareth tiene un rea total de 30.069 has., correspondientes al 39% de la localidad (DAPD, 2004). La zona se caracteriza por temperaturas medias que oscilan entre 4,4C y 8,3C y precipitaciones bajas, que oscilan entre 776 mm en la zona norte de la localidad y 3.062 mm en la zona suroriental (DAPD, 2004). Entre los ecosistemas caractersticos, la localidad cuenta con bosques andinos, bosques altoandinos y pramos (Fig. 1).
azules indican los sitios seleccionados para la toma de muestras empleadas en los anlisis fitoqumicos, de transformacin de material vegetal y ecofisiolgicos
La mayor parte del territorio pertenece al Parque Nacional Natural de Sumapaz, el resto del rea donde se presentan los asentamientos, es en su mayora un ecosistema de bosque alto andino (Alcalda Local de Sumapaz, 2009). En las zonas altas de la localidad, de difcil acceso, se observa poca intervencin, mientras que en las zonas bajas, ms favorables para los asentamientos, el bosque se encuentra intervenido y las especies arbustivas no superan los 20 metros de altura (Alcalda Local de Sumapaz, 2009). La primera etapa de las investigaciones que hacen parte de este documento, consisti en una exploracin etnobotnica dentro de la cual se identificaron los usos potenciales de las especies del rea, de acuerdo con el conocimiento de la poblacin local. Esta informacin
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se complement con informacin bibliogrfica y recorridos de campo para la seleccin de tres especies con potencial de uso alimenticio y medicinal. Para cada una de las especies seleccionadas se analizaron los aspectos de ecofisiologa, fitoqumica, bromatologa, transformacin, propagacin tradicional y propagacin in vitro. Las especies seleccionadas fueron Bomarea multiflora, Cavendishia bracteata y Rubus acanthophyllos. La recoleccin de material vegetal y la toma de datos se hicieron en las veredas Santa Rosa, Las Auras y Nazareth. A continuacin se presentan los resultados obtenidos a partir de los trabajos desarrollados en las reas de etnobotnica, ecofisiologa, fitoqumica, transformacin, propagacin por mtodos tradicionales y propagacin in vitro.
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sobre especies econmicamente importantes y con potenciales de uso y aprovechamiento, constituye una herramienta importante para la implementacin de medidas adecuadas para su conservacin efectiva y manejo a largo plazo (Araujo-Murakami y Zenteno, 2006). El objetivo del estudio fue contribuir a la caracterizacin etnobotnica de la flora til de la localidad de Sumapaz. Se obtuvo un inventario de las especies con potencial de uso de la zona y se recopil informacin cultural respecto a su uso y manejo, por parte de los pobladores de la localidad.
rea de estudio
Este estudio se desarroll en la localidad de Sumapaz, zona rural de la ciudad de Bogot D.C., departamento de Cundinamarca (Colombia), particularmente en el Corregimiento de Nazareth, en las veredas Santa Rosa, Las Auras, nimas Bajas, nimas Altas, Nazareth y Los Ros. Se incluy adems la vereda Laguna Verde, del Corregimiento de Betania la cual limita con algunas de las veredas mencionadas anteriormente y presenta condiciones similares a stas (Fig. 1.1).
La poblacin de la localidad de Sumapaz corresponde en su mayora a campesinos con una tradicin de uso del suelo y aprovechamiento de los recursos vegetales de su entorno. El nmero de habitantes de la localidad se estim en 5.667 en el 2005 (DANE, 2005), de los cuales el 32% corresponde al corregimiento de Nazareth (DAPD, 2004). Los pobladores de la localidad de Sumapaz se dedican principalmente a labores relacionadas con el campo (DANE, 2007), siendo la actividad
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econmica principal la pecuaria, seguida de la actividad agrcola con la papa como principal producto (UELDAMA, 2003).
Metodologa
Se llevaron a cabo nueve salidas de campo entre junio y septiembre del 2009, en las cuales se realizaron entrevistas y recorridos etnobotnicos con informantes claves de la regin. Se entrevistaron un total de catorce personas, ocho mujeres y seis hombres, con edades entre los 20 y 80 aos. Los recorridos etnobotnicos fueron hechos con dos informantes de la localidad por zonas de bosque altoandino secundario, relictos de bosque, caminos veredales y potreros. Durante los recorridos se registraron las plantas tiles conocidas por los entrevistados y la informacin asociada: nombres comunes, usos, partes utilizadas, forma de uso y manejo. Se colectaron muestras botnicas de las plantas mencionadas y, cuando fue posible, se hizo un registro fotogrfico de las especies. El material colectado fue procesado de acuerdo con Alexiades (1996a), y depositado en el herbario del Jardn Botnico Jos Celestino Mutis. Las entrevistas se hicieron a travs de conversaciones semiestructuradas (Alexiades, 1996b), centradas en una lista de preguntas que indagaban sobre las especies tiles conocidas por los informantes. La lista de preguntas incluy informacin de las plantas como nombres comunes, usos, partes utilizadas, forma de uso y manejo de las especies y las zonas donde se pueden encontrar. Se indag tambin acerca de la edad de los informantes, su nivel de estudio y ocupacin, as como de su lugar de procedencia, el de sus ancestros y el tiempo de residencia en la zona. Estos datos fueron tenidos en cuenta para realizar los anlisis pertinentes en cuanto al conocimiento de los usos potenciales de las plantas de la regin. La informacin obtenida se consign en una base de datos, donde se incluyeron los siguientes datos para cada especie: familia, nombre cientfico, nombres comunes, categoras de uso, descripcin de usos, lugar de crecimiento (bosque, huertos, zonas de cultivo), colector, nmero de coleccin y nombre del informante. Para algunas de las plantas mencionadas por los informantes no se reportan nombres cientficos, solo nombres comunes, ya que no fue posible colectarlas ni avistarlas durante las entrevistas etnobotnicas. Esta situacin determin que para algunos de los anlisis fueran excluidas algunas
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plantas de las cuales se desconoca su taxonoma o de las que no se obtuvo informacin especfica sobre su categora de uso; los casos en que esto ocurri se especificaron al momento de presentar los resultados respectivos. En cuanto a los usos reportados de las especies se definieron doce categoras (Tabla 1.1), tomando como referencia lo planteado por Marn-Corba et al. (2005).
Tabla 1.1. Categoras de uso de las plantas reportadas en exploraciones etnobotnicas en la localidad de Sumapaz
Categora
Alimenticio Artesanal Colorante Forraje Industrial
Descripcin
Incluye especies cultivadas y del bosque, usadas como comestibles Incluye especies utilizadas para elaborar artesanas, como fibras para cestera Plantas utilizadas para elaborar tintes naturales o para el proceso de teido de fibras Plantas que sirven para alimento animal Especies con potencial de ser utilizadas en procesos industriales como elaboracin de jabones o espermas (velas) Incluye especies utilizadas por su madera como combustibles (para lea o carbn), para construccin (edificacin de viviendas como vigas, cercas, techos, etc.) o para aserro (procesos de ebanistera o elaboracin de herramientas agrcolas) Especies con connotaciones msticas Plantas usadas para tratar o prevenir enfermedades Especies con uso actual y potencial en el ornato y decoracin de espacios Especies con usos especficos y que no pueden ser catalogadas en las otras categoras de uso definidas anteriormente
Maderable
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Resultados Se reportaron un total de 96 plantas con potencial de uso en la zona de estudio (anexo 1.1), de stas, 23 corresponden a algunas de las plantas mencionadas en entrevistas domiciliarias, las cuales no fue posible colectar, para estos casos slo se reporta el nombre comn. Las 73 especies restantes pertenecen a 44 familias. La familia con mayor representacin de especies es Asteraceae (18%), seguida de las familias Melastomataceae (5%), Myrtaceae (4%), Rosaceae (4%) y Solanaceae (4%) (Fig. 1.2)
Figura 1.2. Familias de plantas tiles ms representativas de la localidad de Sumapaz (n= 74)
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Los usos ms comunes para las especies registradas fueron el medicinal, seguido del maderable y el alimenticio (Fig. 1.3). Se presentan en menor proporcin los usos mgico-religioso, colorante, industrial, artesanal y forraje.
Figura 1.3. Usos potenciales de las plantas reportadas en exploraciones etnobotnicas en la localidad de Sumapaz (n=109)
Dentro de la categora medicinal la familia ms representativas fue Asteraceae (28%) (Fig. 1.4). Se reportaron un total de 35 usos teraputicos de las plantas medicinales utilizadas en la zona de estudio los cuales se agruparon en 11 categoras (Fig. 1.5). Entre los usos ms frecuentes se encuentran aquellos para tratar diferentes tipos de dolencias relacionadas con el sistema digestivo (15%), como dolores de estomago, diarrea, lcera, estreimiento, parsitos y pesadez del hgado. En segundo lugar se encuentran los usos analgsicos (14%), para tratar dolores generales en el cuerpo, dolor de cabeza, dolor de
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odo, dolor de muela, dolor de rin o dolores musculares, y el uso como tnico de diferentes rganos (14%) como el corazn, hgado, riones y prstata. Se mencionan varios usos para tratar diferentes dolencias relacionadas con la piel (10%) como quemaduras, heridas, cicatrices o golpes e inflamaciones. Tambin se reportaron usos para tratar dolencias en animales (10%) como diarrea, fiebre, mastitis en las vacas, heridas, para desinflamar o para sacar la asoleadura (cuando un animal se asolea mucho). En menor proporcin se presentan otros usos incluyendo plantas para tratar la amigdalitis, paperas, vena varice, para agilizar el parto, para nios pequeos que no quieren caminar o gatear y para que los nios dejen de lactar.
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Figura 1.5. Usos teraputicos de las plantas medicinales reportadas en exploraciones etnobotnicas en la localidad de Sumapaz (n= 78)
Para la categora maderable la familia con mayor proporcin de reportes de especies tiles fue Melastomataceae (27%), seguida por Asteraceae y Cunoniaceae (13% cada una) (Fig. 1.6). Se encontr que el uso ms comn es para construccin (42%): edificacin de viviendas, vigas, postes y cercas.
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En segundo lugar se encontr el uso como combustible (38%), especficamente para lea y en un menor porcentaje el uso para aserro o para fabricacin de distintos tipos de herramientas agrcolas (21%) (Fig. 1.7). En el anlisis de esta categora se excluyeron tres plantas para las cuales no se present informacin detallada de su forma de uso (Cordia cylindrostachia, Escallonia paniculata y siete cueros).
Figura 1.7. Tipo de uso de plantas maderables en la localidad de Sumapaz (n= 26)
En cuanto a la categora alimenticio la familia ms representativa fue Myrtaceae (21%), seguida de Passifloraceae y Rosaceae (14% cada una) (Fig. 1.8). Los frutos son la parte ms aprovechada de las plantas, los cuales, dependiendo de la especie son consumidos directamente o utilizados para preparar mermeladas.
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En segundo lugar se encuentran las hojas, utilizadas como condimento, en la preparacin de aguas aromticas o agua de panela y en ensaladas. Por ltimo se encuentra el tallo, empleado en slo un caso (Fig. 1.9).
Figura 1.9. Partes de las plantas aprovechadas como alimento en la localidad de Sumapaz (n=18)
En cuanto al manejo dado a las plantas, se encontr que la mayor proporcin son aprovechadas en estado silvestre y solo un bajo porcentaje son cultivadas (Tanacetum parthenium, Matricaria recutita, Calendula officinalis, Vasconcellea pubescens, Ficus carica y ajenjo) o presentan ambos tipos de manejo (Parietaria debilis, y Verbena litoralis) (Fig. 1.10).
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Discusin Teniendo en cuenta la baja representatividad de estudios etnobotnicos en zonas andinas (Arango, 2004) en comparacin con la informacin disponible para zonas bajas tropicales, los resultados de este estudio constituyen un aporte importante a la caracterizacin de la flora til de los Andes colombianos. El nmero de plantas y familias reportadas (96 y 44 respectivamente) es comparable con la cifra presentada por Arango (2004), quien registr 115 especies y 58 familias de plantas tiles en Salento, Quindo, a una altitud de 1.895 m. El valor obtenido en este estudio es un poco menor debido posiblemente al bajo nmero de muestra utilizado, lo que puede determinar que muchas de las especies de plantas tiles de la localidad no hayan sido registradas. El uso ms representativo de las plantas reportadas fue el medicinal, patrn similar al encontrado en otros estudios en zonas rurales andinas (Arango, 2004; Aldunate et al., 1983), para comunidades rurales e indgenas en Suramrica (Coe y Anderson 1999; Rossato et al., 1999) y Norteamrica (Toledo et al., 1995). Esto concuerda adems con lo establecido por la Organizacin Mundial de la Salud (OMS), que estima que alrededor del 80% de la poblacin mundial utiliza frecuentemente las plantas medicinales como forma de atencin primaria en salud (Bermudez et al., 2005). Dicha tendencia se hace an mas fuerte en contextos rurales y en pases en va de desarrollo, donde el uso de hierbas para el tratamiento de enfermedades es muy importante en poblaciones, que en ocasiones por los altos costos, tienen dificultad para acceder a medicamentos convencionales y por lo tanto acuden a sus remedios tradicionales (Tene et al., 2007). Al igual que lo encontrado por Thomas y colaboradores (2009) en los Andes Bolivianos, la familia Asteraceae fue la ms representativa en cuanto a usos medicinales. Esta familia no es solo la dominante en el ecosistema de pramo (Luteyn, 1999) y una de las ms grandes en el reino vegetal (Heinrich et al., 1998), sino que en zonas andinas presenta una gran popularidad en cuanto a usos medicinales, atribuida al gran espectro de componentes bioactivos que contiene (Thomas et al., 2009; Heinrich et al., 1998).
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El tratamiento de molestias o dolencias del sistema digestivo fue el uso ms reportado para las plantas medicinales de la zona, lo que concuerda con diversos estudios en comunidades rurales e indgenas de Bolivia, Ecuador y la Patagonia (Macia et al., 2005; Bourdy et al., 2000; Bourdy et al., 2004; Arrazola et al., 2002; Tene et al., 2007; Estomba et al., 2006). Dentro de las especies maderables son especialmente importantes las plantas utilizadas en construccin, particularmente para las vigas de las casas y postes de las cercas; su uso para lea se encuentra en un segundo lugar. En estudios en comunidades rurales apartadas o comunidades indgenas donde el uso de los recursos del bosque constituye todava una necesidad bsica en otros mbitos adems del medicinal, se encuentra que las plantas maderables constituyen un porcentaje bastante alto de las especies tiles de la zona, en ocasiones similar o mayor al medicinal (Lucena et al. 2007; Rossato et al., 1999). En cuanto a las plantas alimenticias reportadas por la comunidad, se observ una preferencia por las frutales, las cuales son aprovechadas en estado silvestre. La mayora de stas son consumidas ocasionalmente y no constituyen una fuente regular de alimento. En la zona de estudio, la mayor parte de los alimentos son llevados desde el rea urbana de Bogot y complementados con los productos obtenidos de las huertas caseras. El bajo aprovechamiento de especies silvestres comestibles y su falta de uso como complemento a la alimentacin de las personas, evidencia la perdida de tradiciones ancestrales sobre el uso de estas plantas. En general el conocimiento sobre plantas con usos alimenticios en comunidades campesinas de zonas rurales se encuentra en detrimento, debido en parte a que los pobladores no dependen ya de los recursos del bosque para su alimentacin, y las plantas que no son usadas constantemente en las sociedades humanas son propicias a ser olvidadas. En el caso del estudio realizado por Van den Eynden y colaboradores (2003) en el amazonas ecuatoriano sobre plantas alimenticias silvestres, se encontr que el conocimiento de las comunidades mestizas de la zona corresponda en promedio a un 20% del conocimiento de las comunidades indgenas de la misma rea, pues mientras los indgenas colectan y usan diariamente plantas alimenticias del bosque, los mestizos lo hacen en muy raras ocasiones. An as, en la zona de estudio, existen algunas especies de plantas
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frutales como la morita de monte (Rubus megaloccocus), el mortio (Hesperomeles ferruginea) la uva camarona (Macleania rupestris), la uva de ans (Cavendishia bracteata) y el agracejo (Vaccinium floribundum), algunas no reportadas por los informantes entrevistados en este estudio, que son usadas actualmente por la empresa comunitaria campesina Procampsu en la vereda nimas Bajas. Con estas especies se elaboran mermeladas y yogurt, que son comercializados a nivel local y en mercados campesinos de la ciudad de Bogot, aunque lo anterior ocurre solamente en una de las cuatro veredas visitadas, lo cual demuestra en parte el inters de la comunidad por recuperar sus tradiciones y utilizar los recursos autctonos en proyectos productivos que generen inclusin social y una fuente extra de ingresos en la comunidad, ya que en la poca de cosecha algunas familias recolectan frutos de forma silvestre y los venden a la empresa (observaciones personales). En este sentido se recomienda evaluar las especies reportadas en este estudio para determinar su potencial de ser incluidas en proyectos similares al mencionado anteriormente. Estos proyectos no solo ayudan a generar alternativas econmicas para las pobladores de la zona, sino que se constituyen como herramientas para que la comunidad valore los recursos autctonos y as se contribuye a la recuperacin de los saberes tradicionales y a la proteccin de los recursos naturales. Para las dems categoras (artesanal, colorante, forraje, industrial, mgico-religioso) los resultados sugieren que su representatividad como plantas tiles en la zona es baja, siendo las categoras colorante y mgico-religioso con tres reportes cada uno, las ms mencionadas. Este resultado ms que evidenciar el bajo nmero de especies con dichos potenciales de uso en la regin, podra ser un reflejo de la prdida del conocimiento tradicional. Como se menciowwn anteriormente, debido a que en la comunidad de Sumapaz muchas de las plantas no constituyen una necesidad bsica hoy en da, la tendencia es que sean olvidadas; esto se apoya an ms en el hecho de que los reportes en cuestin, provienen de personas mayores a 55 aos quienes recordaban que dichas plantas eran usadas por sus padres o abuelos cuando ellos(as) eran pequeos(as). Por ejemplo, antiguamente algunas especies como el tinto (Cestrum buxifolium), la curtidera (Coriaria ruscifolia) y el cucharo (Galium hypocarpium) eran utilizadas como colorantes o mordientes para teir la lana, debido a la inexistencia o falta de acceso a colorantes y mordientes industriales.
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Hoy en da estos y otros productos son asequibles para las personas, por lo que no es necesario seguir usando las plantas. En este sentido es interesante explorar los potenciales de uso de estas especies, que por su bajo nmero de reportes en la zona pueden estar subvalorndose, pero podran tener importantes potenciales de uso como colorantes naturales. En general se puede observar que la mayor proporcin de plantas reportadas en este estudio son aprovechadas de forma silvestre y solo un bajo porcentaje son cultivadas (Tanacetum parthenium, Matricaria recutita, Vasconcellea pubescens, Ficus carica y ajenjo) o presentan ambos tipos de manejo (Parietaria debilis, y Verbena sp.). Esto evidencia que a pesar de la prdida de conocimiento tradicional que se observa en la comunidad, an se conserva un amplio conocimiento sobre los usos de las plantas nativas. Lo anterior contrasta con lo encontrado en otras reas rurales de la ciudad, como por ejemplo en la vereda Verjn Bajo de la localidad de Chapinero, donde es mayor la proporcin de plantas cultivadas que las silvestres reportadas por los informantes (Gutirrez, 2011). En este sentido se recalca la importancia de la regin del Sumapaz, no solo como centro de diversidad de plantas del pas y del mundo (Hospital de Nazareth, 2007), si no como reservorio del conocimiento tradicional de la ciudad y por lo tanto determina la necesidad de estudiarlo y protegerlo. Se recomienda continuar con las exploraciones etnobotnicas en la zona, con el fin de registrar la mayor cantidad posible de plantas tiles de la regin. No solo porque la degradacin continua de los ecosistemas a la que se ven sometidas las reas rurales del Distrito Capital hace que la disponibilidad de las plantas tiles en su ambiente natural sea cada vez ms limitada (Jardn Botnico, 2008), sino por que el conocimiento tradicional de las comunidades campesinas va en detrimento (Caniago y Siebert, 1998; Benz et al., 2000; Katewa et al., 2004). Esto se hace ms importante si se tiene en cuenta que el conocimiento que las poblaciones rurales poseen es muy valioso, sobretodo en regiones donde las culturas indgenas ya se han extinguido y son los pobladores actuales los que han heredado parte del conocimiento de las culturas antiguas (Nolan & Robbins, 1999). Adicionalmente muchas de las plantas presentes en stas zonas, podran tener importantes potenciales de uso y ser relevantes para el desarrollo de nuevas fuentes de medicamentos, alimento, industria u otros beneficios (Akerele, 1993; Katewa et al., 2004). En este sentido se ratifica la
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importancia de continuar con estudios de este tipo, incluyendo tcnicas de anlisis cuantitativo que permitan determinar entre otros, el valor de uso de las especies reportadas y la importancia relativa de las mismas para los pobladores de la zona. Bibliografa Alcalda Local de Sumapaz. 2009. Sumapaz Positiva: Porque Bogot tambin es Sumapaz. Plan de Desarrollo Local - Econmico, Social y de Obras Pblicas, Sumapaz 2009-2012. Documento para deliberacin pblica. Bogot, Colombia. Akerele, O. 1993. Las plantas medicinales: un tesoro que no debemos desperdiciar. Foro Mundial de la Salud, 14: 390-395. Alexiades, M. N. 1996a. Standard Techniques for Collecting and Preparing Herbarium Specimens. en: M., Alexiades (ed.). Selected Guidelines for Ethnobotanical Research: A Field Manual. 99-126. New York: New York Botanical Garden. Alexiades, M. N. 1996b. Collecting Ethnobotanical Data: An Introduction to Basic Concepts and Techniques. en: M., Alexiades (ed.). Selected Guidelines for Ethnobotanical Research: A Field Manual. 53-94. New York: New York Botanical Garden. Aldunate, C., J. J. Armesto, V. Castro & C. Villagran. 1983. Ethnobotany of prealtiplanic community in the Andes of northern Chile. Economic Botany 37:120-135. Arango, S. C. 2004. Estudios etnobotnicos en los Andes Centrales (Colombia): Distribucin del conocimiento del uso de las plantas segn caractersticas de los informantes. Lyonia, 7(2): 89-104 Araujo-Murakami, A. y F. Zenteno 2006. Bosques de los Andes Orientales de Bolivia y sus especies tiles en M. Moraes R., B. llgaard L. P. Kvist , F. Borchsenius y H. Balslev. Botnica Econmica de los Andes Centrales. 146-161. La Paz: Universidad Mayor de San Andrs. Arrzola, S., Atahuachi, M., Saravia, E. & Lpez, A., 2002. Diversidad florstica medicinal y potencial etnofarmacolgico de
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Anexo 1.1. Listado de plantas tiles de la localidad de Sumapaz. Se presentan los potenciales de uso para cada una de las plantas, las partes utilizadas, su forma de aprovechamiento y una des cripcin de su forma de uso.
Familia
Especie
Nombre Comn
Usos Reportados
Parte Usada
Aprobechamiento
Descripcin de Uso
Cicuta
Me
Para el dolor de cintura u otros dolores, se machuca se envuelve en hojas de arboloco y se pone en el lugar del dolor. Se utiliza en cocimiento para el dolor de estmago, para el hgado o como laxante. Se usa tambin para tranquilizar la diarrea de los nios y los viejos, se prepara un agua aromtica y se toma sin dulce. Las hojas se comen en ensaladas, se sancochan y se pican. Se usa para lea, tambin para el ataque de nervios tomando un agua aromtica, o para el dolor de muela haciendo buches. Se usa para los riones y para la prstata. Se hace un agua aromtica con las hojas y se toma 1 vez al da por varios das. Tambin se toma para la gripa. Se hace una infusin con las hojas para el dolor de estmago. Para el "torsn" de los animales o los humanos. Sirve para "descargar el hgado o para el dolor de estomago, en agua aromtica.
Apiaceae
Apio paramero / Apio de monte / Apio Berros Romero de monte Vira vira X X
Me
A X Me, Ma
H T, H
S S
Me
Baccharis cf. tricuneata Tanacetum parthenium Taraxacum officinale Asteraceae Matricaria recutita Calendula officinalis Espeletia sp.
X X X
Me Me Me Me Me Me
H H
S C
X X X
H, Ra H, Fl Fl
S C C
Se usa para los riones, se cocina la raz o tres hojas y se toma. Se prepara un colirio para los ojos. Se hacen pomadas con la flor. Sirve para quemaduras y dolores. Las hojas y las flores cocinadas sirven para la lcera. Se usa la "trementina que dan los frailejones (la resina que brota del tallo) de la mitad para abajo" para el dolor de muela (se pone un pedazo en la boca) o para la tos (se come la trementina). Tambin se hacan anteriormente espermas con esto. Un informante report que su mam lo utilizaba como medicinal pero no record los usos especficos. Se utiliza para el dolor de cintura. Se calientan las hojas y se ponen en la cintura. Para lea.
Frailejn
Me, I
Chipaca
Me
Cocua
Me, Ma
H, T
36
Familia
Especie
Nombre Comn
Usos Reportados
Parte Usada
Aprobechamiento
Descripcin de Uso
cf. Borago officinalis Greigia stenolepis Viburnum cf. lasiophyllum Sambucus cf. nigra
X X
Me A Me
Fl Fr H
C S S
La flor se usa para la tos. Se comen las "piitas". Se usan las hojas para la diarrea del ganado. Se machacan y se da a tomar el zumo mezclado con agua. Se hacen baos para los fros. Se mezcla con otras plantas y se hacen baos para la gripa. Para la tos, se cocina con la pepa y se toma el agua. Un informante report que su mam lo utilizaba pero no record los usos especficos. Antes se usaba para tinta; se usaba para teir la lana, se mola y se echaba a hervir con la lana. Su fruto sirve para comer, al igual que la parte interna de los tallos jvenes, se pelan y se come la parte del centro. Su madera es muy buena, se utiliza para elaborar herramientas para arar, para hacer el yunte. Se usa para friso" en la cintura o en cualquier lado. Se machuca, se calienta un poco, se pone en el lugar de la molestia y se amarra por un rato. Se utiliza para lea o se usa su madera para hacer cercas. Se usa para la amigdalitis. Se coge la "cscara del tronco" (la corteza), se raspa y se le quita lo "negrito" y se cocina hasta que el agua quede con color (como color agua de panela) y se hacen grgaras. Su madera es muy buena para lea y para aserro. "Su madera es muy buena". Se utiliza para lea. Se usa el tallo para hacer canastos. Se raja y salen cuatro fibras. "Su madera es muy fina". Se utiliza para postes o cercas. Se cocina en agua y se toma para los riones y para la prstata. Se comen sus frutos directamente, tambin se pueden elaborar mermeladas. Se utiliza su madera. Se usa para los animales cuando tienen diarrea o fiebre, se machucan las hojas y se da el zumo 2 o 3 veces.
X X X X X X
Me Me nn I A
Fl Fr
S C S
Vasconcellea pubescens Lepidium bipinnatifidium Coriaria cf. ruscifolia Hedyosmum cf. bonplandianum Clusia sp. Commelina sp.
Fr Fr, T
S S
X X
Ma Me
T H
S S
X X
Ma Me, Ma
T T
S S
Cunoniaceae
X X X X X
Ma O Ma Me
T T T H, T
S S S S
Equisetaceae Ericaceae Escalloniaceae Fabaceae Thibaudia cf. floribunda Escallonia cf. paniculata Otolobium sp.
X Tibar Ruchico X X
A Ma Me
F T H
S S S
37
Familia
Especie
Nombre Comn
Usos Reportados
Parte Usada
Aprobechamiento
Descripcin de Uso
Geraniaceae
X X
Me Me, F
Fr Fr
S S
Lo usaban anteriormente para el dolor de muela. El fruto se machaca y se pone donde duele. El ganado se come la "mazorca". La mazorca tambin se utiliza como medicina, se machuca y se da al ganado para sacarle la asoleadura (cuando se asolean mucho) o para la diarrea. Para desinflamar a los animales, para heridas. Se hierve y se les hacen baos.
X X X X X
Me Me A O
H H H T
S S S S
Se cocina con leche o con agua de panela y se toma, es rico, como un agua aromtica. El tallo se usaba para amarrar terneros o para amarrar los postes de las casa, es muy resistentes y no se totea. Los frutos se comen directamente. Se usa para los clicos y para el estreimiento. Se prepara un zumo con sus hojas. Para los animales cuando les da clicos o churrias se cocina o se hace un zumo y se le da a tomar. Su madera sirve para lea. El fruto se come; han intentado hacer mermeladas. Sirven de "monte" y su madera se usa para aserro y lea. "Su madera es muy buena". Se utiliza para postes. Sirve para lea o para poste.
X X
A Me
Fr H
S S
Malvaceae Miconia cf. ferruginea Bucquetia glutinosa Tibouchina grossa Tuno X A, Ma FR, T S
Melastomataceae
Saltn Colorado - Tuno de parque Siete cueros Brevo Laurel de monte Cucharo Guayabo o Tibar Guayabo
X X
Ma Ma
T T
S S
X X X X X X
Ma Me A, Me Me Ma A, Me, Ma
T H H FR, T T H
S S S S S T
"Su madera es muy buena". Para las paperas, se calienta la hoja y se pone en el cuello, esto alivia. Se utiliza para adobar las carnes. Anteriormente las parteras lo utilizaban para agilizar el parto. -
Ficus carica Morella cf. parvifolia cf. Myrsine sp. Indeterminada Indeterminada
Sus frutos sirven para comer directamente, con sus hojas se prepara un agua que sirve para el dolor de muela, para desinflamar la cara y tambin para la diarrea del ganado. Su madera es muy buena y se utiliza. Las hojas se usan para darle sabor al masato. Se usa para la diarrea del ganado, las hojas se muelen y se cuelan y el zumo se da a tomar para endurecer la diarrea.
Myrcianthes leucoxyla
Arrayn
A, Me
38
Familia
Especie
Nombre Comn
Usos Reportados
Parte Usada
Aprobechamiento
Descripcin de Uso
Myrcianthes cf. rhopaloides Oxalidaceae Papaveraceae Passifloraceae Oxalis medicaginea Bocconia integrifolia Passiflora sp. Passiflora sp. Phytolacca cf. bogotensis Phytolaccaceae
Fr
Se consumen los frutos directamente. Segn una informante podra servir para elaborar mermeladas. Se usa para los riones y para la fiebre. Se usan los "palos grandes" para madera. Se comen los frutos. Se comen los frutos. Para las varices; se toma poquito y se hacen baos para ayudar a desinflamar (con la ramita de la mazorquita madura y con las hojas. Tambin se usa en animales en baos para desinflamar. Puede tomarse para los morados. Para baar las heridas, se hierve la "mazorquita" y eso bota un jabn con el que se lavan las heridas. Antes la usaban para lavar la ropa, por que produce espuma. Para el dolor de cabeza, se tibian las hojas y se ponen en la cabeza. Se usa para las vacas que tienen mastitis, se baa la ubre de las vacas. Para el hgado se prepara un agua con las hojas y se toma. Se usa para el dolor de cintura y para los riones. Se cocina el" gajo". Se cocinan las hojas para baar las heridas. Sirve para lo mismo que la calndula pero es ms efectivo. Se cocinan las hojas para baar las heridas. Sirve para lo mismo que la calndula pero es ms efectivo. Se cocinan los frutos en agua para la tos. Tambin se comen directamente. Se comen los fruticos. Se usa para los riones, se cocina una ramita en agua y se toma. Antes lo utilizaban para ayudar a fijar el color al teir la lana. Los frutos se comen para sacar el calor de los riones. Tambin se comen para el corazn. Para el dolor de odo, se destripan las pepas en el odo.
X X X X X X
Me Ma A A Me, I
Fl, T T Fr Cu Fr
S S S S S
Piper cf. bogotensis Piper sp. Plantago sp. Xachnella cf. mutisi Muehlenbeckia sp. Muehlenbeckia cf. tamnifolia
Cordoncillo Cordoncillo Llantn Chisac Bejuco colorado Bejuco colorado Mora silvestre Fresa Cadillo
X X X X X
Me Me Me Me Me
H H H T H
S S S S S
Me
Rosaceae
X X X X
A, Me A Me I Me Me
Fr Fr Fr, T Fr FR Fr
S S S S S S
Rubiaceae
X X
Solanaceae
Solanum americanum
39
Familia
Especie
Nombre Comn
Usos Reportados
Parte Usada
Aprobechamiento
Descripcin de Uso
Cestrum mutisii
Tinto
Cuando una persona va al cementerio y en la casa ah nios pequeos se dice que se "entecan", les da diarrea. Se les hacen baos con esta planta para curarlos. Se cocinan las hojas en agua para los riones y para el dolor de cintura y se toma; se le puede agregar panela. Tambin para tratar la fiebre o nombre billetes. Para desinflamar la cara del dolor de muela, tambin para el sistema nervioso, con la raz y "la mata". Se usa para la fiebre en agua aromtica, pero debe tomarse en poca cantidad. Antes hacan lavados con esta planta para la fiebre interna. Cuando las gallinas tienen peste, se machuca la planta y se pone el zumo en el agua donde toman. Se utiliza su madera. Para las heridas y cicatrices. En cocimiento para baos. Ahora se sacan pomadas.
Palitaria
Me
C, S
Valerianaceae
Valeriana Verbena
X X
X X
Me Me
H, T, Ra H
S C
Salvio negro rnica Cocua Malvisco Violeta Amarillo Paico Calichana Belladona Mosquero Organo Hierba colorada Chisac/ Guaca Tuno Chubaca Granizo X X
Me Me
T H T Fl Fl T H H
C S S S S S T
X X X X X X X X X X X X X X
Ma Me Me Ma Me Me Me Me A, Me H Me Ma Ma Ma
Se usa para la gripa, haciendo un aromtica con las flores. Para madera. Se usa para purga. Se prepara un agua y se toma una sola vez en ayunas. Se usa para la fiebre. Se prepara un zumo con sus hojas y se toma. Se hace una pomada para las cortadas y los dolores.
Fl H H S Fr
T S S S S
Se usa para la tos; se hace una infusin con las flores y se toma. Para la tos, se hace una infusin con las hojas y se toma, Lo utilizan para pimentar las carnes y el arroz. Se usa para la fiebre y el dolor de riones. Se toma el zumo puro. Para la diarrea, se cocinan sus hojas. Su madera sirve para lea. El fruto se lo comen; han intentado hacer mermeladas.
Aguanozo
Alcaparro X
Ma
Me
T
H
S
S
Sirven de "monte" y su madera para aserro y lea. Se cocinan las hojas y se hacen baos para desinflamar.
40
Familia
Especie
Nombre Comn
Usos Reportados
Parte Usada
Aprobechamiento
Descripcin de Uso
X X X X
Me Ma Me Me
T T H H
S S S S
Cuando un nio pequeo no puede caminar "ligero" se cocina todo el bejuco y se baa el nio. Se usa para madera o para lea. Se usa para madera o para lea. Se usa para la fiebre de los animales, se machuca y se da el zumo en una botella con agua ( 2 o 3 veces). Para la persona que sufra de tos o mal de costado (pulmonar), se machaca y se toma el zumo. "Anteriormente se coga una flor de esta planta y "muestre a ver si mi compadre me est pensando, si se cerraba la flor quera decir que lo estaba pensando".
X X
Me O
Ra
X X
A Me
H Fl
S S
Se tomaba en las maanas en lugar del tinto. Se usa para los nios que no quieren dejar la teta. Es muy amarga, se unta en el pezn.
41
42
43
Figura 2.1. Vista general del individuo de Bomarea sp. a. rganos subterrneos (rizoma, races y races tuberiformes). b. Tallo areo con hojas en disposicin helicoidal. c. Inflorescencia.
Tallo El tallo areo presentaba un total de 113 entrenudos; stos varan de acuerdo con su posicin, desde la base hacia la parte apical. En
44
los cinco primeros entrenudos se presenta una disminucin gradual de la longitud, despus de esto se observa un incremento hasta el entrenudo 18, seguido de una disminucin hasta el entrenudo 28, despus de lo cual se observa una leve tendencia a disminuir con algunas oscilaciones. Cerca del pice se presentan los entrenudos
Hojas La longitud de las hojas se incrementa gradualmente hasta la hoja nmero 13, despus de sta, la variable presenta pequeas oscilaciones, tendiendo a estabilizarse despus de la hoja nmero 23. El ancho tiende a incrementarse hasta la hoja 23, despus de la cual se observa una leve tendencia a disminuir. (Fig. 2.3a)
45
La tendencia de las hojas a ser ms largas y menos gruesas a medida que se alejan del pice, puede estar relacionada con la efectividad en la captacin de luz, pues las hojas ms cercanas a la base recibiran niveles ms bajos de radiacin fotosintticamente. En cuanto a sus caractersticas externas, las hojas son glabras; en la superficie abaxial presenta estomas de gran tamao, los cuales pueden ser observados fcilmente con un estereoscopio (Fig. 2.4).
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Rizoma El rizoma presentaba una longitud indeterminada, slo se colect un segmento de aproximadamente 20 cm de largo. El dimetro del rizoma vara entre 1-1.3 cm. La produccin de races tuberiformes es muy alta, en el segmento de rizoma colectado se presentaron 25 de estas estructuras (Fig. 2.5).
Figura 2.5. a. Rizoma con races, algunas de las cuales forman una estructura tuberiforme. b. Races tuberiformes separadas
Races tuberiformes Las races tuberiformes son rganos de almacenamiento, stos son consumidos gradualmente por la planta. La produccin de estas estructuras puede estar relacionada con el hecho de que los tallos areos son los ejes de las inflorescencias, por lo cual tienen un tiempo de vida muy corto; por esta razn se plantea la hiptesis de que esta especie, as como muchas otras dentro de la familia Alstroemeriaceae, presenta races tuberiformes como mtodo de almacenamiento de las sustancias producto de la fotosntesis, que de otra forma se perderan al morir el eje de la inflorescencia despus de la maduracin de los frutos y la liberacin de las semillas (Fig. 2.6).
47
El consumo de las sustancias de reserva almacenadas en estas estructuras, principalmente almidn (Fig. 2.7), debe incrementarse en el momento en que se inicia la produccin de nuevos tallos areos, principalmente durante la produccin de los primeros entrenudos, los cuales presentan una longitud gradualmente mayor cuando es escaso el nmero de hojas totalmente expandidas.
Aunque en menor proporcin que las races, el rizoma tambin almacena almidn. (Fig. 2.8)
48
Yema, raz y sitios para el almacenamiento de almidn (sectores teidos con lugol). b. Grnulos de almidn y haces vasculares
2. Rubus acanthophyllos
Esta especie presenta hbito herbceo y en condiciones naturales forma pequeas poblaciones en bosques altoandinos; no obstante, tambin predominan las plantas de gran tamao con tallos subterrneos. A lo largo del hbito, los individuos de la especie presentan indumento compuesto por tricomas simples, blanquecinos o glandulares y rojizos. (Fig. 2.9)
Figura 2.9. Caractersticas del envs de las hojas de Rubus acanthophyllos. a. indumento y espinas sobre las nervaduras secundarias. b. Presencia de tricomas glandulares
49
Figura 2.10.
3. Cavendishia bracteata
Esta especie presenta porte arbustivo, se encuentra principalmente en espacios abiertos con alta exposicin a la radiacin solar directa durante algunas horas del da. Las hojas jvenes presentan coloracin rojiza debido a la presencia de pigmentos antocianos (Fig. 2.11), los cuales pueden cumplir una funcin de proteccin de las hojas jvenes en la zona apical.
Figura 2.11.
50
Otras estructuras relacionadas con la proteccin de la lmina foliar son los tricomas glandulares; stos se presentan con mayor densidad en las hojas jvenes. (Fig. 2.12, 2.13)
a
Figura 2.12. Tricomas glandulares en la haz de una hoja de C.
bracteata. a. Observacin al estereoscopio. b. Observacin al microscopio ptico 32x
a
Figura 2.13. Envs de la hoja en C. bracteata. a. Observacin en el estereoscopio. b. Observacin en el microscopio ptico con un aumento de 32x
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Bibliografa Garbiso, C. & Estrada, J. 2001. Sinopsis taxonmica de Bomarea Mirb. subgnero Bomarea (Alstroemeriaceae) para Venezuela. Plantula 3(1): 11-39. Lancheros, H. 2009. Anlisis de la relacin de las caractersticas fsicas y anatmicas con la tasa de transpiracin y la tasa fotosinttica de Cavendishia bracteata, Fuchsia boliviana y Rubus megalococcus. Informe tcnico indito. Bogot D.C.: Jardn Botnico Jos Celestino Mutis Subdireccin Cientfica.
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Fotosntesis
El proceso de fotosntesis sucede al interior de los cloroplastos; se divide en reacciones de luz y oscuridad. En las reacciones de luz, el efecto de la radiacin incidente sobre los pigmentos antena y los centros de reaccin de los fotosistemas crea un gradiente de electrones que es aprovechado en la produccin de molculas portadoras de energa (NADPH y ATP). El flujo de electrones se produce a travs de los complejos moleculares denominados fotosistema I y fotosistema II, as como a travs de las molculas denominadas citocromos. Los fotosistemas estn ubicados en los cloroplastos sobre la membrana tilacoide, en las lminas libres o estroma tilacoide y las lminas agrupadas o grana tilacoide; en las primeras se encuentran las molculas del fotosistema I, mientras que en las segundas funciona el fotosistema II (Lttge, 1997).
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Bjorkman y Demmig-Adams (1995), con base en numerosas publicaciones, muestran que las plantas presentan una gama de respuestas temporales y espaciales frente a la variacin de la intensidad de la luz o densidad de flujo fotnico (DFF). Relaciones entre los procesos de fotosntesis y transpiracin El flujo de agua hacia el exterior de las lminas foliares y la entrada de CO2 en stas son dos procesos relacionados con la apertura estomtica, debido a esto, existen patrones de respuesta similares en los procesos de transpiracin y fotosntesis. Diversos trabajos han evaluado el comportamiento de estos procesos frente a diferentes factores como variacin de la intensidad de luz o estado de desarrollo de las hojas. En el trabajo de Miyashita et al. (2005), se presenta un paralelismo entre la transpiracin y la fotosntesis en plantas de Phaseolus vulgaris con riego constante y con suspensin de ste; por otro lado, Souza et al. (2004) mostraron un resultado similar en Vigna ungiculata, trabajando con plantas expuestas a estrs hdrico y sin ste. Cayn (2001) encontr una relacin cuadrtica entre la edad de la hoja y las tasas de fotosntesis y transpiracin. Pachevsky (1997) muestra una relacin directa de la apertura estomtica con las tasas de fotosntesis y transpiracin en hojas de tabaco; al comparar hojas de plantas transgnicas que presentan modificaciones en la anatoma, con hojas silvestres, se observa que hay mayor diferencia en la tasa de transpiracin en comparacin con la tasa fotosinttica, debido a que la transpiracin es regulada directamente por la apertura estomtica y la anatoma foliar. En el trabajo de Jones (1997) se presentan las grficas de variacin de la tasa fotosinttica y la transpiracin con cambios en la intensidad de luz, mostrando un patrn de respuesta similar entre las dos variables, con cambios ms bruscos en la respuesta de la fotosntesis con respecto a la respuesta de la transpiracin.
Metodologa
El seguimiento se realiz sobre cuatro plantas, dos creciendo en condiciones de luz directa y dos en condiciones de sombra (cubiertas por plantas de mayor porte); en cada planta se utilizaron cuatro hojas, dos hojas jvenes (de color rojo) y dos completamente desarrolladas (color verde).
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En cada hoja se realizaron 10 mediciones durante el da: Los datos se analizaron comparando las curvas de respuesta de las variables ETR (tasa de transporte de electrones), rendimiento fotosinttico, conductancia y transpiracin. La comparacin se realiz por tipo de hoja, condicin de luz y hora del da. En esta especie se evalu la respuesta del rendimiento fotosinttico, la tasa de transporte de electrones y la conductancia estomtica en hojas jvenes y hojas desarrolladas. 1. Toma de datos Los datos de fotosntesis (tasa aparente de transporte de electrones y rendimiento fotosinttico del fotosistema II) se tomaron con el fluormetro PAM-2000, utilizando el programa DA-2000. Los datos de conductancia y tasa de transpiracin se tomaron con el pormetro Li-1600. Las variables de respuesta fueron: Tasa de transpiracin (mmol m-s-), conductancia (mmol m-s-), tasa de transporte de electrones o ETR (mol e-m-s-) y rendimiento fotosinttico del fotosistema II. Se registraron dos variables ambientales: la temperatura en grados Celsius y la intensidad de la radiacin fotosintticamente activa (mol m-s-). 2. Estimacin de fijacin de CO2 Se estim la fijacin de CO2, dividiendo el valor de ETR en 4. El valor obtenido es slo una aproximacin, pues el flujo de electrones puede estar relacionado con otras rutas como el flujo de electrones en la fotorespiracin o la reduccin de nitrito (Heinz Walz GmbH 1993). A partir del valor estimado se obtuvo el promedio de fijacin de CO2 por unidad de rea foliar y tiempo (moles m-s-). 3. Estimacin de la transpiracin promedio diaria A partir de las curvas de transpiracin, se estim el total de agua transpirada durante el intervalo en que se desarrollaron las
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mediciones y se dividi por el tiempo en segundos, para obtener la tasa de transpiracin promedio por hoja. 4. Anlisis de datos La variacin diaria de rendimiento fotosinttico, la ETR, la conductancia y la transpiracin, se compararon utilizando grficos xy, tomando como x la hora del da y como y la variable analizada; para la comparacin tambin se usaron las curvas diarias de radiacin fotosintticamente activa y de humedad relativa. Los datos de fijacin de CO2, y transpiracin promedio diaria se compararon con el modelo de anlisis de varianza bifactorial, utilizando como variables independientes el tipo de hoja (roja o verde) y la condicin de luz (luz directa o sombra).
Resultados
1. Condiciones ambientales La intensidad de radiacin fotosintticamente activa incidente sobre las hojas de las plantas que crecen bajo condiciones de luz se increment gradualmente desde 10 hasta 388 m m-s-, entre las 6:15 am y las 11:00 am, entre las 11:00 am y las 11:30 am, se presenta un descenso rpido hasta llegar a 119 m m-s-. En la ltima medicin realizada a las 6:57 pm. se observa un descenso gradual hasta llegar a 4 m m-s- (Fig. 3.1).
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En las plantas de sombra la radiacin present valores mucho ms bajos, alcanzando un mximo de 77 m m-s- cerca de las 11:00 am. En plantas expuestas a luz directa, la temperatura de las hojas present valores entre 12.2-19.3C. Las hojas de las plantas bajo condiciones de sombra presentaron temperaturas entre 11.3-17.1C. En los dos casos, el valor ms bajo se obtuvo en las primeras horas de la maana y el ms alto entre las 10:40 am y la 11:00 am. (Fig. 3.2)
La humedad relativa vari entre 75.2 y 86.8%. Se presenta un descenso gradual hasta las 10:40 am (Fig. 3.3), que coincide con el perodo de radiacin y temperatura con valores ms altos.
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2. Rendimiento fotosinttico y tasa de transporte de electrones Se observ que el rendimiento fotosinttico es ms alto en las hojas totalmente desarrolladas (hojas verdes), en comparacin con las hojas jvenes (hojas rojas). Los valores ms bajos se presentan en las horas en que la radiacin es ms alta; tambin se pueden observar valores ms altos bajo condiciones de sombra (en la mayora de las mediciones), tanto para hojas rojas como para hojas verdes. Es ms contrastante la diferencia en rendimiento entre luz y sombra en las hojas rojas. (Fig. 3.4)
La tasa aparente de transporte de electrones (ETR) presenta paralelismo con la intensidad de la radiacin fotosintticamente activa (Fig. 2.5, 2.6), pues entre mayor es la incidencia de fotones, mayor es el nmero de molculas de clorofila excitadas. Las hojas de las plantas que crecen bajo luz directa (Fig. 3.5) presentan los valores ms altos de ETR, alcanzando 10.5 mol m-s- en hojas rojas y 45.5 mol m-s- en hojas verdes; las respuesta de las hojas verdes muestra mayor paralelismo con la variacin de la radiacin incidente.
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radiacin fotosintticamente activa (PAR) a lo largo del da en hojas rojas (superior) y rojas (inferior) de plantas de Cavendishia bracteata que crecen bajo condiciones de luz directa
Las hojas de las plantas que crecen bajo sombra (Fig. 3.6) presentan valores menores de ETR en comparacin con las de luz, alcanzando 6.88 mol m-s- en hojas rojas y 23.73 mol m-s- en hojas verdes; las hojas verdes presentan un alto paralelismo con la variacin de la radiacin incidente.
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acin fotosintticamente activa a lo largo del da en hojas rojas (superior) y verdes (inferior) de plantas de Cavendishia bracteata que crecen bajo condiciones de sombra
3. Fijacin de CO2 estimada Se observa que las hojas verdes presentan una mayor tasa promedio de fijacin de CO2 y de igual forma, se presentan valores ms altos bajo condiciones de luz directa (Fig. 3.7).
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Figura 3.7. Tasa promedio de fijacin de CO2 en Cavendishia bracteata por tipo de hoja y condiciones de luz
Al comparar los resultados obtenidos mediante un modelo de anlisis de varianza bifactorial (Tabla 3.1) y utilizando como variables independientes el tipo de hoja (roja o verde) y la condicin de luz (luz directa o sombra), se encontr que los dos factores presentan efectos significativos sobre la variable respuesta (tasa promedio de fijacin de CO2), no se encontr efecto significativo de la interaccin.
Tabla 3.1. Anlisis de varianza para la fijacin promedio de CO2, utilizando como variables independientes la condicin de luz y el color de la hoja
Origen de variacin Suma de cuadrados Cuadrado medio
gl
Valor P
F crtico
1 1 1 12 15
De acuerdo con lo anterior, el valor estimado de fijacin promedio de CO2 es significativamente ms alto en las hojas de las plantas que crecen bajo condiciones de luz directa en comparacin con las hojas de las plantas de sombra; de igual forma, el valor es significativamente mayor en las hojas verdes en comparacin con las hojas rojas.
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4. Conductancia y transpiracin La variable conductancia estomtica presenta un patrn de respuesta que vara entre condiciones de luz directa y de sombra (Fig. 2.6, 2.7). En condiciones de luz directa (Fig. 3.8), la conductancia responde de forma inversa a la intensidad de la radiacin fotosintticamente activa, tanto en hojas rojas, como en hojas verdes; despus de las 9:30 am y hasta las 11:00 am, se presenta un incremento que est directamente relacionado con el incremento de radiacin incidente; en horas de la tarde, contina incrementndose la conductancia, an cuando la radiacin disminuye gradualmente, este incremento llega hasta la 1:35 pm, hora despus de la cual se presenta una disminucin gradual, relacionada con la disminucin de radiacin incidente; finalmente, antes del anochecer se presenta un nuevo incremento. La respuesta de la conductancia bajo condiciones de luz directa parece estar relacionada principalmente con la humedad relativa (Fig. 3.3) y de forma indirecta con la radiacin fotosintticamente activa.
sintticamente activa a lo largo del da en plantas de Cavendishia bracteata que crecen bajo condiciones de luz, en hojas rojas (arriba) y verdes (abajo)
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Bajo condiciones de sombra (Fig. 3.9), el comportamiento de la variable conductancia estomtica parece ser ms predecible; en horas de la maana vara de forma proporcional a la radiacin fotosintticamente activa y en las horas de la tarde se incrementa a medida que la radiacin incidente disminuye, es decir presenta una respuesta en las hojas rojas principalmente. Tanto en condiciones de luz como de sombra, la conductancia es ms alta en hojas verdes en comparacin con las hojas rojas.
Figura 3.9. Variacin de la conductancia estomtica y la radiacin
fotosintticamente activa a lo largo del da, en plantas de C. bracteata que crecen bajo condiciones de sombra, en hojas rojas (superior) y verdes (inferior).
Figura 3.9. Variacin de la conductancia estomtica y la radiacin fotosintticamente activa a lo largo del da, en plantas de Cavendishia bracteata que crecen bajo condiciones de sombra, en hojas rojas (superior) y verdes (inferior)
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La variable transpiracin presenta el mismo patrn de respuesta que la conductancia; se puede observar la diferencia de patrones entre las hojas de las plantas que crecen bajo luz directa y las hojas de las plantas de sombra; tambin se puede observar que dadas las condiciones, las hojas verdes presentan valores ms altos de transpiracin que las hojas rojas (Fig. 3.10).
Figura 3.10. Variacin de la transpiracin a lo largo del da en hojas rojas y verdes de plantas de Cavendishia bracteata que crecen bajo condiciones de luz y de sombra
En general, las hojas verdes presentan valores ms altos de transpiracin; adems, no se observa una diferencia contrastante entre condiciones de luz y sombra, lo cual indica que aunque el patrn de respuesta entre luz directa y sombra es diferente, el promedio diario de transpiracin es similar. 5. Promedio diario de la tasa de transpiracin El promedio diario de tasa de transpiracin presenta valores ms altos en las hojas verdes, tanto en las hojas que crecen bajo condiciones de luz directa como en las que crecen bajo condiciones de sombra (Fig. 3.11).
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Tipo de hoja
Figura 3.11. Tasa promedio de transpiracin diaria en hojas de
El anlisis de varianza bifactorial (tabla 3.2) indica que existe un efecto significativo del color de las hojas sobre la transpiracin, mientras la condicin de luz y la interaccin de los dos factores no presenta efecto significativo sobre esta.
Tabla 3.2. Anlisis de varianza para la transpiracin promedio, utilizando como variables independientes la condicin de luz y el color de la hoja
Origen de variacin Condicin de luz Color de las hojas Interaccin Error Total Suma de cuadrados
23,8941 336,251 0,01702 183,98 544,142
gl 1 1 1 12 15
Cuadrados medios
23,8941 336,251 0,01702 15,3317
F
1,55848 21,9318 0,00111
Valor P
0,23570 0,00053 0,97397
F Crtico
4,74723 4,74723 4,74723
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De acuerdo con lo anterior, la tasa de transpiracin en las hojas ms desarrolladas (hojas verdes) es significativamente superior a la presentada por las hojas jvenes (hojas rojas).
Discusin
El mayor grado de paralelismo entre ETR y la radiacin fotosintticamente observado en las hojas verdes en comparacin con las rojas, puede explicarse por un aparato fotosinttico ms desarrollado, con mayor concentracin de clorofila, que permite a la hoja responder con mayor eficiencia a las variaciones en la intensidad de la radiacin incidente. De igual forma, el mayor paralelismo observado en las hojas de sombra en comparacin con las hojas de luz, es debido a que la vegetacin protectora impide que se produzcan incrementos drsticos en la radiacin incidente, y de esta forma, las hojas responden directamente a los cambios graduales en la luz incidente.
Bibliografa
Bjrkman, O. & B. Demming-Adams. 1995. Regulation of Photosintetic Light Energy Capture, Conversion, and Dissipation in Leaves. En E. Schulze & M. Candwell (eds.). Ecophysiology of Photosyntesis. Berlin: Springer. Cayn, G. 2001. The Evolution of Photosynthesis, Transpiration and Chlorophyll During the Development of Leaves of Plantain (Musa AAB Simmonds). Infomusa 10(1): 12-15 Heinz Walz GmbH. 1993. Portable Fluorometer PAM-2000 and Data Acquisition Software DA-2000. En: Handbook of Operation with Examples of Practical Applications. Effeltrich: Walz. Jones, H. 1997. Stomatal control of photosynthesis and transpiration. Journal of Experimental Botany. 49: 387398 Luteyn, J & Pedraza-Pealosa, P . 2007. Neotropical Blue Berries, the Plant Family Ericaceae. http://www.nybg.org/bsci/res/lut2/ Lttge, U. 1997. Physiological Ecology of Tropical Plants. Berln: Springer Verlag.
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Miyashita, K., Tanakamaru, S., Maitani, T., Kimura, K. 2005. Recovery Responses of Photosynthesis, Transpiration, and Stomatal conductance in Kidney Bean Following Drought Stress. Environmental and Experimental Botany 53: 205214 Pachevsky, L., Acock, B., Benning, S., Willmitzer, L & Fisahn, J. 1997. Estimation of The Anatomical, Stomatal and Biochemical Components of Differences in Photosynthesis and Transpiration of Wild-Type and Transgenic (Expressing Yeast Derived Invertase Targeted to the Vacuole) Tobacco Leaves. Plant Cell and Environment 20: 1070-1078. Souza, R., Machadoa, E., Silva, J., Laga A., Silveira, J. 2004. Photosynthetic Gas Exchange, Chlorophyll Fluorescence and Some Associated Metabolic Changes in Cowpea (Vigna Unguiculata) During Water Stress and Recovery. Environmental and Experimental Botany 51: 4556
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Para la medicin de las condiciones ambientales se utiliz una estacin climtica automtica con una unidad de procesamiento SUTRON 8210 (Fig. 4.1). Se tomaron datos de humedad relativa, temperatura del aire, temperatura del suelo, radiacin fotosintticamente activa, intensidad de luz, velocidad del viento y direccin del viento.
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Figura 4.1. Instrumentos utilizados para la medicin de las condiciones ambientales. a. Vista general de la estacin climtica. b. Sensor de humedad y temperatura AT/RH SHIELD 5600-0021. c. Anemmetro WE550 y veleta WE70. d. Sensor de radiacin LI-190SA. e. Sensor fotomtrico LI-210SA. f. y g. Sensores de temperatura del suelo 2. Medicin de fotosntesis y conductancia estomtica
Para medir la transpiracin se emple el pormetro LI- 1600 y para la estimacin de la fotosntesis se utiliz el fluormetro PAM-2000 (Fig. 4.2)
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Con el fluormetro porttil PAM-2000, se realizaron las medidas de fluorescencia, ubicando la fibra ptica en un ngulo de 60 con la hoja. Se tomaron los datos de fluorescencia mnima de muestra previamente iluminada (Fo), fluorescencia mxima de muestra previamente iluminada (Fm) y radiacin fotosintticamente activa (PAR), a partir de estos datos se obtienen los valores de rendimiento fotosinttico y tasa aparente de transporte de electrones. En esta especie se evalu la respuesta del rendimiento fotosinttico, la tasa de transporte de electrones y la conductancia estomtica en hojas de tallos rastreros (hojas bajas) y en hojas de tallos erectos (hojas altas). Resultados
1. Condiciones ambientales
A continuacin se presenta la variacin de la radiacin fotosintticamente activa, la temperatura del aire, la temperatura del suelo y la humedad relativa, durante el intervalo de tiempo en que se realizaron las mediciones (Fig. 4.3).
Figura 4.3. Variacin de la radiacin fotosintticamente activa durante el intervalo de tiempo en que se desarrollaron las mediciones
La radiacin fotosintticamente activa present valores entre 200 y 1549 mol m- s-, en las horas de la maana; a la 1:00 pm alcanz un valor cercano a 1600 mol m- s-, despus de lo cual se inicia una disminucin gradual, llegando a 12 mol m- s- a las 6:00 pm. La temperatura del aire present valores entre 13 y 29.9C., el valor ms alto se obtuvo a la 1:22 pm. La temperatura del suelo present un incremento gradual, registrando el valor ms alto (19.7C) a las 3:10 pm. (Fig. 4.4)
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La humedad relativa vari entre 37 y 76%; el valor ms alto se obtuvo a las 6:00 pm y el ms bajo a la 1:24 pm (Fig. 4.5).
Figura 4.5. Variacin de la humedad relativa durante el intervalo de tiempo en que se desarrollaron las mediciones 2. Respuesta fotosinttica y conductancia estomtica
Los valores de rendimiento fotosinttico y tasa de transporte de electrones fueron ms altos en las hojas presentes en el tallo erecto (hojas altas) con respecto a las hojas de los tallos rastreros (hojas altas). (Fig. 4.6 y 4.7) No se observa una relacin clara entre la tasa de transporte de electrones en las hojas altas (Fig. 4.7) y la radiacin incidente (Fig. 4.8), mientras que en las hojas bajas se presenta un comportamiento similar en las dos variables.
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En la variable conductancia estomtica se observan nuevamente valores ms altos en las hojas altas (Fig. 4.9), a excepcin de los observados antes del anochecer.
Figura 4.9. Variacin de la conductancia estomtica en hojas altas y bajas de Bomarea multiflora a lo largo del da
La conductancia estomtica (Fig. 4.9) no presenta una relacin directa con la temperatura de las hojas (Fig. 4.10), ni con la radiacin incidente (Fig. 4.11), sin embargo, se observa un comportamiento similar de la conductancia en las hojas bajas con la diferencia de la temperatura de las hojas y el aire.
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Figura 4.11. Variacin de la diferencia de temperatura entre las hojas y el aire en Bomarea multiflora a lo largo del da, en hojas ubicadas en la parte inferior (bajas) y en la parte superior (altas)
En general las hojas bajas muestran una mayor relacin de las variables rendimiento fotosinttico, ETR y conductancia con variables externas como la temperatura y la radiacin incidente, lo cual puede estar relacionado con condiciones de humedad ms variables en inmediaciones de las hojas de la parte alta, en comparacin con las hojas que se encuentran cerca del suelo.
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Captulo 5 Comparacin de la respuesta de la conductancia estomtica y el rendimiento fotosinttico de Bomarea multiflora, Cavendishia bracteata y Rubus acanthophyllos en relacin con las variables luz y temperatura
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Comparacin de la respuesta de la conductancia estomtica y el rendimiento fotosinttico de Bomarea multiflora, Cavendishia bracteata y Rubus acanthophyllos en relacin con las variables luz y temperatura
Hctor Lancheros Introduccin En los trabajos anteriores se evalu el comportamiento de las curvas diarias de rendimiento fotosinttico, tasa de transporte de electrones y conductancia estomtica en comparacin con factores externos como la radiacin fotosintticamente activa incidente y la temperatura de las hojas; en el presente trabajo se evalu la relacin de estos factores utilizando un grfico xy y un anlisis de regresin. Metodologa A partir de los valores de rendimiento fotosinttico, tasa de transporte de electrones y conductancia estomtica, obtenidos con el fluormetro PAM-2000 y el pormetro Li-1600 (Lancheros 2011a, 2011b) en Bomarea multiflora, Cavendishia bracteata y Rubus acanthophyllos se realiz el anlisis de regresin utilizando la hoja de clculo Openoffice Calc. Se analiz la dispersin de los datos y el grado de ajuste utilizando el ndice R. Resultados
1. Bomarea multiflora
En Bomarea multiflora se observa una relacin inversa de la conductancia estomtica con la radiacin fotosintticamente activa (PAR) y la temperatura (Fig. 5.1); no obstante, las curvas presentan alta dispersin, la cual puede ser causada por otros factores no considerados como la humedad relativa y la velocidad del viento. El rendimiento fotosinttico tambin presenta una relacin inversa con las variables PAR y temperatura (Fig. 5.2), en este caso, la dispersin es menor, pues se trata de una variable que, por definicin, est influenciada por la intensidad de la luz incidente y,
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a su vez, la temperatura est relacionada con la intensidad de luz y afecta el funcionamiento de las enzimas. Figura 5.1. Relacin de la conductancia estomtica en hojas de Bomarea multiflora con la radiacin fotosintticamente activa (PAR) y la temperatura. Otro factor que podra influir es el estrs hdrico de la planta, el cual se relacionara con la temperatura, la hora del da, el potencial hdrico del suelo y la humedad relativa en la atmsfera circundante.
2. Cavendishia bracteata
En las hojas jvenes (hojas de color rojo) de Cavendishia bracteata se presenta una relacin escasa de la conductancia estomtica con la radiacin fotosintticamente activa y la temperatura (Fig. 5.3, izquierda), los modelos de regresin potencial indican una
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relacin directa, sin embargo el valor R en los dos casos es muy bajo, indicando mucha dispersin con alrededor de las lneas de tendencia, lo cual indica que otros factores, como el potencial hdrico del suelo, la humedad relativa y la velocidad del viento, pueden tener mayor relacin con la respuesta de esta variable. En las hojas totalmente desarrolladas (hojas color verde) la conductancia estomtica no presenta una relacin clara con la radiacin fotosintticamente activa y la temperatura (Fig. 5.3, derecha), lo cual indica que son otros factores del medio los que influyen directamente sobre esta variable.
Cavendishia bracteata con la radiacin fotosintticamente activa (PAR) y la temperatura. A la izquierda se muestra la relacin en hojas jvenes (color rojo) y a la derecha se observa en hojas completamente desarrolladas (color verde)
El rendimiento fotosinttico presenta una relacin inversa con la radiacin fotosintticamente activa y la temperatura, tanto en hojas
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jvenes, como en hojas totalmente desarrolladas. Los modelos que mejor se ajustaron fueron el logartmico, para la relacin con PAR y el lineal, para la relacin con la temperatura. (Fig. 5.4)
Figura 5.4. Relacin del rendimiento fotosinttico en hojas de Cavendishia bracteata con la radiacin fotosintticamente activa (PAR) y la temperatura. A la izquierda se muestra la relacin en hojas jvenes (color rojo) y a la derecha se observa en hojas completamente desarrolladas (color verde)
Los valores R presentaron valores similares entre hojas rojas y verdes, para las dos variables independientes evaluadas; no obstante, los valores de las constantes variaron entre los dos tipos de hojas.
3. Rubus acanthophyllos
En Rubus acanthophyllos se observa una relacin directa del rendimiento fotosinttico con la radiacin fotosintticamente activa, en el intervalo analizado se observa que no hay relacin de esta variable con la temperatura. (Fig. 5.5)
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Esta especie crece bajo condiciones de luz tenue y a diferencia de las otras dos especies analizadas, el rendimiento fotosinttico se incrementa en funcin de la luz incidente, pues el valor ms alto dentro de radiacin fotosintticamente activa fue de 10mol m-s-. Bibliografa Lancheros, H. O. 2011a. Curva diaria de transpiracin y fotosntesis de Cavendishia bracteata en el corregimiento de Nazareth de la localidad de Sumapaz. En: Estudios sobre especies promisorias en la localidad de Sumapaz. Bogot: Jardn Botnico Jos Celestino Mutis. Lancheros, H. O. 2011b. Anlisis de las curvas diarias de transpiracin y fotosntesis de Bomarea sp.. En: Caracterizacin del potencial de uso de la flora en un rea de la localidad de Sumapaz. Bogot: Jardn Botnico Jos Celestino Mutis.
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Tipo de micorriza Caracterstica
Hongo septado Colonizacin intracelular Manto Red de Hartig Aclorfila Grupos de hongos Grupos de plantas
Micorriza arbuscular
+ - (+) Glomeromycota
Ectomicorriza
+ + + Basidiomycota/ Ascomycota (Glomeromycota) Gymnospermae Angiospermae
Ectendomicorriza
+ + +o+ Basidiomycota/As comycota Gymnospermae Angiospermae
Micorriza arbutoide
Micorriza monotropoide
Micorriza ericoide
Micorriza orquidioide
+ + +o+ Basidiomycota
+ + + + +
Basidiomycota
+ + Ascomycota
+ + +
Basidiomycota
Ericales
Monotropoideae
Ericales Bryophyla
Orchidales
A continuacin se describen las categoras de micorrizas reportadas en los grupos de plantas trabajados.
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Micorriza arbuscular Las micorrizas arbusculares, originalmente denomindas vesculoarbusculares, son asociaciones mutualistas entre la mayora de plantas vasculares y un pequeo grupo de hongos clasificados en el nuevo phylum Glomeromycota. Este tipo de asociacin se caracteriza por la presencia de hifas intra-radicales (intracelulares y extracelulares), arbsculos (hifas finamente ramificadas involucradas en el intercambio de nutrientes), micelio extra-radical (hifas que conectan a la raz con el suelo) y esporas formadas en el micelio extra-radical. Algunas especies de hongos forman estructuras intraradicales denominadas vesculas, las cuales son hifas engrosadas que pueden servir para el almacenamiento de lpidos. Los hongos de los gneros Gigaspora y Scutellospora producen vesculas auxiliares (llamadas cuerpos o clulas auxiliares) en el micelio extraradical (Peterson et al., 2004). La presencia de micorrizas arbusculares contribuye a la asimilacin de nutrientes minerales, principalmente fsforo, el cual es transportado desde el suelo hasta la raz a travs del micelio extraradical. Se ha observado que otros minerales como el zinc y el cobre se incrementan en plantas con este tipo de asociacin (Smith & Read, 2008). Existe discusin sobre la influencia de las micorrizas arbusculares en la asimilacin de nitrgeno, tanto en la asimilacin de formas de nitrgeno no disponible para la planta como en la interaccin de organismos fijadores de N2. Ectendomicorriza Las ectendomicorrizas son asociaciones formadas entre un limitado nmero de hongos ascomicetes y los gneros de conferas Pinus y Larix (Peterson et al., 2004). stas poseen un recubrimiento de hifas sobre la raz denominado manto, y una estructura de intercambio de nutrientes alrededor de las clulas de la epidermis y el crtex denominada red de Hartig. Setaro et al. (2006) describieron un tipo de micorriza encontrado en diferentes especies de ericceas, al cual denominaron micorriza cavendishioide, sin embargo, Smith & Read (2008) concluyeron que las caractersticas presentadas para describir la nueva categora no eran suficientes y consideraron que se trataba de ectendomicorrizas.
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Micorriza ericoide Este tipo de micorrizas se encuentran principalmente en un nmero restringido de familias del orden Ericales y la participacin de un pequeo grupo de hongos ascomicetos como micobiontes en la asociacin. Las plantas que presentan esta asociacin se caracterizan por presentar pelos radicales con una estructura anatmica muy simple; cada pelo radical consiste en un cilindro central rudimentario y una o dos capas de clulas corticales. Esta asociacin involucra la colonizacin de las clulas epidrmicas seguida por la formacin de un complejo hifal ramificado en cada clula colonizada (Peterson et al., 2004). Existen numerosos hongos capaces de formar micorrizas ericoides; el ms conocido es Rhizoscyphus ericae (Smith & Read, 2008). Este tipo de micorriza se ha observado tambin en un grupo de brifitos, los hongos aislados de las races de estas plantas han formado micorrizas ericoides cuando se inocularon en plntulas de algunas especies de ericceas (Peterson et al., 2004). Se ha demostrado que las micorrizas ericoides se encuentran implicadas en la asimilacin de fsforo, al igual que las otras categoras de micorrizas, sin embargo, la funcin ms importante de esta asociacin se encuentra relacionada con la asimilacin de nitrgeno, en forma de nitrato o amonio, as como aminocidos libres, los cuales pueden ser absorbidos por las hifas y translocados al hospedero (Peterson et al., 2004). Metodologa El material vegetal de las tres especies se recolect en la localidad de Sumapaz, el de C. bracteata en la vereda Las Auras, mientras que el de B. multiflora y R. acanthophyllos se colect en la vereda Santa Rosa. De cada especie se trabajaron muestras de dos individuos. 1. Aclaramiento y tincin de races Las races de cada muestra se lavaron para remover la mxima cantidad de sustrato, luego se introdujeron en un tubo de ensayo y se les adicion KOH al 10% hasta taparlas. El tubo se puso en bao mara a 60C durante cinco minutos. Despus se retir el KOH con agua corriente, se adicion H2O2 10%, se colocaron nuevamente las races en bao mara por cinco minutos y se lavaron nuevamente con agua corriente.
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A las races aclaradas se les agreg una solucin de tinta de estilgrafo en vinagre al 5% hasta taparlas completamente y se dejaron en bao mara por 20 minutos. Se lavaron nuevamente con agua corriente para eliminar el exceso de colorante, se cortaron segmentos entre 1 y 1.5 cm de largo y se montaron en lminas con una gota de glicerina. Las observaciones de las muestras teidas se hicieron en el microscopio ptico con un aumento de 400x. Para la medicin del porcentaje de colonizacin se observaron 100 campos pticos por cada muestra, anotando la presencia de cada tipo de micorriza por campo. 2. Separacin de esporas Se tomaron 10g de suelo de cada muestra; cada una se pas por una serie de tres tamices (de 1.000, 106 y 38 m), comenzando con el de mayor dimetro de poro y terminando con el menor. El juego de tamices se puso bajo un chorro de agua corriente hasta separar la muestra en tres fracciones. La fraccin del tamiz de 1.000 m se descart y las dos fracciones restantes se distribuyeron en cuatro tubos de centrifugacin, con 2 ml de solucin de sacarosa 50% en el fondo, completando el volumen del tubo con agua. Las muestras en los tubos se centrifugaron durante 5 minutos a 3.500 rpm. Despus de centrifugado, el sobrenadante se tom con una jeringa y se pas por el tamiz de 38 m. La muestra obtenida se deposit en una caja de Petri para realizar la separacin de esporas bajo el estereomicroscopio utilizando un pincel fino (Fig. 6.1).
Figura 6.1.
Algunas de las esporas se montaron en lminas para la observacin en el microscopio, con el fin de determinarlas hasta el nivel de gnero (Fig. 6.2).
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Resultados 1. Bomarea multiflora Se observ la presencia de micorrizas arbusculares en esta especie; se encontr una densidad considerable de hifas con algunas vesculas colonizando el crtex de la raz (Fig. 6.3). Se aislaron esporas de por lo menos cinco especies diferentes. Se encontraron esporas de gran tamao, al parecer de una especie de Glomus, algunas de stas agregadas en esporocarpios (Fig. 6.5b). Tambin se encontraron esporas pequeas agrupadas en esporocarpios masivos, al parecer de la especie Glomus versiforme (Fig. 6.4).
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Figura 6.3. Micorrizas en Bomarea multiflora. a. Observacin a 100x de la raz colonizada por hifas, con algunas vesculas. b. Observacin a 400x de las hifas colonizando el crtex. c. Hifas y vesculas observadas a 400x.
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Figura 6.5. a. Esporocarpio de Glomus sp. b. Espora de Glomus sp. c. Esporas de tamao pequeo, probablemente de los gneros Sclerocystis y Glomus 2. Rubus acanthophyllos
En esta especie se observaron micorrizas arbusculares con una densidad alta de hifas y abundante nmero de vesculas. (Fig. 6.6) , en la muestra se observ tambin la presencia de arbsculos (Fig. 6.7).
de races. a. Observacin a 100x de la raz colonizada por hifas y vesculas. b. Observacin a 400x de las hifas colonizando el crtex. c. Hifas y vesculas observadas a 400x.
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de races. a. Observacin a 100x de la raz colonizada por hifas y vesculas. b. Observacin a 400x de hifas y un gran nmero de vesculas colonizando el crtex. c. Hifas y arbsculos observados a 400x.
De la muestra se obtuvieron esporas color marrn, probablemente del gnero Glomus. La pared de la espora est compuesta por tres capas. En el interior de stas se observan cuerpos lipdicos (Fig. 6.8).
acanthophyllos. a. Observacin en el estereoscopio con un aumento de 100x. b y c. Observacin en el microscopio ptico con un aumento de 400x. d. observacin en el microscopio con un aumento de 1000x.
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3. Cavendishia bracteata En esta especie no se present una tincin adecuada de las estructuras de los hongos que colonizan la raz; sin embargo, se observaron hifas y complejos hifales al interior de las clulas; tambin se observaron estructuras circulares que podran ser microesclerocios. Al parecer las estructuras observadas corresponden con micorrizas arbusculares y hongos endfitos (Fig. 6.9).
De acuerdo con su forma, se separaron tres tipos de esporas (Fig. 6.10 y 6.11).
observadas en el estereoscopio con un aumento de 40x. a. Esporas esfricas de Glomus sp. b. Esporas clavadas de Sclerocystis sp. c. Esporas ovoide s de Acaulospora sp.
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Figura 6.11. Esporas aisladas de la rizsfera de Cavendishia bracteata, observadas en el microscopio ptico con un aumento de 400x; por la ornamentacin presentada en la pared de la espora, pertenecen a una especie del gnero Acaulospora.
Discusin Las tres especies evaluadas presentaron micorrizas arbusculares; en C. bracteata se observaron algunas estructuras que podran indicar la presencia de micorrizas ericoides. La especie en que se encontr mayor dicersidad de hongos formadores de micorriza arbuescular fue C. bracteata, con esporas de tres gneros Glomus, Sclerocystis y Acaulospora; en segundo lugar estuvo B. multiflora con dos morfoespecies de Glomus y una de Sclerocystis. En R. acantophyllos solo se encontr una morfoespecie del gnero Glomus, pero fue la planta en que se encontr mayor colonizacin y estructuras ms definidas (hifas no septadas, vesculas y arbsculos). Bibliografa International Culture Collection of Arbuscular & Vesicular-Arbuscular Mycorrhizal Fungi (INVAM). http://invam.caf.wvu.edu/# Peterson, R. H. Massicotte & L. Melville. 2004 . Micorrhizas: Anatomy and Cell Biology. Ottawa: NRC Research Press.
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Schenk, N. C. & Y. Prez. 1988. Manual for the Identification of Va Mycorrhizal Fungi. Gainesville: Synergistic Publications Sieverding, E. 1983. Manual de mtodos para la Investigacin de la Micorriza Vesculo-Arbuscular en el Laboratorio. Cali: Centro Internacional de Agricultura Tropical (CIAT). Smith, S. & D. Read. 2008. Mycorrhizal Symbiosis. Tercera edicin. Londres: Elsevier.
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Figura 7.1. Tulipsidos aislados de Alstroemeria. (Christensen, 1995a y 1995b) a. 6-tulipsido A. b. tulipsido D. c. tulipsido E
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De las flores de varias especies de la familia Alstromeriaceae se han identificado y aislado pigmentos antocinicos como 6-hidroxidelfinidina, 3-rutinsido, 6-hidroxicianidina, delfinidina 3-rutinsido, cianidina 3-rutinsido, entre otros (Norbaek et al. 1996; Tatsuzawaa et al., 2003). En Colombia se realiz un estudio de actividad antiparasitaria de 26 extractos provenientes de 13 especies colombianas de Bomarea, frente a promastigotes de Leishmania (L. amazonensis, L. braziliensis y L. donovani) y frente a epimastigotes de Trypanosoma cruzi, parsitos causantes de la leishmaniasis y Mal de Chagas, respectivamente. Se encontr que la especie Bomarea setacea present actividad frente a las tres especies de Leishmania con IC50 entre 4.9 y 98.6 g/ml, las dems especies fueron inactivas. (Alzate et al., 2008) Metodologa 1. Material vegetal El material vegetal (hojas) se recolect en la localidad de Sumapaz, corregimiento de Nazaret, vereda las Auras en agosto de 2009. Un espcimen reposa en el Herbario del Jardn Botnico de Bogot Jos Celestino Mutis. 2. Mtodo de extraccin Para la obtencin del extracto etanlico las hojas de Bomarea multiflora se secaron a temperatura ambiente durante tres das. Las hojas secas, se molieron hasta obtener 173,5g de un polvo uniforme. A este material se le realiz una extraccin por maceracin en fro con etanol del 96%. El extracto etanlico resultante se filtr, se concentr a presin reducida y se pes (Fig. 7.2).
Figura 7.2.
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Para calcular el rendimiento de extraccin respecto al peso del material vegetal seco y molido se utiliz la siguiente frmula:
% R= peso del extracto seco x 100 peso del material vegetal seco
3. Anlisis fitoqumico preliminar El anlisis fitoqumico preliminar se llev a cabo para determinar la presencia de diferentes grupos de metabolitos secundarios, para lo cual se utilizaron diferentes reacciones de coloracin. Se sigui la metodologa propuesta por Sanabria (1983), Lock (1988) y Bilbao (1997) (Fig. 7.3).
4. Fraccionamiento Teniendo en cuenta la polaridad de los compuestos presentes en el extracto etanlico de hojas de Bomarea multiflora, se realiz un fraccionamiento slido-lquido empleando cuatro solventes de polaridad creciente: ter de petrleo, cloroformo, acetato de etilo y metanol. A 10,25g de extracto etanlico de hojas de la especie Bomarea multifola, se les realiz un fraccionamiento slido-lquido directo. El extracto slido color verde oscuro y olor caracterstico, se homogeniz. Esta
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mezcla slida se puso en contacto con el solvente, en calentamiento (<30C) y agitacin constante, en la plancha de calentamiento, durante 20 minutos. Posteriormente la mezcla se filtr y concentr a presin reducida. Este procedimiento se realiz de forma exhaustiva, hasta peso constante. Los solventes usados para la extraccin fueron: ter de petrleo, cloroformo, acetato de etilo y metanol, obteniendo as extractos de polaridad creciente. El fraccionamiento se monitore por CCD, asegurando una extraccin exhaustiva para cada disolvente empleado. Los sub-extractos obtenidos se secaron y pesaron para determinar el rendimiento de extraccin de acuerdo con la siguiente frmula:
% R= peso del extracto obtenido x 100 peso del extracto etanlico
5. Evaluacin de la actividad antibacteriana Para este ensayo se emplearon como microorganismos indicadores de actividad, la bacteria Gram-positiva Staphylococcus aureus y las bacterias Gram-negativas Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa, procedentes de cepas de referencia. Todas las cepas fueron donadas por el Laboratorio de Microbiologa del Departamento Ciencias Bsicas de la Corporacin Tecnolgica de Bogot y se mantuvieron a 4C en caldo nutritivo hasta la realizacin del ensayo. Se emple el mtodo de difusin en discos para la determinacin preliminar de la actividad antibacteriana. Como medio de cultivo se emple agar Mueller-Hilton (Oxoid), el cual se impregn con suspensiones microbianas de aproximadamente 1.5106 UFC/mL, correspondientes al tubo 1 en la escala de turbidez de Macfarland, por medio de una escobilla para facilitar la difusin. Los extractos se disolvieron en DMSO hasta una concentracin final de 30 mg/ml (Atep & Erdorul, 2003). Se impregnaron discos blancos estriles de 6,0 mm de dimetro con los extractos de prueba en dosis de 10 l/disco. Se us como control positivo una solucin de cloranfenicol con una concentracin de 100 g/ml (10 l/disco) y como control negativo 10 l de DMSO. A continuacin se presentan los extractos evaluados (Tabla 7.1).
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Tabla 7.1. Extractos para evaluacin de actividad antibacteriana Extracto Sigla Masa extracto (mg) 30,2 30,1 30,0 30,0 30,2
Etanlico ter de
petrleo
Cloroformo Acetato de
etilo
Metanol
Las cajas de Petri que contenan el agar Muller-Hilton, se impregnaron con la solucin bacteriana a una concentracin de 1.5106 UFC/mL. Posteriormente se colocaron los sensidiscos con la solucin del extracto. Por cada combinacin de extracto y cepa bacteriana se utilizaron tres rplicas. Las cajas se incubaron a 36C, durante 24 horas (Chitnis et al., 2007). La actividad antibacteriana de los extractos de prueba se determin mediante la medicin del dimetro del halo de inhibicin en milmetros y se calcul el % de inhibicin mediante la siguiente frmula (Ramrez & Diaz, 2007):
% inhibicin = D halo extracto D halo blanco D halo control positivo D halo blanco
Resultados y discusin 1. Extraccin A continuacin se presenta el rendimiento de extraccin para el extracto etanlico de hojas de Bomarea multiflora (Tabla 7.2). Tabla 7.2. Porcentaje de rendimiento de extraccin con etanol
Parte de la Masa del material planta vegetal seco (g) Hojas 173,5 Masa del extracto (g) 25,13 Rendimiento de
extraccin (%)
Sigla EBH
13,91
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2. Anlisis fitoqumico preliminar A continuacin se resumen las pruebas realizadas para cada tipo de metabolito y los resultados obtenidos. (Tabla 7.3) Tabla 7.3. Resultados del anlisis fitoqumico preliminar del extracto etanlico de la parte area de Bomarea multiflora
Resultado EBH + + + + +
Shinoda HCl Taninos Saponinas Quinonas Gelatina Cloruro frrico Espuma Zn/HCl Zn/NaOH NH3 BorntrgerKraus Cumarinas Fluorescencia Hidroxamato frrico Lactonas terpnicas Esteroides y triterpenos Vainillina Hidroxamato frrico Liebermann-Burchard + + + +
Se determin la presencia de alcaloides, flavonoides, esteroides, triterpenos y fenoles en el extracto etanlico de la parte area de Bomarea sp. Debido a que no se encontraron en literatura revisada reportes de estudios fitoqumicos para el gnero Bomarea, este sera el primer reporte de composicin qumica.
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3. Fraccionamiento El porcentaje de rendimiento indica la cantidad de compuestos solubles en cada solvente de acuerdo a su polaridad. Los resultados para el fraccionamiento del extracto de hojas de Bomarea sp. (Tabla 7.4), muestran que la mayora de los compuestos presentes en el extracto etanlico (53.32%) poseen un carcter polar de forma que fueron extrados con metanol, posiblemente por encontrarse en forma de glicsidos. Los compuestos de carcter lipoflico que se solubilizaron en ter de petrleo, constituyen alrededor del 16% del extracto. Cerca de un 21% son compuestos de polaridad media y fueron solubles en cloroformo y acetato de etilo. Tabla 7.4. Resultados del fraccionamiento del extracto etanlico de hojas de Bomarea multiflora
Masa extracto
(g)
Este mtodo de fraccionamiento permiti separar adecuadamente grupos de compuestos de acuerdo con su polaridad, sin someter el extracto a calentamiento, como ocurre en la extraccin slidolquido tipo soxhlet. 4. Evaluacin de la actividad antibacteriana El ensayo de la actividad antibacteriana frente a E. coli. En los sensidiscos se encuentran los controles positivo (c+) y negativo (c-) y los extractos etanlico (E1) y etreo (E2) de las hojas de Bomarea sp. Es posible ver el halo de inhibicin del control
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positivo y los halos que presentaron los dos extractos. El halo del control negativo fue 0.6 cm (dimetro del sensidisco) (Fig. 7.4).
Figura 7.4. Halos de inhibicin. a. Extractos E1 y E2 frente a Escherichia coli. b. Extractos E3, E4 y E5 frente a Pseudomonas aeruginosa
Se presenta el ensayo de actividad frente a P. aeruginosa para los extractos de cloroformo (E3), acetato de etilo (E4) y metanol (E5). En los sensidiscos se encuentran los controles positivo (c+) y negativo (c-) y los sub-extractos de las hojas de B. multiflora. No se observan halos para los extractos E3 y E4 y un pequeo halo de inhibicin para el extracto E5 (Fig. 7.4). Los halos obtenidos fueron promediados y con los promedios se calcularon los porcentajes de inhibicin. (Tabla 7.5)
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Cepa bacteriana
D promedio
D C+ promedio 1,75 1,75 1,60 1,60 1,60 1,60 1,60 1,40 1,40 1,40 1,10 1,10 1,10 1,10 1,10
D C- promedio 0,60 0,60 0,60 0,60 0,60 0,60 0,60 0,60 0,60 0,60 0,60 0,60 0,60 0,60 0,60
% Inhibicin 43,5 0,0 0,0 50,0 40,0 40,0 37,5 62,5 31,3 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 34,0
1,10 0,60 0,60 1,10 1,10 1,00 0,60 1,10 0,85 0,90 0,60 0,60 0,60 0,60 0,77
Staphylococcus aureus
Escherichia coli
Pseudomonas aeruginosa
Tabla 7.5. Dimetro de los halos y porcentaje de inhibicin de los 5 extractos evaluados. Los extractos de las hojas de B. multiflora, presentaron una inhibicin significativa, teniendo en cuenta que la cantidad de extracto por sensidisco es de aproximadamente 0,3 mg, es decir, unas 300 veces ms que el control positivo (1 g) y que los porcentajes de inhibicin no superan el 65%. A continuacin se puede observar (color gris), que los mayores porcentajes de inhibicin del crecimiento fueron obtenidos para a E. coli, el extracto de acetato de etilo present la mejor actividad, con un porcentaje de inhibicin de 62,5% (Fig. 7.5). Cuatro de los cinco extractos evaluados fueron inactivos frente a P. aeruginosa, el extracto metanlico present un porcentaje de inhibicin del 34%, el cual es muy bajo teniendo en cuenta la cantidad de extracto utilizada en el ensayo. Los porcentajes de inhibicin para S. aureus estn entre 0 y 50%, la mayor inhibicin la present el extracto de acetato de etilo.
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Figura 7.5. Porcentaje de inhibicin de los 5 extractos sobre las tres cepas bacterianas
Para continuar el estudio fitoqumico es recomendable tomar el extracto de acetato de etilo, puesto que present actividad moderada frente a dos de las bacterias empleadas E. coli y S. aureus. Se recomienda determinar las concentraciones mnimas CMI inhibitorias para este extracto. Bibliografa Alzate, F., N. Jimenez, B. Weniger, J. Bastida & A. Gimenez. 2008. Antiprotozoal Activity of Ethanol Extracts of Some Bomarea Species. Pharmaceutical Biology 46 (9): 575-578. Atep, D & Z. Erdorul. 2003. Antimicrobial Activities of Various Medicinal and Commercial Plant Extracts. Turkish Journal of Biology. 27: 157-162. Bilbao, M. 1997. Investigacin Fitoqumica. Armenia: Universidad del Quindo, Facultad de Ciencias Bsicas y Tecnolgicas. Chitnis, R., M. Abichandani, P . Nigam, L. Nahar & S. Sarker, S. 2007. Actividad antibacteriana y antioxidante de los extractos de Piper cubeba (Piperaceae). Ars Pharmaceutica. 48(4): 343-350.
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Christensen, L. 1995a. Tuliposides from Alstroemeria revoluta. Phytochemistry. 38(6):1371-1373. Christensen, L. 1995b. A Futher Tuliposides from Alstroemeria revoluta. Phytochemistry 40(1): 49-51. Lock, O. 1988. Investigacin Fitoqumica. Pontificia Universidad catlica del Per. Maldoni, B. T. Lockhart & L. Tombesi. 1993. Hydrocarbons and Sterols of Alstroemeria aurantiaca. Phytochemistry 34(2): 581-582. Norbaek, R. L. Christensen, G. Bojesent & K. Brandt. 1996. Anthocyanins in Chilean Species of Alstroemeria. Phytochemistry 42(1): 97-100. Ramrez, L. & H. Diaz. 2007. Actividad antibacteriana de extractos y fracciones del ruibarbo (Rumex conglomeratus). Scientia et Technica 33: 0122-1701. Sanabria, A. 1983. Anlisis fitoqumico preliminar. Universidad Nacional de Colombia, Facultad de Ciencias, Departamento de Farmacia. Tatsuzawaa, F., N. Saitob, N. Muratac, K. Shinodac, A. Shigiharad & T. Hondad. 2003. 6-Hydroxypelargonidin Glycosides in the Orange-red Flowers of Alstroemeria. Phytochemistry.; 62: 12391242.
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Metodologa 1. Recoleccin de material vegetal El material vegetal de la especie Rubus acanthophyllos fue recolectado a una altitud de 3.300 m, en suelos con alto contenido de materia orgnica. Debido a la baja cantidad de hojas encontradas, se realiz una propagacin en la cual se trataron de mantener las mismas condiciones del medio donde fueron encontradas (poca luz y alta humedad); al cabo de dos meses se recolect material vegetal, el cual se dejo secar a temperatura ambiente durante tres das, posteriormente se macer en licuadora y se obtuvo el peso seco. 2. Mtodo de extraccin Para la obtencin del extracto vegetal de las hojas jvenes de R. acanthophyllos se utiliz un solvente polar (etanol 96%) en proporcin 1:1 durante 5 das en maceracin fra, a continuacin se filtr, luego se concentr en rotavapor a presin reducida. A continuacin se dej secar en una cmara de extraccin y se guard a una temperatura de 4C hasta su utilizacin. 3. Evaluacin de la actividad antimicrobiana Los extractos etanlicos se dejaron secar en una cmara de extraccin para posteriormente hacer los ensayos antibacterianos. Para evaluar la actividad antibacteriana, se aislaron las bacterias E. coli, P. aureginosa y S. aureus en medio nutritivo, 24 horas antes mediante la tcnica de agotamiento por estras (Gamazo et al., 2005). Para ajustar la concentracin de bacterias se prepar solucin salina (NaCl al 0,85%), a continuacin se tomaron de 2 a 5 colonias de cada bacteria aislada y se inocularon en tubos con solucin salina. Para conocer la cantidad de bacterias presentes en la solucin se utiliz el tubo 0.5 (1.5 x106UFC/ml) de la escala turbimtrica de MacFarland. Posteriormente se realiz una siembra masiva en cajas de Petri con Agar Muller Hilton,con ayuda de un escobilln estril. Se utilizaron discos de papel filtro de 6 mm previamente esterilizados. Los discos de papel fueron repartidos de forma equidistante para evitar la sobreposicin de los halos de inhibicin. Los extractos
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etanlicos obtenidos se solubilizaron en dimetilsulfxido a una concentracin de 30 mg/ml. El volumen final de la concentracin de los extractos solubilizados fue de 10 l en cada disco, al igual que el control positivo (Cloramfenicol) y control negativo (dimetilsulfxido) (E. S. Costa et al, 2008). Al cabo de 24 horas se examinaron para determinar la formacin de halos de inhibicin. El dimetro de cada halo de inhibicin se midi usando una regla milimetrada (+/- 0,5 mm). Siendo stas registradas mediante una cmara digital. El porcentaje de inhibicin fue hallado utilizando la siguiente frmula (Ramrez, 2007).
Porcentaje de inhibicin =
Resultados y discusin
Dimetrodehalodel extracto Dimetrodel halo blanco Dimetrodel control positivo Dimetrodel halo blanco
x 100
1. Recoleccin de material vegetal El rendimiento del material vegetal se obtuvo de la diferencia entre peso del extracto y el peso seco (Tabla 8.1). Tabla 8.1. Rendimiento del material vegetal de R. acanthophyllos
Porcentaje de
rendimiento
2%
2. Actividad antibacteriana Los extractos de la especie R. acanthophyllos provenientes de hojas jvenes inmaduras no presentaron actividad frente a E. coli, P. aeruginosa y S. aureus despus de 24 horas. De acuerdo con estudios del gnero de Rubus como por ejemplo R. urticaefolius se encontr que la mejor actividad fue presentada en el fruto (de Paula Silva y Martins de Siqueira, 2000). An cuando no se encontr actividad en los extractos de las hojas de esta especie, sera necesario un nuevo estudio con frutos en diferente estado de desarrollo, con el fin de comprobar la presencia de metabolitos secundarios con actividad antibacteriana.
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Bibliografa Costa, E. S., C. A. Hiruma-Lima, E. O. Lima, G. C. Sucupira, A. O. Bertolin,S. F. Lolis, F. D. P . Andrade, W. Vilegas, y A. R. M. Souza-Brito. 2008. Antimicrobial Activity of Some Medicinal Plants of the Cerrado, Brazil. Phytotherapy Research. Phytotherapy research . 22: 705707 de Paula Silva, J. y A. Martins de Siqueira. 2000. Accin antibacteriana de extractos hidroalcohlicos de Rubus urticaefolius. Revista Cubana de Plantas Medicinales 5(1):26-9. Fraternale, D. M. Bacchiocca, L. Giamperi, D. Ricci, V . Scoccianti y P . Ninfali. 2007. Control of Isolates of Fusarium Species by using Extracts of Rubus ulmifolius micropropagated Plantlets. Journal of Food, Agriculture & Environment Vol.5 (3&4): 442 445 Gamazo, C., I. Lpez-Goi y R. Daz. 2005. Manual Prctico de Microbiologa. Barcelona: Editorial Masson.
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cido que en un medio neutro o alcalino. En medio cido la forma predominante es la del ion flavilio, el cual da el color rojo, cuando esta es sometida a pH bsico o alcalino, el ion flavilio es susceptible al ataque nucleoflico por parte del agua, producindose la pseudobase carbinol, esto es a pH 4.5 y seguido se forma la chalcona, las dos formas son incoloras (Fig. 9.1). Conociendo esto, las antocianinas tienen su mxima expresin de color a pH cidos (pH 1), y su forma incolora se produce a pH neutros o alcalinos, debido a esta caracterstica se utilizan a las antocianinas a pH cido o ligeramente neutro en la industria alimenticia (Montilla et al., 2008).
Aparte del metanol acidificado algunos autores utilizan acetona para la extraccin de antocianinas. La ventaja de ste respecto al metanol es que permite usar una temperatura mucho ms baja para la concentracin de la muestra. Sin embargo, la mayora de estudios
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en antocianinas coinciden con la utilizacin de metanol acidificado para la extraccin; Awika et al., (2004), comprob que usando metanol acidificado se obtiene mayor cantidad de antocianinas que con acetona acidificada (Peguero, 2007). Efectos positivos de las antocianinas sobre la salud Las antocianinas poseen conocidas propiedades farmacolgicas utilizadas para la terapia de un amplio espectro de enfermedades. Las investigaciones realizadas con extractos de Vitis vinifera ricos en antocianinas, han mostrado que disminuyen la fragilidad y permeabilidad capilar; tambin efectos antiinflamatorios y actividad antiedema. Adems tienen la propiedad de proteger los vasos sanguneos del dao ocasionado por los altos niveles de azcar en la diabetes. Las antocianinas protegen de muchas maneras. Por un lado, neutralizan las enzimas que destruyen el tejido conectivo, adems, debido a su capacidad antioxidativa, previenen los oxidantes del tejido conectivo daado y finalmente, reparan protenas daadas en las paredes de los vasos sanguneos. Experimentos en animales han demostrado que el suministro de antocianinas previene efectivamente la inflamacin y el subsecuente dao a los vasos sanguneos. Esta habilidad antiinflamatoria de las antocianinas tambin ayuda contra las reacciones alrgicas. Por otro lado, se ha observado que su potencial antioxidante va en contra de radicales superxidos y perxidos de hidrgeno (Montilla et al., 2008). Gracias a esta capacidad antioxidante, las antocianinas son catalogadas como agentes nutracuticos. Varios trabajos reportan sus efectos benficos al prevenir la proliferacin de clulas cancergenas, proteccin contra enfermedades del corazn y prevencin del dao causado por los lpidos de los alimentos. Metodologa 1. Extraccin de antocianinas El material vegetal se colect en la vereda Las Auras de la localidad de Sumapaz, ste se seleccion separando las hojas, los frutos y las flores que se encontraban en mal estado fitosanitario. A partir de las brcteas y las flores seleccionadas de C. bracteata se realiz la extraccin de antocianinas colocando el material macerado y previamente pesado en frascos color mbar con cido clorhdrico al
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5% y metanol durante cinco das. Posteriormente, el macerado se filtr y el filtrado se concentr en rotavapor a presin reducida sin temperatura (Fig. 9.2).
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A partir del extracto concentrado de las hojas jvenes de C. bracteata se determin el contenido de antocianinas monomricas por el mtodo de pH diferencial. 2. Mtodo de pH diferencial Se prepararon dos diluciones diferentes, una con el buffer cloruro de potasio a pH 1.0 y otra con el buffer de acetato de sodio a pH 4.5, llevndolas a un volumen final de 3 ml. Posteriormente se realiz un barrido en un espectrofotmetro GENESYS de 700 a 300 nm, esperando una absorbancia de las muestras, entre 0.2 y 1.2 (Leyva, 2009). Para calcular la concentracin de pigmentos monmericos se emple la siguiente ecuacin, la cual se expres con cianidina-3 glucsido:
Donde A= absorbancia, PM= peso molecular de la antocianina, FD= factor de dilucin, e=El valor final de la absorbancia se obtiene aplicando la siguiente ecuacin:
Donde Aavis-max es la mayor absorbancia obtenida a pH 1.0 y a pH 4.5, mientras que A 700nm es la lectura tanto a pH 1.0 como a pH 4.5. La concentracin final de antocianinas (mg/175g) se calcul con base en el volumen del extracto y el peso de la muestra empleado. Por otra parte se realiz la liofilizacin de la muestra de antocianinas con la colaboracin del Laboratorio de Fisiologa y Qumica de la Universidad Nacional de Colombia, Sede Bogot. Resultados y discusin (Fig. 9.3) Mediante el mtodo de pH diferencial se logr determinar la concentracin de antocianinas la cual fue de 0,0104 mg/g de material vegetal especficamente de las brcteas y las hojas jvenes de la especie. El contenido es bajo en comparacin con el encontrado en frutos de otras especies como Rubus glaucus la cual tiene una concentracin de 1,478 g/kg (Ramrez et al., 2007); en otras especies como Bumelia sertorium
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el contenido de antocianinas es de 37,83 mg/100ml este, es similar al contenido de antocianinas presentes en las uvas. Sin embargo, el contenido de antocianinas en uvas de diferentes especies, depende de la variedad, la madurez, las condiciones climticas y la agricultura. En la uva Concord vara entre 61-112 mg/100 g, mientras que en las uvas de vino, como Pinot Noir, Cabernet Sauvignon Vicente tienen concentraciones de antocianinas de 33, 92 y 439 mg/100 g, respectivamente (Rodrigues et al., 2007).
Bibliografa Garzn O. 2008. Las antocianinas como colorantes naturales y compuestos bioactivos: revisin. Acta Biolgica Colombiana. 13(3): 27 36. Leyva, D.E. 2009. Determinacin de antocianinas, fenoles totales y actividad antioxidante en licores y frutos de mora. Tesis de grado para obtener el ttulo de Ingeniero en Alimentos. Oaxaca: Universidad Tecnolgica de la Mixteca.
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Lpez, R., W. Quiones y F. Echeverri. 2007. Perfil cromatogrfico de las antocianinas presentes en algunos frutos colombianos. Scientia et Technica Ao XIII, 33: 275-276 Oliveira, G. S., Aroucha, E. Mendes, P . C. Ferreira, R. Fernandes, F. Bezerra, P . A. de Souza y A. E. de Ufersa-Mossor. 2007. Caractersticas qumicas de frutos da quixabeira (Bumlia sertorium mart). Revista Brasileira de Agroecologia. Vol.2: 2: 1473 - 1476 Ramrez, M., N. Neira y L. Correa. 2007. Actividad antimicrobiana, conservante y obtencin de un colorante natural a partir de plantas de la regin de Boyac. Scientia et technica ao XIII, 33: 415-417
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Para la obtencinelaboracin de la harina se llev a cabo el siguiente procedimiento: 1. Operaciones unitarias 1.1. Seleccin: Se seleccionaron los frutos en buen estado fisiolgico, es decir, aquellos que no presentaron ataques de hongos, mohos o daos fsicos. (Fig. 10.1) 1.2. Lavado y desinfeccin: se emple agua potable e hipoclorito de sodio a una concentracin de 10 ppm, se sumergieron las races en esta solucin con el fin de eliminar residuos o bacterias presentes, seguidamente se enjuagaron con abundante agua para eliminar excesos de tierra. 1.3. Pesado: se tom el peso inicial con el fin de determinar el rendimiento del procesoproducto terminado, empleando
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1.4. Pelado: se retir la cscara de manera manual con un cuchillo de cocina 1.5. Cortado: el material resultante se cort en forma de tiras con el fin de facilitar el proceso de secado. (Fig. 10.2)
deshidratar.
1.6. Secado: los cortes se sometieron a temperatura de 45C en horno de secado por 24 horas (Fig. 10.3).
Figura 10.3. Secado de cortes de races tuberiformes de Bomarea multiflora
131
1.7. Molienda: para reducir el tamao de las races secas se usa un molino, ouna licuadora con vaso auxiliar. 1.8. Tamizado: se emple un tamiz, el cual permite la separacin de las partculas de diferentes tamaos, logrando homogeneidad en el producto final. 1.9. Empaque: para empacar la harina se utiliz una bolsa con cierre hermtico y frascos de vidrio con cierre hermtico para conservar la humedad. La harina obtenida puede ser empleada para elaborar diferentes productos de repostera o arepas, entre otros (Fig. 10.4). La harina obtenida puede ser empleada para elaborar diferentes productos de repostera o arepas, entre otro. En la figura 10.5 se resume el proceso de obtencin de harina.
Para la obtencin de pigmentos se sigui el siguiente procedimiento: Se usPara este proceso se emple se utiliz el arilo de las semillas, aa las cuales se lesle aplicaron operaciones unitarias talesaplicaron
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los procesos de como lavado, seleccin, despulpado, secado a 50c por 24 horas, pesado., posteriormente el material obtenido se someti a maceracinsometi a maceracin con ter de petrleo por 48 horas a temperatura ambiente, el extracto resultante se filtr y concentr a presin reducida (Fig. 10.6).
multiflora
El colorante obtenido fue usado para elaborar jabn lquido artesanal con la formulacin de la tabla 10.1. (Fig. 10.7)
Tabla 10.1. Formulacin de jabn con extractos vegetales Ingrediente Base tensoactiva (texapn 40) Agua estril Fragancia (tintura de limonaria) Colorante Composicin (%) 34 64 1 1
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Resultados y discusin El rendimiento de los tubrculos y los frutos se determin mediante la siguiente frmula:
% de rendimiento = Pesoinicial Peso final x 100 Pesoinicial
El rendimiento en la fase de limpieza y adecuacin que incluye prdida por peso de cascara y tubrculos en mal estado es de 50.44%. El proceso de trasformacin tiene un rendimiento de 14.34% siendo ste muy bajo, por eso se recomienda mezclarla con harina de trigo. El rendimiento del proceso de obtencin de pigmentos empleando el arilo de las semillas es de 45.23 % y su color es intenso, por ende la proporcin a usar en la formulacin de productos es menor. En la Tabla 10.3 se relacionan datos de la semillas de B. multiflora y en la tabla 10.4 datos morfomtrico lgicos de las races tuberiformes.
134
Tabla 10.3. Caractersticas de las semillas de Bomarea multiflora pH 2,9 Color 5 YR 6/0 Peso promedio 0,1836 g Dimetro promedio 5,75 mm
Conclusiones La especie presenta un alto potencial de uso en trminos alimenticios, ornamentales e industriales, se recomienda su propagacin, uso y manejo en la regin. Los productos obtenidos son de fcil elaboracin, por lo cual las metodologas presentadas pueden ser aplicadas por la comunidad en general. Debido al bajo rendimiento de la harina, se recomienda mezclarla con otro tipo de harina para la elaboracin de productos. Bibliografa Corzo D.C. 2010. Desarrollar tres (3) protocolos de transformacin secundaria que puedan utilizarse a nivel industrial, medicinal o alimenticio de especies andinas y consolidar una publicacin en trasformacin de los trabajos realizados en el proyecto 318. Informe tcnico indito. Bogot: Jardn Botnico Jos Celestino Mutis. Corzo D.C. y M.E. Torres. 2011. Tcnicas de aprovechamiento de especies vegetales presentes en las reas rurales del Distrito Capital. Subdireccin Cientfica. Bogot: Jardn Botnico Jos Celestino Mutis. Coronado, M. y R. Hilario. 2001. Procesamiento de alimentos para pequeas
135
y micro empresas agroindustriales. Lima: CIED. Gonzlez Martin, C. y M. A. Calama Crego. 1980. Prcticas de Qumica. Madrid: SM. PRODAR. 2002. Manual de procesos Agroindustriales. Proyecto de Capacitacin para el fomento de la Agroindustria Rural. San Jos: Instituto Interamericano de Cooperacin para la Agricultura. Documento sin publicar. Torres, M. E. 2004. Investigacin en la trasformacin secundaria de frutos, tubrculos, flores, hojas o tallos de especies pertenecientes a ecosistemas andinos. Informe tcnico indito. Bogot: Jardn Botnico Jos Celestino Mutis.
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137
138
139
Para cada estado de maduracin se trabaj un diseo factorial 4x2 donde un factor es la presencia o ausencia de arilo y el otro es el sustrato empleado como medio de germinacin. Se us el siguiente modelo estadstico:
Donde, Yijk es el valor (porcentaje de germinacin) de cada rplica, es la media de todos los tratamientos, i es el efecto del primer factor (presencia o ausencia de arilo), j es el efecto del segundo factor (sustrato), ()ij es el efecto de la interaccin de los dos factores y ijk es el erro aleatorio. Se usaron tres repeticiones en cada tratamiento. Resultados 1. Determinacin de los parmetros morfomtricos de las semillas Los frutos de Bomarea multiflora presentan gran variabilidad en cuanto al nmero de semillas, se pueden encontrar de 11 a 57 frutos en cada cpsula, el peso de las semillas de una cpsula tambin vara y por el contrario el peso de las cpsulas es ms constante. (Tabla 11.1)
Tabla 11.1. Datos morfomtricos de los frutos de Bomarea multiflora N de frutos Media Mnimo Mximo Desviacin 30,2 11,0 57,0 14,8 Peso frutos gr. 3,3 1,4 5,3 1,5 Peso cpsula
vaca gr.
Los parmetros ms constantes en las semillas son el dimetro polar y el ecuatorial respectivamente, el peso de los frutos es ms variable pues se tienen de diferentes tamaos en una misma infrutescencia, lo que se ve reflejado tambin en el peso de las semillas y del arilo (Tabla 11.2).
Tabla 11.2. Parmetros. morfomtricos de semillas de Bomarea multiflora
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Dimetro polar mm. Media Mnimo Mximo Desviacin 6,3 5,3 7,2 0,4
Dimetro ecuatorial
mm.
Peso fruto
mg.
A continuacin se presentan las correlaciones existentes entre los pares de variables, sin embargo se construyeron lneas de tendencia donde se ilustra ms claramente la correlacin existente. (Fig. 11.1)
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Lneas de tendencia entre los pares devariables que mostraron correlacin La relacin entre peso del fruto y peso de la semilla presenta poca dispersin y un valor R alto, por lo cual se puede estimar cualquiera de estas variables con poco nivel de error si se conoce la otra variable (Fig. 11.2).
La relacin entre dimetro ecuatorial y peso del fruto muestra ms dispersin en comparacin con la relacin peso de frutopeso de semilla (Fig. 11.3).
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3. Estimacin de aspectos fisiolgicos de las semillas Se sembraron semillas de Bomarea sp. deshidratadas para determinar si son recalcitrantes, intermedias u ortodoxas. Se emplearon tres tipos de semillas: verdes, pintonas y maduras, las tres responden de una manera diferente a la deshidratacin, siendo las pintonas las que ms fcilmente pierden humedad, seguidas de las verdes y por ltimo las maduras. Luego de la deshidratacin los porcentajes de humedad obtenidos variaron de 35,7 a 51,1 %. (Tabla 11.3)
Tabla 11.3 Descripcin de contenido de humedad de semillas de
Bomarea multiflora Tipo de semillas Frescas Deshidratadas Peso crisol + semillas gr 20,614 19,087 24,312 1 17,950 17,983 20,982 2 17,921 17,965 20,944 3 17,920 17,964 20,944 45,66 35,74 51,05 % de humedad de las semillas
Peso crisol gr. Verde 50% verde Madura 14,714 15,945 17,7141
Despus de tres meses las semillas germinaron, sin embargo este resultado no se puede interpretar como recalcitrancia de las mismas, ya que en otros ensayos donde tambin se emplearon cajas de Petri y papel absorbente como medio de germinacin, las semillas no germinaron. Se hace necesario repetir el ensayo y evaluar diferentes niveles de deshidratacin para determinar el grado de tolerancia a la deshidratacin de las semillas, usando tierra como medio de germinacin. 4. Evaluacin de semillas maduras con y sin arilo en cuatro sustratos Como variable dependiente se emple el porcentaje de germinacin acumulado al final del ensayo, los factores son presencia o ausencia de arilo y sustrato, se tienen 24 nmeros de casos.
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Cuadrados
Suma de Cuadrados
Gl
Cuadrado Medio
RaznF
Valor-P
130,667
130,667
3,27
0,0895
B:Sustrato Interacciones
413,333
137,778
3,44
0,0420*
AB
349,333
116,444
2,91
0,0666
Residuos
640,0
16
40,0
Total (corregido)
1533,33
23
Puesto que el valor-P del factor sustrato es menor que 0,05, este tiene un efecto estadsticamente significativo sobre el porcentaje de germinacin con un 95,0% de nivel de confianza. La tabla 11.5 muestra la media del porcentaje de germinacin para cada uno de los niveles de los factores; tambin presenta los errores estndar de cada media. Las dos columnas de la derecha muestran intervalos de confianza del 95,0% para cada una de las medias. No se observan diferencias significativas debido al factor arilo, mientras que en la evaluacin de sustratos el mejor resultado se obtiene empleando tierra; los mejores resultados se obtienen por las combinaciones tierra-con arilo y turba-sin arilo seguidas por T-C-T con arilo.
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Nivel Media global Presencia de arilo Con arilo Sin arilo Sustrato T-C T-C-T Tierra Turba Interaccin arilo sustrato Con arilo,T-C Con arilo,T-C-T Con arilo,Tierra Con arilo,Turba Sin arilo,T-C Sin arilo,T-C-T Sin arilo,Tierra Sin arilo,Turba
Casos 24
Media 80,3333
Error estndar
Lmite inferior
Lmite superior
12 12 6 6 6 6
3 3 3 3 3 3 3 3
La tabla 11.6 muestra los resultados de la comparacin mltiple para determinar cules tratamientos son significativamente diferentes de otros. La mitad inferior de la tabla muestra las diferencias estimadas entre cada par de medias. El asterisco que se encuentra al lado de los dos pares indica que stos muestran diferencias estadsticamente significativas con un nivel del 95.0% de confianza. En la parte superior de la tabla, se han identificado 2 grupos homogneos, indicados por las letras a o b. No existen diferencias significativas entre aquellos niveles que comparten la misma letra.
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Tabla 11.6. Pruebas de rangos mltiples para porcentaje de germinacin por sustrato Sustrato T-C Turba T-C-T Tierra Contraste T-C - T-C-T T-C - Tierra T-C - Turba T-C-T - Tierra T-C-T - Turba Tierra -Turba Casos 6 6 6 6 Sig. * * Media LS 74,0 79,3333 83,3333 84,6667 Diferencia -9,33333 -10,6667 -5,33333 -1,33333 4,0 5,33333 Sigma LS 2,58199 2,58199 2,58199 2,58199 +/Lmites 7,74082 7,74082 7,74082 7,74082 7,74082 7,74082 Grupos Homogneos A Ab B B
Los valores resultantes de las medias para el factor tipo de semilla se traslapan y no se observa una marcada diferencia entre las ellas, sin embargo el valor ms alto de germinacin se tuvo con las semillas sin arilo (Fig. 11.4).
Medias y 95,0% de Fisher LSD 87 85
% de germinacin
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Los tratamientos tierra-cascarilla-turba y tierra, que tienen una media de 83,3 y 84,6 respectivamente, dan mejores resultados para el porcentaje de germinacin de semillas de Bomarea sp. que el tratamiento tierra-cascarilla, que present una media de 74 (Fig. 11.5).
Medias y 95,0% de Fisher LSD 90 86
% de germinacin
Figura 11.5. Medias de los tratamientos para porcentaje de germinacin segn el sustrato empleado
Se observaron valores ms altos de germinacin en las combinaciones de semillas con arilo y sustrato tierra y semillas sin arilo con sustrato turba (Fig. 11.6).
Grfico de Interacciones 87 84 Sustrato T-C T-C-T Tierra Turba
% Germinacin
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5. Evaluacin de semillas de frutos inmaduros con y sin arilo en cuatro sustratos Como variable dependiente se tiene porcentaje de germinacin acumulado al final del ensayo, los factores son tipo de semilla (con y sin arilo) y sustrato, se tienen 24 nmeros de casos. Este procedimiento ejecuta un anlisis de varianza de varios factores para porcentaje de germinacin realizando pruebas para determinar los factores que afectan estadsticamente el porcentaje de germinacin. Tambin evala la significancia de las interacciones entre los factores. Los valores-P de los factores presencia de arilo, sustrato y de la interaccin de estos son menores que 0.05, lo cual indica que los dos factores y su interaccin tienen un efecto estadsticamente significativo sobre el porcentaje de germinacin con un 95.0% de nivel de confianza (Tabla 11.7).
Tabla 11.7. Anlisis de varianza para porcentaje de germinacin de Bomarea multiflora
Fuente de variacin Efectos principales A: Presencia de arilo B:Sustrato Interacciones AB Residuos Total (corregido) 1125,33 1184,0 4309,33 3 16 23 375,111 74,0 5,07 0,0117* 384,0 1616,0 1 3 384,0 538,667 5,19 7,28 0,0368* 0,0027** Suma de Cuadrados Gl Cuadrado Medio Razn-F Valor-P
La tabla 11.8 muestra la media del porcentaje de germinacin para cada uno de los niveles de los factores; tambin muestra los errores estndar de cada media. Las dos columnas de la derecha muestran intervalos de confianza del 95.0% para cada una de las medias. Para el factor tipo de semilla se tiene mejores resultados cuando se usan sin arilo, en la evaluacin de sustratos se puede ver que se tienen mayores porcentajes de germinacin con tierra, seguido por turba y en cuanto a las interacciones los mejores resultados se tienen con: sin arilo-tierra,
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Casos 24
Media 62,6667
Error estndar
Lmite inferior
Lmite superior
12 12 6 6 6 6
Tipo por Sus3 3 3 3 3 3 3 3 69,3333 38,6667 61,3333 65,3333 57,3333 60,0 81,3333 68,0 4,96655 4,96655 4,96655 4,96655 4,96655 4,96655 4,96655 4,96655 58,8047 28,138 50,8047 54,8047 46,8047 49,4714 70,8047 57,4714 79,862 49,1953 71,862 75,862 67,862 70,5286 91,862 78,5286
Con arilo,T-C Con arilo,T-C-T Con arilo,Tierra Con arilo,Turba Sin arilo,T-C Sin arilo,T-C-T Sin arilo,Tierra Sin arilo,Turba
Esta tabla aplica un procedimiento de comparacin mltiple para determinar cules medias son significativamente diferentes de otras. La mitad inferior de la salida muestra las diferencias estimadas entre cada par de medias. Se ha colocado un asterisco junto a un par, indicando que este par muestra diferencias estadsticamente significativas con un nivel del 95,0% de confianza. En la parte superior de la pgina, se han identificado dos grupos homogneos, indicados por las letras a o b.
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Grupos Homogneos A B
Sig. *
Diferencia -8,0
* indica una diferencia significativa Esta tabla aplica un procedimiento de comparacin mltiple para determinar cules medias son significativamente diferentes de otras. La mitad inferior de la salida muestra las diferencias estimadas entre cada par de medias. El asterisco que se encuentra al lado de los tres pares indica que estos pares muestran diferencias estadsticamente significativas con un nivel del 95,0% de confianza. En la parte superior, se han identificado dos grupos homogneos indicados por las letras a o b. No existen diferencias significativas entre aquellos niveles que comparten la misma letra (Tabla 11.10).
Tabla 11.10. Pruebas de rangos mltiples para porcentaje de germinacin por sustrato. Sustrato T-C-T T-C Turba Tierra Casos 6 6 6 6 Media LS 49,3333 63,3333 66,6667 71,3333 Sigma LS 3,51188 3,51188 3,51188 3,51188 Grupos Homogneos A B B B
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Contraste T-C - T-C-T T-C Tierra T-C Turba T-C-T Tierra T-C-T Turba Tierra Turba
Sig. *
* *
* indica una diferencia significativa Se muestra que los valores resultantes de las medias para el factor tipo de semilla presentan diferencia entre ellas, logrndose mejores resultados de germinacin (66,66%) con las semillas sin arilo, o sea, aquellas que fueron lavadas. (Fig. 11.7)
Medias y 95,0% de Fisher LSD 72 69
% Germinacin
Se muestra que los tratamientos turba, tierra y tierra-cascarilla (1:1), que tienen una media de 66,6%, 71,3% y 63,3 respectivamente, dan mejores resultados para el porcentaje de germinacin de semillas de Bomarea multiflora que el tratamiento con tierra-cascarilla-turba cuyo porcentaje de germinacin fue de 49,3. (Fig. 11.8)
151
% Germinacin
74
64
54
Resulta favorable para la germinacin de semillas de Bomarea sp. la interaccin semillas sin arilo y el sustrato tierra (Fig. 11.9).
Grfico de Interacciones 88 78 Sustrato T-C T-C-T Tierra Turba
% Germinacin
Figura 11.9. Interacciones entre tipo de semillas y sustrato para porcetaje de germinacin
Discusin Las infrutescencias de Bomarea multiflora son muy variables, esta caracterstica hace que igualmente el peso de los frutos de una cpsula tambin vare, pues este valor est en funcin del nmero de frutos que tiene cada cpsula. De las caractersticas morfomtricas medidas
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en las infrutescencias la que presenta menos variacin es el peso de la cpsula vaca que puede estar entre 1,2 y 2,7 gr. Las medidas tomadas a los frutos mostraron correlacin para algunos parmetros como: peso del fruto-peso de la semilla, peso del fruto- ecuatorial y ecuatorial-peso de la semilla, lo que resulta conveniente a la hora de querer estimar unos de estos valores de manera indirecta. Las semillas presentan diferentes tasas de deshidratacin con respecto al estado de maduracin. Luego de deshidratadas, no germinaron en papel absorbente y no se pudo determinar si las mismas toleran la deshidratacin sin que esto afecte su calidad en trminos de viabilidad. Es recomendable hacer ms ensayos de viabilidad por mtodos indirectos que son ms prcticos y se pueden ver los resultados en corto tiempo, uno de ellos es la tcnica de colorimetra con tetrazolio, para esto es necesario conocer la morfologa interna de la semilla. Para la propagacin de esta especie empleando semillas completamente maduras (capsulas abiertas con frutos rojos), se tienen buenos resultados de germinacin que van del 79 al 84% cuando se emplea como medio de germinacin tierra, turba o una mezcla de tierracascarilla-turba (1:1:1), con este tipo de frutos no se hace necesario la limpieza de los mismos, pues empleando semillas con o sin arilo se tienen porcentajes de germinacin del 78 al 82%. Para la propagacin por semillas que no estn completamente maduras (capsulas cerradas con frutos color naranja), se tienen buenos resultados si se lavan los frutos para eliminar el arilo y si se emplea como medio de germinacin tierra o turba. De manera general la propagacin de esta especie no presenta inconvenientes, puesto que bajo la metodologa empleada se encontraron porcentajes bastante satisfactorios de germinacin con semillas que no necesitan tratamientos pregerminativos y empleando sustratos de uso comn como la tierra. Dada la gran cantidad de frutos que tiene una infrutescencia y los porcentajes de germinacin que se tienen la obtencin de material vegetal no representa mayor dificultad, los estudios en esta especie se deben dirigir al manejo agronmico y a la evaluacin de la influencia de factores ambientales en la produccin de la misma.
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enraizamiento in vitro. El endurecimiento se llev a cabo en turba, fertilizando con las soluciones del MS al 50% (Linero, 2006). Para R. macrocarpus y R. bogotensis la propagacin se vio favorecida mediante el empleo del MS. Durante la fase de enraizamiento se determin la interaccin positiva entre la turba, perlita y vermiculita con las sales del MS para lograr los mejores promedios en cuanto a nmero de races, igualmente el medio MS proporcion condiciones ptimas para el enraizamiento in vitro. El sustrato que mejores condiciones brind en la fase de endurecimiento fue el conformado por turba 33.3%, perlita 33.3% y vermiculita 33.3% (Prez, 2007). En R. megalococcus y C. bracteata se logr establecer una metodologa de desinfeccin que permiti el establecimiento asptico de semillas. Para la induccin de la germinacin en R. megalococcus la aplicacin de GA3 1.0 ppm BAP 1.5 ppm ANA 0.5 ppm en el medio MS aument el porcentaje de semillas germinadas. Los mayores porcentajes de germinacin en C. bracteata se consiguieron bajo el medio MS suplementado con GA3 1.0 ppm, BAP 2.0 ppm y ANA 0.5 ppm (Prez, 2008). Se logr establecer una metodologa de propagacin que permiti el crecimiento y el desarrollo segmentos nodales de estas dos especies vegetales. La efectividad de la fase de propagacin estuvo favorecida por el empleo del medio MS si fitorreguladores, por lo que se constituye como el medio ms apropiado para la multiplicacin in vitro de R. megalococcus y C. bracteata (Prez, 2008). Para Rubus glaucus el protocolo de desinfeccin de semillas es validado al emplear hipoclorito de sodio al 3% por un tiempo de 10-15 minutos. Los mayores porcentajes de germinacin en menores tiempos se alcanzaron en las semillas sembradas en el medio MS suplementado con GA3 (0.5 ppm). Para la propagacin, el medio compuesto por 1/2 MS + tiamina + Cistena 100mg/L+ Inositol 100 mg/L +BAP 1.5 mg/L + AIA 0.75 mg/L + sacarosa 30 gr/L brind las mejores respuestas relacionadas con la formacin de brotes (Pinzn, 2006). Metodologa El esquema general de trabajo que se llev a cabo para la realizacin de la fase de establecimiento in vitro de R. acanthophyllos se resume a continuacin:
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Recoleccin de material vegetal. Preparacin de soluciones stock y medios de cultivo. Siembra en los medios respectivos. Registro de datos. Interpretacin de los resultados.
1. Establecimiento de segmentos nodales y lminas foliares Como alternativa para el uso de material vegetal proveniente del campo y con el objeto de disponer de material vegetal juvenil en ptimas condiciones y de disminuir la extraccin de ramas de las poblaciones naturales de R. acanthophyllos, ya que stas son escasas, se implement una estrategia para la induccin de juvenilidad que facilitara el manejo y propagacin in vitro, a travs de la brotacin y enraizamiento de estolones (Fig. 12.1). Con los brotes generados a travs de esta alternativa se llev a cabo la metodologa de desinfeccin descrita en la figura 12.2.
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5 minutos
5. Inmersin en alcohol **
6. Inmersin en NaClO
Figura 12.2. Diseo para la estandarizacin del protocolo de desinfeccin de segmentos nodales y lminas foliares de R. acanthophyllos. * Nistatina a una concentracin de 100 000 UI/L, sometiendo los explantes durante 10 minutos. ** Alcohol al 70 %, sumergiendo el material vegetal durante un tiempo de 40 segundos.
En la tabla 12.1 se presenta un diseo con arreglo factorial de 2 x 2, del cual resultan cuatro tratamientos, con la concentracin de NaClO (3.0, 5.0 %) y el tiempo (5 y 10 minutos) como factores.
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Tabla 12.1. Tratamientos del ensayo de desinfeccin con NaClO. NaClO (%) Tiempo (Min) 5 10
3.0 T1 T3
5.0 T2 T4
Se sembraron los segmentos nodales y las lminas foliares en el medio de cultivo MS suplementado con carbn activado (2 g/L) manejando dos repeticiones por tratamiento, cada una con dos unidades experimentales. Una vez superada la etapa de desinfeccin, las lminas foliares y los segmentos nodales fueron sembrados en los siguientes tratamientos, en los que el medio MS se constituy como el factor y las concentraciones de los fitorreguladores KIN, 2,4 D, BAP y AIB (01 ppm) como niveles de los factores evaluados. Para lminas foliares: T1: MS+ KIN 0,2 ppm + 2, T2: MS+ KIN 0,2 ppm + 2, T3: MS+ KIN 0,4 ppm + 2, T4: MS+ KIN 0,4 ppm + 2, T5: MS+ KIN 0,4 ppm + 2, T6: MS+ KIN 0,4 ppm + 2, T7: MS+ KIN 0 ppm + 2, 4 T8: MS+ KIN 0 ppm + 2, 4 T9: MS+ KIN 0 ppm + 2, 4 Para segmentos nodales: T1: T2: T3: T4: T5: T6: T7: MS+ MS+ MS+ MS+ MS+ MS+ MS+ AIB AIB AIB AIB AIB AIB AIB 4 D 0,3 ppm 4 D 0,6 ppm 4 D 0 ppm 4 D 0,3 ppm 4 D 0,6 ppm 4 D 0 ppm D 0,3 ppm D 0,6 ppm D 0 ppm
0,2 ppm + BAP 0,5 ppm 0,2 ppm + BAP 1 ppm 0,2 ppm + BAP 0 ppm 0,4 ppm + BAP 0,5 ppm 0,4 ppm + BAP 1 ppm 0,4 ppm + BAP 0 ppm 0 ppm + BAP 0,5 ppm
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T8: MS+ AIB 0 ppm + BAP 1 ppm T9: MS+ AIB 0 ppm + BAP 0 ppm Se manejaron dos repeticiones por tratamiento y cada una con una unidad experimental, para un total de 18 secciones foliares y 18 segmentos nodales. Se llev a cabo el registro durante ocho semanas de las variables organognesis (secciones de hojas) y porcentaje de brotacin de las yemas presentes en los segmentos nodales. Todos los componentes del medio de cultivo fueron pesados en una balanza analtica de precisin y disueltos en agua microfiltrada. El medio de cultivo se dispens en recipientes de vidrio con una capacidad de 100 ml, adicionando a cada recipiente 20 ml del medio. El pH del medio fue ajustado a 5.8 antes de esterilizar en autoclave a 15 libras de presin por pulgada cuadrada (15lb/in2), con una temperatura de vapor aproximada de 121.5 C durante 15 minutos. Resultados En el T1 el tiempo de exposicin en NaClO fue bajo, generando altos ndices de contaminacin (100%) para ambos tipos de explantes. Con T2 las secciones de hojas presentaron una desinfeccin del 100% y ningn proceso oxidativo. La desinfeccin alcanzada con los segmentos nodales bajo ste mismo tratamiento fue del 75%, sin signos de oxidacin. Bajo el T3 y T4 se obtuvieron porcentajes de contaminacin ms bajos respectivamente uno al otro, logrndose obtener un ndices de esterilidad del 100% para ambos tipos de explantes, los cuales tampoco presentaron procesos oxidativos. En ocho semanas de evaluacin, las secciones foliares no presentaron organognesis. En los segmentos nodales sembrados en el T8 (MS+ AIB 0 ppm + BAP 1 ppm), se observa un 100% de brotacin de yemas en la sexta semana de evaluacin, seguido de los tratamientos 2 y 5 (MS+ AIB 0,2 ppm + BAP 1 ppm y MS+ AIB 0,4 ppm + BAP 1 ppm, respectivamente) en donde sta variable se present en un 50% ocho semanas despus de la siembra. Discusin La procedencia y la madurez del material vegetal son factores que intervienen en la eficacia de los esquemas de desinfeccin y de
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desarrollo morfognetico. Por tal razn, se opt por trabajar con explantes juveniles establecidos en condiciones semi-controladas de invernadero, los cuales presentan mayor respuesta en cuanto a divisin celular y asepsia (Andrade, 1991), logrando obtener una desinfeccin del 100%. Dentro de cada uno de los tres diferentes tratamientos que presentaron niveles aceptables de desinfeccin del material vegetal, no se logr evidenciar la presencia de vitrificacin en los explantes; sin embargo tratando de controlar la secrecin de fenoles y de esta manera evitar lo ms posible el maltrato y dao de tejidos por oxidacin y necrosis, se opt por utilizar para el establecimiento in vitro de los inculos el tratamiento T3, el cual contiene la menor concentracin de NaOCL y presenta uno de los mejores resultados en cuanto a desinfeccin. En lminas foliares se present latencia en las ocho semanas de evaluacin, en donde no se observ multiplicacin celular en cuanto a la aparicin de callos. En segmentos nodales se observ un efecto importante del medio de cultivo sobre el tiempo y el porcentaje de brotacin de yemas. Comparando los resultados obtenidos, realizar la siembra de ste tipo de explante en el medio MS suplementado con BAP 1 ppm, se sugiere como una metodologa eficaz para producir, en menor tiempo de evaluacin, mayores porcentajes de la variable evaluada, no siendo necesaria la aplicacin de auxinas. Bibliografa Andrade, B. 1991. Evaluacin del mtodo de produccin clonal in vitro de maracuy Passiflora edulis var. Flavicarpa. Bogot: Universidad Nacional de Colombia. Facultad de Agronoma. Guzmn, J. R. 2005. Propagacin in vitro de especies pertenecientes a las familias Rosaceae (Hesperomeles goudotiana y Rubus glaucus), Ericaceae (Macleania rupestris y Vaccinium meridionale) y Cactaceae (Opuntia ficus indica). Informe tcnico indito. Contrato 289-2005. Bogot: Jardn Botnico Jos Celestino Mutis - Subdireccin Cientfica. Linero, J. C. 2006. Desarrollar los protocolos de propagacin in vitro de tres especies andinas priorizadas y complementar, validar y propagar el protocolo de propagacin de la especie Symplocos theiformis, que se viene trabajando en el marco del proyecto Uso sostenible de los
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recursos vegetales del Distrito Capital y la regin. Informe tcnico indito. Contrato 190-2006. Bogot: Jardn Botnico Jos Celestino MutisSubdireccin Cientfica. Prez, B. A. 2007. Complementacin y validacin de dos protocolos de propagacin de especies andinas que se vienen trabajando en el marco del proyecto 318 y realizacin de dos protocolos de propagacin in vitro de dos especies andinas priorizadas y de la consolidacin de los protocolos de 6 de las especies del proyecto de uso sostenible que se han venido trabajando in vitro. Informe tcnico indito. Contrato 0902007. Bogot: Jardn Botnico Jos Celestino MutisSubdireccin Cientfica. Prez, B. A. 2008. Validacin e implementacin de dos protocolos de propagacin in vitro de especies andinas y desarrollo de las fases iniciales de protocolos de propagacin in vitro de dos nuevas especies altoandinas priorizadas en el marco del proyecto 318. Informe tcnico indito. Contrato 286-2008. Bogot: Jardn Botnico Jos Celestino Mutis Subdireccin Cientfica. Pinzn, A. 2006. Complementacin y validacin de cinco protocolos de propagacin de especies andinas que se vienen trabajando en el marco del proyecto 318 y realizacin del protocolo de propagacin in vitro para dos especies andinas priorizadas en el marco del proyecto 318. Informe tcnico indito. Contrato 314 -2006. Bogot: Jardn Botnico Jos Celestino Mutis - Subdireccin Cientfica.
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