OBJETIVOS: Realizar diferentes preparaciones microbiolgicas a partir de muestras naturales y cultivos puros.

puros. Describir las caractersticas morfolgicas y de locomocin de microorganismos que se encuentran en muestras naturales. Realizar frotis fijos y tinciones simples. Identificar y describir las caractersticas morfolgicas y de agrupacin de bacterias y hongos levaduriformes. Identificar y describir las caractersticas microscpicas y tintoriales de las bacterias. Localizar y describir endosporas y cpsulas bacterianas Organizar e interpretar correctamente los resultados del estudio microscpico de los microorganismos.

RESULTADOS:

Microscopio 6 Fecha; 15/08/2013 Muestra; Pulque Preparacin; Hmeda Tincin; Simple (Rojo Neutro) Aumento; 400 veces Descripcin; Observamos bacilos de color rojo, y algunos valos an ms grandes (levaduras) con hilos.

Microscopio 6 Fecha; 15/08/2013 Muestra; Pulque Preparacin; Hmeda Tincin; Sin tincin Aumento; 400 veces Descripcin; Observamos valos grandes como una sombra borrosa, y algunas manchas de agua.

Microscopio 6 Fecha; 15/08/2013 Muestra; Pulque Preparacin; Fija Tincin; Sin tincin Aumento;1000 veces Descripcin; No logramos observar nada

Microscopio 6 Fecha; 15/08/2013 Muestra; Pulque Preparacin; Fija Tincin; Simple (Rojo neutro) Aumento;1000 veces Descripcin; Observamos esferas valos grandes (levaduras) teidos de rojos.

Microscopio 6 Fecha; 15/08/2013 Muestra; Alimento enmohecido (tortilla) Preparacin; Impronta Tincin; Simple (Azul de metileno) Aumento; 400 veces Descripcin; Observamos estructuras ramificadas de Penicillum sp y algunas conidias, estericmas, fialides primarias y secundarias

Microscopio 6 Fecha; 15/08/2013 Muestra; Alimento enmohecido (tortilla) Preparacin; Impronta Tincin; Sin colorante Aumento; 400 veces Descripcin; Observamos estructuras ramificadas solo que traslucidas, casi no se ven, como una sombra borrosa.

Microscopio 6 Fecha; 15/08/2013 Muestra; Alimento enmohecido (tortilla) Preparacin; fija Tincin; Simple (Azul de metileno) Aumento;1000 veces Descripcin; Observamos ramificaciones con algunas bolitas pegadas y algunas sueltas en el medio, quizs sean cocos, o sea estructura del hongo.

Microscopio 6 Fecha; 15/08/2013 Muestra; Alimento enmohecido (tortilla) Preparacin; Fija Tincin; Sin colorante Aumento;1000 veces Descripcin; No logramos ver nada

Microscopio 10 Fecha; 15/08/2013 Muestra; Agua de florero Preparacin; Hmeda Tincin; Simple Aumento;400 veces Descripcin; Observamos una ovalo grande como una mancha sin un contorno bien delimitado, deforme con puntos negros dentro de ella

Microscopio 10 Fecha; 15/08/2013 Muestra; Agua de florero Preparacin; Hmeda Tincin; Sin colorante Aumento;400 veces Descripcin; No logramos observar nada

Microscopio 10 Fecha; 19/08/2013 Muestra; Agua de florero Preparacin; fija Tincin; Simple Aumento;1000 veces Descripcin; Observamos estructuras ovoides pero algo deformes en su orilla, como si no tuvieran un contorno bien definido

Microscopio 10 Fecha; 19/08/2013 Muestra; Agua de florero Preparacin; fija Tincin; Sin colorante Aumento;1000 veces Descripcin; No logramos observar nada

Microscopio 9 Fecha; 19/08/2013 Muestra; Cultivo Bacillus Subtilis Preparacin; fija Tincin; Selectiva de endoespora (Verde de malaquita y safranina) Aumento;1000 veces Descripcin; Observamos bacilos morados por completo y algunos bacilos con contorno morado y al centro un circulo verde (endoespora) en algunas en distintos lados del bacilo.

Microscopio 9 Fecha; 19/08/2013 Muestra; Pulque Preparacin; Tincin; Negativa con tinta china Aumento;1000 veces Descripcin; Observamos cuatro esferas traslucidas (capsulas) en un fondo oscuro.

Microscopio 9 Fecha; 22/08/2013 Muestra; pulque Preparacin; Tincin; Negativa con tinta china Aumento;1000 veces Descripcin; Observamos 6 esferas traslucidas y dos valos (bateras) que estaban rodeadas estas ltimas por un contorn incoloro.

Microscopio 12 Fecha; 22/08/2013 Muestra; pulque Preparacin; Tincin; Diferencial (Tincin de Gram) Aumento;1000 veces Descripcin; Observamos una cadena larga de diplococos, similar a una cadena, tambin observamos bolitas oscuras que tenan a su alrededor como hilos (levaduras).

Microscopio Z-16 Fecha; 22/08/2013 Muestra; Cultivo de E.coli Preparacin; Fija Tincin; De Gram Aumento; 1000 veces Descripcin; Observamos Bacilos de color rosa (Gram negativos) desordenados.

Microscopio Z-16 Fecha; 22/08/2013 Muestra; Cultivo de B.cereus sp Preparacin; fija Tincin; De Gram Aumento; 1000 veces Descripcin; Observamos bacilos de color entre azul fuerte y morado(Gram positivo), en algunas se observaba un ovalo dentro incoloro (endoespora)

Microscopio Z-16 Fecha; 22/08/2013 Muestra; Cultivo de Neisseria sp Preparacin; Fija Tincin; De Gram Aumento; 1000 veces Descripcin; Se observaban esferas (cocos) y esferas unidas (diplococos) de color rosa (Gram negativos) esparcidos por la preparacion

Microscopio Z-16 Fecha; 22/08/2013 Muestra; Cultivo de S. viridans Preparacin; Fija Tincin; De Gram Aumento; 1000 veces Descripcin; Se observaban esferas (cocos) y esferas unidas (diplococos) de color rosa (Gram negativos) esparcidos por la preparacion Realizamos las dos preparaciones para ver las bacterias alcohol cido resistente pero por desorganizacin no logramos verlas al microscopio. Pero para poder reportarlos utilizamos los datos de nuestros compaeros de gaveta. Microscopio Z-16 Fecha; 22/08/2013 Muestra; Cultivo de Mycbacterium sp. Preparacin; Fija Tincin; BAAR Aumento; 1000 veces Descripcin; Se observaban valos ms curvos de lo normal (cocobacilar) de color rosa, pero no de una manera homognea (dishomogeneidad en la coloracin)

Microscopio Z-16 Fecha; 22/08/2013 Muestra; Cultivo de Staphylococcus aureus Preparacin; Fija Tincin; BAAR Aumento; 1000 veces Descripcin; Observamos cocos de color agrupados en racimos de uvas (estafilococo) de color azul

INTERPRETACIN DE RESULTADOS: Tincin simple Las tinciones simples solo nos permitieron ver la morfologa de las bacterias en la muestra de alimento enmohecido y agua de pulque fijas en las que usamos colorante, las fijas sin colorante no se observ nada lo cual es lgico ya que las clulas no tienen color. Preparaciones hmedas Debido a no colocar de manera pareja el cubreobjetos fue que vimos algunos huecos dispersos y traslucidos. Tardamos demasiado en ver la preparacin hmeda del agua de florero, por eso observamos materia orgnica en descomposicin, pedazos de celulosa de las flores que hidratada, en la preparacin del alimento enmohecido, observamos Penicillum sp y algunas conidias, estericmas, fialides primarias y secundarias (Manual de microbioliologia UNAM 2006 pp102) Preparaciones fijas Observamos materia orgnica en descomposicin en el gua de florero, no observamos nada en el alimento enmohecido. No logramos ver la capsula en las preparaciones fijas porque al fijar destruimos la estructura de la capsula, los valos grandes antes mencionados eran levaduras. En la mayora de las preparaciones, de ambas preparaciones, que no tenan colorante no observamos bacterias, pero si hongos (en el alimento enmohecido) y materia orgnica en descomposicin (en el agua de florero) y levaduras (en el pulque) pero las vimos como una sombra borrosa y no definida. Tincin Negativa Se observaron clulas en forma de cocos con un fondo negro y siendo la parte incolora la que evidencio la capsula, utilizamos pulque que es una bebida fermentadora alcohlica tradicional que se produce a partir de la fermentacin de aguamiel (smbb.com.mx). Tincion de endospora Utilizamos Bacillus subtilis observamos clulas bacterianas en forma de bacilos agrupados en diplococos observando en algunas clulas la endospora en color verde, la literartura nos indica que efectivamente B. subtilis tiene la capacidad de formar endosporas resistentes permitiendo al organismo tolerar condiciones ambientalmente extremas. Tincion diferencial de Gram Esta tcnica bsicamente nos permite diferenciar el tipo de bacteria es si gram(+) o gram(-), gracias a la composicin de la pared celular de la bacteria, donde las gram (+) al tener un gran contenido de peptidoglucano el colorante primario forma complejos muy fuertes que difcilmente se decolroraran con el alcohol acetona por el contrario de las gram (-) que al contener poco peptidoglucano y una membrana externa de lipopolisacaridos, estos lpidos de disuelven con el alcohol acetona abriendo los poros y facilitando el complejo cristal violeta-yodo y decolorando la celula y de esta manera al agregar safranina adoptan ese color rosado. Basado en esto pudimos clasificar los siguientes microorganismos: Escherichia coli.

En la prctica observamos cocos y diplococos de color rosa lo cual indica que se trata de una bacteria gram negativa. En la literatura encontramos que Escherichia coli. Pertenece a los enterobacteriace, que son bacilos gram negativos pequeos (0.5, por 0.3m) que no forman esporas (Zinsser pp 737).

B. cereus sp

En la prctica observamos bacilos de color morado (Gram positivo), en algunas se observaba un ovalo dentro incoloro (endoespora), los resultados concuerdan con la literatura B. cereus es un gram positivo esporulado. El gnero Bacillus segn la literatura se caracteriza por formar endosporas, son gram positivos, tienen forma de bacilo y no forman ninguna agrupacin. Esto es concordante con lo observado para Bacillus cereus y Bacillus subtilis tanto en la tincin de Gram y selectiva de endospora. Neisseria sp

Se observaban esferas (cocos) y esferas unidas (diplococos) de color rosa (Gram negativos) esparcidos por la preparacin. El gnero Neisseria incluye varias comensales pero dos de gran importancia patgena N. meningitidis y N. gonorrhoeae debido a las enfermedades clnicas que ocasionan en el ser humano. Streptococcus viridans

Se observaron cocos morados lo que indica que es una bacteria gram positiva su agrupacin es en cadena la cual se denomina estreptococos. Son un grupo de estreptococos sin especificidad serolgica. Se incluyen las especies: mutans, mitis, salivarius, oralis, sanguis y las recientemente propuestas vestibularis, gordonii, crista y sobrinus. Pulque

Debido a que se fij la preparacin no observamos capsulas, pero si tio de morado (como si fueran Gram positivas) las levaduras y lactobacilos que contiene el pulque. En la literatura encontramos que Se han aislado cerca de quince microorganismos (bacterias y levaduras) que intervienen en la fermentacin; entre los ms importantes se encuentran; Leuconostoc mesenteroides y L. dextranicum, bacterias productoras de dextranas que le confieren la consistencia viscosa; diversas especies de Lactobacillus que intervienen en la parte inicial del desdoblamiento de los azucares en cido lctico as como la levadura Saccharomyces cerevicea y la bacteria Zimomonas mobilis, responsables principales del contenido alcohlico que oscila entre 4 y 6 % (Biblioteca Digital de la medicino tradicional mexicana) Quizs sea por la tcnica que empleamos que no pudimos ver a todos estos microorganismos, pero no fue nuestro objeto de estudio, no obstante es de inters conocerlos, en la tincin simple logramos ver algunas de estas bacterias y algunas levaduras. Tincion Diferencial de Ziehl-Neelsen

Como ya sabemos esta tincin nos ayuda a distinguir entre las bacterias acido alcohol resistentes y las bacterias no acido alcohol resistentes, esta tcnica se basa en el contenido alto de lpidos tales como ceras A, B, C y D, unidos a polisacridos tales como glucanas, mananas, arabinogalactanas y arinobananas , adems presenta glicolipidos, acidos micolicos etc, lo cual nos determina que la pared se comporta de manera hidrofobica y por tanto impermeable, se les denomina acido alcohol resistente por la naturaleza acida del decolorante, de este modo al combinarse el colorante con las ceras , estn resisten la decoloracin con alcohol acido ya que ni los fenoles ni las ceras son solubles a este, los dems microorganismos si se decoloran y al teirlos con azul de metileno de lffler toman el color azul.

Micobacterium sp.

En la prctica observamos bacilos teidos de manera irregular, parecan un rosario de color rosa, por lo que interpretamos que es una bacteria cido resistente. En la literatura encontramos que efectivamente Mycobacterium sp es un bacilo delgado recto o ligeramente curvo (Zinsser pp 685), tambin encontramos que son bacilos cido resistentes no formadores de esporas y capsulados (Zinsser pp 685) Todo el gnero de las Mycobacterias presentan gran dificultad mediante la tcnica de Gram porque poseen una gruesa cpsula protectora, de composicin lipdica fundamentalmente, que impide la penetracin del colorante. Por ello se lleva acabo una tincion BAAR donde las bacterias alcohol resistentes quedan de color rosa y las no resistentes quedan de color azul. S. aureus

En la practica observamos cocos de color azul agrupados en racimos de uvas (estafilococo) La literatura menciona sobre de S. aureus que es un coco inmvil, de 0.8 a 1 micrmetro de dimetro, que se divide en tres planos para formar grupos de clulas irregulares semejantes a racimos de uvas. En extendidos los cocos aparecen solos, en pares, en racimos o en cadenas cortas (a esto me refera en las observaciones como trozo de estambre). Esta descripcin es adecuada para las observaciones al microscopio con los objetivos de 40x y 100x. Comparando con la teoria podemos determinar que S. aureus no es acido alcohol resistente ya que observamos cocos de color azul agrupados en racimos de uvas (estafilococo). CONCLUSIONES: En esta prctica aprendimos que dependiendo de lo que queramos observar tenemos que escoger la tcnica adecuada, si solo queremos observar morfologa del microorganismo con una tincin simple bastara, si quisiramos conocer la familia a la que pertenece una bacteria utilizaremos una tincin de Gram, para detectar micobacterias usaramos Ziehl-Neelsen estas ltimas dos tcnicas basadas en la pared celular del microorganismo a estudiar, en el caso de querer detectar algn orgnulo celular podremos ayudarnos con la tincin negativa para evidenciar capsula o la tincin de endospora, la diversidad microbiana es muy grande por lo que es de suma importancia saber que tcnica usar para poder realizar una interpretacin correcta del estudio microscpico del microorganismo y de esta manera tener la capacidad de elegir que tincin ser la adecuada si una simple, diferencial o selectiva. Las diferentes tipos de tinciones nos dan informacin sobre las caractersticas estructurales, presencia o ausencia de determinadas partes de las clulas as como su agrupacin de la muestra. la

La eleccin del colorante en las tinciones es de vital importancia dependiendo de que queramos Observar, esto depende de la afinidad de los colorantes por ciertas estructuras y la tcnica de tincin empleada los microorganismos no tienen color por lo que es necesario teirlos para poder observar su estructura y diferenciar su composicin en base al fundamento de la tcnica de tincin. Los tipos de preparacin preparaciones tienen ventajas y desventajas, y deben emplearse segn sea el objetivo del estudio, las preparaciones hmedas nos permiten ver al microorganismo vivo, pero duran poco tiempo, las preparaciones fijas duran mucho tiempo, nos permiten ver esttico al organismo, pero no mata al microorganismo, adems de que algunas estructuras se ven alteradas por el calor, como la

capsula, al fijar la preparacin el calor la destruye , por lo que para logar ver en una preparacin de capsulas, no debemos fijar la preparacin, porqu el calor destruye la capsula. Las tinciones simples nos dan informacin sobre la presencia, concentracin, morfologa y modo de agrupacin bacteriana. Mientras que las tinciones diferenciales como la tincin de Gram o BAAR nos permiten clasificar a las bacterias por su composicin en pared celular. Conociendo esto, podemos relacionar si el microorganismo tiene propiedades como endotoxinas o resistencia a antibiticos, entre otras ms. Con las tinciones selectivas nos permiten observar estructuras de las clulas como capsula o endospora. Conociendo esta, podemos saber si el organismo presenta funciones inmunognicas, inhibitorias, estructuras de resistencia al calor, agentes fsicos y qumicos muy agresivos, para as poder contrarrestar su crecimiento y su patogenicidad. BIBLIOGRAFA: Videos del blog de microbiologa experimental microexpfqunam,blogspot.mx *Preparaciones hmedas, Tincion simple, Tincion de Gram, Tincion de endospora, Tincion de Ziehl Neelsen, Impronta. http://aulavirtual.usal.es Manual de microbioliologia UNAM 2006 Zinsser: Microbiologa. Editorial: Medica Panamericana , Buenos Aires, ARGENTINA. 8Edicin Michael J. Pelczar, et al. Microbiologa. Ed. McGraw-Hill 1982, Mxico, D.F. Pg. 45 y 46. Michael J. Pelczar, et al. Microbiologa. Cuarta edicin. Ed. McGraw-Hill 1982, Mxico, D.F. Pg. 58-61, 75, 77, 78, 83, 776, 778, 779, 7784. Presentacion Streptococcus viridans de la http://kepler.uag.mx/uagwbt/microbiologia/ciencias/sesiones/tema3.2.2.pdf UAG :