TRANSCRIPCION EN EUCARIOTAS

Mara del Pilar Mrquez Departamento de Biologa

Transcripcin en eucariotas

Compartimentacin de la transcripcin y traduccin

Transcripcin
http://www.wiley.com/college/karp/0471465801/DNAinteractiv e/Transcription/Transcription_588x392.html

Transcripcin en eucariotas

RNA polimerasas: enzimas muy conservadas molecularmente

Transcripcin en eucariotas
La transcripcin es un proceso muy parecido en procariotas y eucariotas
Cules son entonces las diferencias?
Existe una polimerasa para cada tipo de gen o RNA a transcribir
mRNA (mensajero)

Cules son los tipos de genes o RNA?

tRNA (de transferencia) rRNA (ribosomal) snRNA (pequeos nucleares)

Transcripcin en eucariotas
Cules son las diferencias?

mRNA (mensajero) tRNA (de transferencia) rRNA (ribosomal)

RNA polimerasa II RNA polimerasa III

RNA polimerasa I y III RNA polimerasa II y III

snRNA (pequeos nucleares)

Reconocimiento del promotor: FACTORES GENERALES DE TRANSCRIPCIN (GTFs)

NO EXISTE FACTOR SIGMA ()!!

Polimerasa I II III

Localizacin Ncleo / nucleolo Ncleo Ncleo

Tipo de RNA que transcribe rRNA 28S, 18S y 5.8S pre mRNA y snRNA tRNA, snRNA y 5SRNA

Transcripcin en Eucariotas
Se requiere un promotor ncleo o central para la iniciacin de la transcripcin Se identifica por secuencias (secuencias diana) cerca del sitio de iniciacin (+1 de la transcripcin) de muchos genes eucariotas Especifica el sitio de inicio de la transcripcin y la direccin de la transcripcin

Estructura general de un gen eucariota

Regin reguladora Regin estructural Regin terminadora

-30

Unidad Transcripcional

corriente arriba +1 (coordenadas negativas)

corriente abajo (coordenadas positivas)

Transcripcin en Eucariotas
En eucariotas, existen tres tipos de RNA polimerasas Para cada polimerasa existe un tipo de promotor especfico secuencias diana (cajas) van a variar segn tipo de polimerasa requerida

Transcripcin en Eucariotas
RNA polimerasas no pueden reconocer directamente el promotor: requieren de varios factores proteicos adicionales = Factores Generales de la Transcripcin o GTFs
GTFs + RNA polimerasa Promotor central = Complejo de preiniciacin

Transcripcin en Eucariotas
GTFs: funcin similar a factor sigma en procariotas: Reconocen elementos basales del promotor Promueven apertura de la doble hlice Reclutan RNA polimerasa y favorecen la transicin iniciacin-elongacin

Transcripcin en Eucariotas
RNA polimerasa II (mRNA y snRNA): Promotor central de clase II:
combinacin de 4 elementos basales (no siempre estn los 4)
- CAJA TATA (-26) - Elemento Inr (iniciador) (+1) - Elemento BRE (TFIIB Recognition Element) (-35) - Elemento DPE (Downstream Promoter Element) (+30)

Caja TATA
Iniciador

Regin del promotor entre 24 y 32bp corriente arriba del sitio de inicio de la transcripcin Sitio de ensamble del complejo de preiniciacin (GTF + polimerasa)

Ensamblaje del complejo de preiniciacin

1- CAJA TATA: unin del factor basal TFIID a travs de la TBP (TATA Box Binding Protein) Dobla la doble cadena de DNA (80): 2- Reclutamiento de ms factores de transcripcin: TFIIA y TFIIB: plataforma lista para recibir RNApol II 3- Reclutamiento de RNApol II TFIIF y TFIIH (helicasa) 4- TFIIH fosforila RNApol= inicio

Complejo de pre-iniciacin
Promotor central + GTFs + RNA pol II = complejo de preiniciacin completo Ciclos de elongacin abortivos No es suficiente para dar inicio a transcripcin! Qu permite la transicin hacia elongacin? Accin de activadores de la transcripcin reclutados en secuencias reguladoras

Transcripcin en eucariotas
Cmo transcribir genes que se encuentran incorporados en los nucleosomas? Factores adicionales: Complejo mediador Protenas reguladoras de unin al DNA Enzimas modificadoras de la cromatina

Elementos adicionales necesarios para la transcripcin

Secuencias reguladoras: - Elementos proximales (- 50 a -200 pb) UAS (Upstream Activator Sequence) - Elementos distales: Enhancers (intensificadores o amplificadores)

Elementos adicionales necesarios para la transcripcin

Activadores transcripcionales:
Dominio de unin al DNA Dominio de activacin

Activadores: UAS y Enhancers

Activadores

Complejo de iniciacin

UAS

Activacin de la elongacin
Activadores promueven indirectamente la Fosforilacin de cola CTD (dominio carboxilo terminal) de RNApol: Permite que la RNApolimerasa se desprenda de la mayora de los GTFs Transicin iniciacin/elongacin = activacin de la polimerizacin o elongacin

Otros elementos adicionales necesarios para la transcripcin

Enzimas modificadoras de nucleosomas: complejo remodelador de cromatina + Histona Acetil Transferasas (HAT) Complejo mediador: Asegura interaccin entre reguladores y la RNA polimerasa

Complejos mediadores
Mltiples subunidades: > 20 Cada una permite un contacto con un grupo de activadores especficos = regulacin diferencial de la transcripcin en promotores similares Regulacin de la actividad quinasa de TFIIH= iniciacin Muchas subunidades con funcin desconocida Se desprende en la elongacin!

Elongacin

Tras activacin, la RNA polimerasa se desplaza a lo largo de la cadena de DNA sobre un molde 35 formando una burbuja de transcripcin.

Transcripcin en eucariotas: promotores clase I y III

RNApol I y III: promotores de clase I y III
Enzimas muy emparentadas con RNA pol II Comparten algunas subunidades Se asocian a GTFs distintos que permiten reconocimiento de promotores distintos Un factor de transcripcin es comn a las 3 polimerasas = TBP Factor de Transcripcin universal

Genes Clase I: precursores de rRNA

Promotor con dos elementos: Elemento Central UCE (Upstream Control Element)

Promotores clase I

Genes Clase III: precursores de tRNA y rRNA 5S

Promotores ubicados corriente abajo del sitio de inicio de la transcripcin

Generalmente con dos elementos: Caja A Caja B

Promotores clase II

Transcripcin en eucariotas: genes clase I

RNA pol I (rRNA): polimerasa ms activa de las 3!
nica con localizacin nucleolar Transcribe un solo gen = RNA precursor de rRNA 28S, 18S, 5.8S

Transcripcin en eucariotas
RNA pol I
Gen en numerosas copias en el genoma repetidas en tandem = 80% del RNA total de una clula es rRNA Importancia de tener su propia RNA polimerasa

Transcripcin en eucariotas: RNA ribosomal

Ribosomas: rRNAs + protenas ribosomales

Transcripcin en eucariotas: genes clase III

RNApol III:
Transcribe RNA precursor de RNA pequeos = tRNAs y rRNA 5S + snRNA

Terminacin de la transcripcin
Extremos 3 generados de 2 formas: Secuencias terminadoras Corte del RNA por una endonucleasa

RNA pol I termina la transcripcin con una secuencia terminadora de 18bp

RNA pol III termina la transcripcin en una secuencia poly (U)4 inmersa en una regin rica en G.C

Transcripcin en organelos
Al igual que en Bacteria la mitocondria y el cloroplasto poseen: D loop (H1, H2 y L) Un solo cromosoma circular Una sola RNA polimerasa
Transcripcin = procariotas

RNA polimerasas
Bacteria
Un tipo para todos los genes

Archaea
Un tipo IGUAL a la tipo II de los Eucariotas

Eukarya
Tres tipos diferentes (I, II y III) Reconoce caja TATA (-26)

Reconoce la caja Reconoce caja de Pribnow TATA (-26) (-10) Terminacin por repeticiones invertidas o dependiente Terminacin por secuencias poliU

Terminacin por secuencias poliU en algunos genes

 http://vcell.ndsu.edu/animations/transcripti on/movie-flash.htm

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