Mtodos de diagnstico de parsitos Los mtodos de diagnstico se clasifican en: parasitolgicos, porque recuperan e identifican directamente al parsito, y serolgicos,

por detectar la reaccin inmune del hospedero contra el agente invasor. A) Mtodos Parasitolgicos a) Recoleccin y recepcin de la muestra: Las heces adecuadamente rotuladas deben ser procesadas y ledas el mismo da de su evacuacin. b) Procesamiento: 1. Caractersticas fsicas: Evaluar cantidad, consistencia, aspecto (moco y/o sangre), color, olor. 2. Parasitolgico: Buscar helmintos visibles como Ascaris lumbricoides, Enterobiusvermicularis, Taenia sp, Diphyllobothrium pacificum, etc.b. 3. Examen Microscpico Deteccin de trofozotos, quistes, ooquistes, larvas y/o huevos, y otros elementos (leucocitos, hemates, hongos, fibras musculares, almidones). Este examen incluye tcnicas que pueden dividirse en: 1. Mtodos Directos Examen directo o en fresco Deteccin de trofozotos o quistes de protozoarios, y huevos o larvas de helmintos en buena cantidad. Procedimiento: - Colocar 2mg de heces por separado en ambos extremos de una lmina porta objetos. Agregar una gota de solucin salina al 0.85% en uno, y una de solucin yodadade D'Antoni o Lugol en el otro. Se homogenizan y colocan cubreobjetos o celofn recortado. Si hay moco o sangre, separarlos y teirlos con azul de metileno de Loeffler para observar leucocitos y/o identificar amebas. Si la muestra es lquida, tomar la alcuota con una pipeta pasteur. - Leer al microscopio (100x, 400x). Tcnica de Kato Examen rpido para la bsqueda de huevos de helmintos. No se observan protozoarios. Procedimiento: Colocar 100 mg de heces sobre una lmina limpia de 30x40 mm, haciendo unextendido grueso a lo largo de la misma. Cubrir con una tira de celofn de 22x30 mm, previamente humedecida en solucin glicerinada de verde de malaquita al 3%, o colocar unas gotas de esta solucin sobre el extendido y luego cubrir con celofn. Dejar en reposo por 1 hora a T ambiente, por 30 minutos a 37C.

Examinar la lmina al microscopio (100x, 400x). 2. Mtodos de Concentracin Tcnica de Sedimentacin espontnea en tubo Tello adapt esta tcnica, que detecta con alta sensibilidad diversos entero parsitos, desde amibas hasta huevos y larvas. Procedimiento Homogenizar 2-5g de heces con 10-20ml de solucin salina fisiolgica. Verter la mezcla en un tubo cnico de centrfuga de 50ml de capacidad, filtrndola a travs de gasa. Completar el volumen del tubo con ms solucin salina y tapar el mismo, hermticamente. Agitar y dejar reposar por 45 minutos como mnimo. Tomar con una pipeta dos alcuotas: una de la mitad del sedimento y otra del fondo del tubo. Colocarlas en portaobjetos diferentes y a la alcuota del fondo agregarle gotas de Lugol, luego cubrirlas con laminillas de celofn. Observar al microscopio (100x, 400x). Tcnica de Baermann modificada en copa por Lumbreras Aprovecha la capacidad de migracin de trofozotos y larvas, como Balantidium y Strongyloides, hacia el fondo de la copa (hidrotropismo, geotropismo, termotropismo). Procedimiento Colocar 5-10 g de heces en una copa que contiene rejilla y gasa doblada. Verter por las paredes de la copa, solucin salina a 37C, hasta cubrir las heces. Dejar en reposo a T ambiente por 30 a 45 minutos. Retirar rejilla y heces, absorbiendo luego con pipeta, parte del sedimento del fondo y depositndolo en una lmina excavada de Adams o en un blister. Observar al microscopio, con menor aumento (25x, 100x). Esta tcnica tambin puede ser empleada usando esputo, en los casos sospechosos ode control de auto infestacin por Strongyloides stercoralis. Tcnica de Sedimentacin rpida de Lumbreras Para deteccin de huevos de entero parsitos de mayor densidad (Fasciola ,Paragonimus, etc.).

Procedimiento Homogenizar 4-8 g. de heces con 10-20 ml. de agua corriente filtrada. Trasvasar la mezcla a un recipiente de 200-300ml de capacidad, tamizndola con un colador. Completar el volumen con agua corriente filtrada y dejar reposar por 20 minutos. Decantar los 2/3 del sobrenadante y volver a completar el volumen con ms agua corriente filtrada. Repetir lo mismo hasta que el sobrenadante quede limpio, a intervalos de 5 minutos. Verter el ltimo sedimento a una placa petri. Observar al estereoscopio (4,8).La Tcnica de Graham (cinta adhesiva) para diagnstico de E. vermicularis, debe ser utilizada en todos los casos de escozor anal y/o en nios en edad escolar. Se realiza haciendo toques anales diurnos y nocturnos. 3. Otros Cultivo en agar o agar en placa Para casos no detectados en examen de rutina y con sospecha clnica de Strongyloidiosis o controles post-tratamiento. Tener cuidado de sellar la placa, una vez introducida las heces en el centro de la misma, con cinta adhesiva o similar. Se busca, al microscopio, durante una semana, larvas o huellas de ellas dejadas en el agar.

Cultivo en carbn o Dancescu

Heces y carbn en polvo forman una mezcla homognea, que es ubicada en el centro de una placa petri vaca. Agregar unas gotas de agua estril y sellar la placa. Se identifican larvas de Strongyloides sp en las gotas de agua agregadas. Coloracin de Ziehl Neelsen modificado o Kinyoun Basada en la cido-resistencia, se emplea en el diagnstico de coccidias intestinales.

B) Mtodos Serolgicos Los mtodos indirectos tienen real importancia cuando se los elige como alternativa a procedimientos invasivos en cuadros complicados extra intestinales. Existen tcnicas que detectan la presencia de inmunoglobulinas especficas antiparasitarias en el suero del paciente, cuando se percibe un conglomerado (Hemaglutinacin indirecta: HAI), un precipitado (Doble difusin: DD, contra inmuno electroforesis: CIEF) o ausencia de hemlisis(Fijacin de complemento: FC).

En otras se recurre a conjugados enzimticos (Enzyme-linkedimmunosorbent assay: ELISA) o fluorescentes (Inmuno fluorescencia directa e indirecta: IFD eI FI) para visualizar la reaccin antgeno-anticuerpo. Otras ms recientes caracterizan fracciones antignicas, para luego revelar la reaccin con conjugados enzimticos (WesternBlot: WB) o amplificar la seal de inters (Polimerase chain reaction: PCR) . La deteccin de copro antgenos dar un nuevo impulso a estas pruebas. La criptosporidiosis ha sido diagnosticada empleando IFI y ELISA con sensibilidades de 80% y especificidades de95%. Empleando PCR se mejora hasta en 100 veces. Para la strongyloidiosis se han empleado IFI y ELISA, con sensibilidades menores al 90%. La implementacin del WB en el pas mejorar su diagnstico.