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Este documento describe la estructura y características de las inmunoglobulinas G de los camélidos. Las IgG de los camélidos están compuestas solo de cadenas pesadas, carecen de cadenas ligeras y se conocen como anticuerpos de cadenas pesadas o HCAb. Los HCAb tienen dos tipos, IgG2 e IgG3, que difieren en su estructura. Los dominios de unión a antígeno de los HCAb, llamados VHH, tienen propiedades como alta estabilidad y expresión en bacterias que los hacen útiles para aplic
Este documento describe la estructura y características de las inmunoglobulinas G de los camélidos. Las IgG de los camélidos están compuestas solo de cadenas pesadas, carecen de cadenas ligeras y se conocen como anticuerpos de cadenas pesadas o HCAb. Los HCAb tienen dos tipos, IgG2 e IgG3, que difieren en su estructura. Los dominios de unión a antígeno de los HCAb, llamados VHH, tienen propiedades como alta estabilidad y expresión en bacterias que los hacen útiles para aplic
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Este documento describe la estructura y características de las inmunoglobulinas G de los camélidos. Las IgG de los camélidos están compuestas solo de cadenas pesadas, carecen de cadenas ligeras y se conocen como anticuerpos de cadenas pesadas o HCAb. Los HCAb tienen dos tipos, IgG2 e IgG3, que difieren en su estructura. Los dominios de unión a antígeno de los HCAb, llamados VHH, tienen propiedades como alta estabilidad y expresión en bacterias que los hacen útiles para aplic
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Veterinaria de San Marcos Autor: Antonio Herrera Rosalino Universidad Nacional Mayor de San Marcos Facultad de Medicina Veterinaria ESTRUCTURA Y CARACTERSTICAS DE LAS INMUNOGLOBULINAS G DE LOS CAMLIDOS
Postgrado Autor: Antonio Herrera Rosalino Pgina 1
TABLA DE CONTENIDO 1. PRESENTACIN ...................................................................................................... 2 2. LAS INMUNOGLOBULINAS G DE LOS CAMLIDOS ...................................... 3 3. ESTRUCTURA DE LAS INMUNOGLOBULINAS G DE LOS CAMLIDOS ..... 3 4. CARACTERSTICAS DE LAS INMUNOGLOBULINAS G DE LOS CAMLIDOS ............................................................................................................. 6 5. CONCLUSIONES ..................................................................................................... 8 6. LITERATURA CITADA ........................................................................................... 8
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1. PRESENTACIN Los camlidos son los nicos mamferos conocidos que producen isotipos de inmunoglobulinas G (IgG) funcionales que no poseen cadenas livianas en su estructura, por lo que estas inmunoglobulinas estn constituidas solamente por dos cadenas pesadas. El trmino de anticuerpos de cadenas pesadas (HCAb, siglas en ingls) ha sido asignado a estos isotipos de IgG no convencionales.
En el presente artculo se realiza una breve revisin sobre la estructura y las caractersticas de las IgG de los camlidos. Hasta el momento se han identificado dos tipos de IgG de cadenas pesadas, los cuales se diferencian estructuralmente y se les denomina: IgG 2 e IgG 3 . Actualmente, los dominios de unin a antgeno de estos HCAb, conocidos como los VHH o ms comnmente como los nanoanticuerpos vienen siendo utilizados ampliamente en biotecnologa, debido a su fcil expresin en vectores, alta estabilidad al calor y eficiente biodistribucin tisular. Palabras clave: Camlidos, inmunoglobulinas G, nanoanticuerpos, biotecnologa ESTRUCTURA Y CARACTERSTICAS DE LAS INMUNOGLOBULINAS G DE LOS CAMLIDOS Antonio Herrera Rosalino (antoniovet99@gmail.com)
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2. LAS INMUNOGLOBULINAS G DE LOS CAMLIDOS Las IgG son glicoprotenas heterotetramricas las cuales consisten en dos cadenas pesadas (H) y dos cadenas livianas (L) y son consideradas como el principal componente de la inmunidad humoral (De Simone et al., 2006). Sin embargo, Hamers-Casterman et al. (1993) demostraron por primera vez que el suero de los camlidos contena un anticuerpo funcional carente de las cadenas L. Estos anticuerpos slo han sido observados en todas las especies de camlidos, los cuales pertenecen a la familia Camelidae, nica familia sobreviviente del suborden Tylopoda, el cual est taxonmicamente junto con los subrdenes Ruminantia y Suiformes en el orden Artiodactyla (Nguyen et al., 2001). Actualmente, tres subclases de IgG han sido identificadas en los camlidos y se les denomina como: IgG 1 , IgG 2 e IgG 3 (Wernery, 2001). Estos isotipos se han identificado de acuerdo a su patrn de unin con la protena A y G (Rahbarizadeh et al., 2005). Considerando esto, IgG 1 e IgG 3
se unen a las dos protenas, mientras la IgG 2 slo se une a la protena A (De Genst et al., 2006).
3. ESTRUCTURA DE LAS INMUNOGLOBULINAS G DE LOS CAMLIDOS Las IgG convencionales (IgG 1 ) poseen dos cadenas livianas y dos pesadas. Las cadenas pesadas poseen una regin variable (VH) y regiones constantes CH 1 , CH 2 y CH 3 . Las cadenas livianas contienen una regin variable (VL) y una regin constante
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(CL) (Figura 1). Los sitios de unin de antgeno comprenden las regiones variables de las cadenas pesadas y livianas, y contienen tres curvaturas denominadas regiones determinantes de complementariedad (CDR) (Zafir- Lavie et al., 2007). De otro lado, las IgG no convencionales de los camlidos (IgG 2 e IgG 3 ) no poseen cadenas livianas, ni la regin CH 1 ; sin embargo, sus VH mejor conocidos como VHHH, tambin poseen tres CDR (Figura 2) (Harmsen y De Haard, 2007).
Diferentes subtipos de IgG 1
(IgG 1a e IgG 1b ) e IgG 2 (IgG 2a , IgG 2b e IgG 2c ) han sido clasificados de acuerdo a las variaciones en la secuencia de aminocidos en la regin bisagra (De Simone et al., 2008). En consecuencia, las IgG con 35 aminocidos de longitud en esta regin, corresponden a las IgG 2
(Muyldermans y Lauwereys, 1999); y las IgG con 12 aminocidos en esta misma regin, constituyen las IgG 3 (Nguyen et al., 2001). Adicionalmente, los isotipos de HCAbs constituyen alrededor del 50% de IgG sricas compatibles con un rol significativo en la inmunidad de los camlidos (Daley et al., 2007). Los VHH estn conformados con un mayor nmero de aminocidos hidroflicos que los VH de los anticuerpos convencionales (Wu y Lefranc, 2006; Muyldermans et al., 2009). Por lo que, esto les permite poseer ventajas biotecnolgicas junto con su pequeo tamao, el reconocimiento de eptopes, la alta afinidad, la alta solubilidad, la gran estabilidad y la expresin en bacterias y levaduras; por ello los VHH se han convertido en herramientas interesantes para muchas aplicaciones incluyendo el
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diagnstico y la teraputica (Ghassabeh et al., 2010). Por ejemplo, los VHH son solubles y estables incluso bajo condiciones extremas de bajo pH y altas temperaturas (De Simone et al., 2006). El dominio CH 2 de los HCAb contienen secuencias que les permiten realizar funciones efectoras tal como los anticuerpos convencionales, sugiriendo que los HCAb tambin ejercen las funciones efectoras clsicas (Ghassabeh et al., 2010). Entre stas funciones efectoras se pueden mencionar: la activacin de la citlisis por la va del complemento (CDC), activacin de las clulas NK (Ghassabeh, 2010), citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC) (Harmsen y De Haard, 2007); y aumenta tambin la vida media de estas inmunoglobulinas, rescatndolas de una va degradativa (Ghassabeh, 2010).
Figura 1. Representacin esquemtica de la estructura de la inmunoglobulina G convencional (IgG 1 ) y las inmunoglobulinas de cadenas pesadas (IgG 2 e IgG 3 ) de los camlidos Fuente: Wernery, 2001
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La curvatura extendida del CDR 3
provee un aumento en la superficie de unin de antgeno para compensar la prdida del VL, y coincidentemente, esta curvatura contiene muchas regiones hipervariables que contribuye a la alta afinidad de los HCAb frente a los antgenos (Figura 2) (Wesolowski et al., 2009). Adems, este CDR 3 contribuye a que los nanoanticuerpos interacten con sitios antignicos que usualmente no son accesibles a los anticuerpos convencionales tales como los sitios activos de enzimas (Teh y Kavanagh, 2009).
Figura 2. Representacin esquemtica de la estructura de los dominios variables de las cadenas pesadas de las inmunoglobulinas G de los camlidos (A) y de las inmunoglobulinas G convencionales (B). VHH, dominio variable de la cadena pesada de los HCAb; VH, dominio variable pesado; CDR, regin de determinacin complementaria Fuente: Wernery, 2001
4. CARACTERSTICAS DE LAS INMUNOGLOBULINAS G DE LOS CAMLIDOS
La ausencia del dominio CH 1 en los HCAb normalmente resultar en una reduccin de la envergadura entre los sitios de unin y por lo tanto una disminucin en la capacidad de unin. Aparentemente, en los camlidos, esto A B
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est compensado por una diversidad en los isotipos de los HCAb los cuales presentan una variedad en las secuencias de la regin bisagra, los que son lo suficientemente largos para compensar completamente la falta del dominio CH 1 (Pastoret et al., 1998).
La ventaja biolgica de los HCAb parece consistir en el hecho de que han ampliado el espectro de antgenos sobre los cuales pueden actuar (Medina et al., 2004). Adems, los HCAb evolucionaron naturalmente para conferir la especificidad de unin al antgeno y alta afinidad para tres CDR nicamente, en vez de los seis CDR que ocurren en los anticuerpos convencionales (Revets et al., 2005).
Las propiedades biofsicas de los HCAb son consistentes con los anticuerpos convencionales salvo algunas excepciones. Las cadenas H de los HCAb poseen un peso molecular ms bajo que las IgGs convencionales debido a la ausencia del dominio CH 1 . Adems, estando desprovistas de las cadenas L, la estructura no cubierta de las HCAb permite que tengan una mejor permeabilidad tisular y unin a los eptopes que son inaccesibles a sus contrapartes convencionales. Adicionalmente, los dominios VHH de los HCAb son expresados fcilmente en sistemas bacterianos y de levaduras, por lo que vienen siendo utilizados como herramientas en biotecnologa (Daley et al., 2007). Los VHH o nanoanticuerpos debido a las caractersticas mencionadas han sido utilizados como agentes de captura en la protemica y como biosensores, tambin como
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inmunomoduladores de funcin enzimtica, adems como inhibidores de citoquinas proinflamatorias, como agentes terapeticos anticancergenos, as como para proveer inmunoproteccin contra virus y bacterias patgenos, parsitos y toxinas, tambin en tratamientos orales contra infecciones del tracto gastrointestinal y finalmente como inmunoterapeticos en el tratamiento de enfermedades neurolgicas (Teh y Kavanagh, 2009).
5. CONCLUSIONES Desde el descubrimiento de los HCAb y sus dominios VHH (nanoanticuerpos), el inters sobre sus particulares caractersticas se ha incrementado en las ltimas dcadas. La utilidad de los nanoanticuerpos est demostrada por sus aplicaciones en la investigacin y la biotecnologa debido a su alta estabilidad, alta solubilidad, reconocimiento de eptopes no reconocidos por los anticuerpos convencionales y alta capacidad de penetracin tisular. Por lo tanto, los HCAb vienen siendo aplicados en muchas reas, en particular como una nueva forma teraputica para la salud humana y animal.
6. LITERATURA CITADA 1. Daley LP, Purdy SR, Davis WC and Appleton JA. 2007. Contribution of heavy-chain and conventional IgGs to the alpaca immune system during fetal, neonatal, and adult life. J Immunol 178:B215. 2. De Genst E, Saerens D, Muyldermans S and Conrath K. 2006. Antibody repertoire
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development in camelids. Dev Com Immunol 30:187198. 3. De Simone E, Saccodossi N, Ferrari A, Leoni L and Leoni J. 2006. Immunochemical analysis of IgG subclasses and IgM in South American camelids. Small Rum Res 64:29. 4. De Simone EA, Saccodossi N, Ferrari A and Leoni J. 2008. Development of ELISAs for the measurement of IgM and IgG subclases in sera from llamas (Lama glama) and assessment of the humoral immune response against different antigens. Vet Immunol Immunop 126:6473. 5. Ghassabeh GH. 2010. Antibodies: generation, function & application. [Internet], [13 marzo 2010] Disponible en: http://www.microarray.be/downloa d/VION_20100223/VION-Reza- 23-02-2010.pdf 6. Ghassabeh GH, Muyldermans S and Saerens D. 2010. Chapter 3: Nanobodies, single-domain antigen-binding fragments of camelid heavy-chain antibodies. Current Trends in Monoclonal Antibody Development and Manufacturing, Biotechnology: Pharmaceutical Aspects. American Association of Pharmaceutical Scientists Springer. p 2950. 7. Hamers-Casterman C, Atarhouch T, Muyldermans S, Robinson G, Hamers C, Bajyana Songa E, Bendahman H and Hamers R. 1993. Naturally occurring antibodies devoid of light chains. Nature 363:446448.
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8. Harmsen MM and De Haard HJ. 2007. Properties, production, and applications of camelid single- domain antibody fragments. Appl Microbiol Biotechnol 77:1322. 9. Medina MA, Fernandez F, Saad S, Rebuffi G and Yapur J. 2004. Inmunoglobulinas G de cadenas pesadas en la leche de los camlidos sudamericanos. J Neotrop Mammal 11(1):1926. 10. Muyldermans S and Lauwereys M. 1999. Unique single-domain antigen binding fragments derived from naturally occurring camel heavy-chain antibodies. J Mol Recognit 12:131140. 11. Muyldermans S, Baral TN, Cortez Retamozzo V, De Baetselier P, De Genst E, Kinne J, Leonhardt H, Magez S, Nguyen VK, Revets H, Rothbauer U, Stijlemans B, Tillib S, Wernery U, Wyns L, Hassanzadeh-Ghassabeh Gh and Saerens D. 2009. Camelid immunoglobulins and nanobody technology. Vet Immunol Immunop 128:178183. 12. Nguyen VK, Desmyter A and Muyldermans S. 2001. Functional heavy-chain antibodies in Camelidae. Adv Immunol 79:261296. 13. Pastoret PP, Griebel P, Bazin H and Govaerts A. 1998. Chapter XII: Immunology of Camels and Llamas. Handbook of Vertebrate Immunology. Academic Press. p 421438. 14. Rahbarizadeh F, Rasaee MJ, Forouzandeh M, Allameh A, Sarrami R, Nasiry H and Sadeghizadeh M. 2005. The
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production and characterization of novel heavy-chain antibodies against the tandem repeat region of MUC1 mucin. Immunol Invest 34:431452. 15. Revets H, De Baetselier P and Muyldermans S. 2005. Nanobodies as novel agents for cancer therapy. Expert Opin Biol Ther 5(1):111124. 16. Teh YHA and Kavanagh TA. 2009. High-level expression of Camelid nanobodies in Nicotiana benthamiana. Transgenic Res, in press. 17. Wernery U. 2001. Camelid immunoglobulins and their importance for the new-born A Review. J Vet Med B, 48:561 568. 18. Wesolowski J, Alzogaray V, Reyelt J, Unger M, Juarez K, Urrutia M, Cauerhff A, Danquah W, Rissiek B, Scheuplein F, Schwarz N, Adriouch S, Boyer O, Seman M, Licea A, Serreze DV, Goldbaum FA, Haag F and Koch-Nolte F. 2009. Single domain antibodies: promising experimental and therapeutic tools infection and immunity. Med Microbiol Immunol 198:157174. 19. Wu Y and Lefranc MP. 2006. Characteristics of the Camelidae (camel, llama) antibody synthesis. [Internet], [10 marzo 2010] Disponible en: http://imgt.cines.fr/textes/IMGT biotechnology/Camel_IgG.html 20. Zafir-Lavie I, Michaeli Y and Reiter Y. 2007. Novel antibodies as anticancer agents. Nature Publishing Group Oncogene 26: 3714 3733.