I.

TITULO:

ENSAYO DE ANLISIS POR CROMATOGRAFA DE CAPA DELGADA (CCD) DE UN EXTRACTO II. INTRODUCCIN: La cromatografa de adsorcin, descubierta por el botnico ruso Michael Tswett en 1903, permaneci ignorada hasta el ao 1931. Tswett encontr que los pigmentos vegetales podan separarse, filtrando su solucin en ter de petrleo a travs de una columna de carbonato clcico, observando que en sta se formaban zonas amarillas y verdes. El apogeo de la cromatografa de adsorcin comenz en 1931, cuando Kuhn y Lederer, as como Kuhn, Winterstein y Lederer introdujeron el mtodo en la qumica sinttica de los colorantes polinicos. El primer trabajo trat de la separacin en sus componentes del entonces ya conocido caroteno y el aislamiento del y -caroteno. La aplicacin de la cromatografa como norma preparativa por Kuhn, Winterstein y Karrer, es lo que ms influy en el desarrollo de la qumica de los carotenoides en los aos posteriores. Tambin avanz la investigacin de los pigmentos de las hojas verdes, flavinas y otras materias colorantes vegetales, con el empleo de las tcnicas cromatogrficas. Se fue evolucionando tambin hacia la separacin de combinaciones no coloreadas, elaborndose para ello mtodos de revelado. La cromatografa de adsorcin en columna se convirti rpidamente en un procedimiento standard. La cromatografa de Tswett era apropiada principalmente para la separacin de sustancias lipfilas. Falt, sin embargo, un mtodo cromatogrfico de separacin utilizable para compuestos hidrfilos (albuminoides, polisacridos y cidos nucleicos), hasta que Martin y Synge (1941) desarrollaron la cromatografa de reparto. Utilizaron columnas de gel de slice, al que se haba incorporado una determinada cantidad de agua. Consden, Gordon y Martin sustituyen la "sustancia soporte" silicagel por tiras de papel y crean la cromatografa de papel. Despus de conseguir las primeras separaciones de aminocidos, empez el gran desarrollo de la cromatografa de papel, que introdujo el mtodo en casi todo laboratorio qumico.

Pero los lmites de la cromatografa de papel no se reconocieron claramente hasta ms de diez aos despus. La cromatografa de papel era considerada como el mtodo de anlisis cromatogrfico, aunque se produjeron muchas dificultades usando este mtodo en sustancias lipfilas, que segn el mtodo de Tswett eran fcilmente separables. No exista un procedimiento generalmente aplicable de la adsorcin cromatogrfica aunque Izmailov y Shraiber ya en el ao 1938 describieran el principio de la cromatografa de capa fina. Estos autores esparcieron xido de aluminio sobre placas de cristal y separaron diversas sustancias en estas capas no compactas. Williams cromatografiaba en capas de adsorbentes entre dos placas de cristal, una de las cuales tena un pequeo orificio por el cual se hacan llegar a la capa las soluciones y eluyentes. Meinhard y Hall usaron por primera vez un aglutinante (almidn) para conseguir una mayor estabilidad mecnica de las capas. Kirchner, Miller y colaboradores ampliaron el procedimiento y demostraron su utilidad para la separacin e identificacin de terpenos. Mientras que estos autores trabajaron sobre placas de vidrio estrechas (chromatostrips). Reitsema utiliz placas de vidrio ms anchas (chromatoplates) sobre las cuales se podan cromatografiar varias pruebas, una al lado de la otra, pudindose operar tambin bidimensionalmente. No se reconoci la importancia general de este mtodo hasta que por los trabajos de Stahl la cromatografa de capa fina fue introducida como procedimiento de la cromatografa de adsorcin analtica. III. OBJETIVOS: Conocer cmo funciona una cromatografa de capa delgada y que componentes qumicos tiene. Conocer la tcnica de cromatografa en capa delgada, C.C.D., sus caractersticas y los factores que en ella intervienen. Calcular el valor de f.r. de la sustancia y correlacionarlo a la seleccin adecuada del eluyente y deducir la relacin que existe entre la polaridad de la sustancia que se analiza y la del eluyente utilizado. Aplicar la tcnica de C.C.D. como criterio de pureza e identificacin de sustancias.

IV. REVISIN BIBLIOGRFICA:

CONCEPTO DE CROMATOGRAFA
La cromatografa se define como la separacin de una mezcla de dos o ms compuestos por distribucin entre dos fases, una de las cuales es estacionaria y la otra una fase mvil. Varios tipos de cromatografa son posibles, dependiendo de la naturaleza de las dos fases involucradas: slido-liquido (capa delgada, papel o columna), liquido-liquido y gases-liquido (fase vapor). Todas las tcnicas cromatogrficas dependen de la distribucin de los componentes de la mezcla entre dos fases inmiscibles: una fase mvil, llamada tambin activa, que transporta las sustancias que se separan y que progresa en relacin con la otra, denominada fase estacionaria. La fase mvil puede ser un lquido o un gas y la estacionaria puede ser un slido o un lquido. Todos los slidos finamente pulverizados tienen el poder de adsorber en mayor o menor grado otras sustancias sobre su superficie; y, similarmente, todas las sustancias pueden ser adsorbidas, unas con ms facilidad que otras. Este fenmeno de adsorcin selectiva es el principio fundamental de la cromatografa.

CONCEPTO DE R.F.
Rf es el registro y se define como: Rf = distancia que recorre la muestra desde el punto de aplicacin / distancia que recorre el disolvente hasta el frente del eluyente. El valor de Rf depende de las condiciones en las cuales se corre la muestra (tipo de adsorbente, eluyente, as como las condiciones de la placa, temperatura, vapor de saturacin, etc.). Tiene una reproducibilidad de 20%, por lo que es mejor correr duplicados de la misma placa.

CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA.

En este caso se utiliza una placa recubierta con fase estacionaria manteniendo un pequeo espesor constante a lo largo de la placa. El eluyente ascender, por capilaridad, por la placa y arrastrar los componentes a lo largo de sta produciendo manchas de los componentes.

Se usan lminas de: vidrio como soporte del adsorbente, plstico (ej: acetato) metlicos (ej: aluminio). Los tamaos de la placa para CCD convencional son: 20 x 20; 10 x 20 y 5 x 2. Hay placas que contienen un indicador de fluorescencia, para facilitar la identificacin de las muestras. Si no se usa indicador y los componentes no son coloridos se requerirn tcnicas de revelado. ELUYENTES DELGADA. MS COMUNES PARA CROMATOGRAFA EN CAPA

-ter de petrleo -tolueno -dietil-ter, t-butil-ter -diclorometano -acetato de etilo -n-pentano, n-hexano -ciclohexano -tetracloruro de carbono -ter dietlico -cloroformo -acetona -iso-propanol -etanol -metanol -cido actico REVELADORES MS COMUNES PARA CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA Las manchas de color son, por supuesto, inmediatamente visibles; las incoloras pueden revelarse mediante: Luz UV: si la sustancia absorbe luz ultravioleta, se puede usar una fase estacionaria impregnada con un indicador fluorescente (F 254 F366), el nmero que aparece como subndice nos indica la longitud de onda de excitacin del indicador utilizado. La introduccin de la placa en vapores de yodo. El roco con una solucin de agua/H 2SO4 1:1 (dentro de un compartimiento especialmente protegido y bajo una campana de extraccin de gases). Despus calentar intensamente, por ejemplo, con un mechero hasta carbonizar los compuestos.

ADSORBENTES MS COMUNES PARA CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA. a) Silica gel (se utiliza en el 80% de las separaciones) b) xido de Aluminio Almina (cida, neutra bsica) c) Celulosa (Nativa o micro-cristalina) d) Poliamidas Para la seleccin de los adsorbentes deber tomar las siguientes consideraciones: a) Polaridad b) Tamao de partcula a. Dimetro b. rea Superficial c) Homogeneidad d) Pureza FACTORES QUE INFLUYEN EN CROMATOGRAFA DE CAPA DELGADA. UNA SEPARACIN POR

a) Temperatura: a menor temperatura las sustancias se adsorben ms en la fase estacionaria. b) La cromatografa debe llevarse a cabo en un rea sin corrientes de aire. c) Limpieza de las placas. Muchas placas estn contaminadas con grasa o agentes plastificantes o adhesivos. Para el trabajo a pequea escala, stas deben limpiarse corriendo primero una mezcla de cloroformo y metanol y despus dejar secar completamente antes de aplicar la muestra. d) Pureza de los disolventes.

V.

MATERIALES Y MTODOS: Materiales: Extracto de material vegetal seco (hoja de noni) Aguja Balanza Tubo capilar Placas para cromatografa (portaobjetos) Pipeta graduada de 10 mL Probeta de 25 mL Lmpara de luz ultravioleta Regla Papel filtro Papel aluminio Cinta adhesiva Tijera Capilares

Sustancias y reactivos: Metanol 0.3 mL Acetato de etilo 2.7 mL

VI. ANLISIS Y DISCUSIN:

olo

F(r) = 6.5 / 8.5 = 0.76

En la prctica realizada solo obtuvimos una mancha, siendo la distancia solo una. En el factor de referencia, las distancia ha sido medida con una regla a simple vista, por lo que los valores de polaridad no son exactos sino una simple aproximacin. VII.CONCLUSIONES:

 La tcnica de cromatografa en capa delgada (CCD) tiene numerosas ventajas, aparte de ser rpida, sencilla, barata; tiene tambin la ventaja de utilizar poca cantidad de muestra. La cromatografa de capa delgada (CCD) es una tcnica muy simple, que presenta una gran utilidad en separaciones de compuestos para llevar a cabo un anlisis cualitativo. Resulta particularmente til en la separacin de colorantes, puesto que al tratarse de sustancias detectables a simple vista, no se requiere la etapa de revelado de las manchas.

VIII. RECOMENDACIONES Seguir la instrucciones paso a paso que nos indica el profesor. Manipular los materiales con cuidado e higiene. Tomar apuntes. Usar el mandil para evitar alguna lesin.

IX. BIBLIOGRAFA: Es importante hacer hincapi en la importancia de consultar la bibliografa recomendada con el fin de un mejor aprendizaje y para presentar y discutir correctamente los resultados obtenidos en las prcticas. Es importante, as mismo, conocer la estructura y propiedades qumicas de los compuestos que se van a utilizar, por lo que se recomienda consultar las notas de clase o algn libro de texto. Gonzlez de Buitrago JM (1985): Cromatografa. En Gonzlez de Buitrago JM (eds): Tcnicas de Laboratorio Clnico, 1 Ed. Editorial Alambra (Madrid, Espaa), pp. 128 141. Gonzlez de Buitrago JM (1998): Osmometra. Cromatografa. Electroforesis. Tcnicas electroqumicas. En Gonzlez de Buitrago JM, Arilla E, Rodrguez-Segade M, Snchez A (eds): Bioqumica Clnica, 1 Ed. Editorial McGraw-Hill Interamericana (Madrid, Espaa), pp. 17 27. Lozano J (1988): Cromatografa. En: Lozano JA, Tudelo J (eds): Prcticas de Bioqumica. Experimentacin y Simulacin, 1 ed. Editorial Sntesis (Madrid, Espaa), pp. 25 35.