Tema 6. ENZIMAS. Clasificacin. Principios de la catlisis enzimtica. Energa de activacin. Velocidad de reaccin y equilibrio de reaccin.

Cintica enzimtica: ecuacin de MichaelisMenten. Ecuacin de los dobles recprocos. Inhibicin enzimtica. Tipos de inhibicin. Mecanismos de regulacin de la actividad enzimtica: alosterismo, modificacin covalente, proenzimas. Isoenzimas

BIOQUMICA-1 de Medicina Dpto. Biologa Molecular Jess Navas

ENZIMAS
Catalizadores de las reacciones biolgicas. La mayora son protenas aunque hay molculas de RNA con actividad cataltica (ribozimas) Gran poder cataltico Alto grado de especificidad Actan en soluciones acuosas a 37C y pH neutro Su actividad puede regularse El 25% de los genes humanos codifican enzimas que catalizan reacciones metablicas.
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( Lehninger Principles of Biochemistry 3th.ed. Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.) TEMA 6

IMPORTANCIA DE LOS ENZIMAS

Cada paso de una va metablica est catalizado por un enzima. La medida de la actividad enzimtica en fluidos biolgicos o tejidos es importante para el diagnstico de muchas enfermedades. Muchas frmacos son inhibidores de la actividad enzimtica Importancia en la industria de alimentacin y agricultura.
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TEMA 6

ENZIMAS: RESEA HISTORICA

Primera descripcin (finales del siglo XVIII) 1850. Estudios de Pasteur 1897. Buchner 1926. Summer cristaliza la ureasa Segunda mitad del siglo XX: se purifican y caracterizan millares de enzimas, lo que ha permitido conocer su mecanismo de accin.
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Enzimas. Definiciones: - Cofactor: necesario para la actividad enzimtica. Pueden ser iones metlicos o una molcula orgnica, denominada coenzima. Si el cofactor est unido fuertemente al enzima se denomina grupo prosttico. - Apoenzima: parte proteica del enzima (no activa) - Holoenzima: apoenzima + cofactor Nomenclatura de los enzimas: SUSTRATO + TIPO DE REACCION + ASA
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Un tercio de los enzimas requieren algn in metlico para catalizar

( Lehninger Principles of Biochemistry 3th.ed. Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)33 TEMA 6

TEMA 6

Muchas vitaminas son cofactores o precursores de cofactores de enzimas

( Lehninger Principles of Biochemistry 3th.ed. Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.) TEMA 6

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CLASES DE ENZIMAS

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Los enzimas aceleran las reacciones disminuyendo la energa de activacin

E + S = ES = E + P
( Lehninger Principles of Biochemistry 3th.ed. Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.) TEMA 6

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Los enzimas son estereoespecficas porque forman varias interacciones entre aminocidos del centro activo y los distintos grupos del sustrato

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(Bioqumica, Mathews and van Holde McGraw-Hill, 1998) 13

El centro activo de los enzimas es complementario al estado de transicin de la reaccin catalizada

Progreso de la reaccin
TEMA 6 ( Lehninger Principles of Biochemistry 3th.ed. Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)

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Encaje inducido

Cambio conformacional inducido por glucosa en la hexoquinasa (Hexoquinasa = ATP:glucosa fosfotransferasa = 2.7.1.1 )

D-Glucosa
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15 ( Lehninger Principles of Biochemistry 3th.ed. Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)

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La Vmax se alcanza cuando todos los centros activos estn ocupados con sustrato

1/2 Vmax

Velocidad inicial

Vmax (S)

Km + (S)
Km
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=Vo

Concentracin de sustrato [S]

("Biochemistry" 2nd ed. Garrett, R.H. and Grisham, 17 C.M. Saunders College Publishing. 1999.)

Relacin entre Vo y [E]

Vo

[E]
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La velocidad inicial es funcin lineal de la concentracin de enzima siempre que la concentracin de sustrato sea alta

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Ecuacin de Michaelis-Menten
Vo =

Vmax (S) Km + (S)

K1 K2

E+S
K-1

ES

Km =
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K2 + K-1 K1
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La Vmax se alcanza cuando todos los centros activos estn ocupados con sustrato

1/2 Vmax

Velocidad inicial

Km

Concentracin de sustrato [S]

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("Biochemistry" 2nd ed. Garrett, R.H. and Grisham, C.M. Saunders College Publishing. 1999.) 20

Calculo de Km y Vmax por la representacin de Lineweaver-Burk

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("Biochemistry" 2nd ed. Garrett, R.H. and Grisham, C.M. Saunders College Publishing. 1999.)

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Parmetros enzimticos
1. Km (constante para cada enzima) = concentracin de S a la que la Vo es 1/2 Vmax. Es una medida de la afinidad del enzima por S. Cuanto menor es Km, mayor es la afinidad del enzima por S 2. Kcat (constante para cada enzima) = nmero de recambio = nmero de molculas de sustrato convertidas en producto por molcula de enzima y unidad de tiempo, en condiciones de saturacin de sustrato. 3. Vmax = velocidad mxima terica = la velocidad cuando todos los centros activos estn ocupados con sustrato (nunca alcanzada en la realidad) 4. Unidad de enzima = cantidad de enzima que transforma 1 mol de sustrato por min = una forma comn de expresar la velocidad 5. Actividad especfica = unidades por mg de protena total de la preparacin enzimtica. En el caso de enzimas en suero: unidades/L
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TEMA 6

23 ( Lehninger Principles of Biochemistry 3th.ed. Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)

Inhibicin competitiva + Inhibidor

Unin del Inhibidor al centro activo, compitiendo con S Aumenta Km No cambia Vmax

Sustrato

Inhibidor competitivo

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(Adaptado de: Lehninger Principles of Biochemistry 3th.ed. Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)

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Inhibicin no competitiva

+ Inhibidor

Unin del Inhibidor a un sitio del enzima distinto del centro activo: no compite con S No cambia Km Disminuye Vmax
Sustrato

Inhibidor Sustrato no competitivo

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(Adaptado de: Lehninger Principles of Biochemistry 3th.ed. Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)

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Inhibicin acompetitiva + Inhibidor

Unin del Inhibidor a enzima-S, estabilizando el complejo enzima-S pero impidiendo la formacin de producto: Disminuye Km Disminuye Vmax Inhibidor acompetitivo

Sustrato

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(Adaptado de: Lehninger Principles of Biochemistry 3th.ed. Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)

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Sustrato

Inhibidor competitivo

Sustrato Inhibidor no competitivo

Sustrato

Inhibidor acompetitivo

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27 ("Biochemistry" 5th ed. Berg, Tymoczko and Stryer. Freeman and Co. 2002)

INHIBICION COMPETITIVA

INHIBICION NO COMPETITIVA

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Efecto del pH sobre la actividad enzimtica

(Garret and Grisham)

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MECANISMOS DE REGULACIN ENZIMTICA

Regulacin de la cantidad de enzima presente en las clulas Inhibicin reversible por productos Interaccin con moduladores (protenas u otros) - Activacion/inhibicin alostrica - El modulador alostrico se une a un sitio distinto del centro activo - La unin del modulador es reversible e implica cambio conformacional - Suelen ser enzimas multimricas - Tienen cintica sigmoidea - Modificacin covalente: - fosforilacin - ADP-ribosilacin - metilacin
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Activacin proteoltica de pro-enzimas

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Efectos alostricos de moduladores positivo y negativo

+ Modulador alostrico positivo: favorece la forma R

El sustrato es modulador positivo

+ Modulador alostrico negativo: favorece la forma T

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31 ( Lehninger Principles of Biochemistry 3th.ed. Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)

Activacin/inactivacin de enzimas por fosforilacin

Ejemplo: glucgeno fosforilasa

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( Lehninger Principles of Biochemistry 3th.ed. 32 Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)

Una enzima puede tener varios mecanismos de regulacin

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33 ("Biochemistry" 2nd ed. Garrett, R.H. and Grisham, C.M. Saunders College Publishing. 1999.)

Activacin de proenzimas por proteolisis

Auto-activacin de quimotripsina
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34 ( Lehninger Principles of Biochemistry 3th.ed. Nelson, DL and Cox, M.M. Worth Publishers, 2000.)