FERRO Repetitividade: foram realizadas 20 dosagens sucessivas em duas amostras, obtendo-se os seguintes resultados:

Amostra 1 Amostra 2 Mdia (g/dL) Desvio padro Coeficiente de variao (%) 55,39 2,93 5,29 148,50 3,77 2,54

Diluio da matriz:

estudos sucessivos de diluio da

matriz mostraram que no h interferncia na sensibilidade diagnstica da presente metodologia. Substncias interferentes: amostras hemolisadas interferem decisivamente nos resultados, pois a presena de ferro nos eritrcitos provoca resultados falsamente elevados. Vidraria e gua contaminadas com ferro tambm podem gerar resultados errneos. Soros com teor de triglicrideos superior a 800mg/dL podem apresentar resultados falsamente elevados, em decorrncia da turvao secundria hiperlipidemia. Certas drogas podem interferir nos nveis de ferro (ver em limitaes do sistema). Para controle de tal interferncia, recomenda-se que o paciente seja questionado quanto ao uso de medicamentos. BIBLIOGRAFIA CONSULTADA Stookey, L.L.: Ferrozine. A new spectrophotometric reagent for iron. Anal. Chem. 42, 779 - 781, 1970. Ceriotti, LF e Ceriotti, G.: Improved direct specific determination of serum iron and total ironbinding capacity.

FERRO
FINALIDADE Sistema colorimtrico para determinao do ferro srico. Somente para uso diagnstico in vitro. PRINCPIO Em pH cido, frente a um agente redutor, o ferro srico liberado da transferrina sob a forma de on ferroso. Nestas condies, reage com a ferrozina formando cor magenta de absoro mxima em 560nm. METODOLOGIA Goodwin modificado. REAGENTES Soluo redutora: a soluo redutora apresenta a seguinte composio por litro: Cloreto de Hidroxilamina 0,36M , Glicina 0,1M, Tiosemicarbazida 0,014M e t-Octilfenoxipolietoxietanol 0,5mmol com pH 2,2 +/- 0,1. Ferrozina: soluo 0,0095molar de 3-(2-Piridil)-5-6-bis (4- cido Fenil Sulfnico)-1,2,4, Triazina, sal monossdico. Soluo padro 200 g/dL: soluo aquosa contendo 200g/dL de ferro. Reagente A: soluo aquosa contendo 5mg/L de ferro. Carbonato de Magnsio: cada cpsula contm de 75 a 85mg de Carbonato de Magnsio. APRESENTAO Soluo redutora Ferrozina Soluo padro 200g/dL Reagente A Carbonato de Magnsio NMERO DE TESTES 45 testes

BIOQUMICA CLNICA Reagente A: armazenar temperatura de 2-8oC. Estvel at a data de vencimento indicada no rtulo do frasco, obedecidas as condies de armazenamento.
Carbonato de Magnsio: armazenar temperatura de (230oC). Estvel at a data de vencimento indicada no rtulo do frasco, obedecidas as condies de armazenamento.

Reprodutibilidade: foram realizadas 20 dosagens, durante 20 dias consecutivos, em duas amostras, obtendo-se os seguintes resultados: Amostra 1 Amostra 2 Mdia (g/dL) Desvio padro Coeficiente de variao (%) 70,02 4,05 5,78 160,97 4,19 2,60

CUIDADOS E PRECAUES COM O USO DOS REAGENTES Todos os reagentes so somente para uso diagnstico in vitro. Seu manuseio deve ser cuidadoso, evitando-se contato com pele e mucosas. Em caso de contaminao acidental, lavar a rea afetada em gua corrente. O descarte do material utilizado dever ser feito obedecendose aos critrios de biossegurana estabelecidos pelo laboratrio, de acordo com as normas locais, estaduais ou federais. Observar a simbologia constante nos rtulos do produto:

CAPACIDADE DE FIXAO DO FERRO Repetitividade: foram realizadas 20 dosagens sucessivas em uma amostra, obtendo-se os seguintes resultados: Mdia (g/dL) Desvio padro Coeficiente de variao (%) Amostra 261,55 13,95 5,33

Clin. Chem. 26/2, 327 - 331 , 1980. Goodwin, J., Murphy, B., Guiliemette, M.: Clin. Chem., 12:47, 1966. Kaplan L.A., Pesce A. J.: Qumica Clnica, 1266-1269, 1990. Tietz N. W.: Clinical Guide To Laboratory Tests, 2edio, 340-344, 1990. Tibrcio, H.M.: Controle Interno da Qualidade Analtica, 1aed. maro/1995. Doles: dados de arquivo TERMOS E CONDIES DE GARANTIA DA QUALIDADE DO PRODUTO As garantias do fabricante ao consumidor seguem estritamente as relacionadas na Lei no 8.078, de 11 de setembro de 1.990 - Cdigo de Defesa do Consumidor. Os reagentes que compem este sistema para diagnstico so Amostra 280,05 15,38 Doles Reagentes e Equipamentos para Laboratrios Ltda CNPJ: 01.085.513/0001-05 Rodovia BR 153, Km 493, Lt.07 Chcara Retiro, Conjunto Palmares. CEP: 74775-027 Goinia - GO - Brasil e-mail: doles@doles.com.br M.S.: n 10231810049 Reviso: 14 (03/2011) garantidos na sua performance, reprodutibilidade e qualidade at a data de vencimento. Todos os produtos que apresentarem problemas tcnicos comprovados sero substitudos, sem nus para o consumidor.

Irritante

Reprodutibilidade: foram realizadas 20 dosagens, durante 20 dias consecutivos, em uma amostra, obtendo-se os seguintes resultados: Mdia (g/dL) Desvio padro

1 1 1 1 7

x 70 mL x 9 mL x 6 mL x 12 mL cpsulas

AMOSTRA Soro (sem hemlise) coletado em jejum. No utilizar plasma, nem amostra lipmica. O ferro permanece estvel no soro por 4 dias entre 20-30oC, ou 7 dias entre 2-8oC. Todas as amostras biolgicas devem ser consideradas como potencialmente infectantes. PROCEDIMENTO TCNICO Ferro Srico Rotular 3 cubetas do fotocolormetro de B (branco), T (teste) e P (padro). Proceder como segue: Soluo redutora gua deionizada Soro Soluo padro

500L de soro

Coeficiente de variao (%) 5,49 Especificidade: a presente metodologia especfica para determinao do ferro srico e da capacidade de fixao total do ferro. A Tiosemicarbazida forma um complexo com os ons cobre, impedindo a interferncia dos mesmos na reao corada formada com on ferroso. A reao se desenvolve a 2,2 de pH, distante do ponto isoeltrico das protenas, no ocorrendo a turvao. Sensibilidade: a absorvncia encontrada, de 0,015, corresponde a 10g/dL de concentrao de Ferro, quando os testes so realizados em espectrofotmetro, a 560nm. A sensibilidade do sistema est diretamente relacionada com a do aparelho utilizado no laboratrio.

EQUIPAMENTOS E MATERIAIS NECESSRIOS NO FORNECIDOS Espectrofotmetro ou fotocolormetro capaz de medir a absorvncia em 560nm ou filtro verde. Tubos de ensaio. gua deionizada. Cronmetro. Banho maria (37oC). Centrfuga. Tubos de centrfuga. Pipetas graduadas. Pipeta semiautomtica 500L. ARMAZENAMENTO E ESTABILIDADE DOS REAGENTES Soluo redutora: armazenar temperatura de 2-8oC. Estvel at a data de vencimento indicada no rtulo do frasco, obedecidas as condies de armazenamento. Ferrozina: armazenar temperatura de 2-8oC. Estvel at a data de vencimento indicada no rtulo do frasco, obedecidas as condies de armazenamento. Soluo padro 200g/dL: armazenar temperatura de 2-8oC. Estvel at a data de vencimento indicada no rtulo do frasco, obedecidas as condies de armazenamento.

B 1,5 mL 500L - -

1,5 mL 1,5 mL - 500L - 500L

Homogeneizar. Ler a absorvncia de T, zerando o aparelho com gua destilada em 560nm ou filtro verde. Anotar a densidade tica identificada como T1. Ferrozina 4 gotas 4 gotas 4 gotas

Homogeneizar e incubar por 10 minutos em banho maria a 37oC. Determinar as absorvncias de T (teste) e P (padro) zerando o aparelho com o B (branco), em 560nm ou filtro verde. A absorvncia do teste (T) ser identificada como T2.

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CLCULOS T2 - T1 Ferro srico g/dL = absorvncia de P Exemplo: T1: 0,207 T2: 0,368 P: 0,232

x 200

O kit de Ferro Doles possui padro no intervalo de linearidade da metodologia adotada. O laboratrio deve realizar o ensaio com o padro que acompanha o kit e calcular seu fator de calibrao (F) de acordo com o exemplo estabelecido nos clculos. O fator dever ser refeito periodicamente e a cada lote do produto. Os padres utilizados na montagem da curva de calibrao foram ajustados contra Iron Standard Set, cod.565-11, Sigma Chemical Company.

CLCULOS

No teste colorimtrico utiliza-se 500L do sobrenadante da etapa anterior. Esse material contm 500/1500 do volume de soro, ou seja, 1/3 do volume original. Dessa forma, os clculos para CFTF podem ser simplificados:

0,368 - 0,207 Ferro srico g/dL = 0,232

x 200 = 139

CAPACIDADE DE FIXAO TOTAL DO FERRO

Como a reao corada segue estritamente a lei de Beer, basta a determinao de um fator (F) para clculo dos resultados. 200 absorvncia de P

Fator F =

Para obteno do fator (F), recomenda-se dosar em triplicata o padro, ler as absorvncias e tirar a mdia aritmtica das mesmas. Exemplo: P= 0,232; 0,234; 0,231 0,232 + 0,234 + 0,231 3 = 862

A transferrina uma protena ( globulina) transportadora de ferro na qual esto parcialmente bloqueados os stios fixadores desse elemento. A incubao de soro com soluo de ferro em excesso promove a saturao de todos stios ligadores de ferro na transferrina. a chamada capacidade de ligao ou fixao total do ferro (CFTF). A mistura soro/soluo de ferro (Reagente A) contm, aps saturao dos stios de ligao, excesso de ferro em soluo. Tratando-se a mistura com Carbonato de Magnsio (em p), o ferro em soluo, no fixado pela transferrina, adsorvido pelo sal. Dosa-se ento todo ferro ligado transferrina, obtendo-se a capacidade de fixao total do ferro. Procedimento tcnico: identificar os tubos como T (teste) e proceder como segue:

(T2 - T1) C.F.T.F. = absorvncia P Exemplo: Leituras: T1: 0,020 T2: 0,141 P: 0,232 (0,141 - 0,020)

(T2 - T1) x 200 x 3 = absorvncia P

X 600

C.F.T.F. =

0,232

x 600 = 313

SIGNIFICADO CLNICO O ferro essencial para a maioria dos organismos vivos, participando de grande nmero de processos vitais. A anemia por perda de ferro representa um dos transtornos orgnicos mais frequentes encontrados na clnica mdica. A diminuio do ferro srico pode ocorrer nas grandes hemorragias, na gestao, na menstruao, nas neoplasias, nas doenas do colgeno em atividade e nas infeces. O aumento do ferro srico ocorre por diversas causas, entre as quais: tratamento com ferro, transfuso macia de sangue, uso de drogas mielossupressivas, neoplasia da medula ssea, uso de anovulatrios, anemia hemoltica e perniciosa, anemia aplstica, hepatite aguda e molstias crnicas do fgado (ver quadro abaixo). Capacidade de fixao total do ferro Em nosso organismo, o ferro circula como Fe (III), unido a uma protena transportadora especfica: a transferrina. A funo dessa protena captar o ferro do stio de absoro e lev-lo para os orgos hematopticos. A atividade fisiolgica da transferrina pode ser determinada atravs da capacidade total de fixao do ferro (CFTF). Em geral, a CFTF encontra-se aumentada nas anemias ps-hemorrgicas e ferroprivas, assim como no uso de anovulatrios e no aumento da liberao de ferritina srica. Sua diminuio est ligada a disproteinemias, hepatopatias crnicas, hemocromatose e deficincia de ferritina. A transferrina (TRF) pode ser dosada por mtodos imunolgicos. As metodologias por nefelometria so as mais utilizadas. Pode-se quantificar a transferrina utilizando-se a seguinte frmula: TRF = 0,70 x CFTF g/dL Com a utilizao dessa frmula, observamos uma hiperestimao da transferrina, em valores que variam entre 12 e 17%, mas os resultados so perfeitamente aplicveis para fins clnicos. TRF - valores de referncia (nefelometria) Recm nato 130 - 275g/dL Adultos 220 - 400g/dL
Doenas Deficincia de ferro (no complicada) Anemia secundria a doenas crnicas Anemia hemolitica Anemias sideroblsticas Hemocromatose Hipoproteinemias Hepatopatias N ou N ou N ou N ou N ou Lig. N ou Var. ou N ou Var. ou Ferro Srico CFTF IST N ou N ou N ou N ou N ou Lig. N ou Transferrina

A capacidade de fixao total do ferro representa a soma do ferro srico com a capacidade latente de fixao do ferro. CFTF = ferro srico + CLFF. A quantidade de ferro que a transferrina pode absorver para se tornar saturada denomina-se capacidade latente de fixao ou ligao do ferro (CLFF). O ndice de saturao da transferrina (IST) a relao entre ferro srico e capacidade total de ligao do ferro. Ferro srico IST (%) = C.F.T.F.

x 100

EXPRESSO DOS RESULTADOS EM UNIDADES SISTEMA INTERNACIONAL (S.I.) (mmol/L) = (g/dL) x 0,179 LIMITAES DO SISTEMA Para se obter timo desempenho do sistema, necessrio que o procedimento tcnico seja rigorosamente seguido conforme a instrues de uso. Qualquer alterao poder levar a resultados errneos. A utilizao de gua contaminada por ferro aumentar a intensidade da cor do branco, levando a resultados falsamente baixos. Algumas drogas elevam os nveis de ferro srico. Entre elas podemos citar: cloranfenicol, estrgenos, etanol, metotrexate e anovulatrios. Outras drogas diminuem os nveis de ferro srico: alopurinol, anablitos esteroides, aspirina (em altas doses), cortisona e corticotropin. Para aparelhos que exijam um volume maior do que 2mL para leitura, os volumes de reagente e soro podem ser aumentados proporcionalmente. CONTROLE DA QUALIDADE DO SISTEMA 1.A limpeza e a secagem adequada do material a ser utilizado so de fundamental importncia para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. 2.Toda a vidraria deve ser previamente lavada em mistura sulfocrmica ou cido Clordrico a 15%. Enxaguar em gua deionizada. 3.Colunas deionizadoras saturadas liberam ons diversos, aminas e agentes oxidantes, que deterioram os reagentes. 4.As pipetagens devem ser precisas. 5.O nvel da gua do banho maria deve ser superior ao nvel dos reagentes nos tubos de ensaio e a temperatura de 37oC rigorosamente observada. 6.O uso de soro controle de referncia deve ser uma prtica rotineira do laboratrio. Recomenda-se utilizar um soro controle com valor na faixa de normalidade (soro controle N - Doles) e outro soro controle de valor elevado (soro controle P - Doles). VALORES DE REFERNCIA Recomenda-se que cada laboratrio estabelea sua prpria faixa de valores de referncia na populao atendida. Como orientao, sugerimos os seguintes valores:
Ferro srico Capacidade de fixao total do ferro (CFTF) Capacidade latente de fixao do ferro (CLFF) ndice de saturao da transferrina (IST)

Mdia aritmtica = 200 0,232

= 0,232

Soro

T 500L 1mL

Fator (F) =

Reagente A

Ferro srico g/dL = (T2 - T1) x fator (F) Ferro srico g/dL= (0,368 - 0,207 ) x 862 = 139

Homogeneizar durante 5 minutos Carbonato de Magnsio Adicionar o contedo de 1 cpsula Agitar intensamente e deixar em repouso durante 10 minutos. Centrifugar por 10 minutos a 3.000 r.p.m. Separar o sobrenadante.
Padro Absorvncia Conc. (cg/dL)

CURVA DE CALIBRAO

Colorimetria: rotular 3 cubetas do fotocolormetro de B (branco), T (teste) e P (padro).

(cg/dL)

1 2 3 4 5 6 7

0.000 0.058 0.115 0.230 0.460 0.690 0.790

0 50 100 200 400 600 800

Proceder como segue:

Soluo redutora gua deionizada Sobrenadante etapa anterior Soluo padro B 1,5 mL 500L - T 1,5 mL 500L P 1,5 mL 500L

Obs.: No utilizar esta curva para determinar o resultado de seu ensaio. A curva de calibrao a representao grfica da relao entre os valores das absorvncias com os valores das concentraes de um conjunto de solues padro. A curva de calibrao demonstra a linearidade da reao at uma determinada concentrao, na qual pode ser determinado um fator de calibrao (F), de acordo com a Lei de Beer. A reao linear at a concentrao de 600 g/dL (ver curva acima). Valores acima de 600 g/dL diluir a amostra com soluo fisiolgica e proceder a nova dosagem. Multiplicar o valor encontrado pelo fator de diluio.

Homogeneizar. Ler a absorvncia de T zerando o aparelho com gua destilada em 560nm ou filtro verde. Anotar a densidade tica identificada como T1.
Ferrozina 4 gotas 4 gotas 4 gotas

CARACTERSTICAS DE DESEMPENHO FERRO O ferro foi dosado em 38 soros com teor de ferro srico situado no intervalo de 50 a 193g/dL. A comparao do kit de Ferro Doles (Y) com um mtodo de referncia (X) deu origem seguinte equao de regresso linear: Y=0,34X - 2,68, sendo o coeficiente de correlao 0,99. A recuperao de ferro foi de 99 3% em soros cujos teores de ferro oscilaram entre 52 e 158g/dL e aos quais se adicionou on ferrico correspondente a uma concentrao de 50g/100mL de soro. CAPACIDADE DE FIXAO TOTAL DO FERRO Foram realizados testes em 40 amostras cujo nvel de capacidade de fixao total do ferro (CFTF) oscilava entre 169 e 320g/dL. A comparao do kit de Ferro Doles (Y) com um mtodo de referncia (X) deu origem seguinte equao de regresso linear: Y= 30,20 + 0,87X, sendo o

Homogeneizar, e incubar por 10 minutos em banho maria a 37oC e determinar as absorvncias de T (teste) e P (padro), zerando o aparelho com B (branco), em 560nm ou filtro verde. A absorvncia do teste (T) ser identificada como T2.

60 - 160 g/dL 240 - 410 g/dL 140 - 280 g/dL 20 - 45%

coeficiente de correlao 0,90.

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