Practica Biologia 2013-II (1-4)

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA
FACULTAD DE CIENCIAS ESCUELA PROFESIONAL QUIMICA
MANUAL DE PRACTICAS L A B O R A T O R I O DE BIOLOGA CH 061
SEMESTRE ACADEMICO 2013-1 PILAR GARCA AVELINO Jefe de Prcticas
Manual de Prcticas: Laboratorio de Biologa
UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA FACULTAD DE CIENCIAS ESCUELA PROFESIONAL DE QUMICA BIOLOGA (CH 061)
Cronograma de Practicas de Laboratorio de BIOLOGA - CH 061
LABORATORIO CLASE INTRODUCTORIA AL LABORATORIO 1. Reconocimiento de Biomolculas 2. Extraccin de ADN EXAMENES PARCIALES 3. Amilasa salival PRACTICA CALIFICADA 1: Anlisis de un artculo cientfico EXPOCIENCIA 4. Hongos ambientales PRACTICA CALIFICADA 2 Bioseguridad y Laboratorios: 1, 2, 3 EXMENES FINALES EXMENES SUSTITUTORIOS
Fecha de ejecucion 10 y 11 de setiembre 17 y 18 setiembre 1 y 2 octubre 14 16 octubre* 22 y 23 octubre 30 octubre 5 al 8 noviembre 12 y 13 noviembre 25 de noviembre 09 11 diciembre* 16 18 diciembre*
Entrega de Informe
24 y 25 set. 9 oct. NO HAY LABORATORIO 29 y 30 oct.
NO HAY LABORATORIO 19 y 20 noviembre En la clase de TEORIA! NO HAY LABORATORIO NO HAY LABORATORIO
En la fecha de realizacin de los laboratorios se entregaran los preinformes correspondientes. * Las fechas definitivas de los exmenes parcial, final y sustitutorio sern definidas por el Dr. Guy Carvajal
Prof. Pilar Garca Avelino
PRESENTACION DEL MANUAL DE PRCTICAS

El propsito del Laboratorio es familiarizar al estudiante con la metodologa de trabajo de la biologa, proporcionarle un ambiente donde tenga oportunidad de encontrarse con sustancias e instrumentos que le motive a experimentar. Considerando al laboratorio como un lugar donde el trabajo en equipo se facilita, da lugar a un proceso de constante integracin, comunicacin, investigacin, construccin de ideas, surgimiento de nuevas preguntas, donde las actividades experimentales propician la reorganizacin de conocimientos y facilitan el alcanzar un aprendizaje significativo. Para logra tales fines, se propone esta gua que, como material de apoyo didctico, reforzara el proceso constante de enseanza aprendizaje, requiriendo la participacin y gua del profesor. Material necesario para trabajar por alumno: Individualmente: un mandil, gafas de seguridad, guantes, plumn marcador, toalla, cuaderno de apuntes. Por equipo: El que se indique para cada prctica. INSTRUCCIONES GENERALES. 1. Busca conceptos, antecedentes previos a la realizacin de las prcticas. 2. Construye la hiptesis de trabajo, antes de solicitar su material. 3. Lee cuidadosamente los experimentos antes de ejecutarlos. 4. Recurre a tus libros de texto y/o consulta para aclarar dudas despus de realizadas las practicas, o consulta al profesor responsable. 5. Al efectuar cada uno de los pasos del desarrollo experimental, observa minuciosamente y anota los cambios ocurridos. 6. Al concluir el desarrollo experimental, resuelve el cuestionario para su futura revisin. 7. Elabora tus conclusiones. PRECAUCIONES PARA EL DESARROLLO DE CADA EXPERIMENTO Las medidas oportunas y la compresin de las prcticas a seguir, har del laboratorio un lugar seguro como cualquier ambiente de clases. Para ello debern tenerse en cuenta, en forma general las siguientes precauciones: 1. Observa donde dejas el material caliente, cerciorndote que este frio antes de tomarlo con la mano. 2. Cuando calientes un tubo de ensayo, no lo apuntes hacia ti o hacia tus compaeros, pude proyectarse su contenido. 3. Si cae sobre ti o en tu ropa un material corrosivo, lvate inmediatamente con abundante agua, e infrmalo al profesor del curso. 4. Nunca pruebes una sustancia. 5. Al detectar el olor de un liquido, no coloques la cara sobre la boca del recipiente, con tu mano abanica hacia ti el aroma. 6. Antes de usar un reactivo lee dos veces la etiqueta de su contenido. 7. Los tubos de ensayo no pueden calentar ser por el fondo sino por las paredes, para evitar su expulsin del contenido. 8. No arrojes cuerpos slidos en los lavaderos, no viertas directamente los cidos. 9. Rotula tu material de trabajo, as te ser fcil identificarlos. 10. Cuando trabajes con el mechero mantn tu cabello recogido. 11. Nunca emplear papel para encender el mechero.
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PRESENTACION DEL INFORME

No olvidarse de indicar el grupo de laboratorio (incluido horario) que pertenecen: A1, A2, B1, B2, C1, C2
I. II. Resumen (1 p) Qu teoras lo sustentan? En relacin al desarrollo de los experimentos. Objetivos especficos (1 p) Tema central de estudio para cada experimento desarrollado Observaciones experimentales, datos y resultados (para c/experimento) (3 p) Durante el desarrollo del experimento: Qu se observ? Qu datos hubieron? Cules fueron los resultados?Qu reacciones se dieron? Se indican los resultados tal y como se dieron durante la investigacin. Se debe describir los pasos ejecutados durante la experimentacin Se pueden presentar los datos en tablas, grficas, o figuras, debidamente numeradas Discusin de las observaciones experimentales, datos y resultados (3 p) Se obtuvieron los resultados correctos segn la teora? Si, no? Qu sucedi? Es la etapa que encadena los resultados obtenidos por la investigacin. Se relaciona, interpreta y discute los resultados. Se pone a prueba la capacidad analtica y de autocrtica del investigador. La discusin pone el toque personal al trabajo. Conclusiones (2 p) Qu significan los resultados? Las conclusiones estn relacionadas con los objetivos. Es el anlisis del cumplimiento de cada uno de los objetivos de la prctica Cuestionario (1.5 p) Preguntas relacionadas al tema Bibliografa (0.5 p) Qu autores se consultaron para fundamentar la investigacin? Qu fuentes han sido consultadas (libros, artculos, tesis? REVISAR: Referencias Bibliografas al estilo Vancouver, en: http://www.unap.cl/p4_biblio/docs/Normas_VANCOUVER.pdf
III.
IV.
V.
VI.
VII.
PREINFORME DEL LABORATORIO N 1
RECONOCIMIENTO DE BIOMOLECULAS
Nombre del Alumno: Grupo: Fecha:
Recuerde que el PREINFORME debe de entregarlo de manera individual, el da de realizacin del laboratorio, se presenta en hojas A4 bond, que tiene un peso mximo de 4 ptos. sobre la nota del Laboratorio.
Calificacin
1. Realice el DIAGRAMA DE FLUJO de los experimentos a desarrollar PROCEDIMIENTO, realice un esquema de trabajo de cada experimento. Es el plan ordenado de la forma en que se realiz la prctica para lograr el objetivo de la misma. (2 puntos) Ejemplo:
A
Se indica el proceso (Se adiciona se separa)
C
a. b. c. d. e. Identificacin de azucares reductores Hidrolisis de la sacarosa Reconocimiento del almidn Reconocimiento de protenas Reconocimiento de lpidos
2. Cuestionario: a. Mencione algunos carbohidratos alimenticios, segn la clasificacin de la siguiente tabla: Monosacridos (3 ej.) Disacridos (3 ej.) Oligosacridos (1 ej.) Polisacridos (2 ej.) b. c. d. e. Qu es la inversin de la sacarosa? Qu sucede qumicamente al aadir lugol a las muestras positivas para la reaccin? Cul es la reaccin que tiene lugar entre el reactivo de Biuret y las protenas? Cul es el valor de la polaridad de la acetona y el cloroformo?
3. Bibliografa: cite correctamente la bibliografa consultada

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GUIA DE LABORATORIO N 1
INTRODUCCIN En los organismos se encuentran cuatro tipos diferentes de molculas orgnicas en gran cantidad: carbohidratos, lpidos, protenas y nucletidos. Todas estas molculas contienen carbono, hidrgeno y oxgeno. Adems, las protenas contienen nitrgeno y azufre, y los nucletidos, as como algunos lpidos, contienen nitrgeno y fsforo. Se ha dicho que es suficiente reconocer cerca de 30 molculas para tener un conocimiento que permita trabajar con la bioqumica de las clulas. Dos de esas molculas son los azcares glucosa y ribosa; otra, un lpido; otras veinte, los aminocidos biolgicamente importantes; y cinco las bases nitrogenadas, molculas que contienen nitrgeno y son constituyentes claves de los nucletidos. En esencia, la qumica de los organismos vivos es la qumica de los compuestos que contienen carbono, es decir, los compuestos orgnicos. El carbono es singularmente adecuado para este papel central, por el hecho de que es el tomo ms liviano capaz de formar mltiples enlaces covalentes. A raz de esta capacidad, el carbono puede combinarse con otros tomos de carbono y con tomos distintos para formar una gran variedad de cadenas fuertes y estables y de compuestos con forma de anillo. Las molculas orgnicas derivan sus configuraciones tridimensionales primordialmente de sus esqueletos de carbono. Sin embargo, muchas de sus propiedades especficas dependen de grupos funcionales. Una caracterstica general de todos los compuestos orgnicos es que liberan energa cuando se oxidan. Entre los tipos principales de molculas orgnicas importantes en los sistemas vivos estn los carbohidratos, los lpidos, las protenas y los nucletidos. OBJETIVOS Determinar cualitativamente los azucares reductores. Hidrolizar la sacarosa. Reconocer la presencia de almidn. Reconocer cualitativamente las protenas presentes en muestras biolgicas. Demostrar la solubilidad de los lpidos en diferentes tipos de solventes.
MATERIALES Y REACTIVOS Tubos de ensayo, mechero, placas petri, vasos de precipitado, gradillas, pipetas graduadas, propipetas, pinzas de madera, pisceta, almidn. Reactivo de Fehling, solucin de azucares, solucin de almidn, acetona, cloroformo, sulfato de cobre, hidrxido de sodio Por grupo: un huevo, 5 ml leche, 1 papa (elementos crudos)
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IDENTIFICACIN DE AZCARES REDUCTORES (I)

FUNDAMENTO Los monosacridos (figura 1) y la mayora de los disacridos poseen poder reductor, que deben al grupo carbonilo que tienen en su molcula. Este carcter reductor puede ponerse de manifiesto por medio de una reaccin redox, llevada a cabo entre ellos y el sulfato de cobre (II). Tras la reaccin con el glcido reductor se forma xido de cobre (I) de color rojo. De este modo el cambio de color indica que se ha producido la reaccin y que el glcido presente es reductor. Figura N1. Algunos monosacridos
Reaccin de Fehling: Es una reaccin cualitativa que sirve para determinar la presencia de un azcar reductor que no sea sacarosa (carece de carbono anomrico y no es azcar reductor). El reactivo de Fehling presenta sulfato de cobre, carbonato de sodio, citrato de sodio, y agua. En la reaccin para determinar a los azucares reductores los agentes estabilizantes de la reaccin son el carbonato y citrato, el sulfato de cobre es el reactante especficamente el Cu que va a reaccionar con los grupos qumicos de aldehdos y cetonas. Que en reacciones de oxido reduccin el Cu se convierte en CuO dando un color rojo ladrillo que precipitar posteriormente, como lo expresa la siguiente reaccin (figura 2):
Figura N2. Reaccin de Fehling
PROCEDIMIENTO Rotular 6 tubos de ensayo, adicionar el azcar correspondiente. Adicionar los reactivos en el orden sealado Mezclar por inversin el reactivo con cada uno de sus componentes Someter a la accin del calor hasta ebullicin La reaccin ser positiva si en la muestra se forma un precipitado color rojo ladrillo (CH2O), y ser negativa si se queda azul o cambia a un tono de azul-verdoso.
Tabla N1. Azucares reductores TUBO DE ENSAYO 1 1.Solucin de glucosa 2.Solucin de maltosa 3.Solucin de lactosa 1% 1% 1% 3 ml 3 ml 3 ml 3 ml 3 ml 3 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1ml 1 ml 1 ml 2 3 4 5 6
COMPONENTES
4.Solucin de fructuosa 1% 5.Solucion de galactosa 1% 6.Solucin de sacarosa 0.5% Reactivo de Fehling A Reactivo de Fehling B Calor: ebullicin (aprox. 5)
mechero / bao mara
GRAFICAR / ESQUEMATIZAR / ANOTAR SUS OBSERVACIONES Y RESULTADOS (De las distintas muestras)
HIDROLISIS DE LA SACAROSA (II)

FUNDAMENTO La sacarosa (figura 3) es un disacrido que no posee carbonos anomricos libres por lo que carece de poder reductor y la reaccin con el licor de Fehling es negativa, como ha quedado demostrado en el anterior experimento. Sin embargo la presencia de HCl y el calor, la sacarosa se hidroliza, es decir incorpora una molculas de agua y se descompone en los monosacridos que la forman: glucosa y fructuosa, que s son reductores (figura 4). Figura N 3. Sacarosa
Figura N 4. Disacridos: (a) reductor, (b) no reductor
PROCEDIMIENTO Mezclar por inversin el reactivo con cada uno de sus componentes, ver la tabla 3. Someter a la accin del calor hasta ebullicin Tabla N2. Componentes de la hidrolisis de la sacarosa COMPONENTES Solucin de sacarosa cido clorhdrico HCl 0.5% 1M Enfriar Hidrxido de sodio NaOH 1M Reactivo de Fehling A Reactivo de Fehling B Calor: ebullicin 1 ml 1 ml 1 ml Muestra sacarosa 3 ml 1 ml 5
Calentar al mechero
mechero bao mara La reaccin ser positiva si en la muestra se forma un precipitado color rojo ladrillo (CH2O), ser negativa, si la hidrolisis no se ha realizado correctamente, apareciendo una coloracin verde en el tubo de ensayo.
GRAFICAR / ESQUEMATIZAR / ANOTAR SUS OBSERVACIONES Y RESULTADOS

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RECONOCIMIENTO DE POLISACARIDOS: ALMIDN (III)

FUNDAMENTO El almidn es un polisacrido vegetal formado por dos componentes: la amilosa y la amilopectina. Esta prueba usa como reactivo el lugol, se basa en la especificidad del almidn cuando est presente en solucin, la cual da un color azul en presencia del Yodo. El lugol presenta: yoduro de potasio y yodo, ms agua (solucin de Lugol). El yodo de la solucin tiene afinidad por los enlaces 1-4 y 1-6 de la molculas de almidn, esta interaccin del yodo por dichos enlaces producen el cambio de coloracin no por una reaccin qumica sino por una reaccin de adsorcin o fijacin de iodo en la superficie de la molcula de amilosa, lo cual solo ocurre en frio (a temperatura ambiente) La amilosa en disolucin coloidal y en presencia de iodo se colorea de azul toma color azul, la amilopectina da una coloracin rojo violcea. Figura N 5. Fragmento de la molcula del almidn (amilopectina) En el crculo un monmero de glucosa.
PROCEDIMIENTO Colocar los componentes indicados en la tabla 4, adicionar el reactivo de lugol y observar los primeros cambios de coloracin. Tabla N 3. Reconocimiento del almidn COMPONENTES Solucin de almidn 2% Papa rallada Albmina Reactivo de Lugol 3 gotas 3 gotas TUBO DE ENSAYO 1 1 ml 1 ml 1 ml 3 gotas
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Mezclar por inversin y anotar los resultados, ser positivo si se torna azul, violceo. Calentar suavemente, sin que llegue a hervir, hasta que pierda el color. Enfriar el tubo de ensayo en agua fra, observar como a los 2-3 minutos reaparece el color azul
GRAFICAR / ESQUEMATIZAR / ANOTAR SUS OBSERVACIONES Y RESULTADOS
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RECONOCIMIENTO DE PROTENAS (IV)

FUNDAMENTO Las protenas son macromolculas formadas por la unin de muchos aminocidos (figura 6) por enlace peptdico (estructura primaria). Adems pueden darse uniones por enlaces dbiles de distinta naturaleza que hacen que la protena adquiera una conformacin tridimensional caracterstica (estructura terciaria) ver la figura 7. Las variaciones de pH, temperatura o concentracin salina pueden destruir esos enlaces dbiles de manera que la protena pierde su conformacin y se dice que se desnaturaliza.
Figura N6. Unidad de la protena: aminocido
Figura N7. Estructura de las protenas
Las protenas debido al gran tamao de sus molculas forman con el agua soluciones coloidales que pueden precipitar formndose cogulos al ser calentadas a temperaturas superiores a 70C o al ser tratadas con soluciones salinas, acidas, alcoholes, etc. Una de las reacciones coloreadas especficas de las protenas, que sirven para su identificacin, cabe resaltar la reaccin de Biuret (figura 8). Esta reaccin los producen los pptidos y las protenas, pero no los aminocidos, ello se debe a la presencia del enlace peptdico CO-NH que se destruye al liberarse los aminocidos Reaccin de Biuret (figura 8) Se debe a los componentes que presenta: el hidrxido de sodio y sulfato de cobre (II); el cual el agente denaturante de las protenas es el hidrxido y el reactante es el sulfato de cobre. Las protenas despus de ser denaturadas facilitan la interaccin del Cu con los pares de electrones sin compartir del grupo amino del pptido mediante enlaces de coordinacin con la formacin de un complejo coloreado prpura violceo, cuya intensidad depende de la concentracin de protenas.
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Figura N8. Complejo de cobre formado en la reaccin de Biuret
PROCEDIMIENTO Rotular tres tubos de ensayo, en el primero agregar 2 ml de albmina (huevo), en el segundo tubo 2 ml de leche, y en el tercero 2 ml de la solucin de almidn. Aadir 0.5 ml de hidrxido de sodio (NaOH) al 5%, y 0.5ml de sulfato de cobre (Cu2SO4) al 1% a cada tubo. Tabla N4. Ensayos de protenas TUBO DE ENSAYO 1 Albmina (huevo) Casena (lcteo) Sol. almidn NaOH 5% 0,5 ml 0,5 ml 0,5 ml 0,5 ml 2 ml 2 ml 2 ml 0,5 ml 0,5 ml 2 3
COMPONENTES
Rvo. Biuret: Cu2SO4 1% -
Observe la formacin del color violeta en los tubos que presentan protenas, siendo Biuret (+), de no haber un cambio de color ser Biuret (-).
GRAFICAR/ESQUEMATIZAR SUS OBSERVACIONES Y RESULTADOS
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RECONOCIMIENTO DE LPIDOS (V)

FUNDAMENTO Los lpidos son insolubles en agua. Cuando se agitan fuertemente en ella se dividen en pequesimas gotas formando una emulsin de aspecto lechoso que es transitoria, pues al dejarlo en reposo desaparece por la reagrupacin de las gotitas de grasa en una capa que por su menor densidad se sita sobre el agua. Las grasas son solubles en disolventes orgnicos. En este experimento el reconocimiento de lpidos ser por la prueba de solubilidad, identificando el comportamiento de las molculas de aceite con el agua, las cuales no se homogenizan, debido a que estas presentan caractersticas diferenciales, mientras que el agua es polar, el aceite es no polar, esto hace que microscpicamente se note que el aceite forme micelas en solucin acuosa. Donde las colas hidrofbicas de las molculas de aceite se esconden del agua adoptando la forma de micelas. PROCEDIMIENTO Tabla 8. Reconocimientos de lpidos por solubilidad TUBO DE ENSAYO COMPONENTES 1 Aceite Agua destilada Acetona Cloroformo 1 ml 2 ml 2 ml 2 ml 2 1 ml 3 1 ml
Agregar por las paredes del tubo cada componente:
Rotular los tubos y en cada uno de ellos adicionar 1 ml de aceite Luego por las paredes de cada tubo adicionar: 2ml de agua para el primer tubo, 2ml de cloroformo para el segundo tubo y cloroformo para el tercer tubo NO HOMOGENIZAR! Hacer la primera observacin. Mezclar por inversin cada tubo, dejar en reposo por 5 minutos Anotar las observaciones respectivas.
Tabla 9. Resultados de la solubilidad de los lpidos Muestra Soluble Aceite + agua destilada Aceite + acetona Aceite + cloroformo
GRAFICAR/ESQUEMATIZAR SUS OBSERVACIONES Y RESULTADOS
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INFORME DEL LABORATORIO N 1
Nombre del alumno (Apellidos, Nombre) Pre informe (4 p) Informe (12 p) Desempeo (4 p)
Nota
1 Resumen (1p)
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2 Objetivos especficos (1p)
3 Datos y observaciones experimentales (4 p)

Experimento N 1: Identificacin de Azucares Reductores
Tabla N1. Resultados de azucares reductores GLCIDO Reductor Importante: Es necesario indicar la formacin de precipitado y la cantidad con un signo (+++). glucosa maltosa lactosa fructuosa galactosa sacarosa
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Experimento N 2: Reconocimiento del Almidn

Tabla N2. Resultado de reconocimiento del almidn Muestra Reaccin al lugol almidn papa Clara de huevo
Experimento N 3: Reconocimiento de polisacridos: Almidn

Tabla N3. Resultado de reconocimiento del almidn Muestra Almidones? Importante: Es necesario indicar la intensidad del color con un signo (+++). almidn papa huevo
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Experimento N 4: Reconocimiento de Protenas

Tabla N4. Ensayos de protenas
Muestra Protenas
albmina
casena
almidn
Importante: Es necesario indicar la intensidad del color con un signo (+++).
Experimento N 5: Reconocimiento de Lpidos

Tabla N5. Resultados de la solubilidad de los lpidos Muestra Soluble Aceite + agua destilada Aceite + acetona Aceite + cloroformo
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4 Discusin de observaciones, datos y resultados (3 p)
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5. Conclusiones (2 p)
6. Cuestionario (1.5 p)
1. Qu azcares son reductores? 2. Qu funcin tiene el cido clorhdrico? 3. Al trabajar con el lugol Por qu se da el cambio de coloracin despus de sometido al calor? Fundamente su respuesta. 4. Qu es la desnaturalizacin? 5. Qu la provocado que la desnaturalizacin en la muestra? 6. Cul de las muestras empleadas tiene mayor cantidad de protenas? 7. Qu es una emulsin transitoria? 8. Qu es una emulsin permanente? 9. Con cul de los solventes orgnicos fue soluble el aceite? 10. En nuestro sistema digestivo que enzima se encarga de solubilizar las grasas que consumimos?
7. Bibliografa (0.5 p)
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ANEXO 1
PREPARACION DE REACTIVOS LABORATORIO: RECONOCIMIENTO DE BIOMOLECULAS

a. Soluciones de azucares glcidos al 1% Glucosa, maltosa, lactosa, fructuosa, galactosa, sacarosa, almidn. Se pesa 1 gramo de un glcido y se disuelve en 100 ml de agua destilada, agitando hasta disolverse por completo. Se vierte en un frasco limpio y se rotula, indicando la fecha de preparacin. As para cada uno de ellos. Para el caso del almidn, debe emplearse agua destilada caliente y agitacin constante b. Solucin de almidn al 2% Se pesa 2 gramos de almidn y se disuelve en 100 ml de agua destilada caliente y en agitacin constante. c. Hidrxido de sodio al 5% Se pesa 5 gramos de NaOH y se disuelve en 100 ml de agua destilada. d. Reactivo de Fehling Solucin A: solucin al 3% de sulfato cprico cristalizado Pesar 30 g de sulfato cprico Cu2SO4 y aforar en un litro con agua destilada Solucin B: solucin al 15% de sal de Rochelle (tartrato de sodio y potasio) en solucin acuosa al 5% de hidrxido de sodio NaOH. Preparar un litro de hidrxido de sodio al 5% (50 grs en 1 L) y adicionarle 150 g de tartrato de sodio y potasio e. Solucin de lugol: yodo/yoduro de potasio Adicionar 2 g de yoduro de potasio y1 g de yodo a 80 ml de agua destilada, agitar hasta solubilizar los reactivos Aforar 100ml de agua. f. Reactivo de Biuret Solucin A: 17.3 g de sulfato de cobre Cu2SO4 en 100 de agua destilada caliente Solucin B: 17.3 g de citrato sdico Na2CO3y 100 g de bicarbonato de sodio anhidro NaHCO3 en 800 ml de agua destilada caliente. Se mezclan ambas soluciones, se enrazan a un litro y se ponen en un matraz cubierto para evitar la accin de la luz. El reactivo se guarda en un frasco color mbar.
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EXTRACCION DE ADN ANIMAL

Calificacin
1. Realice el DIAGRAMA DE FLUJO de los experimentos a desarrollar PROCEDIMIENTO, realice un esquema de trabajo de cada experimento. Es el plan ordenado de la forma en que se realiz la prctica para lograr el objetivo de la misma. (2 puntos) Ejemplo:
A
2. Cuestionario: Qu es el ADN basura? Qu es cdigo gentico? Cuntos genes tiene el hombre? Hay espacio vaco entre los tomos en una doble hlice de ADN? 3. Bibliografa: cite correctamente la bibliografa consultada
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EXTRACCIN DE ADN ANIMAL

INTRODUCCIN El ADN es una cadena de nucletidos, es un polinucletido. Esta cadena est formada por muchas unidades de nucletidos unidas entre s, por un enlace peptdico, y cada nucletido est formado por un azcar (desoxirribosa), una base nitrogenada (que puede ser adenina (A), timina (T), citosina (C) guanina (G)) y un grupo fosfato que acta como la unin de nucletidos. Ver la figura 1. La secuencia del ADN se especifica nombrando slo la secuencia de sus bases. La disposicin secuencial de estas cuatro bases a lo largo de la cadena, es decir, el ordenamiento de los nucletidos, es la que codifica la informacin gentica. El ADN se presenta como una doble cadena de nucletidos, en la que las dos hebras estn unidas entre s por enlaces. El ADN forma el gen, que es la unidad bsica de la herencia. Figura 1. Estructura del ADN El ADN tiene algunas propiedades por las que es importante en la evolucin: 1) Almacena informacin, 2) Es una molcula estable, por lo que no cambia (muta) con mucha frecuencia. 3) En ocasiones ocurren pequeos cambios en el ADN que dan lugar a la variacin necesaria para que se produzca la seleccin natural. En las plantas, los animales y los hongos, el ADN se encuentra mayormente en el ncleo de las clulas. Para extraer el ADN de las clulas vegetales hay que romper la fuerte pared celular exterior, emulsionar los lpidos de la membrana plasmtica y la envoltura nuclear. La extraccin del ADN celular es una etapa clave en muchos procedimientos de biologa molecular y aplicaciones de ingeniera gentica. El mtodo vara dependiendo de la clula o tejido desde donde se necesita extraer el DNA, sin embargo, cualquier protocolo tiene las siguientes etapas bsicas: Primero las clulas deben ser homogenizadas, lisadas (rotas) para liberar el ncleo (si est presente). El ncleo tambin debe ser roto para liberar el DNA. En este punto el DNA debe ser protegido de enzimas que podran degradarlo (nucleasas). Una vez que el DNA es liberado. Debe ser precipitado con alcohol (etanol) para purificarlo y concentrarlo. Dependiendo de las aplicaciones posteriores, puede ser necesario someter el DNA a etapas de purificacin adicionales. Usualmente el DNA extrado se analiza mediante electroforesis en geles de agarosa y/o espectrometra UV. OBJETIVOS Lograr la extraccin y visualizacin de ADN de una muestra animal.
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MATERIALES Y REACTIVOS Vasos de precipitado de: 500, 250 y 100 ml; probetas de 100 y 50 ml, 2 pipetas graduadas de 10 ml, 1 propipeta,1 pisceta, 1 pipeta pasteur, 2 tubos de ensayo de 15 ml, 1 gotero, 1 gradilla, 1 varilla de vidrio, 1 embudo, gasa, papel filtro, hielo, shampoo de color claro, cloruro de sodio 2M, alcohol a bajas temperaturas (muy frio: 0 C), azul de metileno. Por grupo: gasa, alcohol de 96 C muestra animal: hgado de pollo
FUNDAMENTO El ADN se encuentra en el interior del ncleo celular, disperso y replegado, unido a protenas para formar la cromatina. Para extraerlo es necesario homogenizar el tejido y romper las clulas para separar el ncleo, al lograrlo se libera el ADN, se debe separar de las protenas y precipitarlo para extraerlo de la solucin. Se visualizara como un agregado de fibras blanquecinas que se podrn adherir a una varilla de vidrio. EXTRACCION DE ADN ANIMAL PROCEDIMIENTO A cada paso indicado, escriba la finalidad 1. Triturar una porcin de hgado de pollo (20 grs) con 50 ml de agua destilada fra en un mortero, aadir 1 gramo de arena fina, seguir homogenizando. Filtrar 1 vez el homogenizado en una gasa contenido sobre un embudo en la probeta de 50 ml, para obtener la suspensin En un vaso precipitado de 50 ml colocar 5 ml de la suspensin, adicionar 5 ml de NaCl 2M frio y agitar. Este vaso deber estar contenido en otro vaso precipitado de 500 ml que contenga hielo. Aadir 1 ml de detergente (shampoo en solucin fra) y remover suavemente con la varilla de vidrio, mezclando, y evitando la formacin de espuma. Repetir el procedimiento 3 veces dejando reposar un minuto cada vez. Si de forma espuma retirarla con la pipeta pasteur. Trasvasar el material contenido en el vaso precipitado de 50 ml a un tubo de ensayo grande. Aadir 10 ml de alcohol frio, inclinando el tubo de ensayo y dejando resbalar muy lentamente el alcohol por la pared, para formar una capa sobre la solucin. Dejar reposar, no mover, evitando que se mezclen ambas soluciones. Porque? El ADN aparecer poco a poco lentamente en la interfase de agua-alcohol en forma de grumos blancos. Se favorece la precipitacin y recoleccin as se va recogiendo mediante la varilla de vidrio o un hisopo largo, introducindola lentamente bajo la interfase y hacindola girar suavemente mientras se extrae. As se conseguir que se adhiera a la varilla unas hebras blancas, poco a poco se irn enrollando los fragmentos de mayor tamao de ADN. Pasado un minuto, retirar la varilla atravesando la capa de alcohol con lo cual el ADN quedar adherido a su extremo con el aspecto de un copo de algodn mojado. Tomar una muestra de ADN, depositarlo sobre un portaobjetos y teir con azul de metileno durante 3 minutos. Secar la lmina y observarla al microscopio. Describir la muestra al microscopio.
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2.
3.
4.
5.
6.
7.
INFORME DEL LABORATORIO N 2
Nota
1. Resumen (1p)
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2. Objetivos especficos (1p)
3. Datos y observaciones experimentales (4 p)

Experimento: EXTRACCION DE ADN ANIMAL 3.1 Triturar una porcin de hgado de pollo (20 grs) con 50 ml de agua destilada fra en un mortero, aadir 1 gramo de arena fina, seguir homogenizando.
3.2
Filtrar 1 vez el homogenizado en una gasa contenido sobre un embudo en la probeta de 50 ml, para obtener la suspensin.
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3.3
En un vaso precipitado de 50 ml colocar 5 ml de la suspensin, adicionar 5 ml de NaCl 2M frio y agitar. Este vaso deber estar contenido en otro vaso precipitado de 500 ml que contenga hielo.
3.4
Aadir 1 ml de detergente (shampoo en solucin fra) y remover suavemente con la varilla de vidrio, mezclando, y evitando la formacin de espuma. Repetir el procedimiento 3 veces dejando reposar un minuto cada vez. Si de forma espuma retirarla con la pipeta pasteur. (Trasvasar el material contenido en el vaso
precipitado de 50 ml a un tubo de ensayo grande)
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3.5
Aadir 10 ml de alcohol frio, inclinando el tubo de ensayo y dejando resbalar muy lentamente el alcohol por la pared, para formar una capa sobre la solucin. Dejar reposar, no mover, evitando que se mezclen ambas soluciones. Porque?
3.6
El ADN aparecer poco a poco lentamente en la interfase de agua-alcohol en forma de grumos blancos. Se favorece la precipitacin y recoleccin as se va recogiendo mediante la varilla de vidrio o un hisopo largo, introducindola lentamente bajo la interfase y hacindola girar suavemente mientras se extrae. As se conseguir que se adhiera a la varilla unas hebras blancas, poco a poco se irn enrollando los fragmentos de mayor tamao de ADN. Pasado un minuto, retirar la varilla atravesando la capa de alcohol con lo cual el ADN quedar adherido a su extremo con el aspecto de un copo de algodn mojado.
28
3.7
Tomar una muestra de ADN, depositarlo sobre un portaobjetos y teir con azul de metileno durante 3 minutos. Secar la lmina y observarla al microscopio. Describir la muestra al microscopio.
4. Discusin de observaciones, datos y resultados (3 p)
29
30
a. Explique, cmo se puede determinar la concentracin del ADN. b. Presente un diagrama de flujo de la extraccin de ADN en una muestra de sangre, piel o cabellos? c. Cmo se puede preservar el ADN despus de haberlo extrado? d. Cul es la diferencia de extraer ADN animal, vegetal y bacteriano? (sealarlas) e. Cul es la importancia de estudiar el ADN en muestras arqueolgicas? Y en la actualidad?
31
AMILASA SALIVAL
Calificacin
1.
Realice el DIAGRAMA DE FLUJO del experimento a desarrollar: PROCEDIMIENTO Es el plan ordenado de la forma en que se realiz la prctica para lograr el objetivo de la misma. (2 puntos) Ejemplo:
A
2.
Cuestionario: a. Qu es la amilasa salival?, Cul es su funcin? b. Cules son las propiedades de las enzimas? c. Qu es anabolismo? d. Qu es catabolismo? Bibliografa: cite correctamente la bibliografa consultada
3.
32
AMILASA SALIVAL
INTRODUCCIN Propiedades del almidn. El almidn es el polisacrido de reserva ms abundante en vegetales y constituye la principal fuente de nutricin glucdica para la humanidad. Los almidones estn constituidos por una mezcla de dos componentes: a-amilosa: cadena lineal de unas 200 unidades de D-glucosa unidas por enlaces (1-4) amilopectina: cadena lineal de D-glucosas unidas por enlaces tipo (1-4) con numerosas ramificaciones (1-6). El polmero contiene unas 1000 unidades de glucosa.
La proporcin en que se mezclan la a-amilosa y la amilopectina para formar el almidn depende de la especie vegetal en que aparece el almidn. La -amilosa se disuelve fcilmente en agua, adquiriendo una estructura secundaria caracterstica, de forma helicoidal, en la que cada vuelta de hlice comprende seis unidades glucosa. Esta estructura secundaria, en la que los grupos hidroxilo que dan hacia afuera, permite que el iodo, al penetrar en el interior del helicoide, confiera a la disolucin una coloracin azul violcea intensa caracterstica que permite la identificacin positiva de trazas de almidn. Como esta coloracin no es resultado de ninguna interaccin covalente, el calentamiento origina la desestabilizacin del helicoide y la prdida de color, que se recupera al enfriar lentamente la disolucin. La variacin en el pH tiene un efecto anlogo.
Estructura repetitiva de la amilosa.
Hidrlisis del almidn. El almidn puede hidrolizarse por medios qumicos o enzimticos. La ebullicin con cidos o lcalis hidroliza aleatoriamente los enlaces glucosdicos entre unidades de glucosa, dando polisacridos de longitud intermedia denominados dextrinas, cada vez menores hasta la obtencin de unidades de glucosa individuales. Los compuestos que se obtienen en la hidrlisis del almidn y el color que producen con el iodo son los siguientes: Almidn (azul). Amilodextrinas (violeta).
33
Eritrodextrinas (rojo). Acrodextrinas (incoloro*). Maltosa (incoloro*). Glucosa (incoloro*). * Tener en cuenta el ligero color amarillo propio del iodo. El almidn tambin puede hidrolizarse enzimticamente. Uno de los enzimas que hidrolizan el almidn es la amilasa, que se halla presente en el jugo pancretico y la saliva. Este enzima ataca al azar los enlaces (1-4) del interior de la cadena. As, rinde finalmente unidades de glucosa libre y maltosa. La amilasa no ataca los enlaces (1-6), base de las ramificaciones de la amilopectina. Estos enlaces pueden ser hidrolizados por otro enzima desramificador. La ptialina o amilasa salival es una protena enzimtica presente en la saliva. Como todo enzima, la accin que ejerce sobre su sustrato (almidn) depende de una serie de parmetros: pH, temperatura, concentracin de enzima... OBJETIVOS Ver el efecto del pH y la temperatura sobre la actividad enzimtica. Ver el efecto de la temperatura sobre la actividad enzimtica. COMPARAR y DISCUTIR los resultados de la actividad de la amilasa a los diferentes pH. Deducir el pH en el cual la enzima es ms activa.
PROCEDIMIENTO I. OBTENCIN DEL ENZIMA. 1. Tras enjuagar la boca, se mastica un trozo de papel de filtro para estimular la salivacin. Los lquidos segregados se van pasando a un embudo con un filtro humedecido colocado sobre un tubo de ensayo, hasta recoger la suficiente cantidad de saliva para realizar la prctica. 2. La saliva as obtenida se diluye 1:10 con agua destilada, obteniendo as la preparacin de enzima base. II. EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD AMILASA SALIVAL. 1. Tomar tres tubos de ensayo y aadir respectivamente: 1 ClH 0.1 N Almidn 2% Saliva diluida 1:10 2 ml 2 ml 2 ml 2 NaOH 0.1 N Almidn 2% Saliva diluida 1:10 2 ml 2 ml 2 ml 3 Agua destilada Almidn 2% Saliva diluida 1:10 2 ml 2 ml 2 ml
2. Agitar bien y medir rpidamente el pH de cada tubo. Para medir el pH, se toma una gota de la disolucin con una varilla limpia y seca y se humedece con ella un trocito de papel indicador de pH, comparando el color obtenido con el de la escala.
34
Los tres tubos se colocan en un bao de agua termostatizado a 37C durante 15minutos, dejando que la amilasa vaya hidrolizando al almidn. Una vez transcurridos los 15 minutos, se sacan los tubos y se efectan las pruebas del iodo y de Benedict Prueba del iodo o del lugol: permite identificar la presencia de almidn que con este reactivo da un color azul-violeta caracterstico. Tomar 1 ml de muestra de cada uno delos tubos y aadirle unas gotas de la disolucin de iodo iodurada. Si la actividad enzimtica de la amilasa no se ve afectada, catalizar la hidrlisis del almidn y por tanto la prueba del iodo ser negativa. Prueba de Benedict: permite identificar a los azcares reductores, obtenidos por hidrlisis del almidn, que con esta prueba dan una coloracin rojiza (el almidn no tiene poder reductor). Tomar 1 ml de muestra de cada uno de los tubos y seguir el protocolo para la reaccin de Benedict en la prctica de azcares. III. INFLUENCIA DE LA TEMPERATURA EN LA VELOCIDAD ENZIMTICA. 1. Preparar 8 tubos: cuatro de ellos con 2ml de almidn 2% y los otros cuatro con 2 ml de saliva diluida 1:10. 2. Colocar dos tubos, uno conteniendo almidn y la otra saliva, a cada una de las cuatro temperaturas siguientes (marcar cada pareja de tubos segn la temperatura a la que se ensaya): en bao de hielo (OC, si se aade un poco de agua al hielo enfra ms; cuidar que los tubos no vuelquen) a temperatura ambiente (20C) en bao a 37C a ebullicin en bao Mara* (100C).
3. Mantener as los tubos durante 15 minutos para que alcancen la temperatura del experimento. 4. Aadir al tubo que contiene el almidn el contenido del tubo que tiene la saliva, agitar bien y dejar que siga a su temperatura correspondiente. Empezar a contar el tiempo (los tubos deben mantenerse bien inmersos en los respectivos baos para que la accin de la amilasa tenga lugar a las temperaturas indicadas). Transcurridos 0, 2, 4, 6 y 8 minutos coger una muestra de 0,5 ml de cada tubo y ponerla en la placa de pocillos. * En el caso del bao Mara basta con 5 minutos. 5. Aadir a cada muestra unas gotas de reactivo de iodo. Una vez realizada la prueba ANALICE los distintos cambios de color observados y la razn de estos. Cuando el almidn est hidrolizado no produce ningn cambio de color a la solucin de iodo (punto acromtico). El tiempo necesario para alcanzar tal punto da idea de la actividad de la enzima. La inversa de dicho tiempo equivale a la velocidad de la reaccin enzimtica.
35
UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA FACULTAD DE CIENCIAS ESCUELA PROFESIONAL DE QUMICA BIOLOGA (CH 061) INFORME DEL LABORATORIO N 3
AMILASA SALIVAL
Nota
1.
Resumen (1p)
36

Experimento II: EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD AMILASA SALIVAL Tabla N1 Resultados del efecto del pH sobre la actividad
Tubo 1 pH Prueba de Lugol Benedict Tubo 2 Tubo 3
37
Experimento II: EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD AMILASA SALIVAL Tabla N2 Resultados de la temperatura ptima para la actividad de la enzima
0 C 0 1 2 4 6 8 Ambiente: C 37 C 100 C
38
39
6. Cuestionario (1.5 p) a. Qu es y qu hace un enzima? b. El enzima empleado en esta prctica se denomina: c. Su sustrato es: d. Cules son las funciones de la enzima trabajada? e. Cul es la estructura molecular de la enzima trabajada? f. Qu reactivo se emplea para la identificacin del almidn? Explicar brevemente como acta. 7. Bibliografa (0.5 p)
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UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA FACULTAD DE CIENCIAS ESCUELA PROFESIONAL DE QUMICA BIOLOGA (CH 061) PREINFORME DEL LABORATORIO N 4
CONTROL MICROBIOLOGICO AMBIENTAL

Recuerde que el PREINFORME debe de entregarlo de manera individual, el da de realizacin del laboratorio, se presenta en hojas A4 bond, que tiene un peso mximo de 4 ptos. sobre la nota del Laboratorio. 1. Realice el DIAGRAMA DE FLUJO del experimento a desarrollar: PROCEDIMIENTO Es el plan ordenado de la forma en que se realiz la prctica para lograr el objetivo de la misma. (2 puntos) Ejemplo:
A
2.
Cuestionario: a. Defina las 11 siguientes palabras: hongo, levadura, colonia, micelio, hifas, esporas, cepa, agar, microbiota, aerobiosis, unidades formadoras de colonias (UFC) b. Cul es la composicin del agar Sabouraud? c. En qu condiciones se favorece el crecimiento de hongos? Bibliografa: cite correctamente la bibliografa consultada REVISAR: Referencias Bibliografas al estilo Vancouver, en: http://www.unap.cl/p4_biblio/docs/Normas_VANCOUVER.pdf
3.
41

INTRODUCCION Los microorganismos se encuentran presentes en todos los ambientes: en el aire, en el agua, en la superficie de los objetos e incluso sobre nuestra piel. La evaluacin de la calidad microbiolgica del ambiente nos indica la cantidad de microorganismos que estn presentes en un rea determinada. Los microorganismos generalmente no estn flotando en el aire sino que se encuentran sobre partculas inertes, por ejemplo polvo, gotas de agua, etc. que le sirven como medio de transporte, las cuales pueden depositarse sobre las superficies; es por ello que mientras ms limpia es un rea, menor ser el nmero de microorganismos presentes en el aire de la misma. Cuando se trabaja en microbiologa de alimentos es importante determinar el grado de contaminacin ambiental. Las condiciones higinicas del lugar de trabajo (utensilios, superficies, etc.) y del propio manipulador van a depender en parte el nmero y tipo de microorganismos del alimento. Anlisis del aire: El aire, adems de partculas en suspensin, es portador de bacterias o sus esporas. Por ello puede ser causa tanto de contaminacin de alimentos y superficies como de infecciones en el hombre (patologas respiratorias, etc.). Existen diferentes mtodos que permiten evaluar la calidad microbiolgica del aire. Tcnica: Sedimentacin en placa La tcnica de sedimentacin por gravedad permite determinar la carga microbiana de un ambiente problema. Este tipo de control es caracterstico de la evaluacin de la calidad microbiolgica de zonas estriles en la industria alimentaria, farmacutica y en estudios de la microbiota en ambientes naturales. Esta tcnica consiste en exponer placas con un medio nutritivo slido al ambiente durante un periodo determinado, los microorganismos suspendidos en el polvo o aerosoles sedimentan sobre la superficie de este medio. Pasado el tiempo de toma de muestra ambiental, la placa debe mantenerse cerrada y se incubara en las condiciones que favorezcan el tipo de microorganismos que deseemos estudiar, en temperatura ambiente y en aerobiosis, pues estas son las condiciones que prefieren los microorganismos ambientales. OBJETIVO Evaluar la calidad microbiolgica del aire de un rea determinada. Caracterizar (macroscpicamente) y contabilizar las colonias fngicas. Observar microscpicamente la diversidad de colonias fngicas.
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MATERIALES Y REACTIVOS Muestras: HONGOS Lugar de muestreo: lugares seleccionados en la facultad (indicados en la placa Petri). Placa Petri con medio de cultivo: agar Sabouraud (libre de microorganismos). Asas de siembra, laminas portaobjetos, lamina cubreobjetos, azul de lactofenol, microscopio.
PROCEDIMIENTO 1. 2. 3. 4. 5. Destapar 1 placa de agar Sabouraud, durante 30 minutos en el lugar cuyo nivel de contaminacin se desee examinar, lugar seleccionado e indicado en la placa. Tapar la placa y encintar con parafilm Incubar durante 48 horas, a 25 2 C. Efectuar la observacin y calcular el nmero de microorganismos que caen por cm2 durante 1 minuto. Realizar una caracterizacin de los hongos que han crecido en las placas (diferenciar: la colonia: color, volumen (elevada o plana), estructura (algodonosa o costrosa), filamentos (presencia o ausencia), tamao Preparacin de una muestra sobre la lmina portaobjetos: colocar una tira de cinta adhesiva sobre el micelio, con el fin de que las hifas y las esporas queden adheridas a ella. Se coloca una gota de: azul de lactofenol y sobre ella se coloca la cinta adhesiva, para luego observarla al microscopio. Identificar el tipo de hongo (ver el anexo).
TIEMPO DE EXPOSICION 15 MINUTOS
6.
7.
GRUPO LUGAR DE EXPOSICION DE LA PLACA 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Aula de clases R1-125 Aula de clases del cuarto piso Laboratorio 33 Sala de computo Biblioteca Bao de damas Bao de caballeros Pasillo del segundo piso (escuelas) Pasillo del tercer piso (of. profesores) Pasillo del cuarto piso (aulas)
CALCULO DEL NMERO DE MICROORGANISMOS POR CM2 Para calcular la cantidad de microorganismos que cayeron en la placa por unidad de tiempo: Contar el nmero de colonias en la placa. Este nmero se expresa como ufc (unidades formadoras de colonias), ya que varios microorganismos podran estar juntos y al multiplicarse slo se ver una colonia. Calcular el rea de la placa (A): A = r2 Para una placa de 9 cm de dimetro el rea es: A = 3,14 x 4,52 cm2 = 63,62 cm2
43
Calcular el nmero de microorganismos que caen en el rea por unidad de tiempo. Se puede expresar en: ufc/ placa/min; ufc/ cm2/min; ufc/rea total/min. Ejemplo Se expone una placa de 9 cm de dimetro en un rea durante 30 minutos. Se incuba 24 horas a 32,5 +/- 2C y se cuentan 25 colonias. Calcular el nmero de: ufc/placa/min y ufc/cm2/min. Calculo: 25 ufc.30 min X . 1 min X = 0,833 ufc/placa/min Si deseamos expresar los valores en ufc/cm2/min 0,833 ufc.63,62 cm2 X.. 1 cm2 X = 0,0131 ufc/cm2/min
Es importante asegurarse al momento de comparar los resultados, que stos estn expresados en los mismos parmetros
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UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA FACULTAD DE CIENCIAS ESCUELA PROFESIONAL DE QUMICA BIOLOGA (CH 061) INFORME DEL LABORATORIO N 4

Nota
1. Resumen (1p)
45
Tabla N1 Datos del estudio

DATOS rea evaluada Fecha Tiempo de exposicin
Tabla N2 Resultados del N de microorganismos por cm2 a las 24 horas

DATOS Numero de microorganismos Numero de Hongos
46
N de UFC/cm2
Tabla N3 Resultados del N de microorganismos por cm2 a las 24 horas
TIEMPO DE EXPOSICION 30 MINUTOS
GRUPO
LUGAR DE EXPOSICION DE LA PLACA Aula de clases R1-125 Aula de clases del cuarto piso Laboratorio 33 Sala de computo Biblioteca Bao de damas Bao de caballeros Pasillo del segundo piso (escuelas) Pasillo del tercer piso (of. profesores) Pasillo del cuarto piso (aulas)
N de UFC microorganismos 2 por cm
N de UFC Hongos 2 por cm
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
47
48
a. b. c. d. e. f. Qu es esterilidad microbiolgica? Explique la esterilizacin de calor seco y calor hmedo. Para que se emplea cada uno. Qu son los medios de cultivo? Cmo se clasifican los medios de cultivo? Cmo se reproducen los hongos? Es importante el control microbiolgico de los ambientes?
49
ANEXO 4
CONTROL MICROBIOLOGICO AMBIENTAL GUIA DE LOS PRINCIPALES HONGOS AMBIENTALES
Figura N 1. Control microbiolgico ambiental

Aspecto tpico de una placa de sedimentacin mostrando la diversidad microbiana de un ambientes
Figura N 2. Estructura de un hongo microscpico
Hifas
50

Figura N 3. Aspergillus tiene cerca de 200 sp.; A. niger; A. fumigatus
Figura N 4. Penicillium sp. 150 sp. ; P. notatum; P. chrysogenum, P. funiculosum
Figura N 5. Rhizopus nigricans
Figura N 6. Fusarium sp.
Figura N 7. Cladosporium sp.
51

Practica Biologia 2013-II (1-4)

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FACULTAD DE CIENCIAS ESCUELA PROFESIONAL QUIMICA

MANUAL DE PRACTICAS L A B O R A T O R I O DE BIOLOGA CH 061

SEMESTRE ACADEMICO 2013-1 PILAR GARCA AVELINO Jefe de Prcticas

Manual de Prcticas: Laboratorio de Biologa

Cronograma de Practicas de Laboratorio de BIOLOGA - CH 061

24 y 25 set. 9 oct. NO HAY LABORATORIO 29 y 30 oct.

NO HAY LABORATORIO 19 y 20 noviembre En la clase de TEORIA! NO HAY LABORATORIO NO HAY LABORATORIO

Prof. Pilar Garca Avelino

Manual de Prcticas: Laboratorio de Biologa

PRESENTACION DEL MANUAL DE PRCTICAS

Manual de Prcticas: Laboratorio de Biologa

PRESENTACION DEL INFORME

Manual de Prcticas: Laboratorio de Biologa

PREINFORME DEL LABORATORIO N 1

3. Bibliografa: cite correctamente la bibliografa consultada

Manual de Prcticas: Laboratorio de Biologa

Manual de Prcticas: Laboratorio de Biologa

IDENTIFICACIN DE AZCARES REDUCTORES (I)

Figura N2. Reaccin de Fehling

Manual de Prcticas: Laboratorio de Biologa

mechero / bao mara

Manual de Prcticas: Laboratorio de Biologa

HIDROLISIS DE LA SACAROSA (II)

Figura N 4. Disacridos: (a) reductor, (b) no reductor

GRAFICAR / ESQUEMATIZAR / ANOTAR SUS OBSERVACIONES Y RESULTADOS

Manual de Prcticas: Laboratorio de Biologa

RECONOCIMIENTO DE POLISACARIDOS: ALMIDN (III)

Manual de Prcticas: Laboratorio de Biologa

GRAFICAR / ESQUEMATIZAR / ANOTAR SUS OBSERVACIONES Y RESULTADOS

Manual de Prcticas: Laboratorio de Biologa

RECONOCIMIENTO DE PROTENAS (IV)

Figura N6. Unidad de la protena: aminocido

Figura N7. Estructura de las protenas

Manual de Prcticas: Laboratorio de Biologa

Figura N8. Complejo de cobre formado en la reaccin de Biuret

Rvo. Biuret: Cu2SO4 1% -

GRAFICAR/ESQUEMATIZAR SUS OBSERVACIONES Y RESULTADOS

Manual de Prcticas: Laboratorio de Biologa

RECONOCIMIENTO DE LPIDOS (V)

Agregar por las paredes del tubo cada componente:

GRAFICAR/ESQUEMATIZAR SUS OBSERVACIONES Y RESULTADOS

Manual de Prcticas: Laboratorio de Biologa

INFORME DEL LABORATORIO N 1

Manual de Prcticas: Laboratorio de Biologa

2 Objetivos especficos (1p)

3 Datos y observaciones experimentales (4 p)

Manual de Prcticas: Laboratorio de Biologa

Experimento N 2: Reconocimiento del Almidn

Experimento N 3: Reconocimiento de polisacridos: Almidn

Manual de Prcticas: Laboratorio de Biologa

Experimento N 4: Reconocimiento de Protenas

Importante: Es necesario indicar la intensidad del color con un signo (+++).

Experimento N 5: Reconocimiento de Lpidos

Manual de Prcticas: Laboratorio de Biologa

4 Discusin de observaciones, datos y resultados (3 p)

Manual de Prcticas: Laboratorio de Biologa

Manual de Prcticas: Laboratorio de Biologa

PREPARACION DE REACTIVOS LABORATORIO: RECONOCIMIENTO DE BIOMOLECULAS

Manual de Prcticas: Laboratorio de Biologa

PREINFORME DEL LABORATORIO N 2

EXTRACCION DE ADN ANIMAL

Manual de Prcticas: Laboratorio de Biologa

EXTRACCIN DE ADN ANIMAL