Red de Revistas Cientficas de Amrica Latina, el Caribe, Espaa y Portugal

Sistema de Informacin Cientfica

Ricardo Heliodoro Gil-Horn, Rosa Mara Domnguez-Espinosa, Juan Daniel Pacho-Carrillo Bioproduccin de cido lctico a partir de residuos de cscara de naranja: Procesos de separacin y purificacin Tecnologa, Ciencia, Educacin, vol. 23, nm. 2, julio-diciembre, 2008, pp. 79-90, Instituto Mexicano de Ingenieros Qumicos Mxico
Disponible en: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=48223207

Tecnologa, Ciencia, Educacin, ISSN (Versin impresa): 0186-6036 imiqac@sercom.com.mx Instituto Mexicano de Ingenieros Qumicos Mxico

Cmo citar?

Fascculo completo

Ms informacin del artculo

Pgina de la revista

www.redalyc.org
Proyecto acadmico sin fines de lucro, desarrollado bajo la iniciativa de acceso abierto

Tecnol. Tecnol.Ciencia Ciencia Tecnol. Ed. Ed. Ciencia (IMIQ) (IMIQ) Ed. vol. vol.14 (IMIQ) 23 nms.1-2,1999 nm. 23(2): 2, 2008 79-90, 2008 79 79

Bioproduccin de cido lctico a partir de residuos de cscara de naranja: Procesos de separacin y purificacin Lactic acid bioproduction from orange rind: Separation and purification processes
Ricardo Heliodoro Gil-Horn*1, Rosa Mara Domnguez-Espinosa2, Juan Daniel Pacho-Carrillo2
1UNAM,

Facultad de Qumica, 2Consultores independientes Correo-e (e-mail): gilhoran@gmail.com

ABSTRACT The social awareness of the process industry environmental impact has resulted in tougher regulations and new fiscal policies that aim to encourage the chemical industry to adopt new production practices to reduce its environmental impact. For this reason, the use of agricultural waste as low cost raw materials for fine chemicals production through biotransformation has attracted much interest. This option of transforming waste into raw materials appears as an attractive development path. It helps to reduce dependency on oil as raw material and also offers a way to obtain compounds that are uneconomical to produce by traditional chemical synthesis. Mexico South East area is a main citric production zone where a large volume of solid waste in the form of peel and bagasse is generated. This waste comes from orange juice factories and it is normally sent to landfills or open air dumps where they represent an important pollution source. This waste can be used to produce high added value chemicals such as L(+) lactic acid. This product is demanded in the food, pharmaceutical, and personal care industries or for the production of biodegradable plastics and organic synthesis. This research deals with a process for the production of lactic acid through solid phase bioconversion of orange peel and bagasse using Rhizopus oryzae. The product complies with the Food Chemical Codex (FCC) regulations. Three different techniques were evaluated for the separation of liquids and solids (mechanical pressing, centrifugation and vacuum filtration), determining the maximum water contents to carry out the lactic acid extraction from the biotransformed solid. The feasibility of using ion exchange to remove impurities was also evaluated. For the recovery of lactic acid, two processes were tested as possible routes for secondary separation and concentration: (a) Esterification with 1-butanol, and (b) Evaporative crystallization of calcium sulfate salts. Based on the experimental results, a flow sheet was created to carry out theoretical mass and energy balances using the computer program SuperPro Designer 6.0, supported which the packages Aspen Plus and Aspen Split 11.1, to estimate physical and thermodynamic properties and to carry out detailed phase equilibrium calculations in process units. Based on the simulation, a processing plant with capacity of 400 ton/year of orange peel and bagasse with 12% w/w moisture was identified as suitable for the transformation of the wastea from a medium size juice factory into a production plant for 5.5 ton/year of 14% w/w lactic acid.

RESUMEN El inters social por la conservacin del medio ambiente ha resultado en el endurecimiento de legislaciones ambientales y cambios de poltica fiscal que buscan impulsar a la industria qumica y reducir su impacto ambiental. Por tal motivo, la utilizacin de residuos agroindustriales como materia prima de bajo costo, para la obtencin de productos qumicos finos por biotransformacin est ganando inters. Esta opcin de transformar desechos en nuevas materias primas se perfila como una opcin atractiva para reducir la dependencia del petrleo y, al mismo tiempo, obtener compuestos que son econmica o tcnicamente inviables de obtener por sntesis qumica tradicional. El sureste de Mxico es una de las principales regiones productoras de ctricos del pas, donde se genera un gran volumen de desechos slidos de ctricos (cscara y bagazo). Este desecho proviene de la obtencin de jugo de naranja dulce y, normalmente, se manda a tiraderos a suelo abierto, por lo que generan un problema serio de contaminacin. Esta situacin hace deseable su aprovechamiento para la generacin de productos de alto valor agregado como es el cido L(+) lctico, el cual es utilizado en la industria alimentaria, farmacutica y cosmtica y como materia prima para la sntesis orgnica o la produccin de plsticos biodegradables. En esta investigacin se propone un proceso para la obtencin de cido lctico a partir de la biotransformacin de cscara y bagazo de naranja en fase slida con Rhizopus oryzae. Como producto se obtiene un concentrado que cumple con el estndar del Cdigo Qumico de Alimentos (FCC, Food Chemical Codex) en grado alimenticio. Se evaluaron tres tcnicas de separacin slido-lquido (prensado mecnico, centrifugacin y filtracin al vaco), al mismo tiempo que se determin la mxima cantidad necesaria de agua para llevar a cabo la extraccin del cido lctico presente en el slido biotransformado. Posteriormente, se evalu la viabilidad tcnica de utilizar operaciones de intercambio inico como pasos intermedios para la reduccin de impurezas. Asimismo, se evaluaron y compararon dos procesos: (a) Esterificacin del cido lctico con 1-butanol y (b) Cristalizacin evaporativa de sales de sulfato de calcio, como posibles rutas de separacin secundaria y concentracin. Los resultados experimentales permitieron generar una hoja de proceso para llevar a cabo balances de materia y energa tericos usando el programa SuperPro Designer 6.0, apoyndose con los paquetes Aspen Plus y Aspen Split 11.1 para la estimacin de propiedades fsicas y termodinmicas, as como del equilibrio de fases en las diferentes unidades del proceso. Dicha simulacin permiti identificar que una planta con capacidad de procesamiento de 400 ton/ao de cscara de naranja con 12% p/p de humedad puede transformar los desechos de una planta de jugo de tamao medio con una produccin de 5.5 ton/ao de solucin de cido lctico al 36% en masa. *Autor a quien debe enviarse la correspondencia (Recibido: Octubre 8, 2008, Aceptado: Diciembre 3, 2008)

Palabras clave: cido lctico, biotransformacin slida, Rhizopus oryzae, diseo conceptual, simulacin emprica Key words: Lactic acid, solid biotransformation, Rhizopus oryzae, conceptual design, empiric

80 Tecnol. Ciencia Ed. (IMIQ) vol. 23 nm. 2, 2008

INTRODUCCIN

ctualmente, la utilizacin de residuos agroindustriales, como materia prima de bajo costo, en procesos biotecnolgicos para la obtencin de productos qumicos finos, se perfila como una opcin atractiva para reducir la dependencia del petrleo y, al mismo tiempo, obtener nuevos compuestos que son econmica o tcnicamente inviables de obtener por sntesis qumica. El sureste de Mxico es una de las principales regiones productoras de ctricos del pas y ah se genera un gran volumen de desechos slidos (cscara y bagazo), producto de la obtencin de jugo de naranja dulce, siendo deseable su aprovechamiento para la produccin de productos de alto valor agregado y la eliminacin de una fuente de contaminacin importante. Actualmente, existen varios estudios encaminados al aprovechamiento de la fraccin slida de la naranja, como substrato de biorreaccin en fase slida para la produccin a bajo costo de cidos orgnicos, particularmente cido L(+) lctico. cido lctico El cido lctico es el hidroxicido ms sencillo que existe. Su molcula contiene un tomo de carbono asimtrico. Presenta isomera ptica: L(+) o D(-), aunque es ms comn encontrarlo como mezcla racmica. Est presente en alimentos como yogurt, suero de leche, panes, queso y muchos otros alimentos fermentados (Menndez-Gonzlez, 1999) y es uno de los principales intermediarios metablicos en la mayora de los organismos vivos, desde procariotas anaerobios hasta humanos. El cido lctico es ampliamente utilizado en las industrias alimentaria, mdica, farmacutica y cosmtica, como materia prima para sntesis orgnica, como purgante en forma de lactato de calcio o lactato de magnesio, como removedor de sales de calcio, en el curtido de pieles, en la produccin de plsticos biodegradables, agroqumicos, etc. En soluciones acuosas, el cido lctico no ionizado existe en equilibrio con los aniones lactato y los iones hidrgeno (Kulprathipanja y Oroskar, 1991). Es fuertemente higroscpico y la presencia de dos grupos funcionales en su estructura (-OH, -COOH) lo hace formar, espontneamente, dmeros y polmeros de cido lctico (Bello-Gil, 2007). Es soluble en ter, miscible con agua y alcohol e insoluble en cloroformo, ter del petrleo y disulfuro de carbono. Sus dos grupos funcionales permiten llevar a cabo diferentes reacciones qumicas de oxidacin, reduccin, condensacin y substitucin del grupo alcohol (Vaidya y col., 2005).

En cuanto a las reacciones de condensacin, las ms importantes, por los altos rendimientos de producto, son: Esterificacin, deshidratacin y aminlisis (KirkOthmer, 2001). El cido lctico puede producirse por biotransformacin (biorreaccin) o sntesis qumica. Normalmente, la sntesis qumica requiere de caros y complejos procedimientos de obtencin y separacin para lograr la pureza deseada del producto final, as como costos significativos asociados con la disposicin de los desechos (Yin y col., 1997). La produccin de cido lctico se ha incrementado en pocas recientes, llegando a alcanzar en el ao 2002 una produccin mundial de 100,000 ton/ao en los sectores farmacutico, cosmtico y qumico (Purac, 2002). Esta demanda ha venido aumentando con un incremento del 5 al 8% anual, especialmente debido al desarrollo de los polilactatos (PLA), por lo que hoy en da solamente el cido L(+) lctico es el de mayor importancia comercial. Produccin por sntesis qumica La sntesis qumica comercial (Figura 1) se lleva a cabo con la reaccin en fase lquida y a presin atmosfrica de cianuro de hidrgeno y acetaldehdo, catalizada por una base, para formar lactonitrilo, el cual es recuperado por destilacin e hidrolizado a cido lctico utilizando HCl o H2SO4 concentrado para producir cido lctico crudo y sal de amonio. El cido lctico crudo es esterificado con metanol, produciendo lactato de metilo, para luego ser recuperado y purificado por destilacin e hidrolizado con agua bajo un catalizador cido para producir cido lctico puro y reciclar el metanol. Este producto es un

Figura 1. Secuencia de produccin de cido lctico por sntesis qumica

Tecnol. Ciencia Ed. (IMIQ) vol. 23 nm. 2, 2008 81

lquido incoloro, estable al calor. La principal desventaja que presenta este mtodo es la obtencin de mezclas racmicas de cido D(-) y L(+) lctico (Kirk-Othmer, 2001; Yin y col., 1997). Produccin por biotransformacin1 Otras de las vas para producir cido lctico es mediante la biotransformacin de substratos carbonosos complejos. La forma ms rentable de obtener el ismero L (+) es por medio de la gluclisis (transformacin de carbohidratos o hidratos de carbono a cidos). La estereo-especificidad deseada del producto depende del uso previsto; sin embargo, el ismero L(+) del cido lctico es utilizado para la mayora de las aplicaciones (Skory, 2000; Vaidya y col., 2005). Las reacciones estequiomtricas 1 a 4 son algunas de las involucradas en la biorreaccin (Figura 2). Durante estas reacciones el pH disminuye bruscamente, por lo que para mantenerlo cercano a la neutralidad se adicionan lcalis como: Hidrxidos, carbonatos y bicarbonatos, lo cual aumenta el contenido inico en el medio biolgico. Esto es necesario porque a valores de pH cidos disminuye la viabilidad y el desarrollo de la mayora de los microorganismos y, por tanto, disminuye el rendimiento de cido lctico. La
Biorreaccin Dextrosa o glucosa

mayora de los procesos utilizan carbonato de calcio para mantener el pH entre 5.5 y 6.5 mediante la formacin de una sal de lactato. Despus de la biorreaccin, el medio (el cual contiene sales de lactato) se filtra para remover la biomasa, se trata con carbn activado, se evapora y, finalmente, se acidifica con H2SO4 para convertir la sal en cido lctico y sulfato de calcio insoluble, el cual es removido por filtracin. El cido lctico reconstituido se pasa entonces a travs de columnas de carbn activado y de intercambio inico y se evapora para producir los grados deseados de pureza y concentracin. Como hasta este punto el cido lctico no es estable al calor, se esterifica con metanol o etanol, para luego recuperar por destilacin el ster formado, rehidrolizarlo con agua en medio cido y llevar a cabo nuevamente una etapa de evaporacin para obtener la concentracin deseada, pudiendo reciclar el alcohol empleado (Figura 3). Este proceso de separacin produce un producto altamente puro, el cual es similar al producto obtenido por sntesis qumica (Kirk-Othmer, 2001; Yin y col., 1997). Con base en estos antecedentes, en esta investigacin se dise un proceso para la obtencin de cido lctico a partir de la biorreaccin en fase slida de cscara y bagazo de naranja, con Rhizopus oryzae.

(1)

Biorreaccin Maltosa

(2)

Biorreaccin

(3)

Lactosa

Biorreaccin

(4)

Sacarosa

Figura 2. Algunas de las reacciones estequiomtricas involucradas en la biorreaccin de produccin de L(+) cido lctico
1

El trmino fermentacin fue acuado por Louis Pasteur y se refera exclusivamente a la reaccin anaerobia de la glucosa para formar etanol y CO2, empleando levaduras del gnero Saccharomyces. Con el advenimiento de la biotecnologa, los investigadores empezaron a llamar fermentacin a cualquier reaccin bioqumica. Sin embargo, desde la dcada de los 80 del siglo XX se ha tratado de modificar ese uso y emplear el trmino biorreaccin o biotransformacin en lugar de fermentacin (Nota de los editores)

82 Tecnol. Ciencia Ed. (IMIQ) vol. 23 nm. 2, 2008

Remocin de slidos y biomasa

Carbn activado

Evaporacin

Acidificacin con H2SO4

Esterificacin con alcohol Evaporacin y/o destilacin

Evaporacin

Intercambio inico

Filtracin

Hidrlisis

Concentracin por evaporacin

Figura 3. Secuencia de separacin y concentracin de cido lctico luego de la biorreaccin

MATERIALES Y MTODOS

La cepa utilizada fue Rhizopus oryzae (NRRL-1710), que ha sido usada para producir cido L(+)-lctico de manera estereoespecfica en algunos procesos comerciales debido a que no requiere nitrgeno orgnico y es ms fcil su separacin del cultivo en el proceso de recuperacin y purificacin (Miura y col., 2003; Saito y col., 2003; Soccol y col., 1994; Yin y col., 1997; Zacchi y Akerberg, 2000). La biotransformacin en estado slido (BES) de cscara y bagazo de naranja con Rhizopus orizae para la produccin de cido lctico, se llev a cabo en un biorreactor horizontal de capacidad de 1000cc siguiendo la metodologa descrita en la literatura (Gil-Horn, 2007; Pacho-Carrillo y Domnguez-Espinosa, 2005). Los residuos slidos de naranja dulce obtenidos de una fbrica local de jugo fueron cortados de manera gruesa y secados a 50C hasta alcanzar una humedad de 12% (base seca). Posteriormente, la cscara seca fue molida en un molino de platos dentados y luego tamizada para obtener dimetros de partcula entre 1.18-2.36 mm. Lotes de 400 g de harina de naranja fueron adicionados con (NH4)2SO4 como fuente de nitrgeno y CaCO3 como regulador de pH para ajustar el pH inicial a 5. Se inocularon con una solucin de esporas de Rhizopus oryzae correspondiente a 107 esporas/mL (1mL/10g), para luego ser incubados durante 192 horas (8 das) a 30C de acuerdo con la literatura (Ramachandran y col., 2004). La actividad de agua, aW, del medio fue ajustada a 0.9. Una vez listo el medio e inoculada la cepa, la cscara fue homogeneizada nuevamente mediante mezclado. La biorreaccin se llev a cabo en un reactor horizontal de vidrio con 4 paletas internas de acero inoxidable de construccin propia con aireacin constante (1 v/v) con aire estril saturado y bajo mezclado intermitente

de 10 minutos con intervalos de espera de 60 minutos entre cada periodo de mezclado, a 20C. Por otro lado, las etapas de evaporacin al vaco se llevaron a cabo a 65 C y 285 mbar abs. (Gil-Horn, 2007). La determinacin del cido lctico se realiz por medio de cromatografa lquida de alta presin CLAR (HPLC, en ingls) usando un cromatgrafo Agilent 110 con integrador automtico y una columna Zorbax SBAq, 4.6 x 150 mm, 5 m de fase reversa, de acuerdo con el instructivo del fabricante. Para la extraccin del cido de la materia slida biotransformada, se evaluaron tres tcnicas para la separacin de las fases lquida y slida del producto de la biorreaccin (prensado mecnico, centrifugacin y filtracin al vaco). Al mismo tiempo, se determin la mxima cantidad de agua que puede ser aadida para llevar a cabo la extraccin del cido lctico presente en la fase slida. Los azcares residuales se midieron siguiendo las metodologas sealadas en la literatura (Gil-Horn, 2007). Posteriormente, se evalu la viabilidad tcnica de utilizar operaciones de intercambio inico (zeolita catinica cida y/o carbn activado) como pasos intermedios para la reduccin de impurezas. Asimismo, se evaluaron y compararon dos procesos: (a) Esterificacin del cido lctico con 1-butanol (Figura 4A) y (b) Cristalizacin evaporativa de sales de sulfato de calcio (Figura 4B), como posibles rutas de separacin secundaria y concentracin. La descripcin de los procesos de separacin y sus condiciones de operacin se encuentran descritos de manera prolija en la literatura (Gil-Horn, 2007). Los resultados experimentales permitieron plantear una secuencia de produccin, separacin, reduccin de impurezas y concentracin de cido lctico, la cual se integr en una hoja de simulacin en SuperPro Designer 6.0, apoyndose con los paquetes Aspen Plus y Aspen Split 11.1 para la estimacin de propiedades fsicas y termodinmicas, as como del equilibrio de fases en las diferentes unidades del proceso.
RESULTADOS Y DISCUSIN

Etapa experimental Luego de la biorreaccin, se obtuvo cido lctico en forma de lactato de calcio. El producto obtenido present un pH de 3.4 con alto grado de hidrlisis. El rendimiento msico obtenido de cido lctico en la biotransformacin fue de 8.2 mg/g equivalente al 0.82%. La duracin de la biorreaccin de 192h puede ser extendida para lograr una mayor hidrlisis del material biotransformable; sin embargo, para el propsito de

Tecnol. Ciencia Ed. (IMIQ) vol. 23 nm. 2, 2008 83

esta investigacin, que no era el de optimizar esta fase del proceso, el tiempo de biorreaccin definido fue adecuado para producir cantidades adecuadas del producto. Naturalmente, se tuvo la desventaja de la presencia de los productos no deseados de la hidrlisis del material biotransformable como azcares, protenas, cidos orgnicos secundarios, cationes Ca+2 y NH4+1 y aniones CO3-2 y SO4-2. As mismo, el producto slido obtenido present un exceso de azcares no consumidos por el Rhizopus oryzae (13,722.95 ppm p/v), el cual tambin debe tomarse en cuenta para una segunda etapa de optimizacin de la biotransformacin a nivel de laboratorio.
1-Butanol o on nt a o

En las pruebas de separacin slido-lquido result que el mejor mtodo para la recuperacin de la fase lquida del producto de biorreaccin fue el prensado mecnico (Figura 5A). Adicionalmente, se obtuvo que la mxima cantidad de agua que puede ser utilizada para la homogeneizacin del producto slido para la posterior recuperacin de la fase lquida es de 8 mL por cada gramo de slido en base seca (Figura 5B), obteniendo as una recuperacin mxima en el prensado mecnico del 85% del cido lctico producido en la biotransformacin.

a t a o a a n al o tal a

n n a n o on nt a o

ol t l 1-Butanol

lt a

al a a a

ul ato

a ta n

lt a
1-Butanol ol t l

al

ul ato ta o

ol t l

a o a

n al o tal n a

a o a

n al o

a ol t l

lt a

al

ul ato ta o

n -

a o

a o a

n al

a o -

lt a

al

o ul at ta o

lt a

al

ul ato ta o
u a ula olo

nt

u ol

a ula olo

nt

ol

t a a

1-Butano l

a o a

n al o

o l

a o a

n al

o l

B
Figura 4. Metodologa de separacin secundaria y concentracin del cido lctico. A) Ruta 1: Proceso de esterificacin con 1-butanol. B) Ruta 2: Proceso de cristalizacin evaporativa de sales de sulfato de calcio. Las operaciones de intercambio inico corresponden a una etapa de intercambio con zeolita catinica seguida de blanqueado con carbn activado

84 Tecnol. Ciencia Ed. (IMIQ) vol. 23 nm. 2, 2008

Relacin Agua-Slidos (mL/g)

(A)

(B)

Figura 5. Recuperacin de cido lctico obtenido en la separacin de la fase lquida: A) Por prensado mecnico, centrifugacin y filtracin al vaco. B) En funcin de la relacin de dilucin utilizada para la homogeneizacin del producto slido En la reduccin de impurezas con carbn activado y zeolita catinica fue posible observar que ambos son capaces de retener un alto porcentaje de impurezas (Tabla 1). As mismo, se hizo evidente que para poder utilizar el intercambio con zeolita catinica es necesario aplicar previamente un tratamiento de blanqueado con carbn activado, con el fin de reducir primeramente el contenido de azcares y protenas y eliminar el color del lquido. Tabla 1 Retencin de impurezas y prdida de cido lctico en tratamientos con carbn activado y zeolita catinica cida
Operacin Carbn activado (CA) Zeolita catinica (ZC) CA + ZC Principales impurezas retenidas Azcares, steres, protenas, Ca+2, color, cidos orgnicos secundarios NH+1 y Ca+2, protenas, cidos orgnicos secundarios Todas las anteriores % de prdida de cido lctico 33.12 58.16 62.66

Respecto de los cidos orgnicos secundarios, tanto la zeolita catinica como el carbn activado demostraron excelente retencin (resultando mejor el carbn activado), tal y como se observa en los cromatogramas de la Figura 6, obtenidos por cromatografa de lquidos (HPLC, por sus siglas en ingls).

Sin embargo, ambos mtodos de intercambio provocaron una prdida de cido lctico por retencin en la zeolita catinica y el carbn activado, lo cual redujo el rendimiento de recuperacin. Por otro lado, no es posible prescindir de la operacin de blanqueado con carbn activado, puesto que sin sta no sera posible obtener un producto incoloro, al mismo tiempo que es el carbn activado el que retiene las principales impurezas. En las etapas de evaporacin al vaco se obtuvo degradacin y precipitacin de protenas, as como coloracin del lquido por concentracin y degradacin de los azcares remanentes en la solucin. Por otro lado en estas etapas no hubo prdida apreciable de cido lctico por polimerizacin o volatilizacin. Realizando una comparacin entre los dos procesos de separacin secundaria y concentracin aqu evaluados, fue posible observar que la esterificacin del cido lctico realmente brinda un mayor rendimiento global del proceso. Sin embargo, se requiere de un mayor nmero de operaciones. En los datos comparativos presentados en la Tabla 2 se muestra que el proceso de esterificacin con 1-butanol permiti un mayor porcentaje de recuperacin de cido lctico que el proceso de cristalizacin evaporativa de sales de sulfato de calcio, pudindose alcanzar hasta 82% de recuperacin al prescindir de la etapa de intercambio con zeolita catinica. La principal razn de esto y por la cual la esterificacin toma ventaja sobre el segundo proceso, es por la baja afinidad que el carbn activado present hacia el lactato en su forma de ster de lactato de 1-butilo.

Tecnol. Ciencia Ed. (IMIQ) vol. 23 nm. 2, 2008 85

Tabla 2 Datos comparativos de concentracin y eficiencia de recuperacin en los procesos de (a) Esterificacin del cido lctico con 1-butanol y (b) Cristalizacin evaporativa de sales de sulfato de calcio
Conc. cido lctico % eficiencia de Cumple recuperacin de con el (mg/L) cido lctico FCC* 2112.72 3208.10 2722.52 3626.67 53.6% 81.56% 42.78% 57.31% S S No No

Evaluacin Esterificacin + Zeolita Esterificacin sin zeolita

Crist. evaporativa + Zeolita Crist. evaporativa sin zeolita

*Cdigo Qumico de Alimentos (FCC, Food Chemical Codex)

Diseo conceptual y simulacin en SuperPro Designer 6.0 del proceso propuesto Con base en los resultados experimentales y las observaciones derivadas de ellos, se plante una secuencia de separacin, reduccin de impurezas y concentracin de cido lctico a partir de la biotransformacin slida de cscara y bagazo de naranja, utilizando la esterificacin con 1-butanol y posterior hidrlisis del cido lctico (Figura 7). El proceso se inicia al homogeneizar el slido obtenido por biotransformacin mediante mezclado utilizando una relacin de agua-slido en base seca de 8:1, el cual se hace pasar por una etapa de prensado mecnico para separar las fases lquida y slida. El lquido obtenido se filtra para remover partculas suspendidas y se evapora al vaco a 65C. El licor concentrado se acidifica con H2SO4, precipitando as sulfato de calcio insoluble (Reaccin 6, Figura 8). El lquido acidificado se evapora nuevamente al vaco a 65C en un equipo de evaporacin-cristalizacin, con formacin simultnea de cristales insolubles de sulfato de calcio y agentes degradados y precipitados por efecto del pH (en su mayora protenas). Posteriormente, el producto se filtra removiendo los cristales junto con los agentes insolubles y partculas suspendidas. Los slidos retenidos son lavados con agua, la cual es recirculada. El licor concentrado se evapora al vaco a 67.5C y luego se esterifica con 1-butanol (Reaccin 7, Figura 8), con lo cual precipitan azcares insolubles, los cuales son removidos por filtracin. A continuacin, la mezcla heterognea se decanta, separando la fase rica en 1-butanol de la fase rica en agua. La fase ligera correspondiente al alcohol se recircula a la etapa de esterificacin.

Figura 6. Cromatogramas de la solucin acuosa extrada del producto slido, obtenidos por CLAR (HPLC) en fase reversa. Columna Zorbax SB-Aq 4.6 x 150 mm, 5 m. (A) Producto de la separacin slido-lquido por prensado mecnico. (B) Lquido tratado slo con zeolita catinica. (C) Lquido tratado slo con carbn activado

A pesar de haberse alcanzado una mayor concentracin de cido lctico en el proceso de cristalizacin evaporativa de sales de sulfato, la alta concentracin de iones sulfato al final de su secuencia de operaciones fue el principal factor que evit que el producto obtenido por este mtodo cumpliera con las especificaciones del Cdigo Qumico de Alimentos (FCC, Food Chemical Codex), a diferencia del producto obtenido en el proceso de esterificacin con 1-butanol, el cual s logr cumplir con las especificaciones de dicha norma (Tabla 2). Por ello, este ltimo fue considerado como el mejor de los procesos probados.

Slidos y biomasa H2SO4

Slidos finos y clulas suspendidas

Biotransformacin Filtracin

Homogeneizado

Prensado mecnico

Evaporacin Vol=25% al vaco 65 C 285 mbar Acidificacin 65 C 1 atm Evaporacin al vaco y cristalizacin 65 C y 285 mbar

Vol=25%

Agua Columna de carbn c activado Agua y Voltiles Agua CaCO3 1-Butanol Vol=25% 1-Butanol

Columna de i intercambio catinico

86 Tecnol. Ciencia Ed. (IMIQ) vol. 23 nm. 2, 2008

Filtracin

Filtracin
Enfriado 25 C

Desacidificacin 25 C pH 3.5 Decantacin 65 C 1 atm Filtracin

Esterificacin 65 C 1 atm

Evaporacin al vaco 67.5 C 285 mbar CaSO4 Protenas i insolubles

CaSO4 Agua Agua Vol=20%

Azcares insolubles HCI Carbn activado Agua

Agua

Blanqueado 25 C

Filtracin

Evaporacin al vaco 67.5 C 285 mbar

Enfriado 25 C

Filtracin

Blanqueado 25 C

Filtracin

Hidrlisis 25 C

Evaporacin al vaco 67.5 C 285 mbar CaSO4 Vol=25% Ac. lctico

Carbn activado

Carbn activado

Carbn activado

Figura 7. Diagrama de bloques del proceso propuesto para la produccin y purificacin de cido lctico a partir de la biorreaccin en fase slida de cscara y bagazo de naranja

Tecnol. Ciencia Ed. (IMIQ) vol. 23 nm. 2, 2008 87

Por otro lado, la fase rica en agua se enfra hasta temperatura ambiente y se pasa a una etapa de desacidificacin en la que el pH es llevado hasta un mnimo de 3.5 con CaCO3 en polvo, para nuevamente formar sulfato de calcio insoluble (Reaccin 8, Figura 8) y reducir el exceso de aniones sulfato, los cuales se remueven por filtracin junto con partculas suspendidas. Los slidos recuperados se lavan con agua, recirculando esa agua al proceso. El lquido desacidificado se mezcla con carbn activado para ser blanqueado. La mezcla se filtra para recuperar el carbn activado y la fase lquida se enva a una nueva etapa de evaporacin al vaco a 67.5C. Debido al grado de saturacin alcanzado, es posible la formacin de cristales de sulfato de calcio que no se hayan logrado eliminar en etapas previas, por lo que la mezcla se enfra hasta temperatura ambiente para aumentar la saturacin y, posteriormente, se filtra. Debido a la formacin de color en la solucin, sta es nuevamente mezclada con carbn activado en una segunda etapa de blanqueado y filtracin, recuperando el carbn activado, el cual es reutilizado en la primera etapa de blanqueado. La fase lquida recuperada de la segunda etapa de blanqueado se mezcla con agua y HCl al 35% v/v para catalizar la hidrlisis del lactato de 1-

butilo (Reaccin 9, Figura 8). Posteriormente, el lquido hidrolizado se evapora al vaco a 67.5C reduciendo el volumen a 25% del inicial. La fraccin evaporada se recircula al proceso y el producto de fondos obtenido es cido lctico concentrado cuya pureza cumple el estndar del FCC. Posteriormente, se construy un modelo de simulacin del proceso utilizando el simulador SuperPro Designer 6.0 (Figura 9). Para el balance de materia se consider una capacidad de procesamiento por lote ( batch ) de 10 toneladas de cscara de naranja con una humedad msica del 12% y un rendimiento de produccin de cido lctico durante la biotransformacin de 8.2 mg por cada gramo de cscara de naranja en base seca. Los datos fsicos y termodinmicos del lactato de butilo fueron estimados con el mdulo Aspen Plus User Interface 11.1, obtenindose correlaciones de capacidad calorfica a presin constante para las fases lquido y vapor, y de densidad para la fase lquida, ambas en funcin de la temperatura, as como las constantes de Antoine para el clculo de presin de vapor en funcin de la temperatura, cuyos parmetros fueron luego ingresados en el SuperPro Designer 6.0.

(5)

(6)

(7) (8)

(9)

Figura 8. Reacciones que ocurren en la secuencia de separacin, reduccin de impurezas y concentracin de cido lctico a partir de la biotransformacin slida de cscara y bagazo de naranja, utilizando la esterificacin con 1-butanol y posterior hidrlisis del cido lctico

Bagazo y cscara de naranja Venteo-2 Venteo-4 CaSO4+Protena S-103 S-105 S-104 P-4/V-103 Evaporacin intermitente P-5/V-104 Evaporador-Cristalizador S-112 Bioproducto S-102 S-101 Venteo-5 P-2/V-102 Homogeneizador P-3/NFD-101 Filtracin y prensado Biomasa-1 Venteo-3 H2SO4

Aire

Venteo-1

CaCO3 al 50% Agua-1 (NH4)2SO4

CaCO3 _1 Inculo

P1/V-101 Biorreactor S-111 S-109 S-108 S-106 S-107

Agua-2

S-110

P-6/NFD-102 Filtracin tipo Nutsche

P-10/MX-101 Mezclado P-11/V-106 Tanque de agua P-8/GAC-101 P-7/V-105 Columna de carbn Almacenamiento activado P-9/INX-101 Columna de Intercambio inico

S-114 S-113 S-116 S-119 Venteo-6 Azcares

S-123 Carbn activado CaSO4 Venteo-7 S-115 S-118 CaCO3_2

Butanol

88 Tecnol. Ciencia Ed. (IMIQ) vol. 23 nm. 2, 2008

C_activado_salida

P-15/V-109 Tanque de butanol S-122 S-121 P-17/PFF-102 Filtracin P&F P-16/V-110 Desacidificador S-120 P-14/V-108 Decantador C-activado-2 Agua-3 CaSO4_2 C-activado-1 Venteo-9 S-117 P-13/PFF-101 Filtracin P&F HCI Esterificado P-12/V-107 Evaporador-Esterificador

S-124

P-19/PFF-103 Filtracin P&F

P-18/V-111 Primer blanqueado

S-125

Venteo-8

S-127 S-128 P-21/HX-101 Enfriamiento P-22/PFF-104 Filtracin P&F

S-131 S-129 S-130 P-23/V-113 Segundo blanqueado P-24/PFF-105 Filtracin P&F

S-132

S-126

P-20/V-112 Evaporacin Intermitente

P-25/V-114 Evaporacin intermitente

cido lctico

Figura 9. Diagrama de simulacin en SuperPro Designer 6.0 del proceso propuesto para la produccin de cido lctico, a partir de la biorreaccin en fase slida de cscara y bagazo de naranja

Tecnol. Ciencia Ed. (IMIQ) vol. 23 nm. 2, 2008 89

Anlisis de equilibrio lquido-lquido para la etapa de decantacin Dado que luego de la esterificacin se obtiene una mezcla heterognea, se incluy una etapa de decantacin con la finalidad de evitar evaporar el butanol excedente y disminuir as el consumo energtico del proceso. Para ello se evalu la distribucin del cido lctico y del lactato de butilo en las dos fases lquidas, con la intencin de conocer la composicin msica normalizada de las mezclas lactato de butilo - 1, butanol agua y cido lctico - 1, butanol agua, de forma que estos datos puedieran ser ingresados en el SuperPro Designer 6.0 y con ello realizar el balance de materia en la etapa de decantacin. Para esto se obtuvieron los diagramas de equilibrio lquido-lquido correspondientes a estas mezclas a 25 y 65C (Figura 10) utilizando el mdulo Aspen Split 11.1 y el modelo termodinmico NRTL-RK (Non Random Two-Liquid [Renon]/RedlichKuong con ley de Henry). Esta evaluacin mostr que a 65C se obtiene una mejor recuperacin del lactato de butilo y del cido lctico, en la etapa de decantacin, que a temperatura ambiente, por lo que no es necesario enfriar luego de la etapa de esterificacin. Rendimiento de produccin y eficiencia de recuperacin En la etapa de biotransformacin, se estim que por cada 10 Ton de cscara de naranja al 12% de
Agua - Butanol - Lactato de butilo

humedad msica, es posible producir 72 (72.16) kg de cido lctico, de los cuales, al final del proceso, es posible recuperar 51 (50.95) kg como cido lctico y 1 (1.07) kg como lactato de 1-butilo. Con base en esto, el rendimiento msico global de produccin fue de 6 (5.79) g de cido lctico por cada kg de cscara y bagazo de naranja en base seca. Por otro lado, la eficiencia global de recuperacin de cido lctico del proceso de separacin y purificacin, result ser de 70 (70.61)%. Esto es debido a que tan slo en la etapa de filtracin y prensado del slido producido se pierde aproximadamente el 15% del cido lctico generado en la biorreaccin debido a la retencin de lquido en la cscara hidrolizada. El factor de concentracin de lactato alcanzado al final del proceso fue de 46.75 veces respecto a la concentracin a la salida de la etapa de filtracin y prensado mecnico. Con un solo biorreactor, el proceso completo tendra una duracin de 284 (283.87) h/lote, pudindose realizar un total de 39 lotes al ao. Esta cantidad podra incrementarse con el uso de dos o ms biorreactores operados secuencialmente, lo cual aumentara la produccin y reducira los tiempos de espera. Mediante la simulacin se estim que, para una capacidad de procesamiento de 10 Ton por lote de cscara de naranja (400 Ton/ao) y un solo biorreactor, es posible producir 5.5 toneladas (5498kg) al ao de solucin de cido lctico al 36% masa (Tabla 3), equivalente a 45 m3 (44564 litros) a una concentracin de 45 (44.6) g cido/L.
Agua - Butanol - cido lctico

uti lo

tic o

1-B

1-B

eb

lc

uta

uta

to d

l no

cta

La

ido

l no

Agua (A)

Agua (B)

Figura 10. Diagramas de equilibrio lquido-lquido (fracciones masa) para las fases heterogneas formadas por las mezclas: A) Agua-1,butanol-lactato de butilo y B) Agua-1,butanol-cido lctico. Evaluacin a las temperaturas de 25 y 65C

90 Tecnol. Ciencia Ed. (IMIQ) vol. 23 nm. 2, 2008

Tabla 3 Composicin y concentracin de la corriente de producto final del proceso

Componente Amonio 1-Butanol Lactato de butilo CaCO3 Azcares (expresados como glucosa) HCl Lactato de calcio cido lctico Protenas cido sulfrico Agua steres Composicin base Composicin base Concentracin hmeda (% masa) seca (% masa) (g/L) 0.83 1.33 0.76 0.02 4.03 0.26 0.27 36.14 0.16 0.23 55.05 0.93 1.84 2.97 1.69 0.04 8.96 0.58 0.60 80.40 0.35 0.50 ---2.07 1.02 1.64 0.94 0.02 4.97 0.32 0.33 44.59 0.20 0.28 67.91 1.15

cscara de naranja, y que, al mismo tiempo, permitan ofrecer un mayor rendimiento de produccin de cido lctico durante su desarrollo. Asimismo, la optimizacin global del proceso debe llevarse a cabo, en particular, atendiendo al entorno econmico actual que ofrece incentivos econmicos claros para el establecimiento de biorrefineras.
BIBLIOGRAFA Bello-Gil, D. 2007. Plsticos biodegradables, una alternativa verde. Departamento de Bioqumica. Subdireccin de Biotecnologa. Instituto Cubano de Investigaciones de los Derivados de la Caa de Azcar. ECO-SITIO. 03/10/2005. [Fecha de consulta: 25 de octubre de 2007]. Direccin electrnica: http://www.eco-sitio.com. ar/ea_12_plasticos_biodegradables.htm. Gil-Horn, R.H. 2007. Diseo de proceso de separacin y purificacin de cido lctico producido por fermentacin de residuos de cscara de naranja. Tesis profesional. Universidad Autnoma de Yucatn. Facultad de Ingeniera Qumica. Mrida, Yucatn, Mxico. Kirk-Othmer. 2001. Encyclopedia of Chemical Technology. 4a Ed. Vol. 13. CD-ROM. DIALOG OnDisc Books 3.21. Kulprathipanja, S., Oroskar, A. R. 1991. Separation of lactic acid from fermentation broth with an anionic polymeric absorbent. U.S. Pat. 5068418. Washington, DC, EEUU. Menndez-Gonzlez, I. 1999. Obtencin de steres de cido lctico de inters industrial. Proyecto Fin de Carrera. Universidad de Oviedo. Oviedo, Espaa. Purac. 2002. Lactic acid. Technical Report. Enero 3, 2002. Amsterdam, Pases Bajos. Miura, S., Arimura, T., Hocino, M., Dwiarti, L., Okabe, M. 2003. Optimization and scale-up of L(+) lactic acid fermentation by mutant strain Rhizopus sp. MK-96-1196 in airlift bioreactors. J. Biosci. Bioeng. 96(1):85-69. Pacho-Carrillo, J., Domnguez-Espinosa, R. 2005. Towards circular economy: Utilization of waste to enhance industrial viability in tropical regions. Presentado en 7th World Congress of Chemical Engineering, Glasgow, Escocia. Ramachandran, S., Roopesh, K., Nampoothiri, K., Szakacs, G., Pandey, A. 2004. Mixed substrate fermentation for the production of phytase by Rhizopus spp. using oilcakes as substrates. Process Biochem. 38:99-104. Skory, C. 2000. Isolation and expression of lactate dehydrogenase genes from Rhyzopus oryzae. Appl. Environ. Microbiol. 6: 2343-2348. Saito, K., Kawamura, Y., Oda, Y. 2003. Role of the pectinolytic enzyme in the lactic acid fermentation of potato pulp by Rhizopus oryzae. J. Ind. Microbiol. Biotechnol. 30:440-444. Soccol, C. R., Stonoga, V. J., Raimbault, M. 1994. Production of L-Lactic acid by Rhizopus species. World J. Microbiol. Biotechnol.10:433435. Vaidya, A. N., Pandey, R. A., Mudliar, S., Suresh Kumar, M., Chakrabarti, T., Devotta, S. 2005. Production and recovery of lactic acid for polylactide. An overview. Crit. Rev. Environ. Sci. Technol. 35:429467. Yin, P.M., Nishina, N., Kosakai, Y., Yahiro, K., Park, Y., Okabe, M. 1997. Enhanced production of L(+)-lactic acid from corn starch in a culture of Rhizopus oryzae using an air-lift biorreactor. J. Ferment. Bioeng. 84:249253. Zacchi, G., Akerberg, C. 2000. An economic evaluation of the fermentative production of lactic acid from wheat flour. Biores. Technol. 75:119125.

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

Se desarroll experimentalmente un proceso de obtencin de cido L(+) lctico por medio de la biotransformacin en medio slido de residuos de naranja. En este proceso la biotransformacin y la secuencia de separacin juegan papeles muy importantes en el diseo. El prensado mecnico result ser la mejor operacin de separacin slido-lquido, utilizada en conjunto con una relacin de homogeneizado de 8:1 agua-slido en base seca para la extraccin del cido lctico hacia la fase lquida. As mismo, se mostr que es indispensable el uso de carbn activado como mtodo de remocin de color e impurezas en el efluente. Por otro lado, aunque la zeolita catinica demostr ser adecuada para la remocin de impurezas, no se recomienda su uso debido al alto grado de prdida de cido lctico que provoca. El proceso de esterificacin con 1-butanol permiti obtener la mayor recuperacin y pureza de cido lctico. Es indispensable que el acido lctico sea esterificado antes de la remocin de color e impurezas con carbn activado, para evitar prdidas en esta etapa. El diseo de separacin y purificacin propuesto permiti obtener un producto que cumple con el estndar del Cdigo Qumico de Alimentos (FCC) para cido lctico grado alimenticio, demostrndose que el proceso es tcnicamente viable. El modelo de simulacin obtenido permiti llevar a cabo estudios de escalamiento de produccin y estudios de caso de operatividad y es una base indispensable para el mejoramiento del proceso con base a parmetros econmicos. Se recomienda llevar a cabo estudios ms detallados encaminados a obtener mejores condiciones de biorreaccin que lleven al Rhizopus oryzae a consumir los azcares degradados durante la hidrlisis de la