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LA ZEOLITA EN LA ALIMENTACIN DE OVINOS: PARMETROS RUMINALES Y PRODUCCIN DE GAS IN VITRO

Por:

I. A. Z. MARA TERESA RIVERA MIRANDA

Tesis presentada como requisito parcial para obtener el grado de Maestro en Ciencias

rea Mayor: Nutricin Animal

Universidad Autnoma de Chihuahua Facultad de Zootecnia Secretara de Investigacin y Posgrado

Chihuahua, Chih., Mxico

Agosto de 2005

La zeolita en la alimentacin de ovinos: parmetros ruminales y produccin de gas in vitro. Tesis presentada por Mara Teresa Rivera Miranda como requisito parcial para obtener el grado de Maestro en Ciencias, la cual ha sido aprobada y aceptada por:

________________________________________________________________ M. C. Javier Martnez Nevrez Director de la Facultad de Zootecnia

________________________________________________________________ Ph. D. Felipe Alonso Rodrguez Almeida Secretario de Investigacin y Posgrado

________________________________________________________________ Ing. Francisco Javier Camarillo Acosta Coordinador Acadmico de Investigacin y Posgrado

________________________________________________________________ Ph. D. Oscar Ruiz Barrera Presidente

________________________________________________________________ Fecha

Comit: Ph. D. Oscar Ruiz Barrera Ph. D. ngel Claudio Arzola lvarez Ph. D. Jorge Alfonso Jimnez Castro M. C. Oscar Alejandro Viramontes Olivas

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AGRADECIMIENTOS

Al Consejo Nacional de Ciencia y Tecnologa (CONACYT), por otorgarme una beca para realizar mis estudios de posgrado.

A la Facultad de Zootecnia de la Universidad Autnoma de Chihuahua.

Al Ph. D. Oscar Ruiz Barrera, por su apoyo como profesor y asesor.

A los profesores Claudio Arzola, Alfonso Jimnez, Oscar Viramontes, por la revisin de este trabajo de tesis.

Agradezco al personal del laboratorio de nutricin animal, por su apoyo y las atenciones brindadas hacia m persona durante la estancia en este lugar.

Un agradecimiento por sus atenciones al personal de la biblioteca, especialmente a Chelito.

Por su apoyo durante la etapa de toma de muestras a Ignacio Morquecho, Yamicela Castillo y Oscar Ruiz.

A mi alma mater, la Universidad Autnoma de San Luis Potos por haber inculcado en m el amor a la profesin, al campo de la Agronoma: para el hombre por el campo. iii

DEDICATORIA

A CRISTO Por que sin l mi vida no tiene sentido; por las duras pruebas y eventos dolorosos que puso en m vida durante este perodo de tiempo y en el cual nunca me dej sola.

A MIS PADRES Aarn Rivera Acosta y Jernima Miranda Rojas, por su amor, apoyo y comprensin, y por ensearme a ser sencilla y sobretodo por el espritu de lucha que sembraron en m. A t pap, porque gracias al trabajo duro y tenaz que realizas en el campo, me has sacado a delante. A t mam por tus sacrificios y consejos, por que juntos han sido el pilar de mi vida.

A MIS HERMANOS Luis, ngeles, Cecilia, Antonio y Carmen, por su cario y apoyo, los quiero.

A MIS ABUELAS Natividad Acosta, gracias por todo, te quiero y Apolonia Miranda gracias por que te preocupaste por m y por que con tu partida, me has enseado a valorar ms la vida.

A IGNACIO Por tu paciencia, amor y apoyo incondicional. iv

CURRICULUM VITAE

La autora naci el 16 de octubre de 1976 en el municipio de Soledad de Graciano Snchez, San Luis Potos, Mxico. 1992 -1995 Estudios de preparatoria, en el Centro de Estudios Tecnolgicos Industriales y de Servicios (CETIS) No. 125, San Luis Potos.

1995

Estudiante graduado del CETIS No. 125, San Luis Potos, S L P. Obteniendo el ttulo de Tcnico en Qumico Industrial.

1997 2001

Estudios de licenciatura en la Facultad de Agronoma de la Universidad Autnoma de San Luis Potos, Ejido Palma de la Cruz, Soledad de Graciano Snchez, S. L. P.

2002 - 2003

Realizacin de tesis de licenciatura en el Instituto de Investigacin de Zonas Desrticas de la Universidad Autnoma de San Luis Potos. Obtencin del ttulo de Ingeniero Agrnomo Zootecnista con Mensin Honorfica por Trayectoria Acadmica y Trabajo de Investigacin. Estudiante graduado de Maestra en Ciencias en Produccin Animal, rea mayor Nutricin Animal en la Facultad de Zootecnia de la Universidad Autnoma de Chihuahua, Chihuahua, Mxico.

2003

2003 - 2005

RESUMEN LA ZEOLITA EN LA ALIMENTACIN DE OVINOS: PARMETROS RUMINALES Y PRODUCCIN DE GAS IN VITRO POR: I. A. Z. MARA TERESA RIVERA MIRANDA Maestra en Ciencias en Produccin Animal Secretara de Investigacin y Posgrado Facultad de Zootecnia Universidad Autnoma de Chihuahua Presidente: Ph. D. Oscar Ruiz Barrera Se usaron cuatro ovinos machos de la raza Pelibuey fistulados en rumen, con un peso promedio de 32.55 1.34 kg y una edad aproximada de 12 meses, asignados en un cuadro latino 4 x 4, alimentados con una dieta basal heno de alfalfa (70 %) y concentrado (30 %) proporcionada ad libitum. Los tratamientos consistieron en cuatro niveles de zeolita (aditivo mineral) 0.0 % (T1), 1.5 % (T2), 3.0 % (T3) y 4.5 % (T4) ajustados diariamente al consumo de alimento y dosificados va intraruminal; con la finalidad de determinar el efecto de cada nivel sobre el pH, la concentracin de nitrgeno amoniacal (N-NH3), la concentracin de cidos grasos voltiles (AGV), actico (C2), propinico (C3) y butrico (C4), sobre la degradacin in situ de la materia seca (DISMS), adems de la produccin de gas in vitro (PGIV) de la materia seca, la desaparicin in vitro de la materia seca DIVMS, produccin de biomasa microbiana (BM), y el porcentaje de protena cruda (PC) y protena verdadera (PV) del contenido

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ruminal (fase lquida y slida). Cada perodo experimental consisti de 17 d, con 10 d de adaptacin y 7 d para recoleccin de muestras. Los tratamientos no tuvieron efecto (P>0.05) sobre el pH, la concentracin de N-NH3, la concentracin de AGV (C2 y C4), DISMS, la PGIV de la materia seca, la DIVMS, produccin de BM y el porcentaje de PC y PV del contenido ruminal, ni en la interaccin tratamiento por hora de muestreo (P>0.05), solo tuvieron efecto entre las horas de muestreo (P<0.001). En relacin a AGV este parmetro mostr diferencias significativas solo en el cido propinico (P<0.06), el cual fue mayor para el tratamiento 1.5 % zeolita comparado con el 3.0 y 4.5 % los cuales fueron iguales al control, presentndose diferencias (P<0.001) entre las horas de muestreo, pero no entre la interaccin tratamiento por hora de muestreo (P>0.05). Con la inclusin de zeolita se tuvieron algunas mejoras en los parmetros ruminales; se recomienda realizar posteriores estudios donde se incluya estos niveles de zeolita en dietas que contengan alimentos fibrosos de mala calidad, ya que en este tipo de dietas es donde pudiera encontrarse mejores resultados.

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ABSTRACT ZEOLITE IN THE DIET OF OVINE: RUMINAL PARAMETERS AND IN VITRO GAS PRODUCTION Four Pelibuey ovine male fistulated in rumen, with a weight average of 32.55 1.34 kg and an approximate age of 12 months, were assigned to a latin square 4 x 4 design and fed ad libitum with a basal diet of alfalfa hay (70 %) and supplemented with concentrate (30 %). Treatments consisted of four levels of zeolite (mineral additive) 0.0 % (T1), 1.5 % (T2), 3.0 % (T3) and 4.5 % (T4) and intake was adjusted daily. The objective was to determine the effect of each treatment on pH, ammonia nitrogen (N-NH3) concentration, total volatile fatty acids (TVFA) concentration, acetic acid content (C2), propionic acid content (C3) and butyric acid content (C4), in situ dry matter degradation (ISDMD), in vitro gas production (IVGP) of the dry matter, in vitro dry matter disappearance (IVDMD), production of microbial biomass (MB), and the percentage of crude protein (CP) and true protein (TP) of the ruminal content (solid and liquid phase). Each experimental period consisted of 17 d, with 10 d of adaptation and 7 d for samples collection. The zeolite did not have effect (P>0.05) on pH, N-NH3 concentration, ISDMD, IVGP dry matter, IVDMD, MB production and the percentage of PC and PV of the content ruminal, neither in the interaction treatment for hour of sampling (P>0.05), However, they had effect among the hours of sampling (P<0.001). In relation to VFA this parameter showed significant differences on the propionic acid value (P<0.06), being this value greater for the 1.5 % zeolite level compared to the 3.0 and 4.5 % which were similar to the control, differences were found (P<0.001)I in the hour of sampling, viii

but not in the interaction treatment x hour of sampling (P>0.05). With the inclusion of zeolite in the diet was found some improvements in the ruminals parameters; it is recommended to carry out subsequent studies where be included these levels of zeolite in diets that contain fibrous food of poor quality, since in this type of diets is where could be found better results.

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CONTENIDO Pgina RESUMEN.. ABSTRACT.... LISTA DE CUADROS... LISTA DE CUADROS DEL APNDICE LISTA DE GRFICAS.. LISTA DE ABREVIATURAS INTRODUCCIN.. REVISIN DE LITERATURA.. Caractersticas Generales de las Zeolitas Naturales Estructura fsico qumica.......................... Principales tipos de zeolita. Propiedades Generales de las Zeolitas Naturales Propiedades de intercambio catinico. Propiedades de adsorcin.. Posible Interaccin de la Zeolita con la Fisiologa Animal... Mecanismo de accin. Efecto de la zeolita sobre compuestos nitrogenados........ Efecto de la zeolita sobre elementos minerales................... Efecto de la Zeolita sobre el pH......................................................... Efecto de la Zeolita sobre cidos Grasos Voltiles........................... Efecto de la Zeolita sobre la Produccin de Gas In Vitro.. vi viii xiii xiv xv xvi 1 3 3 3 5 6 6 8 9 9 10 13 15 18 19

Produccin de Biomasa Microbiana............................................... Efecto de la Zeolita sobre la Produccin de Biomasa Microbiana..... Efecto de la Zeolita sobre la Digestibilidad de los Alimentos.. MATERIALES Y MTODOS... Localizacin del rea de Estudio. Caractersticas de la Poblacin Tratamientos y Dieta.. Metodologa. pH... Nitrgeno amoniacal cidos grasos voltiles Degradacin in situ.. Produccin de gas in vitro.. Desaparicin in vitro de la materia seca.. Biomasa microbiana.... Protena cruda.. Protena verdadera.. Anlisis Estadstico.... RESULTADOS Y DISCUSIN pH. Nitrgeno Amoniacal.. cidos Grasos Voltiles. Degradacin In situ....

21 22 25 28 28 28 28 29 29 32 32 33 34 37 37 38 38 39 41 41 43 45 50

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Produccin de Gas In Vitro... Desaparicin In Vitro de la Materia Seca.. Biomasa Microbiana.. Protena Cruda y Verdadera. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES....... LITERATURA CITADA. APNDICE.

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LISTA DE CUADROS

Cuadro 1 2 3 4 ALGUNOS TIPOS DE ZEOLITA ENCONTRADOS EN MXICO.. COMPOSICIN QUMICA DE LA DIETA BASE, OFRECIDA A OVINOS... COMPOSICIN QUMICA DE LA ZEOLITA, CLINOPTILOLITA USADA EN LOS TRATAMIENTOS EXPERIMENTALES MEDIAS DE LOS CUADRADOS MNIMOS PARA LOS PARMETROS ESTIMADOS DE LA DEGRADABILIDAD RUMINAL DE LA MATERIA SECA EN LA DIETA MEDIAS DE LOS CUADRADOS MNIMOS PARA LOS PARMETROS ESTIMADOS DE FERMENTACIN IN VITRO CON EL MODELO MONOFSICO. MEDIAS DE LOS CUADRADOS MNIMOS PARA LA DESAPARICIN IN VITRO DE LA MATERIA SECA (%) Y PRODUCCIN DE BIOMASA MICROBIANA (mg/100 ml), DESPUS DE 96 HORAS DE INCUBACIN... MEDIAS DE LOS CUADRADOS MNIMOS PARA LA PROTENA CRUDA Y PROTENA VERDADERA EN LA FASE LQUIDA Y SLIDA DEL CONTENIDO RUMINAL...

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LISTA DE CUADROS DEL APNDICE

Anexo 1 2 MEDIAS DE LOS CUADRADOS MNIMOS PARA EL pH EN LQUIDO RUMINAL OBSERVADO POR HORA DE MUESTREO MEDIAS DE LOS CUADRADOS MNIMOS PARA EL NITRGENO AMONIACAL (mg/100 ml) EN LQUIDO RUMINAL OBSERVADO POR HORA DE MUESTREO................... MEDIAS DE LOS CUADRADOS MNIMOS PARA EL CIDO ACTICO (mM/L) EN LQUIDO RUMINAL OBSERVADO POR HORA DE MUESTREO. MEDIAS DE LOS CUADRADOS MNIMOS PARA EL CIDO PROPINICO (mM/L) EN LQUIDO RUMINAL OBSERVADO POR HORA DE MUESTREO............ MEDIAS DE LOS CUADRADOS MNIMOS PARA EL CIDO BUTRICO (mM/L) EN LQUIDO RUMINAL OBSERVADO POR HORA DE MUESTREO.......... MEDIAS DE LOS CUADRADOS MNIMOS PARA EL PORCENTAJE DE DEGRADACIN IN SITU DE LA MATERIA SECA OBSERVADO POR HORA DE INCUBACIN.. MEDIAS DE LOS CUADRADOS MNIMOS PARA LA PRODUCCIN DE GAS IN VITRO (ml/200 mg MS) DE LA MATERIA SECA OBSERVADA POR HORA DE INCUBACIN

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LISTA DE GRFICAS

Grfica 1 2 Medias de los cuadrados mnimos para el pH en lquido ruminal por hora de muestreo, de acuerdo a cuatro niveles de zeolita......... Medias de los cuadrados mnimos para el nitrgeno amoniacal (NNH3) en lquido ruminal por hora de muestreo, de acuerdo a cuatro niveles de zeolita................................................................... Medias de los cuadrados mnimos para el cido actico en lquido ruminal por hora de muestreo, de acuerdo a cuatro niveles de zeolita............................................................................................... Medias de los cuadrados mnimos para el cido propinico en lquido ruminal por hora de muestreo, de acuerdo a cuatro niveles de zeolita.......................................................................................... Medias de los cuadrados mnimos para el cido butrico en lquido ruminal por hora de muestreo, de acuerdo a cuatro niveles de zeolita.......................................................................................................... Medias de los cuadrados mnimos para la degradacin in situ de la materia seca por hora de incubacin, de acuerdo a cuatro niveles de zeolita.............................................................................. Medias de los cuadrados mnimos para la produccin de gas in vitro de la materia seca por hora de incubacin, de acuerdo a cuatro niveles de zeolita...................................................................

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LISTA DE ABREVIATURAS a A a+b AGV ATP b B BM Bs BS c C C2 C3 C4 CO2 CIC


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Interseccin de la Curva de Degradacin a Tiempo Cero Asntota de Produccin de Gas Degradabilidad Total cidos Grasos Voltiles Adenosina Trifosfato Degradabilidad Potencial Tiempo Medio de Produccin de Gas Biomasa Microbiana Biomasa Seca Base Seca Tasa Constante de Degradacin Constante que Determina el Cambio de Perfil cido Actico cido Propinico cido Butrico Dixido de Carbono Capacidad de Intercambio Catinico Grados Centgrados Das Decilitro Degradacin Efectiva de la Materia Seca Degradacin In Situ de la Material Seca

d dl DEMS DISMS

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DIVMS e EB EE FDA FDN g G h k kg km L m m2 meq mg ml mm mm3 mM MO MS

Desaparicin In Vitro de la Material Seca Logaritmo Natural Energa Bruta Error Estndar Fibra Detergente cido Fibra Detergente Neutro Gramos Produccin de Gas Horas Tasa de Salida Kilogramos Kilometro Litro Metros Metros Cuadrados Miliequivalente Miligrmos Mililtros Milmetros Milmetros Cbicos Milimoles Materia Orgnica Materia Seca

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msnm l N NH3 NH4+ N-NH3 NNP p PC pH PGIV psi ppm pt ptp PV R rpm Si t T t1 tRM

Metros Sobre el Nivel del Mar Microlitro Nitrgeno Amoniaco Amonio Nitrgeno Amoniacal Nitrgeno no Proteico Degradacin por Tiempo Protena Cruda Potencial Iones Hidrgeno Produccin de Gas In Vitro Libras por Pulgada Cuadrada Partes por Milln Peso del Tubo Seco Inicial Peso del Tubo con Precipitado Protena Verdadera Tasa Fraccional de Fermentacin Revoluciones por Minuto Silicio Tiempo de Incubacin Tratamiento Punto de Inflexin Tiempo de Mxima tasa Fraccional de Fermentacin

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INTRODUCCIN El uso de zeolitas naturales como aditivo en la alimentacin animal se han investigado en diversos pases desde hace ms de 30 aos y recientemente en Cuba, Estados Unidos, Colombia, Brasil y Venezuela. En Mxico en los aos 70s, fueron descubiertos los primeros yacimientos de zeolitas (clinoptilolita) en el estado de Oaxaca; despus se encontraron reservas en Chihuahua, Sonora, Puebla, San Luis Potos y varios estados ms, pero al parecer, no existen reportes sobre utilizacin de zeolitas naturales en la alimentacin animal en Mxico. Las zeolitas naturales, denominadas el mineral del siglo, son de origen volcnico, con estructuras cristalinas de alumino-silicato de lcali, en las que prevalece el Mg, Ca, Na y K, se caracterizan por su capacidad de adsorcin e intercambio inico y como reservorio de amonio, devolviendo al medio ruminal, sodio y potasio requeridos por las bacterias (Bryant y Robinson, 1961; Bryant y Robinson, 1968). Comprenden un grupo de ms de 40 aluminosilicatos, entre los cuales, los ms importantes por la dimensin de sus yacimientos, aceptacin y uso en la produccin animal a nivel mundial son, la clinoptilolita y la mordenita (Mumpton y Fishman, 1977). Las propiedades de intercambio inico y adsorcin de las zeolitas naturales, pueden eficientar el uso del nitrgeno (N) del alimento en nutricin animal, reducir las enfermedades intestinales que prevalecen en cerdos jvenes y rumiantes, controlar la humedad y el contenido de amonio en el estircol.

2 Las zeolitas propician condiciones favorables para el crecimiento de bacterias celulolticas e incrementan la celulosis ruminal (Galindo et al., 1982) mejorando as la digestin de la fibra y la fermentacin ruminal de dietas altas en protena soluble (Sweeney et al., 1980). Galyean y Chabot (1981) Sweeney et al., (1984) y Hemken et al., (1984) reportaron cambios en los patrones de fermentacin ruminal en ganado alimentado con clinoptilolita. En ovinos, la zeolita ha mejorado la digestibilidad de la fibra neutro detergente y los patrones de fermentacin ruminal (Forouzani et al., 2004). El objetivo de este trabajo fue determinar el efecto de zeolita natural sobre algunos parmetros ruminales y la produccin de gas in vitro en ovinos.

REVISIN DE LITERATURA

Caractersticas Generales de las Zeolitas Naturales Fueron descubiertas en 1756 como cristales bien formados en cavidades de roca basal por Baron Axel Fredrick Cronstedt, quien las nombr piedras hirvientes (del griego zeo: hiervo y lithos, piedra) en alusin a su peculiar caracterstica espumosa caliente (Mumpton and Fishman, 1977; Bosch y Schifter, 1988; Galindo, 1988). Casi 40 especies naturales han sido reconocidas y un nmero igual sintetizadas en laboratorio (Mumpton and Fishman, 1977; Bosch y Schifter, 1988; Castaing, 1998). No fue hasta 1972 cuando se descubrieron los primeros yacimientos al sur de Oaxaca, Mxico por F.A. Mumpton; los cuales consisten en 90% clinoptilolita y mordenita. Similares hallazgos en ambientes volcnicos fueron descubiertos en diferentes estados del pas, por gelogos mexicanos (Mumpton, 1973; Mumpton y Fischman, 1977; Bosch y Schifter, 1988). Estructura fsico qumica. Las zeolitas son compuestos de aluminio (Al) y silicio (Si), donde se presentan como tetraedros alternos. Este armazn contiene canales donde se encuentran los cationes sodio (Na+), calcio (Ca2+), magnesio (Mg2+), potasio (K+); que neutralizan las cargas negativas y molculas de agua. Estos cationes son mviles y se pueden intercambiar en diferentes grados por otros cationes (Mumpton y Fischman, 1977; Mumpton, 1983; Galindo et al., 1990; Castro, 1996). La estructura cristalina de las zeolitas contiene fundamentalmente oxigeno y silicio en una relacin 2:1; si cada tetraedro contiene silicio (Si) en su 3

catin central, la estructura es elctricamente neutra. En las zeolitas el Si tetravalente se reemplaza por el aluminio (Al) trivalente, dando lugar a diferencias de cargas positivas. Las cargas negativas libres estn balanceadas por cationes mono y divalentes, tales como: Na+, K+. Ca2+, Mg2+, que cubren la estructura (Mumpton and Fishman, 1977; Pond y Mumpton, 1984; Roque, 1988; Bosch y Schifter, 1988). Estos tetraedros son las unidades fundamentales de la estructura, los hay con un tomo de Si en el centro, o bien con un Al. No parece ser de mayor trascendencia que los tetraedros sean de Si o de Al siempre y cuando se respete el equilibrio de cargas, o sea, que las cargas libres debidas a la presencia del Al se neutralicen con otros iones (Bosch y Schifter, 1988). La frmula emprica de las zeolitas naturales se puede representar como sigue: M2/nO.Al2O3.XSiO2.YH2O Donde M es cualquier lcali o catin alcalinotrreo; n es la valencia del catin; X es un nmero entre dos y diez; y Y es un nmero entre dos y siete. La frmula de la clinoptilolita, que es la ms comn de las zeolitas naturales es: (Na,K)20 . Al2O3 . 10SiO2 . 8H2O (Na3K3)(Al6Si30O)72 . 24H2O Los iones dentro del primer juego de parntesis son los cationes intercambiables, los segundos son los estructurales, porque junto con el O2 forman parte de la estructura del tetraedro. Molculas de agua, tambin se encuentran presentes libremente en todas las zeolitas naturales (Mumpton and Fishman, 1977; Mumpton, 1983; Pond y Mumpton, 1984). El agua no tiene ningn papel en la estabilidad de la red cristalina y se puede eliminar sin que la

red se destruya; sin embargo, su papel qumico en la molcula es nulo. Las zeolitas tienen una estructura con dimetros de poro mnimos o sea, de 3 a 10 angstroms, es esta porosidad, usualmente ocupada por molculas de agua, la que les confiere a las zeolitas muchas propiedades notables (Bosch y Schifter, 1988). Cada especie de zeolita tiene su propia estructura y por lo tanto su propia serie de propiedades fsicas y qumicas; sin embargo la mayora de las estructuras pueden ser visualizadas como SiO4 y AlO4, tetrahedros unidos en una forma geomtrica simple, formando redes unidas tridimensionalmente (Mumpton and Fishman, 1977; Pond y Mumpton, 1984; Bosch y Schifter, 1988). Principales tipos de zeolita. Las zeolitas son naturales y sintticas, y son clasificadas como tectoaluminosilicatos. La clinoptilolita y la modernita son los tipos de zeolitas ms abundantes e importantes a escala mundial, la clinoptilolita, es uno de los minerales ms resistentes a los cidos y a la temperatura relativamente alta y en comparacin con otros minerales de su grupo poseen una alta capacidad de intercambio inico que propicia la incorporacin de mezclas durante su anlisis, alta capacidad de adsorcin y un color variado. Las zeolitas pueden ser de origen volcnico o sedimentario, las segundas se caracterizan por ser aglomerados de cristales de muy pequeas dimensiones y a menudo con caras cristalinas mal desarrolladas. La clinoptilolita es de origen sedimentario y parece ser la ms abundante (Bosch y Schifter, 1988). De las ms de 40 especies de zeolitas conocidas en la actualidad, slo 10 tipos se han probado en la alimentacin animal, la 5

clinoptilolita es una de las zeolitas con mayor nmero de referencias bibliogrficas, aunque existen algunos trabajos referidos a zeolitas sintticas (Castaing, 1998). En 18 Estados mexicanos se han descrito 17 especies de minerales zeolticos de los cuales cuatro (clinoptilolita, mordenita, eroinita, chabasita)

tienen actualmente gran importancia prctica (Ortiz, 2001). A continuacin se sealan algunos tipos de zeolita (Cuadro 1) encontradas en Mxico y su capacidad de intercambio catinico. Propiedades Generales de las Zeolitas Naturales Las aplicaciones de las zeolitas naturales en la agricultura y en la industria dependen bsicamente de sus propiedades fsicas y qumicas entre las cuales podemos citar las siguientes: Intercambio catinico, adsorcin, actuar como amortiguador o estabilizador del equilibrio cido-bsico, catlisis, deshidratacin y rehidratacin y reactividad biolgica (Mumpton, 1999); las propiedades extrnsecas de la roca (por ejemplo composicin de slice, color, porosidad, resistencia, y densidad) son tambin importantes en muchas aplicaciones. Propiedades de intercambio catinico. La capacidad de intercambio catinico (CIC) est en funcin del grado de sustitucin, del Si por Al en la estructura cristalina; a mayor sustitucin mayor ser el dficit de cargas positivas y el nmero de cationes alcalinos o alcalino trreos requeridos para la neutralidad elctrica (Roque, 1989). Semens (1984) indic que existe una selectividad para el intercambio que no depende de la concentracin del in que compite en solucin, sino que 6

CUADRO 1. ALGUNOS TIPOS DE ZEOLITA ENCONTRADOS EN MXICO. Zeolita Frmula Clinoptilolita (Na4K4) (Al8Si40O96.24H2O CIC meq/g Estados 2.54 Chih., Gto., S.L.P., Hgo., Gro., Jal., Mich., Oax., Pue., Sin., Son., Tlax., Ver. 2.29 Chih., Gto., Mich., Oax., Pue., S.L.P., Son. 4.54 B.C.N., Hgo., Jal. 3.12 3.84 Son. B.C.N., Gto., Hgo., Jal., Oax.

Mordenita

Na8(Al8Si40O96).24H2O

Analcima Erionita Chabasita

Na16(Al16Si32O96).16H2O (Na,Ca5,K)9(Al9Si27O72).27H2O (Na,Ca)6(Al12Si24O72).40H2O

CIC Capacidad de Intercambio Catinico Fuente: Mumpton (1983) Pond y Mumpton (1984)

depende de la selectividad de la zeolita hacia diferentes cationes. Las zeolitas naturales tienen una CIC de 2 a 4 meq/g, alrededor de dos veces la CIC de la arcilla bentonita. La clinoptilolita tiene baja CIC (2.25 meq/g) pero selecciona cationes como: Cs+ . Rb+ . K+ . NH4+ . Ba+ . Sr2+ . Na+ . Ca2+ . Fe3+ . Al3+ . Mg2+ . Li+. Esta preferencia de seleccionar cationes, incluyendo NH4+, puede ser explotada para remover NH4-N de aguas residuales (Mercer et al ., 1970). En la mayora de las zeolitas, el agua se retiene por hidratacin de los cationes que estn compensando la carga superficial y por hinchamiento osmtico. El amoniaco, sin embargo, se retiene principalmente mediante intercambio catinico del in amonio (NH4+) (Mumpton, 1999). Castaing (1998) seala que cada especie de zeolita tiene un patrn de intercambio de cationes especfico, por lo que unos cationes son

intercambiados ms fcilmente que otros. Por ejemplo, la clinoptilolita intercambia preferentemente amonio frente a sodio; sin embargo, la alta capacidad de intercambio catinico de algunas zeolitas sintticas puede alcanzar valores de 1000 meq/100 g, pero las zeolitas naturales (clinoptilolita, erionita, phillipsita, etc.) suelen tener valores inferiores. El empleo de las zeolitas representar ventajas considerables, gracias a su alta CIC, cuando se trate de neutralizar el efecto negativo de sustancias txicas y antinutricionales.

Propiedades de adsorcin. Una de las propiedades ms importantes de las zeolitas es su gran estabilidad trmica y el aumento de su capacidad de adsorcin con la temperatura, su capacidad de adsorcin aumenta al calentarse (Bosch y Schifter, 1988). Mumpton y Fishman (1977); Bosch y Schifter (1988) sealan que las cavidades grandes y canales de entrada de las zeolitas se encuentra por lo general llenas de molculas de agua que forman esferas hidratadas alrededor de los cationes intercambiables; si el agua se elimina por calentamiento entre 300 y 350 oC, las molculas tendrn un pequeo dimetro en la seccin transversal, permitiendo la adsorcin de sustancias inherentes y as separar molculas gaseosas de acuerdo a su tamao. Molculas demasiado grandes no pasaran por los canales. Esta propiedad es conocida como tamiz molecular, propiedad de la mayora de las zeolitas cristalinas. El rea de la superficie disponible para la adsorcin son rangos superiores a 100 m2 por gramo, y algunas zeolitas son capaces de adsorber alrededor del 30% de un gas, basado en el peso seco de la zeolita (Mumpton and Fishman, 1977) as como tambin metales pesados (Mumpton, 1999). Posible Interaccin de la Zeolita con la Fisiologa Animal Mecanismo de accin. A pesar de varios trabajos realizados, todava no se ha indicado el mecanismo exacto mediante el cual acta la zeolita. De acuerdo con Castro (1996), la clinoptilolita actuara como un intercambiador de iones por el amonio e iones metlicos y puede selectivamente absorber molculas de gas simple y vapor (Boronic, 2000; Melenova et al., 2003). Tambin esta propiedad de intercambio inico puede llevar a iones como el Ca2+, K+, Mg2+ y Na+ a ser

ms tiles. Las propiedades de intercambio inico podran llevar una accin buffer en el animal por la absorcin de un catin y la liberacin de otro (Castro, 1996; Mumpton, 1999; Boranic, 2000) as como de adsorber metales pesados (Mumpton, 1999). Eigenman (1983) citado por Velzquez (1994) indica que uno de los posibles mecanismos de accin de la zeolita en rumiantes puede ser por efectos en la peristalsis o en la presin osmtica del contenido intestinal. Efecto de la zeolita sobre compuestos nitrogenados. Las protenas y la urea o cualquier fuente de NNP que llega al rumen, son degradadas a NH3 mientras que la mayora de los aminocidos son desaminados. Teniendo en cuenta la CIC de la zeolita y su capacidad para absorber compuestos nitrogenados es importante sealar que estos aluminosilicatos interactan e intervienen directamente en el metabolismo proteico en las diferentes especies (Pond y Mumpton, 1984). As los trabajos de Galindo (1988) describen los efectos de las zeolitas naturales en el metabolismo de la protena en rumiantes. Cada tipo de zeolita posee un modelo selectivo especfico y diferente de intercambio inico, por lo tanto, ciertos cationes presentes son intercambiados con ms rapidez que otros. Por ejemplo la clinoptilolita intercambia con preferencia NH4+ en relacin con el Na+ (Mumpton y Fischman, 1977; Pond y Mumpton, 1984). El NH4+ retenido por la zeolita es liberado lentamente al ambiente ruminal en la misma magnitud que la zeolita regenera su estado normal debido a los cationes procedentes de la saliva o de los alimentos. White y Ohlrogge (1974)

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sealan que aproximadamente el 15 % del NH3 presente en el rumen puede ser captado por la zeolita, lo que permite una mejor utilizacin del N por los rumiantes (Sweeney et al., 1980). Nesterov et al. (1979) reportaron que al adicionar 5% de clinoptilolita en la racin de animales, recibiendo una relacin de 30:70 NNP y protena, la concentracin de NH3 y urea en el rumen se redujo al mismo tiempo que se incrementaron los niveles de aminocidos en sangre y rumen. Al alimentar ovinos Ad libitum con una dieta suplementada con urea (0.9 %) mas zeolita (3 %), esta mostr una alta tendencia en la retencin de N con mas baja excrecin urinaria, obteniendo mejor utilizacin del N (Parre et al., 1997). Por lo tanto, la presencia de zeolita puede contribuir a un ambiente ruminal estable con respecto al nitrgeno aprovechable, lo que beneficiar a los microorganismos del rumen y al animal. Nitrgeno amoniacal. La cantidad de amoniaco (NH3) en el contenido ruminal nos indica el grado de fermentacin de la protena en el rumen (Edelman, 1997) y por lo tanto, falta de NH3 reduce la proliferacin de las bacterias por ser el N esencial para la sntesis de protena microbiana. Segn ciertos investigadores, cuando la concentracin de NH3 es de 5 mg/dl, la produccin de protena microbiana es mxima (Edelman, 1997). As mismo, otros autores sealan que el NH3 se ha detectado en concentraciones con un amplio rango, desde uno hasta 22.1 mg/100ml (McCollum y Horn, 1990 citados por Villalobos, 1993). En un intento por reducir los efectos txicos de altos niveles de NH4+ en el lquido ruminal, cuando se proporciona NNP, como urea o biuret en las dietas, White y Ohlrogge (1974) introdujeron zeolita natural y sinttica al rumen 11

de animales en experimentacin y sealan que aproximadamente el 15 % de NH3 presente en el rumen fue captado por la zeolita, por lo tanto los rumiantes tuvieron una mejor utilizacin del nitrgeno. En becerros suplementados con clinoptilolita, los niveles de NH3 en rumen se incrementaron aproximadamente 4 h despus de suplementar el alimento con clinoptilolita (Galyean y Chabot, 1981) debido posiblemente a la alta afinidad de la clinoptilolita de intercambio ionico con el ion amonio (NH4+) (Mumpton y Fischman, 1977). Estos mismos autores sealan que a las 0 y 8 h de muestreo se tuvieron niveles de NH3 por debajo de 50 ppm, los cuales se encuentran en el rango ptimo para el crecimiento de las bacterias. En estudios realizados por Galindo et al. (1982) observaron que existi tendencia a disminuir la concentracin de NH3 en rumen con respecto a la dieta de ensilaje cuando se agreg a la dieta dos niveles de zeolita (0.5 y 1.0 %), sin embargo, no existi diferencia entre estos dos niveles. McCollum y Galyean (1983) mencionan que al suplementar dietas para bovinos en engorda con 1.25, 2.5 y 5.0 % de clinoptilolita, la dieta con 5.0 % zeolita tuvo los valores mas bajos en concentracin de amoniaco a las 3 h despus de la alimentacin; a las 6 h postalimentacin, los niveles 2.5 y 5.0 % clinoptilolita tuvieron valores mas bajos de amoniaco comparados con la dieta sin clinoptilolita y a las 9 h postalimentacin, los niveles 2.5 y 5.0 % tuvieron los niveles mas bajos de amoniaco que con las otras dietas. Por otra parte Sweeney et al. (1980) no observaron efecto de la zeolita sinttica en la concentracin de NH3 en rumen de bovinos. Ames (1960) demostr la alta selectividad de la zeolita por el NH4+. 12

La concentracin de N-NH3 en rumen no fue afectada por la adicin de 2 % zeolita A (sinttica) y 1.0 % NaHCO3 en la dieta de vacas lecheras (Johnson et al., 1988). Forouzani et al. (2004) estudiaron el efecto de inclusin de zeolita (0, 30 y 60 g/kg dieta) en la concentracin de amoniaco, estos autores no encontraron efecto de la zeolita en la concentracin de amoniaco en lquido ruminal entre las dietas; sin embargo, encontraron efecto interaccin zeolita por tiempo. MacCollum y Galyean (1983) mencionan que la clinoptilolita puede alterar la digestibilidad y fermentacin en rumen y los niveles de clinoptilolita superiores a 1.25 % pueden tener influencia en el contenido de amoniaco, pH y digestibilidad de los constituyentes de la dieta en bovinos alimentados con 80 % de concentrado. Efecto de la zeolita sobre elementos minerales. Tomando en cuenta la propiedad de intercambio catinico y adsorcin de la zeolita, este complejo mineral es capaz de interactuar con aquellos minerales cargados positivamente. Esto se puede confirmar con los trabajos de Petkova et al. (1983) quienes analizaron el efecto de la zeolita clcica-potsica blgara en el contenido de macroelementos y microelementos en ovinos y observaron un aumento en la deposicin de Ca, P, Mg y Zn en diferentes rganos y tejidos de ovinos en crecimiento. Por otra parte, Tkachev y Ustn (1985) sealan incrementos en la absorcin de Ca y P en el intestino delgado al suministrar zeolita en la dieta de en el tiempo de muestreo y en la

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puercos jvenes, mientras que Kurashvili (1987) seala un aumento en la utilizacin de P y Ca en gallinas. Watkins y Southern (1992) sealan que el efecto de la zeolita sdica esta influenciado por la concentracin de Ca y P en la dieta, aumentando la

utilizacin del primero y reduciendo la utilizacin el segundo, lo cual puede ser importante para dietas bajas en Ca y altas en P. Al respecto, Roussel et al. (1992) observaron mejoras en la concentracin de Ca en la leche de vacas. Al respecto, Thilsing-Hansen et al. (2002) suplementaron vacas en preparto con 1.4 kg de pellets de zeolita por da (0.7 kg de zeolita A sinttica), la zeolita increment los niveles de Ca en plasma en vacas paridas, mientras que el Mg y el fosfato inorgnico en plasma fueron suprimidos. En contraste, Enemark et al. (2003) registraron una ligera declinacin inicial en la concentracin de Ca en suero y orina en vacas alimentadas con una dieta suplementada con zeolita la cual fue probablemente causada por la disminucin de este mineral, aprovechado de la zeolita contenida en la dieta; la disminucin de la concentracin de fosfato y Mg en el suero de vacas lecheras fue particularmente causado por interferencia de la zeolita con la absorcin

intestinal y particularmente por una marginal suplementacin de estos minerales en la dieta. Castro (1996) al evaluar el efecto de la zeolita en la adsorcin de nutrientes en medios biolgicos, encontr que no hubo incrementos en la excrecin fecal de N y minerales cuando incluy en la dieta para ovinos cuatro niveles de zeolita (0, 1, 3 y 5 %). Por otra parte Gutirrez et al. (1999) sealan que con la inclusin de hasta 5 % zeolita no incrementa la excrecin fecal de 14

nitrgeno y minerales a pesar de la capacidad de intercambio catinico que posee este mineral. La alta capacidad de la clinoptilolita de enlazar cationes divalentes ha sido mostrada al proteger de los efectos antagnicos del Cd (Pond y Yen, 1983) en la toxicosis de cerdos y ratas (Pond et al., 1985). Al respecto, Pond (1989) al suplementar Cu en una dieta con altos niveles de PC (9 14 %) y clinoptilolita (0 2 % de la dieta) en ovinos encontr que la clinoptilolita no protegi de los signos txicos antagonistas del Cu cuando este fue agregado a la dieta basal a 10 20 ppm. Sin embargo, Castro y Savn (1998) sealan que el consumo de altos niveles de zeolita (1200 g/d) durante un perodo de 120 d no provoca acumulacin nociva de metales pesados (Cd y Pb) en la carne y vsceras en cerdos; esto indica, que al parecer no existe peligro potencial al utilizar las zeolitas en la alimentacin animal. Efecto de la Zeolita sobre el pH El pH en el rumen es la consecuencia del balance entre la produccin de cidos a consecuencia de la fermentacin. El pH puede variar en un rango de 5.0 a 7.0 (Edelman, 1997). Las bacterias celulolticas que fermentan la celulosa son muy sensibles a la acidez excesiva, desarrollan mejor su actividad cuando el pH del rumen tiene un valor comprendido entre 6.4 y 7.0; su tasa de multiplicacin empieza a disminuir si su pH desciende a un valor de 6.2, llegando a ser nula cuando el pH es inferior a 6.0 (rskov, 1990). Por lo tanto, el pH del rumen nos indica cuales son las bacterias que predominan en ste (Edelman, 1997). 15

La estabilizacin del pH es uno de los beneficios que le atribuyen a la zeolita natural y al respecto Mumpton (1999) menciona que las zeolitas pueden regular el pH en el sistema digestivo del animal, resultando en menos problemas digestivos de los mismos. As mismo Bryant y Robinson (1968)

sealan que la zeolita estabiliza el pH y mejora las condiciones ruminales debido a la presencia de sales que liberan cationes como Ca2+, Mg2+, Na+, K+, Fe2+ los que a su vez son requeridos por las bacterias ruminales. Peterson (1980) observaron que cuando la clinoptilolita es introducida dentro de un medio cido, sus iones pueden ser intercambiados por los iones de H+ lo cual puede permitir que acte como un agente amortiguador. En trabajos realizados por Gutirrez et al. (1989) no encontraron poder amortiguador de la zeolita natural en el lquido ruminal de ovinos que consuman caa y concentrado comercial. Por otro lado Blanco (1993), al evaluar la capacidad buffer de dos zeolitas naturales y de las dietas en una solucin acuosa comparada con una solucin de bicarbonato de sodio de forma general obtuvo que ambas zeolitas no mostraron capacidad buffer. Velzquez (1994) al estudiar el efecto de diferentes niveles de zeolita, incluida en la leche suministrada a terneros, obtuvo resultados similares al analizar diferentes medios (alimento, contenido y medio de abomaso). Sin embargo, ha sido reportado que las zeolitas naturales han tenido cierto poder buffer en vacas lecheras. Garca et al. (1988) indican que incluir un amortiguador en dietas a base de concentrado permite disminuir la cada brusca de grasa en leche. Galindo et al. (1982) sealan que el efecto buffer de la zeolita en el pH ruminal en dietas con ensilaje, puede ser debido a la 16

neutralizacin por parte de la zeolita sobre los cidos que se liberan como resultado de la digestin de la dieta en el rumen, mejorando as el ecosistema ruminal. Galindo et al. (1982) al estudiar el efecto de dos niveles de zeolita (0.5 y 1.0% en dietas a base de ensilaje encontraron que el pH se mantuvo estable en horas de mxima fermentacin, sin diferencias; estos autores observaron que en la dieta sin zeolita disminuy el pH en las horas de mayor actividad microbiana (2 a 6 h) despus de consumido el alimento y sealando que esto pudiera estar asociado a un mayor desarrollo de la flora lctica, lo que pudiera afectar el desarrollo normal de las bacterias celulolticas. Por otra parte, McCollum y Galyean (1983) al medir el pH ruminal a bovinos en engorda, alimentados con una dieta a base de 70 % de sorgo ms 0, 1.25, 2.5 y 5.0 % de zeolita encontraron que el pH fue menor a las 6 h postalimentacin para la dieta con 2.5 % clinoptilolita comparada con la dieta control o para la dieta 1.25 % clinoptilolita, a las 12 h el pH ruminal fue inferior para la dieta con 5.0 % y para las dietas con 1.25 % clinoptilolita. Al evaluar el pH ruminal en vacas Holstein alimentadas con 2.0 % zeolita A (sinttica) y 1.0 % NaHCO3, Johnson et al. (1988) observaron que el pH fue incrementado cuando se aadi zeolita a la dieta; sin embargo, el cambio de pH de 0.2 unidades fue fisiolgicamente cuestionado, la adicin de NaHCO3 no tuvo efecto en el pH. En trabajos previos con becerros (Sweeney et al., 1984) y en vacas lecheras (Hemken et al., 1984) no reportaron cambios en el pH cuando fue incluida zeolita natural en la dieta.

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Forouzani et al. (2004) evaluaron tres niveles de zeolita (0, 30 y 60 g/kg dieta) y encontraron que el pH en lquido ruminal difiri entre el grupo 30 g/kg zeolita y 60 g/kg zeolita, estos autores observaron valores de pH superiores con 30 g/kg zeolita; sin embargo no encontraron diferencias entre el grupo control y las dietas con zeolita. Efecto de la Zeolita sobre cidos Grasos Voltiles Los cidos grasos voltiles (AGV) son los mayores productos de la fermentacin ruminal realizada por los microoganismos (Dijkstra et al., 2003). Los microorganismos convierten una gran proporcin de carbohidratos y protenas de los alimentos a AGV (Dijkstra et al., 2003), principalmente acetato, propionato y butirato. Los AGV representan para el animal la principal fuente de energa absorbida (Bergman, 1990). Tambin, el tipo de AGV formado y el perfil resultante de AGV determinar la reparticin de nutrientes dentro del rumiante. El acetato y el butirato son lipognicos, mientras que el propionato y el valerato son glucognicos. As que el balance de AGV influye sobre la disponibilidad de nutrientes y en la respuesta animal (Dijkstra et al., 2003). Por otra parte Galyean y Chabot (1981) en su trabajo con bovinos alimentados con cascarilla de algodn y concentrado sealan que la concentracin de AGV en rumen no fue influenciada por la clinoptilolita mineral; sin embargo, la proporcin molar de propionato tendi ser alta en becerros suplementados con clinoptilolita. Galindo et al. (1982) al estudiar el efecto de dos niveles de zeolita (0.5 y 1.0 %) sobre la concentracin de AGV en vacas alimentadas con ensilaje de pasto estrella a libre acceso, observaron que la concentracin total de AGV fue 18

superior en la dieta donde se incluy 0.5 % zeolita (92.69 meq/L) comparado con la dieta control (81.90 meq/L) y que la dieta con el nivel 1.0 % no mostr diferencias con la dieta control. Al sustituir 0, 1.25 y 2.5 % de la dieta base MS por zeolita en animales alimentados con una dieta basada en 70 % sorgo, McCollum y Galyean (1983) observaron que las dietas suplementadas con clinoptilolita tendieron a producir altos niveles de AGV y la dieta con 2.5 % de clinoptilolita produjo mayor concentracin de cido propinico. Johnson et al. (1988) analizaron la concentracin de AGV en vacas Holstein alimentadas con una dieta basal de granos y forraje (80 % ensilaje de maz, 20 % henolaje) en una proporcin 50:50 ms zeolita A o NaHCO3

encontrando que la concentracin de propionato disminuy y la proporcin acetato:propionato se increment con zeolita, estos autores mencionan que el incremento en acetato:propionato es asociado con mayor digestin de la fibra y contenido de grasa en leche, debido a las condiciones favorables para la fermentacin microbial en rumen; la inclusin de NaHCO3 no tuvo efecto en la concentracin de AGV. Efecto de la Zeolita sobre la Produccin de Gas In vitro La tcnica de produccin de gas, mide la cantidad de gas liberado directamente como un producto de la fermentacin e indirectamente desde el fluido ruminal neutralizado (Schofield et al., 1994), adems est relacionada con la fermentacin en el rumen, ms que con la digestibilidad en el tracto digestivo, la cual incluye digestin enzimtica, absorcin y fermentacin en el intestino (Castillo, 2004). 19

Posada y Noguera (2005) mencionan que la tcnica de produccin de gases, a diferencia de otras tcnicas in vitro e in situ, ofrece la posibilidad de determinar de una forma ms precisa el efecto de los compuestos antinutricionales; adems de permitir determinar la extensin y la cintica de degradacin del alimento a travs del volumen de gas producido durante el proceso fermentativo (Theodorou et al., 1994). Una de las ventajas de este procedimiento, es que el curso de la fermentacin y el papel de los componentes solubles del sustrato puede ser cuantificado (Pell et al., 1997). Mumpton y Fischman (1977) y Mumpton (1999) sealan que algunas zeolitas adsorben alrededor del 30 % de un gas, basado en el peso seco de las mismas. Varadyova et al. (2003a) evaluaron el efecto de silicatos (0.1 g zeolita, bentonita, kaolinita, granita) sobre los parmetros de fermentacin ruminal, gas total, metano, AGV en ovinos; estos autores encontraron que estos minerales tuvieron efecto en la produccin de gas y la zeolita tuvo efecto, solo cuando se utiliz como sustrato paja de trigo y cebada; sin embargo, la bentonita tuvo efecto cuando se utiliz como sustrato heno de pradera, paja de trigo, celulosa amorfa y cebada. Estos mismos autores sealan que los silicatos no tuvieron efecto en la produccin de metano, sin embargo ayudaron en el metabolismo microbial, ya que la bentonita y la granita tuvieron influencia en la fermentacin ruminal, sin embargo, la zeolita y la kaolinita tuvieron poco efecto. En otros estudios Varadyova et al. (2003b) determinaron el efecto de diferentes cantidades (0.1, 0.25 y 0.5 g) de dolomita y el efecto de sta, MgO y CaCO3 sobre los productos finales de la fermentacin in vitro; cuando se utiliz celulosa y heno de pradera como sustrato ms 0.5 g de dolomita, observndose 20

un marcado efecto de esta en la produccin de metano, registrando un incremento en la produccin total de gas cuando 0.25 y 0.5 g de dolomita fue agrada al sustrato de celulosa y heno de pradera; sin embargo el MgO y CaCO3 tuvieron un escaso efecto comparado con la dolomita sobre los parmetros de fermentacin de los sustratos incubados. Produccin de Biomasa Microbiana El ecosistema microbial del rumen es complejo y depende mucho de la dieta, esta influye en la composicin y en la relacin de las diferentes clases y cantidades de microorganismos ruminales (Edelman, 1997). La poblacin microbiana en el rumen consiste de bacterias, protozoarios y hongos; las bacterias conforman la mayor parte de los microorganismos ruminales, el nmero de clulas bacterianas por gramo de contenido ruminal es 1010 a 1011 y el nmero de protozoarios en el rumen es alrededor de 105 a 106 clulas/g de contenido ruminal; as mismo, los hongos anaerbicos contribuyen en 8 % de la biomasa microbiana (Ishler et al., 1996). Por lo tanto, la proliferacin de los microorganismos en su totalidad es lo que denominamos biomasa microbiana. La eficiencia del uso de ATP para proliferacin de la masa microbial se expresa como YATP y se define como la cantidad de materia seca microbial (g) producida por mol de ATP proveniente de la fermentacin del alimento, el YATP en promedio es de 22 a 26 g de MS microbial/mol ATP; cuando el YATP es alto, existe mayor proliferacin de bacterias y menor produccin de AGV y calor; por lo tanto cuanto mayor es la produccin de masa microbial, mayor es la eficiencia ruminal (Edelman, 1997).

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Sin embargo, ha sido observado que puede existir una relacin inversa entre el volumen de gas (o AGV) y la produccin de biomasa microbiana (Naga y Harmeyer, 1975; Leng, 1993; citados por Williams, 2000). La relacin de sustrato verdaderamente degradado (mg) a volumen de gas producido (ml) puede reflejar variaciones en la produccin de biomasa microbiana, este coeficiente ha sido definido como factor de particin. ste disminuye con el tiempo de incubacin (Lpez et al., 1998) de tal forma que la produccin de gas o de AGV y de biomasa microbiana por unidad de sustrato degradado no es constante y una relacin inversa puede existir entre ellos (Blmmel et al., 1999). La explicacin reside en la variacin de la produccin de biomasa microbiana por unidad de ATP generada (YATP) (Blmmel et al., 1997). El factor de particin puede variar dependiendo de las proporciones molares de AGV (relacin acetato a propionato) y YATP. La produccin de biomasa microbiana por unidad de ATP puede variar de 10 a 32 mg. Se sugiere por tanto, la combinacin de mediciones de gas in vitro con determinaciones del residuo verdaderamente degradado despus de varios perodos de incubacin (Blmmel et al., 1999). La relacin entre los productos de la fermentacin in vitro y el aporte del sustrato puede ser generalizada por tres ecuaciones: Ecuacin 1: Sustrato incubado sustrato verdaderamente degradado = Biomasa microbiana + AGV + Gases. Ecuacin 2: Sustrato incubado sustrato aparentemente degradado = AGV + Gases. 22

Ecuacin 3: Sustrato verdaderamente degradado sustrato aparentemente degradado = Biomasa microbiana (Blmmel et al., 1997). Efecto de la zeolita sobre la Produccin de Biomasa Microbiana Galindo et al. (1988) mencionan que al incluir zeolita en dietas a base de ensilaje de pasto estrella (5.2 % PC y 35.0 % FC), concentrado (16.0 % PC y 8.0 % PC) y pasto estrella (7.4 % PC y 31.3 % FC) produce un aumento de las bacterias celulolticas y su actividad puede contribuir al aumento en la degradacin de la fibra en el rumen, incrementando as la velocidad de pasaje de la digesta a travs del rumen; tambin la zeolita puede causar una disminucin en la poblacin de bacterias proteolticas y amilolticas. Se considera que el efecto de la zeolita en el ambiente ruminal, especficamente en la celulolisis, se debe al potasio o al magnesio presentes en su composicin, los cuales pueden actuar como catalizadores de la actividad enzimtica de las bacterias ruminales (Galindo et al., 1982). En un estudio realizado por Galindo et al. (1984) mencionan, que la poblacin de protozoarios aument cuando se incluy zeolita en la dieta basada en ensilaje de pasto estrella, debido al aumento de pH ruminal que produce este mineral; sin embargo, disminuy el nmero total de bacterias viables debido posiblemente a la depredacin. Tambin sealan que el mejor efecto en la poblacin microbiana en rumen se obtuvo con el nivel de 1 % comparado con el 0.5 %. La reduccin de las bacterias viables y lactobacilos que produce la zeolita puede ser debido a que estos grupos microbianos se lavan del rumen cuando se incluye esta, probablemente debido a que se reduce el tiempo de 23

retencin de la digesta. Galindo et al. (1990) mencionan que el incremento en la poblacin de bacterias celulolticas y su actividad que produce la zeolita contribuye a una mayor degradacin de la fibra en el rumen aumentando la velocidad en la digesta. Por otra parte, los grupos microbianos no celulolticos se lavan del rumen a una velocidad superior a los celulolticos, esto se debe, a que estos se mantienen libres en el lquido ruminal y son sensibles al efecto de los factores que modifican la poblacin de clulas microbianas en el rumen (Cheng y Costerton, 1980). Las bacterias celulolticas para degradar la celulosa penetran y se adhieren a la fibra y se lavan del rumen en menor proporcin cuando se reduce el tiempo de retencin de la digesta (Galindo et al., 1990). La disminucin de las bacterias proteolticas y amilolticas producidas por la zeolita, en una dieta con ensilaje de pasto estrella (5.2 % PC y 35.0 % FC), concentrado (16.0 % PC y 8.0 % PC) y pasto estrella (7.4 % PC y 31.3 % FC) es de inters, ya que los grupos fisiolgicos se identifican por su actividad, lo cual puede indicar una menor actividad proteoltica y amiloltica en el rumen, esto indica que gran parte del almidn y la protena escapa del rumen hacia las partes bajas del tracto digestivo, donde son digeridas por enzimas especficas (Galindo et al., 1990). Existen evidencias de algunos trabajos (Galindo et al., 1984; Galindo et al., 1986) acerca de que la zeolita en ensilaje de pasto estrella (4.08 % PC y 89.60 % FDN) incrementa la poblacin de protozoarios en rumen y es conocido que los protozoarios ingieren grandes cantidades de clulas microbianas al da (Coleman, 1972; Coleman, 1979) lo cual reduce la biomasa bacteriana libre en el lquido ruminal. 24

La zeolita produce un incremento en todos los iones minerales que la componen, estos minerales fueron estudiados en el rendimiento en biomasa y confirma la importancia de la suplementacin mineral para el crecimiento microbiano (Bryant y Robinson 1961; Bryant y Robinson 1968; Elas, 1971). La zeolita incrementa la celulolisis ruminal (Galindo et al., 1984), el Mg2+ y el Ca2+ son los minerales que tienen mayor efecto en la digestin de la celulosa, ya que ambos iones minerales son imprescindibles para el crecimiento de Bacteroides succingenes, Ruminococcus albus, R. flavefaciens y Butyrivibrio fibrisolvens, que son especies de bacterias de alta actividad celuloltica (Stewart, 1977). El calcio desempea un papel fundamental en la sntesis de protena y de la pared celular de los microorganismos y es requerido por Bacteroides succingenes (Durand y Kawashima, 1979) el potasio es altamente requerido por los microorganismos (Bryant, 1973; Bryant, 1977) y estimula la celulosas; sin embargo las interacciones entre el K y Na en rumen son complejas, y varios autores coinciden en afirmar que para obtener un mximo crecimiento microbiano y actividad celuloltica se necesitan bajos niveles de sodio y altos de potasio (Caldwell et al., 1973; Caldwell y Arcand, 1974), pero an no han quedado establecidos los requerimientos de sodio y potasio para los microorganismos ruminales. Galindo et al. (1990) indican que es necesario controlar el tipo de zeolita que se debe suplementar a los rumiantes para obtener mayor digestibilidad de la celulosa y que las zeolitas que intercambian el magnesio son altamente beneficiosas, mientras que si se utilizan zeolitas que intercambien con

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preferencia el sodio, puede resultar perjudicial para la digestibilidad de la fraccin fibrosa. Efecto de la Zeolita sobre la Digestibilidad de los Alimentos La digestibilidad de los alimentos es un indicador eficiente del valor energtico y nutricional de estos (Edelman, 1997), as como para predecir el nivel de respuesta en los animales alimentados con fuentes de nutrientes (Castro, 1996). Al respecto, Sweeney et al. (1980) demostraron mejorar la digestibilidad del N, MO y FDA cuando 5 % de clinoptilolita fue agregada a una dieta con protena altamente soluble para becerros y vaquillas en crecimiento. As mismo Sweeney et al. (1983) al agregar zeolita (3.5 a 4.5 %) a una dieta alta en N soluble increment la digestibilidad aparente de la protena y materia orgnica. As mismo, becerros que recibieron 5 % de zeolita natural en la dieta, mostraron una relacin positiva en la digestin de la MS y FDA (Sweeney et al., 1984). En otro trabajo, se aliment a becerros en engorda con una dieta a base de 70 % de sorgo con clinoptilolita (0, 1.25 y 2.5 % de la dieta BS), la digestibilidad en todo el tracto digestivo fue mejor con el 1.25 % clinoptilolita; la digestin ruminal de MS, MO, almidn y PC tendi ser mas alta con clinoptilolita en la dieta (McCollum y Galyean, 1983). Por otra parte Forouzani et al. (2004) evaluaron la inclusin de zeolita (0, 30 y 60 g/kg dieta) en una dieta basada en ensilaje de maz tratado con urea, cebada y heno de alfalfa (119.8 g PC/kg y 373 g FDN/kg) sobre la digestibilidad, estos autores encontraron efecto de esta en los coeficientes de digestibilidad de MS y PC, la dieta con 30 g de este mineral tuvo mayor digestibilidad de la FDN. 26

Parre et al. (1997) alimentaron ovinos con una dieta a base de heno de gramneas, maz molido, salvado de algodn, conteniendo urea (0.9 %) y clinoptilolita (3 %); sin embargo, en este trabajo la zeolita no mostr efecto en la digestibilidad de la MS, PC, FDN y EB. Por otra parte, la digestibilidad de la MS, MO y PC disminuy cuando se aadi zeolita (2 %) a una dieta (16.7 % PC y 16.7% FDA) a base de forraje (80 % ensilaje de maz, 20 % henolaje) y concentrado en una proporcin 50:50, pero la digestin de la FDA no fue afectada (Johnson et al., 1988).

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MATERIALES Y MTODOS

Localizacin del rea de Estudio El estudio se realiz en la unidad metablica y en el laboratorio de nutricin animal de la Facultad de Zootecnia de la Universidad Autnoma de Chihuahua, situada sobre el Perifrico Francisco R. Almada km 1, a una altitud de 1435 msnm, y con una temperatura media anual de 18.2 oC con una precipitacin media anual de 387.5 mm3. Su localizacin geogrfica es 28 38 latitud Norte y 106 04 longitud Oeste (lvarez, 1992). Caractersticas de la Poblacin Se utilizaron cuatro machos ovinos de raza Pelibuey con pesos promedio de 32.55 1.34 kg y una edad aproximada de 12 meses. Una vez seleccionados, se colocaron en corrales individuales de 1.5 x 0.7 m, con piso de cemento y acondicionados con cama de aserrn. Se les proporcion una dieta compuesta con 50 % de ensilaje de maz, 25 % de heno de alfalfa y 25 % de concentrado, la cual consumieron a libre acceso como acondicionamiento para la ciruga de fstula ruminal. Una semana antes de fistular, se dosificaron con vitaminas A, D, E (Synt-ADE) y se desparasitaron internamente (Cydectin); teniendo adems un perodo de recuperacin posquirrgico de 20 d con la misma dieta. Tratamientos y Dieta Una vez restablecidos los ovinos, se les aliment con una dieta basada en 70 % heno de alfalfa y 30 % concentrado (21.99 % maz quebrado, 3.21 % gluten de maz, 1.06 % pasta de soya, 1.76 % pericarpio, 1.41 % melaza, 0.04

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minerales, 0.18 % sal y 0.35 % CaCO3) (Cuadro 2), ajustndose al consumo diario establecido para eliminar la posibilidad de tener rechazos de alimento, la dieta fue proporcionada diariamente ad libitum y ofrecida durante 10 d de adaptacin. Se proporcion agua a libre acceso y la alimentacin se realiz a las 10:00 y 17:00 h. Los tratamientos consistieron en cuatro niveles de zeolita natural (Cuadro 3), 0.0 % (T1), 1.5 % (T2), 3.0 % (T3) y 4.5 % (T4) ajustados diariamente al consumo de alimento, y los cuales fueron dosificados va intraruminal por la maana en el momento de la alimentacin, durante todo el perodo experimental. El trabajo se hizo bajo un diseo de cuadro latino 4 x 4. Cada perodo consisti de 17 d, con 10 d de adaptacin y 7 d para recoleccin de muestras. Metodologa pH. Se colectaron muestras lquidas y slidas del contenido ruminal en el sptimo da del perodo de muestreo en cada uno de los ovinos, durante los tiempos 0, l.5, 3, 6, 9, 12, 16 y 24 h iniciando en la maana (6:00 h) antes de la alimentacin (10:00 h), siguiendo el procedimiento descrito por Galyean (1980). Las muestras de lquido ruminal obtenidas en cada tiempo de muestreo, se filtraron a travs de una tela de nylon e inmediatamente se determin el pH utilizando un potencimetro porttil digital Banart 30 (Banart), el cual se estandariz en una solucin con pH 7.0 y entre mediciones se lav con agua destilada. Con las muestras slidas de contenido ruminal, se hizo un pool, obteniendo una muestra por animal por perodo por tratamiento para el anlisis de PC y PV. 29

CUADRO 2. COMPOSICIN QUMICA* DE LA DIETA BASE, OFRECIDA A OVINOS.

% BS MS MO CEN PC FDN

Heno alfalfa + concentrado 93.67 87.11 6.56 16.10 37.66

* Valores calculados del NRC (2000).

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CUADRO 3. COMPOSICIN QUMICA DE LA ZEOLITA, CLINOPTILOLITA* USADA EN LOS TRATAMIENTOS EXPERIMENTALES.

Elemento Al2O3 Ca Fe K Mg Na SiO2

% 4.29 0.87 1.49 1.73 0.26 0.39 68.33

* Anlisis realizados por el Centro de Investigacin en Materiales Avanzados, S. C. Chihuahua, Chih., Mxico.

31

Nitrgeno amoniacal. Las muestras de lquido ruminal filtrado se centrifugaron a 3500 rpm (centrfuga Beckman modelo TJ-6) durante 15 min para eliminar el sedimento; el sobrenadante se dividi en dos proporciones, una parte, se acidific con siete gotas de H2SO4 concentrado, para detener la actividad microbial, mantenindose a 4
o

C para el anlisis posterior de nitrgeno

amoniacal (N-NH3), protena cruda (PC), y protena verdadera (PV) y otra parte se mantuvo en refrigeracin para anlisis de cidos grasos voltiles (AGV). Posteriormente se analiz N-NH3, donde se tomaron 5 ml de sobrenadante de lquido ruminal ms 10 ml de tetraborato de sodio al 5 %; se destil en micro Kjeldahl hasta colectar 40 ml en un vaso de precipitado con un contenido de 10 ml de cido brico al 2 % ms 3 gotas de indicador para protena y finalmente se procedi a titular con H2SO4 al 0.0542 N (Preston, 1986). Los valores observados fueron expresados en miligramos de N-NH3 por cada 100 ml de lquido ruminal (mg/100 ml). cidos grasos voltiles. La determinacin de los cidos grasos voltiles (AGV) se realiz siguiendo la tcnica sugerida por Galyean y May (1995) en un cromatgrafo de gases modelo SRI-8610 (Valco Instruments Co., Inc), con un detector FID y una columna EC-1000. Se tomaron 5 ml del sobrenadante de lquido ruminal al cual se le aadi 1 ml de cido metafosfrico al 25 %, con una relacin 5:1. Se colocaron en envases de vidrio color mbar y se almacenaron en refrigeracin a 4
o

C. Posteriormente las muestras

refrigeradas se pusieron a temperatura ambiente, se pasaron por papel filtro y se tom 1 l del filtrado por una inyeccin de cromatografa de gas lquido para la determinacin en el cromatgrafo de gases. Los AGV analizados fueron el 32

cido actico, propinico y butrico; los valores observados fueron expresados en mM/L de lquido ruminal. Degradacin in situ. La degradacin in situ de la materia seca (DISMS) de la dieta, fue medida para cada tratamiento utilizando, el procedimiento de la bolsa de nylon (rskov y McDonald, 1979; Ayala y Rosado, 2000) fue desde el da uno hasta el cinco, del perodo de muestreo, donde se usaron bolsas de nylon de 5 x 10 cm con un tamao de poro de alrededor de 40 m. La muestra de la dieta fue secada a 55 oC por 24 h en una estufa de aire forzado, posteriormente fue molida a un tamao de partcula de 2 mm. En cada bolsa se depositaron 3.5 g de muestra y se ataron a una gua de aproximadamente 25 cm de longitud soportando en un extremo un contrapeso para asegurar que las bolsas quedaran sumergidas completamente en el contenido ruminal. La incubacin se realiz a las 18:00 h, terminando 96 h despus. Los tiempos de incubacin se iniciaron de manera regresiva, empezando en la hora 96, 72, 48, 24, 12, 9, 6, 3 y finalizando en la 0. Terminando el tiempo de incubacin, las bolsas fueron extradas y lavadas con agua comn hasta que el agua qued limpia, despus fueron secadas a 55 oC en una estufa de aire forzado por 48 h; una vez transcurrido este tiempo, las bolsas fueron pesadas. La fraccin soluble fue diluida en agua a temperatura ambiente, dejndola reposar por 15 min, posteriormente se pas por papel filtro y se seco a 55 oC por 48 h (Ayala y Rosado, 2000). Los datos de DISMS se ajustaron, utilizando el PROC NLIN del paquete SAS (1997), con la ecuacin propuesta por rskov y McDonald (1979): p = a + b (1-e-ct) 33

Donde (p) es el porcentaje de degradacin en el tiempo (t); (a), la interseccin de la curva de degradacin a tiempo cero representando el componente que se degrada rpidamente; (b) degradabilidad potencial del componente. Los valores de (a + b) es la degradabilidad total del material, todo expresado en porcentaje; (c) es la tasa constante de degradacin, expresada en %/h, y (e) log N (2.71828). La degradacin efectiva de la materia seca (DEMS) fue calculada de acuerdo con Dhanoa (1988) usando la frmula DEMS = a + b * c / (c+k) donde a, b y c ya se describieron anteriormente y k es la tasa de salida del rumen asumiendo ser 0.02 y 0.04/h. Produccin de gas in vitro. El procedimiento de produccin de gas in vitro (PGIV) fue hecho de acuerdo a la tcnica de Menke y Steingass (1988)

utilizando un transductor de presin (Theodorou et al., 1994), para medir el gas producido por la dieta, utilizando lquido ruminal de cada uno de los animales, conteniendo en el medio ruminal cuatro niveles de zeolita natural, e incubados en un perodo de 96 h. La muestra de la dieta se moli y pas por una malla de 1 mm y fue previamente secada por 24 h en una estufa de aire forzado a 55 oC. El lquido ruminal de cada uno de los ovinos conteniendo en su medio ruminal cuatro niveles de zeolita; se colect 20 min antes de iniciar la prueba y se filtr a travs de una tela de nylon. Las muestras de lquido ruminal se colectaron el da seis del perodo de muestreo por la maana, ya que los microorganismos son menos activos pero ms consistentes en su composicin y actividad (Menke y Steingass, 1988; Blmmel y rskov, 1993). 34

El medio de cultivo in vitro estuvo formado por un buffer de bicarbonato y fosfato, un agente reductor, una fuente de nitrgeno, varios minerales y resazurina. El CO2 fue usado durante la preparacin del medio para asegurar un ambiente anaerobio en el tiempo de inoculacin. La solucin A (micro mineral) estuvo constituida por 13.2 g CaCl2.2H2O, 10.0 g MnCl2.4H2O, 1.0 g CoCl2.6H2O, 8.0 g FeCl3.6H2O en 100 ml con agua destilada; la solucin B (solucin buffer) const de 39.0 g NaHCO3 35.0 g NaHCO3 ms 4.0 g de (NH4)HCO3 en 1 L con agua destilada; la solucin C (macro mineral) estuvo constituida por 5.7 g Na2HPO4, 6.2 g KH2PO4, 0.6 g MgSO4.7H2O en 1 L con agua destilada; y la solucin reductora que consisti de 4 ml 1 N NaOH, 625 mg Na2S.9H2O, agregado a 95 ml de agua destilada (Menke y Steingass, 1988). Las soluciones A, B, C y resazurina se agregaron dentro de un matraz con agua destilada, el cual se introdujo en bao Mara a 39 oC, posteriormente, se agreg la solucin reductora y CO2, hasta que el color se torn de azul a rosa y finalmente, claro o transparente. Se pesaron 200 mg de muestra y se incubaron en el interior de frascos de 50 ml de volumen, a los que se le aadieron 30 ml de una mezcla de lquido ruminal y del medio de cultivo (1:2; v/v). El llenado de los frascos se realiz en condiciones anaerobias (gaseado continuo de CO2), ausencia de luz y se mantuvo la temperatura constante de 39 oC, los frascos permanecieron dentro de un incubador rotatorio marca New Brunswick Scientific (Digital incubator shaker modelo12400) por 96 h. Para cada muestra se incubaron tres frascos para PGIV y tres frascos blanco que solo contenan mezcla de lquido ruminal y medio de cultivo, que sirvieron como factor de correccin; los anlisis se 35

realizaron por animal y por perodo. La PGIV se midi a las 3, 6, 9, 12, 24, 48, 72 y 96 h utilizando un transductor Festo (Theodorou et al., 1994). Se estim el volumen de gas producido mediante la utilizacin de una ecuacin de regresin lineal entre el volumen y la presin (Fondevila, et al., 2002; Fondevila, 2005 comunicacin personal); volumen (ml) = 2.4964 x presin (psi). Transcurrido el tiempo de incubacin, los frascos se introdujeron en un congelador para detener la accin de los microorganismos. Los datos se ajustaron al modelo monofsico no lineal descrito por Groot et al. (1996) utilizando el PROC NLIN del programa SAS (1997). La produccin de gas en los periodos de tiempo medidos fue estimada por la siguiente ecuacin: G = ___A__ 1 + _Bc_

tc
Donde (G) es la prediccin de gas (ml) por 200 mg de MS incubada para un tiempo dado de incubacin; (A) asntota de produccin de gas; (B) tiempo medio de produccin de gas despus de la incubacin; (C) constante que determina el cambio de perfil; (t) es la variable predictora que representa el tiempo de incubacin en horas. Los parmetros de cintica de fermentacin del mismo modelo son: punto de inflexin (parmetro t1), tasa fraccional de fermentacin (parmetro R) y tiempo de mxima tasa fraccional de fermentacin (parmetro tRM). El. parmetro C es la constante que determina la curvatura y por lo tanto la

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posicin del punto de inflexin. El punto de inflexin fue calculado con la siguiente ecuacin:

C 1 t1 = B C + 1

1/ C

Con los parmetros B y C, la tasa fraccional de fermentacin (parmetro R) puede ser calculada, si se asume una relacin lineal entre la fermentacin del sustrato y la produccin de gas. De tal manera el parmetro R fue calculado por la siguiente ecuacin: R= Ct C 1 BC + t
C

(R), se incrementa para alcanzar su mximo cuando la poblacin microbial no limita la fermentacin del alimento. Mientras que el tiempo para alcanzar la tasa mxima (tRM), fue calculada con la siguiente ecuacin: tRM = B(C 1)1/C Desaparicin in vitro de la materia seca. Los frascos que se utilizaron para PGIV se descongelaron, y su contenido se vaci en tubos de ensayo de plstico, los cuales se centrifugaron a 1000 rpm (centrfuga Beckman modelo TJ-6) durante 5 min para separar el sobrenadante y el pellet; el pellet que es la fraccin no degradada de la muestra se sec en una estufa a 55 oC durante 48 h, posteriormente se pes para calcular la desaparicin in vitro de la materia seca (DIVMS) despus de 96 h de incubacin (Capetillo, 2002; Bovera, 2003). Biomasa microbiana. La produccin de biomasa microbiana (BM) despus de 96 h de incubacin se realiz mediante la tcnica de clulas lavadas (Galindo et al., 1990) la cual consiste en centrifugar el sobrenadante mencionado

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anteriormente a 1000 rpm (centrfuga Beckman modelo TJ-6) durante 30 min, para separar el sobrenadante y el pellet, este ultimo es el contenido microbiano, diluyndose con 30 ml de agua destilada; posteriormente en tubos de plstico de 35 ml de volumen (pesados a peso constante) se agreg 10 ml de esta dilucin y se centrifug nuevamente durante 30 min a 1000 rpm, los tubos junto con el pellet obtenido se secaron en una estufa a 60 oC durante 48 h. La produccin de biomasa seca se determin mediante la siguiente ecuacin: Bs = 10 (ptp pt) mg/30 ml de lquido ruminal. Donde Bs es la biomasa seca; ptp es el peso del tubo con precipitado y pt es el peso del tubo seco inicial. Protena cruda. La determinacin de protena cruda (PC) se realiz en muestras de sobrenadante del lquido ruminal, as como en muestras de slido del contenido ruminal mediante el procedimiento descrito por la AOAC (1984) en la cual las muestras de sobrenadante (10 ml) y las de slido del contenido ruminal (0.2 g) se llevaron a digestin previamente agregndoles mezcla de selenio, ms 3 ml de H2SO4 concentrado; posteriormente se destilaron en un micro Kjeldahl hasta colectar 40 ml en un vaso de precipitado con un contenido de 10 ml de cido brico al 4 % ms 5 gotas de indicador para protena y finalmente se procedi a titular con H2SO4 al 0.0542 N. Los valores obtenidos fueron expresados en porcentaje de protena cruda (% PC). Protena verdadera. El contenido de protena verdadera (PV) fue determinada de acuerdo con Berstein (1970) citado por Meir (1986), donde a las muestras de sobrenadante (10 ml) y slido del contenido ruminal (0.2 g) se les aadi 25 ml

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de agua destilada. Se llevaron a ebullicin por 1 2 min y se depositaron 13 ml SO4Cu al 6 % y NaOH 1.25 %, se filtraron en papel y se llevaron a digestin agregando previamente mezcla de selenio y 3 ml de H2SO4 concentrado. El nitrgeno se determin por micro Kjeldahl hasta colectar 40 ml en un vaso de precipitado, conteniendo 10 ml de cido brico al 4 % ms cinco gotas de indicador para protena y finalmente se procedi a titular con H2SO4 al 0.0542 N. Los valores obtenidos fueron expresados en porcentaje de protena verdadera (% PV). Anlisis Estadstico. El diseo experimental utilizado fue un cuadro latino 4 x 4, correspondiendo a los cuatro tratamientos que se probaron (niveles de zeolita), a los cuatro ovinos usados y a los cuatro periodos que se utilizaron en la prueba. Las variables medidas (Yijk) fueron pH, nitrgeno amoniacal, cidos grasos voltiles, degradacin in situ de la materia seca, produccin de gas in vitro, desaparicin in vitro de la materia seca, biomasa microbiana, protena cruda y verdadera. Los datos de las variables fueron analizados usando el procedimiento MIXED de SAS (1997) para llevar a cabo el ANOVA y comparaciones de medias de los tratamientos. El modelo de cuadro latino para las variables: desaparicin in vitro de la materia seca; biomasa microbiana, protena cruda y verdadera fue: Yijk = + i + j + k + ijk Donde: Yijk = Variable respuesta i = Media general = Efecto del nivel de zeolita i

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= Efecto del ovino j

k = Efecto del perodo k ijk = Error en la observacin del tratamiento i en el ovino j y el perodo k Las variables pH, nitrgeno amoniacal, cidos grasos voltiles, degradacin in situ de la materia seca, produccin de gas in vitro se midieron a diferentes tiempos y fueron analizadas usando un arreglo de parcelas divididas en el tiempo con la estructura del diseo en cuadro latino. El modelo estadstico fue: Yijkl = + i + j + k + ()ijk +ti + (t)il + ijkl

Donde:

Yijkl i j k

= Variable respuesta = Media general = Efecto del nivel de zeolita i = Efecto del ovino j = Efecto del perodo k

()ijk = Error de parcela grande (t)il tl ijkl = Interaccin de tratamiento de parcela con su parcela = Efecto del tiempo l = Error en la observacin del tratamiento i en el ovino j en

el perodo k y el tiempo l

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RESULTADOS Y DISCUSIN

pH Los resultados de pH en el lquido ruminal se muestran en la (Grafica 1) y en el (Anexo 1). De acuerdo al anlisis estadstico de la informacin, no se encontraron efectos debido al tratamiento o a la interaccin tratamiento por hora de muestreo (P>0.05); se registraron diferencias significativas (P<0.001) entre las horas de muestreo del pH en el lquido ruminal. El patrn que se observ en el pH fue que disminuy inmediatamente despus de administrar el alimento por la maana hasta las 16 h de muestreo (12 h postalimentacin), para volver a incrementarse posteriormente. Esto ocasion que, los valores obtenidos entre las horas de muestreo 12 y 16 h (8 y 12 h postalimentacin) para los tratamientos 3.0 y 4.5 % y entre las horas del muestreo 9 y 16 h (5 y 12 h postalimentacin) para el tratamiento 0.0 % zeolita se mantuvieron en rangos de pH 6.1 a 6.2; sin embargo, el tratamiento 1.5 % entre las horas de muestreo 12 y 16 (8 y 12 h postalimentacin) tuvo valores de pH 6.0, valores en los que la actividad de las bacterias celulolticas (rskov, 1990; Ishler et al. 1996) y de la celulasa (Stewart, 1977) son reducidas. Estos resultados concuerdan con lo reportado por Galindo et al. (1990) quienes al medir el pH en lquido ruminal de vacas alimentadas con una dieta a base de ensilaje de pasto estrella (35.0 % FC), concentrado (8.0 % FC), pastoreo en pasto estrella (31.3% FC) ms 0.5 1.0 % zeolita, no encontraron diferencias entre tratamientos, coincidiendo con Forouzani et al. (2004) quienes no encontraron diferencias entre la dieta control (373.9 g FDN/kg MS) a base de grano de cebada y forraje, y las dietas con

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Grfica 1. Medias de los cuadrados mnimos para el pH en lquido ruminal por hora de muestreo, de acuerdo a cuatro niveles de zeolita.

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zeolita (30 y 60 g/kg MS). En el presente trabajo no se produjeron modificaciones en el pH del lquido ruminal entre tratamientos debido probablemente a que la dieta contena un 30 % de concentrado el cual aporta carbohidratos altamente fermentables y solubles, observndose con la cada del pH de 6.0 a 6.2 en las horas de mxima fermentacin; sin embargo, el pH en todas las horas de muestreo con todos los tratamientos estuvieron dentro de rangos aceptables de acuerdo con algunos autores, como rskov (1990) quien seala que la actividad de las bacterias celulolticas llega a ser nula cuando los valores de pH son inferiores a 6.0. Asimismo, Cooper y Klopfenstein (1996) consideran que existe acidosis subclnica si el pH est dentro del rango de 5.2 y 5.6. Nitrgeno Amoniacal En la (Grafica 2) y en el (Anexo 2) se puede observar que la concentracin de nitrgeno amoniacal (N-NH3) en el lquido ruminal no mostr diferencias (P>0.05) entre tratamientos, ni en la interaccin tratamiento por hora de muestreo (P>0.05), sin embargo, hubo diferencias (P<0.001) entre las horas de muestreo. Estos resultados estn de acuerdo con lo observado por Forouzani et al. (2004), Johnson et al. (1988), Galindo et al. (1988) quienes observaron que no existieron diferencias entre los tratamientos sobre la concentracin de NH3 cuando usaron dietas con 119.8 g/kg, 16.7 % y 4.22 % de PC; respectivamente, y en el presente trabajo se utiliz una dieta con 16.1 % PC. En el presente estudio se observ que la concentracin de N-NH3 con los tratamientos 1.5, 3.0 y 4.5 % zeolita a las 8 h de muestreo (4 h

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Grfica 2. Medias de los cuadrados mnimos para el nitrgeno amoniacal (N-NH3) en lquido ruminal por hora de muestreo, de acuerdo a cuatro niveles de zeolita.

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postalimentacin) tendi a ser menor que el control (0.0 % zeolita) lo cual pudiera estar relacionado con el intercambio de los iones mviles de la zeolita con el NH4+ con la posible disminucin de la proteolisis ruminal, esto confirma lo reportado por Galindo (1988) al indicar que aunque no existi diferencia entre tratamientos, la concentracin de NH3 tendi a disminuir, asimismo esta misma autora indica que aproximadamente el 31 % de la concentracin de NH3 en el rumen de vacas que consumieron ensilaje con 12.8 % PC se redujo por la adicin de zeolita en la dieta; por otra parte en este trabajo a las 12 h de muestreo (8 h postalimentacin) el tratamiento 4.5 % zeolita fue mayor en concentracin de N-NH3 la cual probablemente pudo haber contribuido a la actividad microbial. Con esto puede interpretarse que la zeolita fue capaz de secuestrar NH4+ y liberarlo gradualmente a travs del tiempo (Mumpton y Fischman, 1977). Estos resultados estn en acuerdo con lo encontrado por Galyean y Chabot (1981) y por Forouzani et al. (2004) quienes obtuvieron mayores concentraciones de NH3 en rumen despus de 4 h de haber proporcionado el alimento con zeolita, el cual contena 373.9 g FDN/kg MS; sin embargo, en el presente trabajo fue observada esta tendencia a las 12 h de muestreo (8 h postalimentacin). cidos Grasos Voltiles En las grficas y anexos 3, 4, 5 se puede observar el comportamiento a travs de las horas de muestreo en la produccin de cido actico (C2), cido propinico (C3) y cido butrico (C4). El anlisis de la informacin mostr que los diferentes tratamientos no tuvieron efecto (P>0.05) sobre las concentraciones de C2 y C4, ni en la interaccin tratamiento por hora de muestreo; sin embargo,

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Grfica 3. Medias de los cuadrados mnimos para el cido actico en lquido ruminal por hora de muestreo, de acuerdo a cuatro niveles de zeolita.

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Grfica 4. Medias de los cuadrados mnimos para el cido propinico en lquido ruminal por hora de muestreo, de acuerdo a cuatro niveles de zeolita.

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Grfica 5. Medias de los cuadrados mnimos para el cido butrico en lquido ruminal por hora de muestreo, de acuerdo a cuatro niveles de zeolita.

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se observaron diferencias significativas en la concentracin de C3 entre los tratamientos (P<0.06), presentndose en todos los AGV evaluados diferencias (P<0.001) entre las horas de muestreo. Estos resultados no coinciden con Galindo et al. (1982) quienes encontraron que la cantidad total de AGV fue significativamente superior en la dieta donde se incluy zeolita 0.5 %, y con lo reportado por Galindo (1988) al indicar que la zeolita increment la proporcin molar de cido actico en el rumen pero no modific significativamente las proporciones relativas de cido propinico y butrico. En el presente estudio el tratamiento 1.5 % zeolita tendi a tener mayor concentracin de AGV (C2, C3 y C4), sin embargo, con respecto al C3 se encontr diferencia significativa entre tratamientos. La concentracin de C3 fue mayor para el tratamiento 1.5 % zeolita comparado con el 3.0 y 4.5 % los cuales mostraron concentraciones menores de C3 (P<0.06), por lo que, estos ltimos dos tratamientos, no difirieron entre el control (Anexo 4), esto pudo ser debido a la cantidad de concentrado que se agreg a la dieta, y relacionado al pH alcanzado en las horas de mxima fermentacin por el tratamiento 1.5 % el cual fue 6.0, estando este entre el rango para llevarse acabo la digestin del almidn, como lo sealan Ishler et al. (1996) al indicar que para que se lleve acabo la digestin del almidn se requieren ambientes cidos, con valores de pH entre 5.2 y 6.0. Estos resultados estn de acuerdo a lo sealado por Galyean y Chabot (1981) quienes observaron una tendencia mayor en la proporcin molar de propionato en bovinos suplementados con clinoptilolita; y con lo observado por McCollum y Galyean (1983) al encontrar que la proporcin molar de propionato fue superior

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en dietas con 2.5 % clinoptilolita que para los otros tratamientos. Asimismo, estos ltimos autores reportaron que la proporcin molar de acetato, butirato y cidos menores no fue diferente entre tratamientos. Degradacin In Situ Los valores de degradacin in situ de la materia seca (DISMS) de la dieta ofrecida compuesta por heno de alfalfa y concentrado incubada en ambientes ruminales diferenciados por cuatro tratamientos de zeolita se observan en la (Grfica 6), as como en el (Anexo 6). El anlisis de la informacin no mostr diferencia significativa entre los tratamientos (P>0.05), ni en la interaccin tratamiento por hora de incubacin (P>0.05); sin embargo, hubo diferencia entre las horas de incubacin (P<0.001). Se observ una diferencia (P<0.001) entre las horas de incubacin, por lo que la DISMS se increment conforme avanz el tiempo de incubacin en todos los tratamientos hasta 96 h de incubacin. Los tratamientos con zeolita 1.5, 3.0 y 4.5 % tendieron a disminuir el porcentaje de degradacin con respecto al 0.0 %. No se encontraron trabajos que apoyen estos resultados, sin embargo, Johnson et al. (1988) observaron que la digestibilidad de la MS, MO, y PC en todo el tracto digestivo disminuy cuando se aadi zeolita sinttica a una dieta de forraje y concentrado (con 16.7 % PC y 16.7 % FDA), y sealan que parte de esta reduccin podra ser atribuida a la proporcin indigestible de la zeolita. Los parmetros ajustados de degradabilidad ruminal y los valores de DEMS se presentan en el (Cuadro 4). La fraccin rpidamente degradable (a), la fraccin degradable a una tasa medible (b), la tasa constante de degradacin

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Grfica 6. Medias de los cuadrados mnimos para la degradacin in situ de la materia seca por hora de incubacin, de acuerdo a cuatro niveles de zeolita.

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CUADRO 4. MEDIAS DE LOS CUADRADOS MNIMOS PARA LOS PARMETROS ESTIMADOS DE LA DEGRADABILIDAD RUMINAL DE LA MATERIA SECA EN LA DIETA. Tratamiento (%) Parmetro a b c a+b DEMS 0.02 0.04 69.10 59.38 67.26 57.63 66.60 56.67 68.04 58.64 0.225 0.207 0 26.80 60.69 0.05 87.48 1.5 26.60 59.82 0.05 86.42 3.0 27.79 59.59 0.04 87.38 4.5 29.61 57.11 0.04 86.72 P>F 0.246 0.489 0.482 0.735

a Fraccin rpidamente degradable o degradable a la hora 0 b Fraccin degradable a una tasa medible c Tasa de degradacin por hora a + b Degradabilidad potencial DEMS Degradacin efectiva de la materia seca a dos tasas de pasaje ruminal (k/h)

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(c) y la fraccin potencialmente degradable en rumen (a + b) no mostraron diferencia (P>0.05) entre tratamientos; as mismo, la DEMS a dos tasas de pasaje 0.02 y 0.04 no fue afectada por los tratamientos (P>0.05). Estos resultados no estn de acuerdo a lo sealado por Galindo et al. (1990) quienes mostraron que la zeolita reduce el tiempo de digestin de la digesta debido a que tiene un efecto positivo en las bacterias celulolticas y su actividad puede contribuir a una mayor degradacin de la fibra en rumen con el consiguiente aumento de la velocidad de la digesta a travs del rumen. Debido a que todos los ovinos recibieron la misma dieta, se podra pensar que la disminucin en la degradacin in situ es debida a los tratamientos con zeolita, probablemente por los compuestos indigestibles de la misma. Produccin de Gas In Vitro Los volmenes de gas producidos en las diferentes horas de incubacin de la dieta a base de 70 % heno de alfalfa y 30 % concentrado incubados con lquido ruminal conteniendo en su medio, cuatro niveles de zeolita se reportan en la (Grfica 7) y en el (Anexo 7). No se observaron diferencias entre los tratamientos (P>0.05) ni en la interaccin tratamiento por hora de incubacin; por tanto, se observaron diferencias (P<0.001) entre las horas de incubacin, por lo que la produccin de gas in vitro (PGIV) se increment conforme avanz el tiempo de incubacin en todos los tratamientos hasta las 24 h, la cual inmediatamente tendi a disminuir hasta las 96 h. En este estudio no se observaron diferencias entre los tratamientos (P>0.05), sin embargo los tratamientos con zeolita 1.5, 3.0 y 4.5 % tendieron a producir mayor produccin de gas comparados con el control (0.0 %

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Grafica 7. Medias de los cuadrados mnimos para la produccin de gas in vitro de la materia seca por hora de incubacin, de acuerdo a cuatro niveles de zeolita.

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observndose esta tendencia en todos los tiempos hasta el final de la incubacin a las 96 h, donde la produccin promedio ms baja la tuvieron los tratamientos 1.5 y 3.0 % y la ms alta el 4.5 %. Estos resultados estn de acuerdo con lo sealado por Varadyova et al. (2003a) quienes encontraron que la zeolita y bentonita tuvieron efecto sobre la produccin de gas de cada uno de los sustratos incubados por separado, por lo que la zeolita tuvo efecto cuando se utiliz como sustrato paja de trigo, y cebada; y la bentonita cuando se utiliz heno de pradera, paja de trigo, celulosa amorfa, y cebada. El patrn observado en este trabajo no es normal ya que en otros trabajos donde se utiliz solo un tipo de sustrato y no ingredientes asociados, la produccin de gas va en aumento conforme aumenta el tiempo de incubacin hasta alcanzar la asntota de produccin de gas. Por otra parte, la tcnica de produccin de gas tiene potencial para investigar efectos asociativos entre alimentos (Liu et al., 2002), sin embargo estas asociaciones entre alimentos han sido poco estudiadas, al respecto Castillo (2004) menciona que la investigacin futura requiere de cuantificar los perfiles de PGIV observados usando este tipo de asociaciones, o si los modelos utilizados con los tratamientos simples (un forraje) aplicaran cuando son usadas una mezcla de forrajes o raciones completas. Los pocos trabajos realizados sobre estas asociaciones han mostrado un incremento en la produccin de gas en las etapas tempranas de la incubacin (Getachew et al., 1998), lo que coincide con lo observado en el presente trabajo donde la PGIV fue en aumento hasta las 24 h de incubacin.

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En el (Cuadro 5), se reportan los parmetros obtenidos por el modelo monofsico, la asntota de produccin de gas (parmetro A) para el sustrato (mezcla heno de alfalfa y concentrado) diferenciado por cuatro tratamientos 0.0, 1.5, 3.0 y 4.5 % de zeolita estuvo en un rango de 20.8 y 22.0 ml/200 mg MS, pero no fue estadsticamente diferente (P>0.05), sin embargo, tendi a ser mayor para los tratamientos con zeolita 1.5, 3.0 y 4.5 %, debido posiblemente al efecto que tiene la zeolita en el crecimiento microbiano y con ello contribuir a la degradacin del alimento (Galindo,1988) . Para el tiempo medio de formacin de gas despus de la incubacin (parmetro B) no se encontraron diferencias entre tratamientos (P>0.05), y el rango fue de 2.2 y 2.4 h. Asimismo, para la constante indicadora del cambio del perfil (parmetro C), no se encontraron diferencias (P>0.05) entre tratamientos. El punto de inflexin (parmetro t1) de la curva de produccin de gas, puede ser utilizado como un estimador del tiempo despus de la incubacin en el cual la mitad de la cantidad asinttica de gas ha sido formada. Sin embargo, para este parmetro tampoco existi diferencia entre tratamientos (P>0.05). La tasa fraccional de fermentacin (parmetro R) se incrementa en las etapas iniciales de la incubacin, por lo que la poblacin microbial tiende a multiplicarse y colonizar el sustrato hasta alcanzar un mximo (Rm), es decir, cuando el tamao de la poblacin microbial no limita ms la fermentacin, y la digestin no se ve impedida por los componentes qumicos o estructurales del alimento, entonces Rm puede ser alcanzada rpidamente en la incubacin de los componentes solubles, la cual no requiere de la colonizacin microbial bajo

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CUADRO 5. MEDIAS DE LOS CUADRADOS MNIMOS PARA LOS PARMETROS ESTIMADOS DE FERMENTACIN IN VITRO CON EL MODELO MONOFSICO. Parmetros del modelo Tratamiento (%) 0.0 1.5 3.0 4.5 EE A 20.8 22.0 21.5 21.9 0.82 B 2.4 2.3 2.2 2.4 0.09 C 3.7 1.8 2.0 2.0 0.88 t1 1.6 1.1 1.2 1.2 0.19 R 2.1 0.5 0.7 0.7 0.72 tRM 2.4 2.0 2.0 2.0 0.22

EE Error estndar de la media A Asntota de produccin de gas B Tiempo medio de formacin de gas (h) C Constante indicadora del cambio del perfil t1 Punto de inflexin de la curva R Tasa fraccional de fermentacin tRM Tiempo de mxima tasa fraccional de fermentacin (h)

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densidades altas de microorganismos (Groot et al., 1996). La zeolita no tuvo efecto sobre este parmetro (P>0.05) entre tratamientos, y en base a que no existi diferencia en R, no se puede concluir que con el tratamiento 1.5 % el sustrato contena ms componentes solubles que con los otros tratamientos 3.0 y 4.5 %, an cuando se alcanz la R rpidamente, lo que probablemente demuestra que los microorganismos tuvieron menos barreras estructurales para obstaculizar la fermentacin y digestin que con el 0.0 % zeolita. Cuando la poblacin microbial se multiplica y coloniza el sustrato para digerir los componentes insolubles del alimento, entonces se alcanza el mximo de la tasa fraccional de fermentacin (Rm), y el tiempo de incubacin en el que este proceso ocurre es el tiempo de mxima tasa fraccional de fermentacin, parmetro tRM (Groot et al., 1996). El anlisis de la informacin mostr no diferencia significativa (P>0.05) para este parmetro entre los tratamientos; sin embargo se observ que los tratamientos con zeolita 1.5, 3.0 y 4.5 % tendieron a tener menor tiempo que con el 0.0 %, debido posiblemente a que la zeolita favoreci el crecimiento de las bacterias ruminales, lo cual probablemente contribuy a la rpida degradacin del alimento. Esto resultados indican que la informacin obtenida a travs del modelo monofsico probablemente no es suficiente para detectar las posibles diferencias entre los tratamientos estudiados. Por lo que se sugiere en posteriores trabajos incubar el sustrato (heno de alfalfa y concentrado) por separado y ajustar los datos con el modelo multifsico, ya que este modelo nos proporciona informacin acerca de la degradacin de la fraccin soluble y no soluble.

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Desaparicin In Vitro de la Materia Seca La desaparicin in vitro de la materia seca (DIVMS) despus de las 96 h de incubacin se observa en el (Cuadro 6). No hubo diferencia en la DIVMS entre los tratamientos (P>0.05), sin embargo existi una tendencia, mayor en el tratamiento 3.0 y 4.5 % zeolita con alto porcentaje de DIVMS, esto coincide con Galindo (1988) sealando, que la zeolita produce un incremento en las bacterias celulolticas, contribuyendo a incrementar la digestibilidad in vitro de la fibra, lo cual ocurrido posiblemente en el presente trabajo. Biomasa Microbiana La produccin de biomasa microbiana (BM) despus de 96 h de incubacin (Cuadro 6) no difiri entre tratamientos (P>0.05); aunque se muestra una tendencia del nivel 4.5 % zeolita a tener mayor efecto en la produccin de BM, esto pudo ser debido a la concentracin de N-NH3 retenido por este nivel de zeolita, el cual fue liberado lentamente al ambiente ruminal para ser utilizado por los microorganismos ruminales y producir biomasa microbiana. Estos resultados estn de acuerdo con lo sealado por Galindo (1988) quien indica que la zeolita y los iones minerales Mg2+, Ca2+, K+ y Na+ componentes de esta incrementan el rendimiento en biomasa por gramo de celulosa y hemicelulosa fermentada y seala que el Mg2+ y el Ca2+ son los iones minerales ms importantes en la celulolisis ruminal, mientras que el Na+ produce una marcada depresin de la digestibilidad de la celulosa. Protena Cruda y Verdadera El porcentaje de protena cruda (PC) y protena verdadera (PV) del contenido ruminal de las fases lquida y slida se reportan en el (Cuadro 7). No

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CUADRO 6. MEDIAS DE LOS CUADRADOS MNIMOS PARA LA DESAPARICIN IN VITRO DE LA MATERIA SECA (%) Y PRODUCCIN DE BIOMASA MICROBIANA (mg/100 ml), DESPUS DE 96 HORAS DE INCUBACIN. Tratamiento (%) Parmetro DIVMS BM 0.0 77.9 3.3 1.5 75.7 2.7 3.0 79.1 3.1 4.5 78.2 3.5 EE 5.923 0.531

DIVMS Desaparicin in vitro de la materia seca despus de 96 h de incubacin en % BM Biomasa microbiana mg/100 ml de lquido ruminal, EE Error estndar de la media.

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se encontr diferencia (P>0.05) entre los tratamientos. En los resultados obtenidos, se puede apreciar que el tratamiento 1.5 % tendi a mostrar valores superiores de PC y PV en el contenido ruminal fase slida; no existen trabajos que apoyen estos resultados, sin embargo, Domnguez et al. (1994) obtuvieron valores de 16.01 % de PC en el contenido ruminal de ovinos sacrificados, estos mismos autores sealan que estos valores pueden variar por efecto de la dieta recibida.

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CUADRO 7. MEDIAS DE LOS CUADRADOS MNIMOS PARA LA PROTENA CRUDA Y PROTENA VERDADERA EN LA FASE LQUIDA Y SLIDA DEL CONTENIDO RUMINAL. Tratamiento (%) Fase lquida PC (%) PV (%) Fase slida PC (%) PV (%) 20.63 4.71 22.10 4.93 21.43 4.29 20.24 4.52 0.944 0.262 0.0 0.40 0.17 1.5 0.42 0.17 3.0 0.39 0.15 4.5 0.41 0.18 EE 0.024 0.008

PC Protena cruda, PV Protena verdadera, EE Error estndar de la media.

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CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

Bajo las condiciones en que se realiz este trabajo, el pH no fue diferente entre los tratamientos. La concentracin de nitrgeno amoniacal (N-NH3) fue diferente en algunas horas con los diferentes tratamientos pero tendi a ser mayor con el 4.5 % zeolita, lo cual puede contribuirse a la actividad microbial y tender a producir mayor cantidad de biomasa microbiana (BM); por tanto, la concentracin de N-NH3 y produccin de BM no fue diferente entre los tratamientos. La zeolita tuvo efecto en la concentracin de cido propinico (C3) en el lquido ruminal entre tratamientos, observndose mayor concentracin de C3 con el nivel 1.5 %, asimismo este nivel tendi a tener mayor concentracin de cido actico y cido butrico, pero no hubo diferencia entre tratamientos. La degradacin in situ de la materia seca no fue diferente entre tratamientos; de manera que, no se observ algn efecto de esta en la degradacin determinada por este mtodo debido posiblemente a compuestos insolubles de la misma. La produccin de gas no fue diferente entre tratamientos; sin embargo, los tratamientos 1.5, 3.0 y 4.5 % tendieron a producir mayor cantidad de gas, observndose marcadamente esta tendencia con el tratamiento 4.5 %. Este mineral tendi a aumentar el porcentaje de desaparicin in vitro de la materia seca, mostrando ser superior con los niveles 3.0 y 4.5 %; as como el porcentaje de protena cruda y verdadera en la fase slida del contenido ruminal, mostrando valores superiores con el tratamiento de 1.5 %, pero no se

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observaron diferencias entre los tratamientos. Bajo las condiciones de este experimento los resultados indican que, con la inclusin de zeolita se mostraron algunas mejoras en los parmetros ruminales; sin embargo no permiten recomendar la suplementacin de este mineral en las dietas de heno de alfalfa y concentrado. En este trabajo para determinar el efecto de la zeolita en la produccin de gas in vitro se utiliz una mezcla de sustratos (heno alfalfa y concentrado), por lo que se recomienda realizar ms investigacin al respecto, la investigacin consistira en incubar primero las dietas separadamente y posteriormente en combinacin, registrando la produccin de gas, con la finalidad de observar el comportamiento de estos sustratos por separado al tratarse con los diferentes niveles de esta, as como el ajuste del modelo no lineal empleado. As mismo, incluir estos niveles de zeolita en raciones que contengan alimentos fibrosos de mala calidad, ya que en este tipo de dietas es donde pudiera encontrarse mejores resultados, adems tambin son necesarios posteriores trabajos de investigacin para verificar y entender los mecanismos de accin de tales reacciones.

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APNDICE

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ANEXO 1. MEDIAS DE LOS CUADRADOS MNIMOS PARA EL pH EN LQUIDO RUMINAL OBSERVADO POR HORA DE MUESTREO.

Tratamiento (%) Horas de muestreo 0 1.5 3 6 9 12 16 24 Promedio 0.0 7.0 7.0 7.2 6.6 6.2 6.2 6.1 6.9 6.6 1.5 6.8 6.9 7.1 6.5 6.1 6.0 6.0 6.8 6.5 3.0 6.9 7.0 7.1 6.5 6.4 6.1 6.2 6.9 6.6 4.5 7.0 6.9 7.2 6.7 6.4 6.2 6.2 6.8 6.7 EE 0.17 0.17 0.17 0.17 0.17 0.17 0.17 0.17 0.17

EE Error estndar de la media.

76

ANEXO 2. MEDIAS DE LOS CUADRADOS MNIMOS PARA EL NITRGENO AMONIACAL (mg/100 ml) EN LQUIDO RUMINAL OBSERVADO POR HORA DE MUESTREO. Tratamiento (%) Horas de muestreo 0 1.5 3 6 9 12 16 24 Promedio 0.0 19.9 22.0 22.2 16.4 11.7 18.5 15.3 23.6 18.7 1.5 22.0 23.4 21.7 16.8 7.01 17.8 12.6 18.7 17.5 3.0 21.7 22.7 18.5 19.9 8.7 15.0 10.3 18.7 16.9 4.5 25.7 24.5 25.2 21.5 8.9 20.8 14.2 23.8 20.6 EE 1.88 1.88 1.88 1.88 1.88 1.88 1.88 1.88 1.88

EE Error estndar de la media.

77

ANEXO 3. MEDIAS DE LOS CUADRADOS MNIMOS PARA EL CIDO ACTICO (mM/L) EN LQUIDO RUMINAL OBSERVADO POR HORA DE MUESTREO. Tratamiento (%) Horas de muestreo 0 1.5 3 6 9 12 16 24 Promedio 0.0 30.6 36.9 35.8 38.1 46.7 56.7 53.8 43.6 42.8 1.5 35.5 36.1 28.7 38.0 45.9 63.4 62.3 36.1 43.3 3.0 40.1 37.7 33.1 36.7 44.7 60.8 45.8 34.9 41.7 4.5 40.6 39.1 25.3 44.5 41.1 49.9 52.2 37.6 41.3 EE 6.96 6.96 9.96 9.96 6.96 6.96 6.96 6.96 6.96

EE Error estndar de la media.

78

ANEXO 4. MEDIAS DE LOS CUADRADOS MNIMOS PARA EL CIDO PROPINICO (mM/L) EN LQUIDO RUMINAL OBSERVADO POR HORA DE MUESTREO. Tratamiento (%) Horas de muestreo 0 1.5 3 6 9 12 16 24 Promedio 0.0 9.4 12.2 10.8 19.0 14.3 20.8 17.3 15.1 14.9a 1.5 13.3 12.4 12.0 21.0 18.5 30.8 26.6 10.6 19.7b 3.0 11.4 10.6 9.2 17.1 15.0 23.7 21.0 11.2 14.9a 4.5 12.6 11.7 10.5 14.9 15.5 25.1 19.9 11.6 15.2a EE 2.94 2.94 2.94 2.94 2.94 2.94 2.94 2.94 0.98

EE Error estndar de la media. ab Medias dentro de las hileras con diferentes literales, son diferentes (P<0.06).

79

ANEXO 5. MEDIAS DE LOS CUADRADOS MNIMOS PARA EL CIDO BUTRICO (mM/L) EN LQUIDO RUMINAL OBSERVADO POR HORA DE MUESTREO. Tratamiento (%) Horas de muestreo 0 1.5 3 6 9 12 16 24 Promedio 0.0 4.0 3.9 4.0 4.5 4.2 8.0 5.8 4.7 4.9 1.5 4.2 4.5 4.1 4.2 6.7 8.8 8.6 4.0 5.6 3.0 5.2 4.4 4.1 4.0 4.7 9.0 7.9 3.6 5.4 4.5 5.6 5.5 4.3 4.3 4.3 5.6 8.3 4.4 5.3 EE 1.08 1.08 1.08 1.08 1.08 1.08 1.08 1.08 1.08

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80

ANEXO 6. MEDIAS DE LOS CUADRADOS MNIMOS PARA EL PORCENTAJE DE DEGRADACIN IN SITU DE LA MATERIA SECA OBSERVADO POR HORA DE INCUBACIN. Tratamiento (%) Hora de incubacin 0 3 6 9 12 24 48 72 96 Promedio 0.0 27.9 34.9 38.9 48.3 54.0 67.9 80.9 85.5 85.4 58.2 1.5 27.9 32.5 39.0 44.8 56.6 63.0 77.4 84.2 84.5 56.7 3.0 27.9 34.5 38.0 44.9 52.2 62.8 76.2 84.8 84.5 56.2 4.5 27.9 38.2 42.0 47.9 52.6 64.4 78.9 82.8 86.3 57.9 EE 1.81 1.81 1.81 1.81 1.81 1.81 1.81 1.81 1.81 0.60

EE Error estndar de la media.

81

ANEXO 7. MEDIAS DE LOS CUADRADOS MNIMOS PARA LA PRODUCCIN DE GAS IN VITRO (ml/200 mg MS) DE LA MATERIA SECA OBSERVADA POR HORA DE INCUBACIN. Tratamiento (%) Hora de incubacin 3 6 9 12 24 48 72 96 Promedio 0.0 13.8 18.4 19.7 19.3 22.9 21.9 20.1 18.4 17.0 1.5 13.5 18.7 19.7 19.5 24.7 23.2 21.4 19.2 17.6 3.0 14.2 18.9 20.1 19.6 23.6 23.2 21.0 18.8 17.6 4.5 13.8 18.6 20.2 19.7 23.4 23.5 21.5 19.3 20.0 EE 0.48 0.48 0.48 0.48 0.48 0.48 0.48 0.48 0.48

MS Materia seca EE Error estndar de la media.

82