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Msc. (c) Maribel Denise Riveros Ramirez Microbiloga Invest. asociado de la UPCH Instituto de Medicina Tropical Alexander von Humboltd
Qu es la microbiologa?
Estudio de los organismos microscpicos 3 palabras griegas: mikros (pequeo), bios (vida) y logos (ciencia)
Epidemias
Descritas a lo largo de toda la historia de la humanidad. Atribuidas en la antigedad a hechizos o magia. SIN EXPLICACIN HASTA EL SIGLO XVII.
1.Generacin espontnea
La vida surge a partir de la no vida.
idea que perdur hasta finales del siglo XIX, la vida poda surgir del lodo, del Agua, del mar o de las combinaciones de los cuatro elementos fundamentales: aire, fuego, agua, y tierra.
Jean-Baptiste de Lamarck publica en 1809 su clebre Filosofa zoolgica y coloca a la generacin espontnea como el punto de partida de la evolucin biolgica. Algunas recetas de la Generacin espontnea.
Pionero en descubrimientos sobre los protozoos, los glbulos rojos de la sangre, el sistema de capilares y los ciclos vitales de los insectos. Construy como entretenimiento diminutas lentes biconvexas montadas sobre platinas de latn, que se sostenan muy cerca del ojo. A travs de ellos poda observar objetos, que montaba sobre la cabeza de un alfiler, amplindolos hasta trescientas veces. Otros: red de capilares (de Malpighi), glbulos rojos, protozoos y bacterias en agua animculos y espermatozoides de insectos y humanos. Demostr los huevos de gorgojos, pulgas y mejillones y que estos no surgan espontneamente a partir de granos de trigo y arena. Describi el ciclo vital de las hormigas mostrando que las larvas y pupas proceden de huevos, examin plantas y tejidos musculares, y describi tres tipos de bacterias: bacilos, cocos y espirilos. Mantuvo en secreto el arte de construir sus lentes, por lo que no se realizaron nuevas observaciones de bacterias hasta que se desarroll el microscopio compuesto en el siglo XIX.
los seres vivos se forman solamente a partir de seres vivos . Uno de los trabajos ms recordados, con microbios, es el del qumico Louis Pasteur. En los aos 60 del siglo pasado, los resultados de Pasteur se abrieron paso con dificultad en medio de creencias milenarias. Los acompaaba una idea igualmente reciente y provocativa, la del bilogo Charles Darwin, quien aseguraba que la vida, como la conocemos, es la consecuencia de un lento proceso evolutivo regido por la seleccin natural.
Postulados de Koch
Siglo XX
Aerobiosis y anaerobiosis En 1938 se observaron por primera vez los virus gracias a la invencin del microscopio electrnico. En las dcadas de 1960 y 1970 se descubrieron numerosos virus y se determinaron sus caractersticas fsicas y qumicas. Diversas tcnicas innovadoras: microscopio electrnico de barrido o las tcnicas de secuenciacin del cido desoxirribonucleico (ADN). Descubrimiento de los priones por Stanley Prusiner y su equipo en 1982 ha abierto una va de estudio dentro de la microbiologa (simples protenas desprovistas de material gentico) En 1988 Kary Mullis utiliza la enzima de Thermus aquaticus para estabilizar la PCR (premio Nobel en 1993)
Ramas de la Microbiologa
Microbiologa Medica
DEFINICIN
Es el estudio de las interacciones entre los humanos y los microorganismos con los que coexisten. Los microorganismos son clasificados de acuerdo a la naturaleza de su interaccin en un espectro que va desde los beneficiosos hasta los dainos.
Dominio Archae
Las arqueas o arqueobacterias Procariontes con organizacin interna ms sencilla. Habitan ambientes extremos : - Ambientes sin oxgeno - Agua con sales concentradas. - Agua cida y caliente. 3.500 millones de aos antigedad Caractersticas rna: separacin del reino monera y la creacin de archae.
Diferencias
PROCARIOTAS(Eubacterias y archaebacterias) Informacin gentica esta libre en el citoplasma Pared celular, qumicamente compleja (peptidoglicano) No organelas membranosas pero si RIBOSOMAS pequeos 70s Locomocin con flagelos (flajelina) y presencia de filamentos axiales
EUBACTERIAS (todas las otras clulas) Informacin gentica en un ncleo rodeado de membrana DNA asociado con protenas (Histonas) Pared celular en plantas (celulosa) y hongos (quitina) pero ausente en clulas animales Organelas membranosas, mitocondrias y cloroplastos Ribosomas 80s Locomocin con flagelos (microtubulos,t ubulina y dineina) motilidad contrctil, basado en actina y miosina.
Procariota: Cpsula
Una cpsula gelatinosa, o glicoclix, formado a partir de polisacridos, polipptidos o ambos, rodea una pared celular. Bacterias mviles tienen un flagelo
Procariota: Pili
Pili. Proyecciones que asisten en la adhesin de dos bacterias para el intercambio gentico.
http://www.youtube.com/watch?v=-6PMZZMpVFo
Procariota: ADN
El ADN bacteriano se encuentra en 2 lugares: cromosoma circular el cual puede estar unido a la membrana celular plsmido circular el cual es un ADN mucho ms pequeo y libre.
Procariota: Ribosomas
Ribosomas y los grnulos de inclusin se encuentran en todo el citoplasma.
Estructura de la Bacteria
Forma
Bacilo: bacillus Esferas: coccus Espiral: spirillum
Arreglo
En parejas: diplo Formando grupos como racimo: staphylo Cadenas: strepto
Ejemplos
Streptococcus: Cadena de esferas o cocos Staphylococcus: Racimo de esferas o cocos Lactobacillus:Cadenas de bacilos
Otras formas
Cocos Cadena = Streptoccus Racimo = Staphylococcus Bacilos Cadena = Streptobacillus Coccobacillus Vibrio = curvos Espirilos Espiroquetas
Componentes de la bacteria
Flagelo Pili o pelo Capsula Membrana plasmtica Citoplasma Pared celular Lipopolisacridos cidos teicoicos Inclusiones Esporas
Envoltura celular
Cubierta externa del citoplasma Compuesto de 2 capas: Pared celular y membrana celular Mantiene la integridad celular Divide a las bacterias en 2 grupos = Tincin Gram Gram-positivos: Pared celular gruesa compuesta de peptidoglicanos y membrana celular Gram-negativos: Membrana celular externa, capa de peptidoglicanos delgado, y membrana celular.
Pared celular
Determina la forma de la bacteria Su resistencia previene ruptura por presin osmtica Presente slo en bacterias Algunos antibiticos lo afectan directamente. Ejm: Penicilina
Formacin de la pared celular de Gram positivos por unin de cinco glicinas entre las unidades de peptidoglicano
cidos teicoicos
Presente slo en Gram positivos Glicerol, fosfatos y ribitol Sitio de unin de fagos
Lipopolisacrido (LPS)
Endotoxina Causante de fiebre Nomenclatura de la toxina Endo- parte of bacteria Exo- excretado en el medio externo Estructura Lipido A Polisacrido Antgeno O de E. coli y Salmonella Slo en Gram negativas Puede ser removido con alcohol/acetone
LPS
Funciones Txico; causa muerte en ratones, cerdos y humanos
a LPS
Pyrogeno; causa fiebre Vacunacin. Siempre causa fiebre Adyuvante; estimula inmunidad Resistente al calor Caracterstica de las colonias Mucoide = Cremoso (bastante LPS) Seco = Rugoso (poco LPS)
Flagelo bacteriano
Los flagelos bacterianos son simples pero son motores poderosos - Motilidad Movimiento rotacional de 360 grados. Partes: - Filamento. Largo, delgado, estruct helicoidal compuesto de la protena flagelina. - Gancho. Vaina curveada - Cuerpo basal. Anillos superpuestos fijos en la pared celular. Bacterias sin flagelo: Movimiento Browniano
Flagelo - Funcin
Gua a la bacteria en una direccin en respuesta a un estmulo externo: - Estmulo qumico quimiotaxis; positivo y negativo - Estmulo de luz fototaxis Genera movimiento horarios y antihorarios: - Antihorario resulta en un movimiento linear suave corren - Horario - tumbos
Flagelo bacteriano
http://www.youtube.com/watch?v=Jno9DqbVDdY
Quimiotaxis
Movimiento dirigido hacia atrayentes qumicos y lejos de repelentes qumicos Sistema molecular sensorial Ms de 30 genes en el opern; codifican receptores, comunicadores, transductores, reguladores de tambor, y motores Conseguido por paseos aleatorios sesgados Mecanismo de accin Paseos al azar se logran a partir de alteraciones en la frecuencia de volteo
Fimbria
Pelos finos de protena que salen de la superficie celular Funcin: Adhesin a otras clulas y superficies
Estructura tubular rgida compuesta de la protena pilin Slo en clulas Gram negativas Funcin: Unin de bacterias para la transferencia de DNA (conjugacin)
Pili
Glicocalix
Molculas que recubren la parte externa de la pared celular, compuesto de azcares y/o protenas Dos tipos: 1. Capa mucosa poco organizado 2. Cpsula altamente organizada Funciones: Proteger a la clula de deshidratacin y falta de nutrientes Evita la fagocitosis de los glbulos blancos contribuyendo a la patogenicidad Unin formacin de biofilms
Biofilm
Cpsula
Material compacto alrededor de la clula Algunas bacterias segregan materiales mucosos: polisacridos, polipptidos y complejos de polisacridos y protenas (glucoclix) Capa mucosa: si el material es laxo, de modo que forma solo una capa difusa.
Quorum sensing
mecanismos de cooperatividad entre microorganismos desarrollan un comportamiento multicelular que les suponga una ventaja selectiva El mecanismo bacteriano de comunicacin intercelular que controla la expresin gnica en funcin de la densidad celular. Regulacin de la induccin de la patogenicidad mediante quorum sensing en la bacteria simbionte del ser humano S. aureus.
METABOLISMO
CRECIMIENTO
NUTRICION
Introduccin
Qu utilidad tiene conocer las condiciones que un microorganismos requiere para crecer?
# Obtenerlo en el laboratorio Cultivo
Nutricin Microbiana
La nutricin es el proceso por el que los microorganismos toman del medio donde habitan las sustancias qumicas que necesitan para crecer Dichas sustancias se denominan nutrientes Los nutrientes se requieren para:
energa biosntesis
Nutrientes: Dependiendo de las cantidades que se requieran se habla de macronutrientes y micronutrientes. Existen diferencias en cuanto a los requerimientos nutricionales de cada microorganismo.
MACRO
Carbono. Nitrogeno. Fosforo. Azufre Potasio Magnesio Sodio Calcio Hierro
MICRO
Cromo Cobalto Cobre Manganeso Molibdeno Niquel Selenio Tungsteno Vanadio y Zinc.
Factores de crecimiento
Se requieren en muy pocas cantidades y solo por algunas clulas:
Vitaminas, Aminocidos, purinas y pirimidinas.
Tipos Nutricionales
Tipo
Fotoautotrofas
Fuente de energa
Luz
Fuente de carbono
CO2
Ejemplos
Algas y cianobacterias
Fotoheterotrofas
Quimioautotrofas o Litotrofas
Luz
Qumica
Compuestos orgnicos
Compuesto inorgnicos: H2, NH3, NO2, H2S, CO2
Quimioheterotrofas o Heterotrofas
Qumica
Clases de nutrientes
Universales (los requeridos en esta forma por todos los procariotas): H2O, CO2, fosfatos y sales minerales Particulares: elementos que se pueden captar de diferentes maneras, segn especies: N y S. Especiales: los microorganismos pueden tener necesidades especiales. Ej: Las diatomeas necesitan cido silcico Las bacterias halfilas requieren grandes cantidades de Na (mares) Factores de crecimiento
El Carbono
El C es necesario para construir el esqueleto de todas las molculas orgnicas Auttrofos: pueden usar CO2 como nica fuente de C Hetertrofos: emplean molculas orgnicas preformadas y reducidas como fuente de C
Los microorganismos tienen gran flexibilidad con respecto a la fuente de C
El CO2
El CO2 es requerido por todo tipo de bacterias.
Los autotrofos lo requieren como fuente de C, y lo reducen usando como fuente de energa
sustancias qumicas : quimioautotrofos la luz: fotoautotrofos
Las arqueas metanognicas lo pueden usar como aceptor final de electrones en la respiracin, produciendo CH4. Adems, algunas lo usan tambin como fuente de C Los heterotrofos necesitan pequeas cantidades de CO2 para sus carboxilaciones en rutas metablicas
El CO2
El origen del CO2 puede ser:
Endgeno: procedente de descarboxilaciones que ocurren al degradar la fuente orgnica de carbono Exgeno: el CO2 de la atmsfera o disuelto en las soluciones acuosas Normalmente, las bacterias crecen a la concentracin de CO2 atmosfrico (0.03%), pero algunas bacterias (Neisseria, Brucella), cuando se aislan por primera vez, requieren atmsferas enriquecidas, con 5-10% de CO2. (capnofilia o microaerofilia)
Fosfatos
El P suele requerirse en forma de fosfatos
Bacterias que usan fosfatos orgnicos poseen fosfatasas extracelulares (secretadas) en Gram-positivas, periplsmicas en Gram-negativas Fosfatos inorgnicos
Las bacterias que usan fosfatos orgnicos no dependen de ellos, ya que tambin pueden usar fosfatos inorgnicos
El fsforo se usa principalmente para la sntesis de los cidos ncleicos y los fosfolpidos, pero aparece tambin en coenzimas y en protenas.
Oligoelementos o micronutrientes
Mn2+ (cofactor de ciertas enzimas) Co2+ (vitamina B12) Zn2+ (estabiliza ADN-polimerasas y ARNpolimerasas) Ni (en hidrogenasas, enzimas que captan o liberan H2)
Nitrgeno y azufre
Los elementos N y S son requeridos por todos los seres vivos, se encuentran en la clula en estado reducido:
El -NH2 forma parte de los aminocidos y de las bases nitrogenadas El radical SH interviene en aminocidos y coenzimas
Factores de crecimiento
Son molculas orgnicas, componentes celulares esenciales, que no pueden ser sintetizados por el microorganismo, los toman del ambiente, y son requeridos en muy pequeas cantidades Existen 3 clases principales
Aminocidos: sntesis de protenas Purinas y pirimidinas: sntesis de cidos nucleicos Vitaminas: cofactores enzimticos
Ejemplos:
Brucella requieren biotina, niacina, tiamina y pantotnico Haemophilus necesita hemo y piridn-nucletidos
Factores de crecimiento
Factor o vitamina p-aminobenzoico (PABA) Acido flico Biotina Cobalamina (vitamina B12) Niacina (cido nicotnico) funciones principales precursor del cido flico metabolismo de compuestos C1, transferencia de grupos metilo biosntesis de cidos grasos; fijacin de CO2 reduccin y transferencia de compuestos C1; sntesis de desoxirribosa precursor del NAD; transferencia de electrones en reacciones redox
Riboflavina cido pantotnico Tiamina (vitamina B1) Complejo B6 (piridoxal, piridoxamina) Grupo Vitamina K, quinonas
precursor de FAD y FMN precursor de la CoA descarboxilaciones; transcetolasas. transformaciones de aminocidos y cetocidos
transportadores de electrones (ubiquinonas, menaquinonas, etc.)
Captacin de Fe
La captacin de Fe es difcil debido a la insolubilidad del ion Fe3+ Los siderforos son molculas de bajo PM capaces de formar complejos de Fe3+ y aportarlos a la clula Los mo secretan siderforos cuando hay poco Fe disponible. E complejo Fe-siderof se une a la prot receptora del siderforo. Dentro de la clula el Fe se reduce a Fe2+
Categoras Nutritivas
Crecimiento Bacteriano
Se define como el aumento ordenado de todos los constituyentes qumicos de la clula. Se trata de un proceso complejo, que supone la replicacin de todas las estructuras y componentes celulares a partir de los nutrientes exgenos.
Crecimiento Bacteriano
Aumento de nmero (no de tamao) Multiplicacin bacteriana: fisin simple o binaria
1. 2. 3. 4. 5. 6. Replicacin de DNA Elongacin Auto duplicacin de ADN cromosmico Tabicado central Invaginacin membrana celular Sntesis de pared
Tiempo de generacin
Tiempo de generacion: es el tiempo que se requiere para que la poblacion se duplique. Los tiempos de generacion varian ampliamente entre las diferentes bacterias. Ej. 1 a 3 horas, 10 min, o varios dias. Varan de 20 minutos (Escherichia coli) hasta 24 horas
Fase de Latencia
El nmero de microorganismos no vara Adaptacin al medio, produccin de enzimas Tiempo variable: entre una hora a das. Tamao relativo aumentado por divisin
Fase Estacionaria
El medio de cultivo no se renueva, comienzan a acumularse metabolitos txicos, se modifica el pH, los nutrientes se agotan, la velocidad de multiplicacin se retrasa y hay un equilibrio entre bacterias vivas y muertas. Fase de Esporogenesis para las especies productoras de esporas.
Cuando continua el crecimiento en el medio de cultivo viejo se produce una inversin numrica con respecto a la fase exponencial. En este periodo son mas las bacterias muertas que las vivas, hasta que se termina con la muerte de todas. Si son bacterias con capacidad de esporular, se produce la esporulacin en esta fase. Disminucin de nutrientes
Efecto de la Temperatura
Temperatura mnima de crecimiento Temperatura ptima de crecimiento Temperatura mxima de crecimiento
Efecto de la Temperatura
Sicrfilos Requieren bajas temperaturas 15 20 C La mnima puede ser muy baja Bacterias en el fondo del mar y en los polos Mesfilos Rango de temperaturas: 25 40 C Temperatura ptima: 37 C 1 C Agentes que afectan al hombre y los animales Termfilos Toleran altas temperaturas Temperatura ptima: 55 C Temperatura mxima: 80 C o mas.
M.O Algas
0 - 20 20 - 40 40 - 70 90 - 115
15 38 60 106
E. coli
Bacillus stearothermophi llus Thermus acuaticus
Condiciones de pH
pH : Potencial Hidrgeno. Va desde 0 a 14. pH < 6,5 cido pH > 7,5 bsico o alcalino pH 6,5 7,5 neutro Mas adecuado para crecimiento bacteriano Bacterias que crecen hasta pH 4 Acidfilas (Por ejemplo: Lactobacillus) Vibrio cholerae : medio alcalino
Presin Osmtica
Los solutos (sales y azcares) disueltos se desplazan a zonas de menor concentracin. El agua se desplaza a zonas de mayor concentracin de solutos Una presin osmtica alta causa prdida de agua y plasmlisis de la clula Halfilas: bacterias que toleran altas concentraciones salinas Halfilas facultativas : toleran hasta un 2 % de sales
Condiciones atmsfricas
Potencial de xido-reduccin o Redox (Eh) Respiracin bacteriana : reacciones de xidoreduccin, en cadena El aceptor final de electrones o hidrogeniones es variable
Requerimientos de O2 y CO2
En funcin de los requerimientos de O2 y CO2, las bacterias pueden clasificarse en: Bacterias aerobios estrictas: necesitan una concentracin de alrededor del 21% de oxgeno para poder desarrollar. (Pseudomonas, Mycobacterium, Corynebacterium) Bacterias microaerfilas: slo necesitan alrededor de un 5% de oxgeno para desarrollar. Mayores concentraciones inhiben su desarrollo. (Campylobacter, Helicobacter) Bacterias anaerobios obligadas o estrictas: son incapaces de sobrevivir en presencia de oxgeno, es decir requieren un 0% de oxgeno (Fusobacterium, Clostridium) Bacterias anaerobias aerotolerantes: pueden sobrevivir, aunque no crecer, en presencia de hasta un 0,5% de oxgeno. (Actinomyces, Propionibacterium) Bacterias anaerobias facultativas: son capaces de crecer en una atmsfera tanto con o sin oxgeno. (Streptococcus, Staphylococcus, Enterobacteriaceae) Bacterias capnfilas: son bacterias aerobias que necesitan adems para crecer un 5-10% de CO2. (Neisseria, Haemophilus)
Metabolismo Microbiano
Produccin de Energia y biosntesis
1. Introduccin
Metabolismo:
Conjunto de procesos mediante los cuales un microorganismo obtiene la energa y los nutrientes que necesita para crecer.
2 tipos:
liberan E = exergonicas catablicas utilizan E = endergonicas - anablicas
qumica luminosa
Componentes celulares como protenas (enzimas), DNA, RNA, carboidratos, lipdeos, etc.
Sntesis
Compuestos y estruturas
Degradacin
E requerida
Sistema de almacenamiento y transferencia de E
E liberada
degradacin de sustratos y nutrientes
3.Tipos de energia
Energia qumica energa contida en enlaces qumicas
de las molculas
Quimiotrficos
Quimiolitotrficos
C= CO2
Quimiorganotrficos
C=orgnico
Fotoautotrfico = plantas, cianobactrias, algas verdes Fotoorganotrfico/hetero = bactrias prpuras, exceto as abaixo Foto Luz Fotolitotrficas = bactrias prpuras metabolizantes do S
Quimio Qumica Quimioautotrfico = Archaea metanognicas Quimiorganotrfico/hetero = maioria bactrias e fungos Organotrfico/heterotrfico Molculas orgnicas Quimiolitotrfico = bactrias nitrificadoras Autotrfico/litotrfico Molculas inorgnicas
COMPLEJO ENZIMA-SUSTRATO
Almacenamiento de energa
Ligacoes tioster
Fermentacin
Sntese de ATP acoplada reaccin de xido-reduccin
Respiracin
O2 u otro compuesto como aceptor exgeno de eMas E
Recordemos.....(redox)
- Un compuesto se torna oxidado cuando: 1. Pierde e2. Se une a un atomo mas electronegativo 3. Esto generalmente ocurre cuando se une a un O - Un compuesto se torna reducido cuando: 1. Gana e2. Se une a un atomo menos electronegativo 3. Esto generalmente ocurre cuando se une a un H Formas reducidas de C (carboidratos, metano, lipdios, alcoholes) son importantes fuentes de energa en sus enlaces. Formas oxidadas de C (cetonas, aldedos, cidos carboxlicos e CO2) disponen de poco potencial energtico en sus
enlaces.
ELEMENTOS CLAVES PARA REACCIONES CATABOLICAS E IMPORTANTES REACCIONES BIOSINTETICAS Los intemediarios son desviados para vias biosinteticas cuando es necesario:
Ejemplos:
Oxalacetato: precursor de aminocidos Succinil-CoA: formacion de citocromos y clorofila, entre otros Acetil-CoA: biosintesis de cidos graxos
Fosforilacin oxidativa
Genera la gradiente de Protones
Reaccion de oxido y reduccion en presencia de un aceptor de e- externo, u O2 A molcula entera de sustrado es oxidada hasta CO2 Alto potencial de energa Gran cantidad de ATP puede ser generada: teoricamente 38 ATPs
Produccin de ATP:
En la cadena respiratoria:
4 NADH formados em la glucolisis 6 NADH formados en ciclo de Krebs 2 FADH formados en ciclo de Krebs Formacin directa en la glucolisis 12 ATP 18 ATP 4 ATP 2 ATP
2 GTP
38 ATP
La concentracin de NAD + en las clulas es baja, necesita ser reoxidado a no dejar la va glucoltica. Una reduccin del piruvato a etanol u otros productos establece un NAD y permite la continuidad de la glucolisis. Produccin lquida de apenas
2 ATP.
Caractersticas de la Fermentacin:
cido pirvico es reducido a ac.organicos y alcoholes NADH es oxidado a NAD: esencial para la continuidad de la via glicoltica O2 no es necesario No se obtiene ATP adicional. Gases (CO2 y/o H2) pueden ser producidos
Produtos da fermentacin
Espcie microbiana
Acetivibrio cellulolyticus Actinomyces bovis Clostridium acetobutylicum Enterobacter aerogenes Escherichia coli Lactobacillus brevis
Streptococcus lactis
Succinimonas amylolytica
cido lctico
cidos actico e succnico
Biosntesis (anabolismo)
Energia para sntesis de compuestos celulares: cidos nuclicos (DNA, RNA), sustancias nitrogenadas (aa, enzimas, protenas), carbohidratos (peptidoglicano), lipdeos, etc. ATP para procesos como division celular, motilidad, transporte activo de nutrientes, etc.
Utilizacin de energa
Aminocidos
Arranjo de aminocidos
Protenas/enzimas
Purinas e pirimidinas
Nucleotdeos
ribose = ribonucleotdeos (RNA) desoxirribose = desoxirribonucleotdeos (DNA) Activacin de dos nucleotdeos (ATP) Sntese de cidos nuclicos a partir de nucleotidos activados
Biosntesis de carbohidratos
CO2
Triose
Pentoses e hexoses
Nucleotdeos
Polissacardeos
RNA e DNA
Fosfolipdios
Glicerol fosfato