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Biotechnol. Agron. Soc. Environ. 2006 10 (2), 67 71

valuation prliminaire de lactivit larvicide des extraits aqueux des feuilles du ricin (Ricinus communis L.) et du bois de thuya (Tetraclinis articulata (Vahl) Mast.) sur les larves de quatre moustiques culicids : Culex pipiens (Linn), Aedes caspius (Pallas), Culiseta longiareolata (Aitken) et Anopheles maculipennis (Meigen)
Brahim Aouinty (1), Saadia Oufara (1), Fouad Mellouki (2), Saadia Mahari (1)
Laboratoire de Physiologie et Pharmacologie, UFR Sant et Environnement. FST, Universit Hassan II-Mohammedia (Maroc). E-mail : aouinty2002@yahoo.fr (2) Laboratoire de Chimie bioorganique et analytique, UFR 35/97 FST Universit Hassan II-Mohammedia (Maroc). Reu le 23 juin 2004, accept le 5 avril 2006 Les extraits aqueux des feuilles du ricin Ricinus communis L. et du bois de thuya Tetraclinis articulata (Vahl) Mast. prsentent des effets toxiques sur des larves de moustiques culicids. Dans ce travail, lactivit insecticide de ces extraits a t tudie sur les larves des stades 2 et 4 de Culex pipiens (Linn), Aedes caspius (Pallas), Culiseta longiareolata (Aitken) et Anopheles maculipennis (Meigen). Les tests de toxicit ont rvl au bout de 24 heures dexposition des concentrations ltales CL50 trs faibles. Dans le cadre de lutte anti-moustique, les extraits de ces plantes peuvent tre utiliss comme des biocides naturels. Mots-cls. Extraits aqueux, larvicide, Culex pipiens, Ricinus communis, Tetraclinis articulata, biocides naturels. Preliminary evaluation of larvicidal activity of aqueous extracts from leaves of Ricinus communis L. and from wood of Tetraclinis articulata (Vahl) Mast. on the larvae of four mosquito species: Culex pipiens (Linn), Aedes caspius (Pallas), Culiseta longiareolata (Aitken) and Anopheles maculipennis (Meigen). Aqueous extracts of Ricinus communis leaves and Tetraclinis articulata wood showed strong toxic activity against larvae of several mosquitoes. In this study, insecticide effects of these plant extracts have been investigated on 2nd and 4th instars larvae of Culicidae insects, Culex pipiens (Linn), Aedes caspius (Pallas), Culiseta longiareolata (Aitken) and Anopheles maculipennis (Meigen). After 24 hours of exposition, bioassays revealed low lethal concentrations LC50. To control mosquitoes, these plant extracts might be used as natural biocides. Keywords. Aqueous extracts, larvicide, Culex pipiens, Ricinus communis, Tetraclinis articulata, natural biocides.
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1. INTRODUCTION Les moustiques ont toujours t considrs comme source de nuisance pour lhomme, principalement en raison du fait quils peuvent tre des vecteurs de maladies. Les femelles en priode de reproduction ont besoin de sang pour le dveloppement des ufs et certaines espces ont une prfrence marque pour le sang humain. Parmi les espces connues dans la transmission des maladies lhomme, nous citons celles appartenant aux genres Culex, Aedes et Anopheles. Les espces du genre Culex transmettent des maladies

parasitaires telles la lariose et la vre jaune alors que les espces du genre Anopheles transmettent le paludisme. Au Maroc, le paludisme, maladie parasitaire dorigine hydrique, continue poser un problme de sant publique (Alaoui Slimani et al., 1999). Dans les campagnes de lutte anti-moustique, les matires actives des insecticides utiliss appartiennent aux organophosphors, pyrthrinodes et carbamates de synthse. Ces prparations, bien quelles se soient rvles trs efcaces sur les moustiques culicids, prsentent plusieurs inconvnients. En effet, en plus de leur cot lev, elles peuvent tre lorigine de

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divers problmes environnementaux. Pour Barbouche et al. (2001), laccumulation signicative de matires actives dans les cosystmes traits, aquatiques et terrestres est un problme de pollution. Par ailleurs, les substances actives des produits utiliss prsentent un large spectre daction et npargnent pas les organismes non cibles. tous ces inconvnients sajoute aussi un grand problme de dveloppement de rsistance aux insecticides chimiques, chez les insectes traits (Georghiou et al., 1975 ; Sinegre et al., 1977). Pour assurer une meilleure intervention, tout en prservant au maximum le milieu naturel, de nouvelles mthodes prventives ainsi que de nouveaux produits sont constamment recherchs. Ainsi, pour contribuer une gestion durable de lenvironnement, la mise en place de nouvelles alternatives de contrle des moustiques est davantage encourage. Les substances naturelles qui prsentent un large spectre daction en pharmacologie, comme bactricides, fongicides, acaricides, etc., peuvent aussi tre utilises comme insecticides de remplacement. Lutilisation des extraits de plantes comme insecticides est connue depuis longtemps, en effet le pyrthre, la nicotine et la rotnone sont dj connus comme agents de lutte contre les insectes (Crosby et al., 1966). Dans certaines rgions dAfrique noire, les feuilles de tabac malaxes dans leau taient utilises pour lutter contre les moustiques. Au Maroc, lutilisation de plantes contre les invasions de moustiques est une pratique trs courante, surtout dans les rgions rurales. En effet, les odeurs du basilic Ocimum basilicum, Basil (Labie) et de Sarghina, Corrigiola telephiifolia (Caryophyllace) sont des rpulsifs trs efcaces. Daprs Jacobson (1989), plus de 2 000 espces vgtales possdant une activit insecticide sont dj identies. Rcemment, la litire de laulne, plante riche en polyphnols sest rvle tre doue de proprits toxiques importantes vis--vis des larves des moustiques Culex pipiens, Aedes aegypti et A. albotropus (David et al., 2000). Dans des travaux encore plus rcents, les proprits insecticides de certaines plantes ont t testes sur les larves dinsectes. Nous citons cet effet, les travaux de Jang et al. (2002 a) sur A. aegypti et C. pipiens en testant lactivit larvicide de certaines lgumineuses et les travaux dAlaoui Slimani (2002) dans lesquels la toxicit de Mentha pulegium (Labie) a t conrme sur des larves de culicids. Lactivit larvicide des extraits de plantes mdicinales aromatiques a aussi t conrme dans les travaux de Jang et al. (2002 b). Par ailleurs, la protection des cultures contre les ravageurs par des extraits vgtaux a t tudie aussi bien sur des larves de lpidoptres (Lee et al., 2002) que sur des larves dacridiens (Barbouche et al., 2001). Au Maroc, les tudes menes sur lactivit insecticide des extraits vgtaux vis--vis des larves de moustiques sont trs limites. En effet, lexception

des travaux dAlaoui Slimani (2002) et ceux de Bouallam Tifnouti (2001), aucune autre tude na t effectue sur des larves de moustiques culicids. Ainsi, dans le cadre de recherches menes au sein de notre laboratoire sur la dmoustication, la toxicit des extraits aqueux de quelques espces vgtales locales a t tudie sur les larves de stades L2 et L4 de quatre moustiques culicids : Culex pipiens (Linn), Aedes caspius (Pallas), Anopheles maculipennis (Meigen) et Culiseta longiareolata (Aitken).

2. MATRIEL ET MTHODES 2.1. Choix des larves Les larves soumises aux tests de toxicit proviennent de gtes larvaires non traits situs dans des zones rurales de Mohammedia, ville ctire de latlantique marocain. Elles sont maintenues en levage au laboratoire dans des bocaux en verre une temprature moyenne de 21,3 C 1,8 C. Elles ont t dtermines laide dune cl didentication des culicids du Maroc (Himmi, 1995). Les espces ont t tries et isoles les unes des autres an dviter des interactions interspciques. 2.2. Prparation des extraits aqueux La matire vgtale (feuilles, tiges et bois) de 5 plantes locales (Ammi visnaga Lam., Tetraclinis articulata L., Ricinus communis L., Nerium oleander L. et Inula viscosa (L.) Ait.), traditionnellement utilises contre des insectes, est pralablement lave leau distille puis sche dans une tuve porte 40 C pendant 48 h 92 h. Elle est ensuite broye laide dun mixeur jusqu sa rduction en poudre. Une quantit de 100 g de poudre de chaque plante est dilue dans un litre deau distille pralablement porte bullition, puis laisse refroidir sous agitation magntique pendant 30 minutes. Le mlange obtenu est ltr laide du papier Whatman (3 MM). Le ltrat rcupr reprsente une solution stock initiale 100 g par l soit 10 %. 2.3. Estimation des quantits du rsidu sec Dans le but de donner une signication plus logique aux quantits de matires vgtales solubles dans les extraits aqueux, ces derniers ont t concentrs par vaporation dans une tuve porte 40 C pendant 48 h, jusqu lobtention dun rsidu sec dont la quantit est exprime en mg. Cela permet dexprimer les concentrations ltales des rsidus secs solubles dans leau en mg/l.

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2.4. Tests de toxicit La mthodologie de nos tests est inspire de la technique des tests de sensibilit normaliss par lOrganisation Mondiale de la Sant, adopte pour tester la sensibilit des larves, vis--vis des insecticides utiliss en campagnes de lutte (OMS, 1963). partir de lextrait initial (solution stock 100 g/l ou 10 %) de chaque plante et leau du gte larvaire, des concentrations de 5 %, 4 %, 3 %, 2 % et 1 % ont t prpares. Les tests sont raliss dans des bchers de 5 cm de diamtre contenant chacun 100 ml de solution et 10 larves de moustiques de la mme espce et du mme calibre. Le mme nombre de larves est plac dans un bcher tmoin contenant 100 ml deau du gte larvaire. Pour chacune des concentrations de lextrait ainsi que pour le tmoin, quatre rptitions sont effectues. Le taux de mortalit est calcul en terme de moyenne des quatre dterminations portant chacune sur 10 individus. Lanalyse statistique des moyennes est ralise laide du test de lanalyse de la variance ANOVA 2. Les moyennes de mortalit ont t traites et compares par le test de Scheffe au seuil de P = 0,05 (Sas, 1990). Les concentrations ltales CL50 sont dtermines aprs 24 heures dexposition, elles sont calcules laide du logiciel Spearman-Kaber (Hamilton et al., 1977). 3. RSULTATS ET DISCUSSION 3.1. Variation du taux de mortalit Aprs avoir expos des larves du stade 4 de lespce C. pipiens aux diffrentes concentrations des cinq extraits aqueux pendant 24 h, le taux de mortalit
Tableau 1. Mortalit (%) des larves L4 de Culex pipiens en fonction de la concentration des extraits aqueux (%) de 5 espces vgtales aprs 24 heures dexposition Fourth instar larvae mortality (%) of Culex pipiens in relation to the aqueous extracts concentration from 5 plant species after 24 hours of exposure.
Espce vgtale 1% 2% 3% 4% 5% Tmoin
0 0 0 0 0

varie selon les concentrations (Tableau 1). Pour tous les extraits, lexception de celui du laurier rose, la mortalit des larves atteint un taux de 100 % partir dune concentration de 4 %. Cependant, dans lextrait du Ricinus communis, la mortalit est plafonne 100 % ds la concentration de 1 %. De lensemble de ces rsultats un premier classement de lefcacit toxique des extraits tests est mis en vidence, ainsi les extraits les plus toxiques sont ceux des feuilles du ricin et du bois de thuya et le moins toxique celui des feuilles du laurier rose. 3.2. Concentrations ltales CL50 Les CL50 calcules pour des larves du quatrime stade (L4) de lespce Culex pipiens (Tableau 2), ont montr que parmi les 5 extraits tests, deux se sont rvls intressants en terme de toxicit, lextrait de T. articulata et celui du R. communis. Ils prsentent en effet les CL50 les plus faibles qui sont respectivement de 530 mg/l et de 600 mg/l. Ces rsultats, bien quils soient prliminaires, illustrent bien lintrt que prsentent les extraits aqueux du bois du thuya et des feuilles du ricin dans la lutte anti-larvaire. Par ailleurs, la toxicit de ces mmes extraits a t tudie sur dautres espces de moustiques, aussi bien sur le stade larvaire avanc L4, que sur le stade jeune L2. Les tableaux 3 et 4 regroupent les rsultats des tests de toxicit en terme de CL50. Ils concernent quatre espces de moustiques C. pipiens, A. caspius, C. longiareolata et Anopheles maculipennis. Dans lensemble des tests raliss, les CL50 paraissent toujours plus faibles pour le deuxime stade larvaire (L2) que pour le quatrime stade (L4) et ce quels que soient lespce considre et lextrait utilis. Les
Tableau 2. Concentrations ltales CL50 (24 h) des extraits aqueux de 5 espces vgtales lgard des larves L4 de Culex pipiens Lethal concentrations LC50 (24h) of the aqueous extracts from 5 plant species against fourth instar larvae of Culex pipiens.
Espce vgtale CL50 (mg/l) I.C. 95% min I.C. 95% max

Ammi visnaga 30 5 70 5 85 8 Tetraclinis articulata 25 4 65 8 95 10 Ricinus communis 100 0 100 0 100 0 Nerium oleander 15 6 35 6 45 6 Inula viscosa 30 8 60 8 80 5

100 0 100 0 100 0 100 0 100 0 100 0 70 5 100 0 100 0 100 0

Ammi visnaga 3750 220 Tetraclinis articulata 530 31 Ricinus communis 600 28 Nerium oleander 3130 310 Inula viscosa 3770 200

2870 450 500 2460 2680

4910 630 740 3970 5290

Moyenne de 4 dterminations portant chacune sur 10 individus Mean of 4 determinations each on 10 individuals.

Moyenne de 4 rptitions Mean of 4 repetitions. I.C. = Intervalle de Conance.

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Tableau 3. Concentrations ltales CL50 (24 h) de lextrait aqueux des feuilles du Ricinus communis lgard de quatre espces de culicids Lethal concentrations LC50 (24 h) of the aqueous extract from leaves of Ricinus communis against four species of culicides. Insectes Culex pipiens Aedes caspius Culiseta longiareolata Anopheles maculipennis Stade larvaire L L4 L2 L4 L2 L4 L2 L4
2

CL50 (24 h) (mg/l) 140 21 600 28 220 25 270 29 110 21 200 31 370 58 1090 112

Intervalle de conance 95 % (mg/l) 90 220 500 740 160 290 230 330 90 130 160 250 280 490 860 1380

Moyennes de 4 rptitions Means of 4 repetitions.

Tableau 4. Concentrations ltales CL50 (24 h) de lextrait aqueux du bois de Tetraclinis articulata lgard de quatre espces de culicids Lethal concentrations LC50 (24h) of the aqueous extract from wood of Tetraclinis articulata against four species of culicides. Insectes Culex pipiens Aedes caspius Culiseta longiareolata Anopheles maculipennis Stade larvaire L L4 L2 L4 L2 L4 L2 L4
2

CL50 (24 h) (mg/l) 190 45 530 31 220 45 340 36 110 31 230 47 180 33 210 36

Intervalle de conance 95 % (mg/l) 150 240 450 610 180 270 230 500 90 150 170 310 140 230 150 290

Moyennes de 4 rptitions Means of 4 repetitions.

larves les plus vulnrables lextrait du ricin sont celles du stade (L2) des espces C. pipiens et C. longiareolata avec respectivement des CL50 (24 h) de 140 mg.l-1 et de 110 mg.l-1 soit des CL50 bien infrieures celles obtenues dans la phase aqueuse des galles de Quercus lusitania, CL50 (24 h) = 256 mg/l (Bouallam Tifnouti, 2001), et de la phase aqueuse de Mentha pulegium, CL50 (24 h) = 750 mg.l-1 (Alaoui Slimani, 2002). Par ailleurs, pour le stade (L4), ce sont les larves de C. longiareolata qui sont les plus touches avec une CL50 (24 h) = 200 mg.l-1. Lextrait aqueux du bois de Thuya est galement plus toxique pour les stades (L2) avec des CL50 allant de 110 mg.l-1 pour C. longiareolata 220 mg.l-1 pour A. caspius. Alors quil est moins toxique pour les larves L4 avec des CL50 allant de 210 mg.l-1 pour A. maculipennis 530 mg.l-1 pour C. pipiens. Cependant, lexception des larves de A. maculipennis, plus rsistantes lextrait du ricin, la toxicit de ce dernier et celle de lextrait du thuya, se manifestent gnralement de la mme faon sur les autres espces. Ils prsentent en effet des CL50 trs proches. Cependant bien quelles paraissent

leves, ces concentrations ltales restent relativement infrieures celles des extraits aqueux des galles de Quercus lusitania et des feuilles de Mentha pulegium. 4. CONCLUSION Ces rsultats bien que prliminaires, tmoignent dune bonne activit larvicide des extraits aqueux des poudres vgtales. Parmi plusieurs extraits tests, ceux du bois de Tetraclinis articulata et des feuilles du Ricinus communis constituent des larvicides prometteurs pour la lutte contre les moustiques nuisibles (Culex pipiens, Aedes caspius, Culiseta longiareolata et Anopheles maculipennis). Ils sont en effet plus efcaces sur les larves du deuxime stade (L2) que sur celles du quatrime stade (L4), avec des CL50 (24 h) plus faibles, oscillant entre 110 mg.l-1 et 370 mg.l-1 pour lextrait du ricin et entre 110 mg.l-1 et 220 mg.l-1 pour lextrait du thuya. Compars dautres extraits aqueux dj tests sur les mmes espces, savoir, les galles de Quercus lusitania et Mentha pulegium, les CL50 (24 h) de la

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71 Hamilton MA., Russo RC., Thurston RV. (1977). Trimmed Spearman-Kaber method for estimating median lethal concentrations in toxicity bioassays. Environ. Sci. Technol. 11 (7), p. 714719 ; correction 12 (4), p. 417 (1978) Himmi O., Dakki M., Trabi B., Elagbani M. (1995). Les Culicidae du Maroc : Cls didentication, avec donnes biologiques et cologiques. Rabat : Institut Sciences, Trav. Srie Zoologie 44, 51 p. Jacobson M. (1989). Botanical pesticides, past present and future In Arnason JT. et al. (Ed.). Insecticides of plant origin. Washington, D.C. : American Chemical Society Symposium, series 387, p. 1-10. Jang YS., Baek BR., Yang YC., Kim MK., Lee HS. (2002 a). Larvicidal activity of leguminous seeds and grains against Aedes aegypti and Culex pipiens pallens. J. Am. Mosq. Control. Assoc. 18 (3), p. 210213. Jang YS., Kim MK., Ahn YJ., Lee HS. (2002 b). Larvicidal activity of Brazilian plants against Aedes aegypti and Culex pipiens pallens (Diptera : Culicidae). Agric. Chem. Biotechnol. 45 (3), p. 131134. Kabaru JK., Gichia L. (2001). Insecticidal activity of extracts derived from different parts of the mangrove tree Rhizophora mucronata (Rhizophoraceae) Lam. against three arthropods. AJST, 2 (2), p. 4449. Koua HK., Han SH., DAlmeida MA. (1998). Histopathologie dAnopheles gambiae s.l Giles, 1902 (Diptera, Culicidae) soumis lactivit larvicide de lextrait aqueux de Persea americana Miller, 1768 (Lauraceae). Entomologie mdicale. Bull. Soc. Path. Ex. 91 (3), p. 252256. Lee HK., Park C., Ahn YJ. (2002). Insecticidal activities of asarones identied in Acorus gramineus rhizome against Nilaparvata lugens (Homoptera: Delphacidae) and Plutella xylostella (Lepidoptera: Yponomeutoidae). Jap. Soc. Appl. Entomol. Zool. 37 (3), p. 459464. Organisation Mondiale de la Sant (1963). Mthode suivre pour dterminer la sensibilit ou la rsistance des larves de moustiques aux insecticides. In Rsistance aux insecticides et lutte contre les vecteurs. Treizime rapport du comit OMS dexperts des insecticides, Genve : OMS, Sr. Rapp. Techn. 265, p. 5560. Sas (1990). SAS User s guide: Statistics. Cary, North Calorina, USA: SAS Institute. Sinegre G., Jilien JL., Gaven B. (1977). Acquisition progressive de la rsistance au chlorpyrifos chez les larves de Culex pipiens (L.) dans le Midi de la France. Parasitologia 19 (1/2), p. 7994. (18 rf.)

phase aqueuse du thuya et du ricin sont relativement plus faibles et par consquent plus efcaces. Les extraits de la phase aqueuse brute de ces deux plantes devront tre soumis une sparation de manire isoler et concentrer les substances actives, qui certainement pourront prsenter des CL50 beaucoup plus faibles et devraient pouvoir tre valoriss en tant quinsecticides de remplacement.
Remerciements Nous remercions le docteur M. Lyagoubi et lingnieur C. Faraj du laboratoire de lInstitut national dHygine de Rabat qui nous ont autoris une formation sur les tests de toxicit. Nous remercions galement le Docteur O. Himmi de lInstitut scientique de Rabat pour son aide pour la dtermination des espces culcidiennes. Bibliographie Alaoui Slimani N., Jouid N., Benhoussa A., Hajji K. (1999). Typologie des habitats dAnopheles dans une zone urbaine (Diptera Culicidae). Entomologiste 55 (5) , p. 181190. Alaoui Slimani N. (2002). Faune culicidienne dune zone marcageuse de Rabat-Sal : Biotypologie et contribution la lutte par des substances naturelles. Thse Doct. es Sci. Biol., Fac. Sci. Univ. Mohammed V., Rabat, Maroc, 192 p. Barbouche N., Hajjem B., Lognay G., Ammar M. (2001). Contribution ltude de lactivit biologique dextraits de feuilles de Cestrum parqui LHrit. (Solanaceae) sur le criquet plerin Schistoceraca gregaria (Forsk.). Biotechnol. Agron. Soc. Environ. 5 (2), p. 8590. Bouallam Tifnouti S. (2001). cologie des diptres culicids de la rgion de Marrakech : Contribution lamlioration des moyens de lutte chimique et biologique. Thse. doct. es Sci., Fac. Sci. Semlalia., Univ. Cadi Ayyad., Marrakech, Maroc, 148 p. Crosby DG. (1966). Natural pest control agents. In Gould, R.F. (Ed.). Natural Pest Control Agents. Adv. Chem. Ser. 53, p. 1-16 David JP., Rey D., Pautou MP., Meyran JC. (2000). Differential toxicity of leaf litter to Dipteran larvae of mosquito developmental sites. J. Invertebr. Pathol. 75, p. 918. Georghiou GP., Ariaratnam V., Pasternak ME., Lin CS. (1975). Organophosphorus multiresistance in Culex quinquefasciatus in California. J. Econ. Entomol. 68, p. 461467.

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