Universidad Autnoma Metropolitana-Iztapalapa

Microbiologa General Unidad 5

Nutricin Microbiana

Dr. Sergio A. Alatorre Santamara

Nutrientes

Microbiologa General Unidad V. Nutricin Microbiana

Sustancias que se emplean en la biosntesis y produccin de energa Indispensables para el crecimiento microbiano; son tomados de los alrededores de la clula Los podemos dividir en Macronutrientes y Micronutrientes Los Macronutrientes representan aproximadamente el 95% de la clula microbiana Estos son captados en cantidades relativamente grandes, proporcionales a lo que representan en las clulas 95% de la clula microbiana est constituido por C, O, H, N, S, P, K, Ca, Mg y Fe

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Macro y microelementos

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Macroelementos: C, H, O, P, K, N, S, Ca y Mg

Microelementos : B, Zn, Mn, Cu, Mo, Fe, Cl

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Composicin tpica de compuestos orgnicos e inorgnicos de microorganismos

Compuesto

Bacteria (% base seca) 46-52 10-14 50-60 6-15 5-10 15-25 4-10

Levaduras (% base seca) 46-52 6-8.5 35-45 30-45 5-10 5-10 4-10

Hongos (% base seca) 45-55 4-7 25-40 40-55 5-10 2-8 4-10

Carbono Nitrgeno Protenas Carbohidratos Lpidos cidos nuclecos Cenizas

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Composicin tpica de compuestos inorgnicos de microorganismos

g/100 g en peso seco Elemento Fsforo Azufre Potasio Magnesio Sodio Calcio Fierro Cobre Manganeso Molibdeno Total Cenizas Bacteria 2-3 0.2-1.0 1-4.5 0.1-0.5 0.5-1 0.01-1.1 0.02-0.2 0.01-0.02 0.001-0.01 -------7-12 Hongos 0.4-4.5 0.1-0.5 0.2-2.5 0.1-0.3 0.02-0.5 0.1-1.4 0.1-0.2 ------------------------2-8 Levaduras 0.8-2.6 0.01-0.24 1-4 0.1-0.5 0.01-0.1 0.1-0.3 0.01-0.5 0.002-0.01 0.0005-0.007 0.0001-0.0002 5-10

Macronutrientes C, H, O, N, S y P

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Son componentes de carbohidratos, lpidos, protenas y cidos nucleicos

Carbono Fuente de energa y/o compuestos para biosntesis

Macronutrientes C, H, O, N, S y P

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Son componentes de carbohidratos, lpidos, protenas y cidos nucleicos

Oxgeno e hidrgeno - Aportados por los compuestos orgnicos usados como fuentes de carbono y energa

Macronutrientes C, H, O, N, S y P

Microbiologa General Unidad V. Nutricin Microbiana

Son componentes de carbohidratos, lpidos, protenas y cidos nucleicos

Nitrgeno y azufre Se encuentran en las clulas en forma reducida como grupos amino y sulfhidrilo. Generalmente en forma reducida, aunque algunos organismos los asimilan en forma oxidada. Sulfatos, nitratos, peptonas y cistena Fijacin de N2 (N2 NH3)

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Nitrgeno

Se requiere para la generacin de protenas, cidos nucleicos, coenzimas, paredes celulares y otros constituyentes celulares

Nitrgeno inorgnico

N2 gaseoso
Nitrato (NO3-) Amoniaco (NH3) Nitrgeno orgnico Aminocidos Purinas Pirimidinas

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Asimilacin bacteriana del nitrgeno Nitrato reduccin Glutamato deshidrogenasa

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Fijacin de nitrgeno

Conversin de nitrgeno gaseoso en nitrgeno de compuestos qumicos

Rhizobium

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Azufre

Aminocidos (cistena y metionina) ARN

Coenzimas
La mayora de las bacterias son capaces de usar sulfato inorgnico (SO42-) Reduccin asimiladora de sulfato

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Fsforo

cidos nucleicos Fosfolpidos Coenzimas

Fosfato inorgnico, de uso directo

Fosfato orgnico, liberado por fosfatasas

Otros Macronutrientes

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K, Ca, Mg y Fe

Se encuentran en la clula en forma de cationes K+: necesario para actividades enzimticas, sntesis de protenas Ca2+: termorresistencia de endosporas Ambos son cofactores de enzimas Mg2+: forma complejos con el ATP y estabiliza los ribosomas y las membranas celulares Fe2+ y Fe3+: forman parte de protenas transportadoras de electrones, cofactor de enzimas

Micronutrientes

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Son aquellos que se requieren en cantidades tan pequeas que contaminantes presentes en agua y otros componentes del medio de cultivo pueden ser fuentes suficientes Mn, Zn, Co, Mo, Ni y Cu Son normalmente parte de enzimas, vitaminas y cofactores Facilitan la catlisis de reacciones y mantenimiento de la estructura de protenas.

Factores de crecimiento

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Son sustancias precursoras de ciertos constituyentes orgnicos de

la clula que los microorganismos son incapaces de sintetizar, generalmente se requieren en pequeas concentraciones: Aminocidos para protenas Purinas y pirimidinas para cidos nucleicos vitaminas para grupos prostticos o centros activos de ciertas enzimas

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Los patrones nutricionales de los microorganismos pueden ser divididos por dos criterios: Fuente de energa Fuente de carbono

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Clasificacin por fuente energtica

Fottrofos Capturan la energa radiante del sol y la transforman en energa qumica que es almacenada en los enlaces de carbohidratos y otras molculas

Si producen O2, oxignicos; si NO lo producen, anoxignicos

Quimitrofos

Oxidan compuestos qumicos para obtener energa

Estos se clasifican segn el tipo de compuestos que oxidan en: quimiorgantrofos y quimiolittrofos

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Fottrofos

Plantas superiores Algas Cianobacterias Bacterias fotosintticas diferentes a las cianobacterias.

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Quimioorgantrofos Obtienen energa de la oxidacin de compuestos orgnicos La mayora de las bacterias perteneces a esta categora utilizan molculas tales como carbohidratos, cidos orgnicos y protenas

Quimiolittrofos Obtienen su energa de la oxidacin de compuestos inorgnicos tales como el cido sulfhdrico (H2S), hidrgeno gaseoso (H2), nitrito NO2-, amonio NH+4 o hierro

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Clasificacin por requerimientos nutricionales (Fuente de carbono) Auttrofos Usan CO2 como nica fuente de carbono

Sintetizan sustancias orgnicas a partir de una fuente de dixido de carbono por medio de un mecanismo conocido como fijacin de CO2 Hetertrofos
Son incapaces de usar CO2 como fuente de carbono Requieren compuestos orgnicos preformados

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Auttrofos

Se incluyen en este grupo: Fotoauttrofos Obtienen su energa de la luz Quimioauttrofos Obtienen su energa de la oxidacin de compuestos qumicos

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Hetertrofos

Quimiohetertrofos
Oxidan compuestos para obtener energa y requieren formas orgnicas de carbono

Fotohetertrofos
Bacterias fotosintticas que pueden usar compuestos orgnicos como fuente de carbono

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Necesidades nutricionales debidas a mutaciones

Prottrofo Aquel que precisa los mismos nutrientes que la mayora de los miembros de su especie

Auxtrofo Cuando un organismo mutado carece de la capacidad para sintetizar un nutriente esencial debe obtenerlo ya sea del medio

o mediante transformacin de un precursor

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Microbiologa General

Unidad 5
Nutricin Microbiana (medios de cultivo)

Dr. Sergio A. Alatorre Santamara

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QU NECESITA UN MICROORGANISMO PARA CRECER?

1) MEDIO DE CULTIVO Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio Es cualquier medio que proporcione substancias nutritivas que permitan el desarrollo y reproduccin de microorganismos

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QU NECESITA UN MICROORGANISMO PARA CRECER? 1) MEDIO DE CULTIVO Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares en composicin a los lquidos orgnicos del cuerpo humano 2) INCUBACIN Depende del metabolismo del microorganismo a cultivar

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Condiciones generales para el cultivo de microorganismos

El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de

cultivo se ve afectado por una serie de factores de gran importancia y que pueden o no ser ajenos al propio medio de cultivo

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Condiciones generales para el cultivo de microorganismos

Disponibilidad de Nutrientes Adecuados

Un medio de cultivo adecuado para la investigacin microbiolgica ha de contener, como mnimo, carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas En muchos casos sern necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento

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Condiciones generales para el cultivo de microorganismos

Consistencia Adecuada del Medio

Partiendo de un medio lquido podemos modificar su consistencia aadiendo productos como albmina, gelatina o agar con lo que obtendramos medios en estado semislido o slido

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Presencia (Ausencia) de Oxgeno y Otros Gases

Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmsfera de oxgeno normal

Pero los anaerobios estrictos slo se desarrolla adecuadamente en una atmsfera sin oxgeno ambiental
En un punto intermedio, los microaerfilos crecen mejor en condiciones atmosfricas parcialmente anaerobias Mientras los anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones

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Condiciones Adecuadas de Humedad

Un nivel mnimo de humedad, tanto en el medio como en la atmsfera, es imprescindible para un buen desarrollo de las clulas microbianas en los cultivos

Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mnimas en las incubadoras a 35-37 C o ms proporcionando una fuente adecuada de humedad para evitar as que se deseque el medio

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Condiciones generales para el cultivo de microorganismos Luz

La mayora de los microorganismos crecen mucho mejor en oscuridad que en presencia de luz solar

Hay excepciones evidentes como sera el caso de los microorganismos fotosintticos

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Condiciones generales para el cultivo de microorganismos

pH
La mayora se desarrollan mejor en medios con un pH neutro Existen aquellos que requieren medios con valores de pH<7 Evitar la presencia de cidos o bases en cantidades que inhiban el crecimiento o que incluso puedan alterar sus procesos metablicos normales

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Condiciones generales para el cultivo de microorganismos

Temperatura
Los microorganismos mesfilos crecen de forma ptima a temperaturas entre 15 y 43 C Los psicrfilos crecen a 0 C (o menores temperaturas) aunque las condiciones ptimas suelen estar alrededor de 10 C Los termfilos por encima de los 50 C e incluso a temperaturas por arriba de los 80 C (hipertermfilos) En lneas generales, los patgenos humanos crecen en rangos de temperatura alrededor de 37C

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Condiciones generales para el cultivo de microorganismos Esterilidad del Medio Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estriles

Evitar la aparicin de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el crecimiento microbiano normal del o de los especmenes inoculados

El sistema para esterilizar los medios de cultivo es en autoclave (vapor de agua a presin) o calor hmedo

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MEDIOS DE CULTIVO Se pueden obtener de distintas fuentes:

En el laboratorio a partir de sus diferentes componentes A partir de productos en polvo deshidratados comerciales

Pueden adquirirse medios listos para su uso

Clasificacin De Los Medios De Cultivo Segn su estado fsico: Lquidos Semislidos (0.5 a 2 g/L de agar) Slidos (15 g/L) Segn su finalidad en microbiologa:

No selectivos o de uso general: contienen suficientes nutrientes como

para soportar el crecimiento de gran variedad de microorganismos

Selectivos: permiten el crecimiento de slo un tipo de microorganismo Enriquecido: son medios no selectivos que se le agrega sustancias como sangre, suero, albmina, etc

Diferenciales: son medios de cultivo que permiten establecer diferencias entre diferentes tipos microorganismos

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Microbiologa General Unidad 5
Nutricin Microbiana

Dr. Sergio A. Alatorre Santamara

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PRINCIPALES COMPONENTES DE LOS MEDIOS

Agar El agar se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de cultivo Agar bacteriolgico es un polisacrido que se obtiene de ciertas algas marinas Un gel de agar al 10% en agua se lica hacia los 100 C y se gelifica alrededor de los 40-45 C, dependiendo de su pureza

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PRINCIPALES COMPONENTES DE LOS MEDIOS

Extractos rganos o tejidos animales o vegetales (p.ej. carne, hgado, cerebro, semillas) son extrados con agua y calor, posteriormente concentrados hasta la forma final de pasta o polvo Estos preparados deshidratados son frecuentemente empleados en la confeccin de medios de cultivo Ejemplos: extracto de carne, de levadura, de malta, etc.

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PRINCIPALES COMPONENTES DE LOS MEDIOS

Peptonas Son mezclas complejas de compuestos orgnicos nitrogenados y sales minerales Obtenidas por digestin enzimtica o qumica de protenas animales o vegetales (soja, carne, gelatina, casena, etc.)

Las peptonas son muy ricas en pptidos y aminocidos, pero pueden ser deficientes en determinadas vitaminas y sales

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PRINCIPALES COMPONENTES DE LOS MEDIOS

Carbohidratos
Llamados comnmente azcares, se utilizan para enriquecer medios (fuente de carbono) Promueven el crecimiento o la pigmentacin Ayudan a determinar si los organismos pueden producir cido y/o gas a partir de ellos

Fluidos corporales
Sangre completa, plasma, o suero sanguneo son aadidos a los medios empleados para el cultivo de algunos patgenos

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PRINCIPALES COMPONENTES DE LOS MEDIOS

Sistemas amortiguadores Son incorporados para mantener el pH dentro del rango ptimo del crecimiento bacteriano (entre 6.5 y 7.5), siendo los lmites entre pH 4 y 9

Los microorganismos ms comunes son neutrfilos (el pH ptimo para su crecimiento est prximo a 7), y sales como fosfatos disdicos o dipotsicos, as como sustancias como las peptonas, previenen un cambio brusco del pH

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OTROS COMPONENTES IMPORTANTES Indicadores de pH Indicadores cido-base se aaden a menudo a los medios de cultivo con objeto de detectar variaciones de pH Agentes reductores Se aaden para crear condiciones que permitan el desarrollo de grmenes anaerobios

Agentes selectivos La adicin de determinadas sustancias al medio de cultivo puede convertirlo en selectivo Por ejemplo, cristal violeta, sales biliares, azida sdica, antibiticos, etc. A la concentracin adecuada, actan como agentes selectivos frente a determinados microorganismos

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Preparacin de medios de cultivo

Se deben tomar en cuenta los siguientes pasos:

- Cada ingrediente del medio debe estar disuelto o mezclado de manera homognea en un volumen adecuado de agua (destilada); puede necesitarse calentamiento
- Medir el pH y, en caso de ser necesario, se ajusta el valor - El medio se deposita en recipientes adecuados - Todo el material se esteriliza para evitar contaminaciones

Dependiendo del tipo de preparacin Preparacin de un medio de cultivo

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Tipos de medios de cultivo

Mnimo Medio que sirve para determinar los requerimientos nutricionales bsicos

Rico Cuando se desea obtener masa celular con mayor velocidad

Definidos o Sntticos Medios en los que se conocen todos los componentes

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Tipos de medios de cultivo

Enriquecidos o complejos Se utiliza para aislar un organismo a partir de una muestra grande de poblacin mixta

Selectivos Favorecen el crecimiento de m.o. Particulares

Diferenciales Permiten distinguir entre grupos distintos de m.o. segn sus caractersticas biolgicas

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Medio definido o sinttico

Son medios en que se conoce su composicin qumica exacta Los medios definidos se emplean regularmente en investigacin dado que con frecuencia se requiere conocer qu esta metabolizando el microorganismo

De gran uso cuando se conocen los requerimientos nutricionales

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Medio definido para E. coli Ingrediente KH2PO4 (NH4)2SO4 Cantidad (g/L) 13.6 2.0 Comentario

Fuente de P y amortiguacin
Fuente de N y S

CaCl2
FeSO47H2O MgSO47H2O Glucosa Agar

0.01
0.0005 0.02 1.0 15

Fuente de Ca
Fuente de Fe Fuente de Mg Fuente de C

pH ajustado a 7.4

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Medio definido para cianobacterias Ingrediente NaNO3 K2HPO43H2O Na2CO3 CaCl23H2O MgSO47H2O Cantidad (g/L) 1.5 0.04 0.02 0.036 0.075

cido ctrico
Citrato amnico frrico EDTA Solucin metales traza

0.006
0.006 0.001 1 mL/L

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Medios complejos

Son medios suficientemente ricos para satisfacer las necesidades nutricionales de diversos microorganismos Se preparan a partir de extractos naturales: carne, sangre, soya o casena Por esta razn son llamados complejos, ya que la composicin es muy variada y rica en nutrientes De gran utilidad cuando se desconocen los requerimientos nutricionales de un microorganismo en particular El caldo nutritivo es el ejemplo ms comn de este tipo de medio: 5 g de peptona, 3 g de extracto de carne y 8 g NaCl por litro de medio

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Tipos de medio

Selectivos - Favorecen el crecimiento de ciertos microorganismos mientras suprime el de otros - Se utilizan para aislar especies particulares a partir de una mezcla compleja

Diferenciales Permiten distinguir entre grupos distintos de microorganismos segn sus caractersticas biolgicas

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Agar MacConkey: medio selectivo y diferencial

Ingrediente
Peptona de gelatina

Cantidad (g/L)
17

Peptona de casena
Lactosa Sales biliares Cloruro sdico Rojo neutro Cristal violeta Agar

1.5
10 1.5 5 0.03 0.001 13.5 pH ajustado a 7.1

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Medios diferenciales: S. pyogenes se diferencia de otras bacterias porque es un medio de agar-sangre es capaz de hemolizar los glbulos rojos. Esto se detecta por el halo que se forma alrededor de cada colonia

Medios de cultivo comunes

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Agar nutritivo: No diferencial, para organismos no exigentes Agar PDA (papa dextrosa): No diferencial, para hongos

Agar sangre: Usado para el crecimiento de estreptococos

Agar chocolate: Crecimiento de Neisserias (gonococos y meningococos) y Haemophilus, pero en l pueden crecer muchos otros microorganismos exigentes Agar MacConkey: Es un medio utilizado para el aislamiento e identificacin de bacterias. Es un medio inhibidor de Gram (+). En su composicin lleva lactosa y un indicador (rojo de metilo) que lo convierten en un medio diferencial Agar C.L.E.D.: El medio C.L.E.D. (Cistina Lactosa Electrlito-Deficiente) est recomendado para el recuento e identificacin presuntiva de los microorganismos de las vas urinarias

Medios de cultivo comunes

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Agar S.S.: El agar SS es un medio selectivo empleado para el aislamiento de Salmonella y Shigella a partir de muestras fecales Agar Hektoen: Es un medio ms diferencial y menos selectivo que el agar SS. Se utiliza para facilitar el aislamiento de las enterobacterias C.P.S. ID3.: Medio cromognico desarrollado por Biomerieux, que permite la identificacin de E. coli, P. mirabilis y E. faecalis con la simple visualizacin del cambio de color de la colonia sobre el medio (rojo burdeos, azul o marrn)

Agar Mueller-Hinton: Es el medio universalmente aceptado para la realizacin de los antibiogramas o pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos
Agar tripticasa de soya: Es un medio utilizado para el crecimiento de organismos exigentes como Brucella, Neisseria o Streptococcus

Medios de cultivo poco comunes

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Agar Chapman y Agar Baird-Parker: Es un medio selectivo para el aislamiento de estafilococos Agar Desoxicolato Citrato Lactosa Sacarosa (DCLS): Similar al agar SS. Es un medio diferencial e inhibidor a la vez Agar Levine o EMB (Eosina azul de metileno): Se utiliza para aislamiento de enterobacterias, pues impide el crecimiento de Gram (+) y diferencia muy bien a E.coli, cuyas colonias adquieren un color negruzco con un brillo metlico caracterstico Agar Cetrimida; Agar King: Permiten el crecimiento de Pseudomonas, inhibiendo Gram (+) y la mayora de enterobacterias. El segundo pone adems de manifiesto la pigmentacin fluorescente de Pseudomonas bajo luz UV Agar Schaedler:Es un medio con sangre y vitamina K, adaptado para el cultivo de anaerobios

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