De que organismo se trata la publicacin? pungens f. multiseries A qu Divisin y clase pertenece?

Gnero nitzschia y clase diatomea

Cul ha sido el inters de este gnero en las dos ltimas dcadas? Por qu? La importancia es que esta alga produce cido domeico que es toxico para la salud de los humanos, en 1989 resultaron intoxicadas 107 personas y 3 personas muertas por el consumo de mejillones en la baha de cardigan en canad. Qu se requiere para la biosntesis de AD? Requieren lo mismo, las otras especies? Se han encontrado varias algas que pertenecen a este gnero como Nitzschia pseudodelicatissima que al igual que la Nitzschia pungens f. multiseries produce el cido domeico, no se conocen todava todas los factores que influencian la produccin de cido domeico, este trabajo muestra varias maneras de producirlo, un cultivo descontinuo no axenico, la presencia de nitrgeno asi como la radiacin extracelular son esenciales para la produccin de cido domeico. b.- Describan las partes de su clula en un esquema a mano. Distingue las estructuras de identificacin, cules son?

Fig. a . Colonias. Note que varias de las clulas estn recientemente divididas. b-c . Valvas mostrando contorno linear lanceolado con pices puntiagudos. Observe bandas abiertas. d . Parte media de la valva en vista externa mostrando estras biseriadas y manto distal. Observe los poroides con velos himenados. e . pice de la valva de, d .Observe dos bandas. f . Parte media de la valva en vista externa

mostrando estras biseriadas, rafe y manto proximal. Note algunos poroides aislados entre las dos hileras regulares de poroides. g. pice de la valva de f. Observe que las estras tienen pocos poroides. h. Parte central de la valva en vista interna mostrando las fbulas alineadas con las interestras. Note que las estras del manto distal estn alineadas con las de la superficie valvar, mientras que las del manto proximal no lo estn. i. pice de la valva deh. Escalas: 50 m ( a ), 20 m ( b,c ), 5 m ( f-h ), 2 m ( d,e,i ).

a. Colonias. Note que los frstulos presentan un abultamiento en la regin media. b. Teca con abultamiento central. c. Detalle de la teca de: b, mostrando las tres bandas conectivales. Bandas con una hilera de poroides que disminuyen de tamao en sentido abvalvar. d. Valva con abultamiento en el manto distal, valvocpula y primera cpula. Observe poroides aislados entre las dos hileras regulares de poroides. e. Valva en vista interna mostrando un abultamiento en el manto proximal de la regin mediana. f. Frstulo con abultamiento central bilateral. g.Valva en vista interna mostrando abultamiento bilateral y pice deformado. Note la presencia de cngulos constituidos por tres bandas abiertas. h. Valva en vista interna mostrando una constriccin en la zona media. i. Valvas en vistas interna y externa. Note el arreglo irregular de los poroides en valva indicada con la flecha. j. Teca con estras con arreglo de poroides irregular y arreglo irregular de las estras e interestras en el

centro. k. Detalle de la parte central de la valva de j, l. Parte de una valva en vista lateral externa. m. Parte de una valva en vista interna. Note en ambas figuras que los poroides de las estras estn irregularmente dispuestos. Escalas: 20 m ( a ), 10 m ( b,g,h,j ), 5 m ( c,f,i,m ), 2 m ( d,k,e,l ). c.- Describan su historia de vida?

d.- Es ste auttrofo o hetertrofo? Por qu? Es Hetertrofo por que hace fotosntesis, uno de los experimentos que se mencionan en el artculo es colocar un inhibidor fotosinttico.

e.- El estudio de la publicacin En dnde se realiz? Qu tipo de muestras se tomarn? Con qu metodologa? Con qu se preservarn? Cmo se analizaron? La investigacin se llevo acabo en The Prince Edward Island Science and Technology Awareness Site (STAS), la muestra fue tomada en la baha de cardigan. La Nitzschia pungens f. multiseries fue la primer unialga aislada, el aislamiento se pretenda realizar en condiciones axenicas( el cultivo axenico es aquel que nicamente cuenta con una sola especie microbiana, proveniente de una sola clula, en la naturaleza es muy poco comn) pero no fue posible por lo que se realiz en condiciones no axenicas, el medio para mantener las clulas fue el medio f/2(es un medio de agua salada utilizado para mantener clulas).

Qu tipo de diseo experimental se us? Cmo se aisl la especie? Qu medio se utiliz? Fueron stas costeras u ocenicas? Cul es el objetivo del estudio? La temperatura y la cantidad de nutrientes para cada cultivo se hicieron especficos para cada experimento, La radiacin fue proporcionado por una lmpara de color blanco fro y la fluorescencia se midi con un LI - COR cuntica (modelo LI- 185B) equipado con un sensor 4'IT la determinacin del nmero de clulas se llev a cabo por determinacin directa por microscopio.

(Como se preservaron).La concentracin de los principales nutrientes para la preservacin de las clulas se determin con un autoanalizador Technicon. Para el anlisis del cido Domeico se realizaron tres mtodos. 1. Concentracin utilizando filtros de policarbonato Las clulas de alcuotas de 50 ml por duplicado de cultivo se concentran hasta aproximadamente 2 ml (garantizando que las clulas en filtro nunca fueron secas) por filtracin al vaco en un filtro de policarbonato - membrana. Las clulas se enjuagaron a continuacin con tres volmenes 10 mL de agua de mar filtrada, eliminado cuantitativamente a partir del filtro con una pipeta. Las clulas y el filtrado se congelaron por separado para su posterior anlisis.

2. La filtracin sobre filtros de fibra de vidrio

Las clulas se recogieron a partir de alcuotas de 50 ml duplicados de la cultura por filtracin a vaco sobre un filtro de fibra de vidrio. El filtro y el filtrado se congelaron para su posterior anlisis 3. La centrifugacin Duplicar alcuotas lO ml de cultivo se centrifugan en cnica tubos de 5 min a aproximadamente 900 x g , a continuacin se tomaron 5 ml de sobrenadante de cada alcuota se retir para el anlisis del cido domeico , y el material restante se centrifug de nuevo. Se tomaron .2 ml de sobrenadante, se llev el volumen a 10 ml en una filtracin con agua de mar y se congel. Las clulas de N. pungens, tambin se analizaron por ultrasnico, y un mtodo de alta sensibilidad. La concentracin de cido domeico en las clulas (picogramos por ml de clula) se calcul dividiendo la concentracin de domeico cido en el extracto celular que hizo a 10 ml con agua de mar (microgramos por mililitro) por la concentracin de clulas (clulas por mililitro). El cido domoico producido por todo el cultivo" (es decir, clulas con el medio de crecimiento) se obtuvo despus de la sonicacin, como anteriormente se mencion. cido domeico celular del cultivo (picogramos por clula) se calcul mediante la asignacin del total de cido domeico producido en el cultivo f.- Explica las Figs. 1-6 y concluye.

Se aadi cido domeico extracelular y se introdujo al cultivo atraves de la membrana de policarbonato, entonces se corri el experimento. En la Fig muestra la produccin de cido domeico en el cultivo, los crculos rellenos muestran la cantidad de celuls en funcin del tiempo, los cuadros rellenos muetran el cido domeico en el cultivo entero, los tringulos rellenos muestran el cido domeico producido por las clulas ms el que se filtr, los tringulos abiertos son el filtrado, y los cuadrados abiertos es el cido domeico en las clulas.

Fig2. Esta grafica tiene que ver con el experimento con radiacin se observa cmo cambian las concentraciones de cido domeico., los crculos abiertos son la cantidad de clulas, los crculos rellenos son el cido domeico en el cultivo completo, y los dos restantes, los cuadrados abiertos y los cuadrados cerrados son la cantidad de cido domeico en el cultivo entero solo que a diferentes radiaciones, a los cuadrados abiertos se les irradio mayor energa que a los cuadrados rellenos.

Fig3 muestra el crecimiento del cido domeico en el cultivo entero de la prueba en la que se deja el cultivo 16 horas con luz y 8 sin luz, se observa como en las horas que no hay luz no existe crecimiento (barras negras) en la concentracin de cido domeico y en las horas que hay luz si lo hay (barras normales).

Fig4 en crculos se observa la concentracin del cido domeico en el cultivo entero, y en cuadrados se observa la cantidad de clulas solo que en este caso es un cultivo discontinuo(se le va agregando medio en distintas fases).

Fig5 muestra el comportamiento de la produccin del cido domeico cuando se adiciona nitrgeno en distintas cantidades, en la fig A las figuras rellenas representan la cantidad de clula, y las figuras sin rellenar representan la cantidad de cido domeico. En los tringulos la concentracin de nitrgeno es 1 mM en los cuadrados se inici con una concentracin de .05 mM y se subi hasta 1 mM y los crculos carecen de nitrgeno. En la figura B se observa la concentracin del nitrgeno y en la figura c se observa la concentracin de fosfato en el mismo cultivo discontinuo. Sin nitrgeno se observa que no hay tanta divisin celular, el nmero de clula cae considerablemente.

Fig6 Muestra el efecto de la adicin del inhibidor fotosinttico, los crculos son la cantidad de clula y los cuadrados la concentracin del cido domeico. Los smbolos rellenos no contienen el inhibidor y los que no tienen relleno si tienen el

inhibidor, se observa como con inhibidor no hay crecimiento en la cantidad de cido domeico.

g.- Cuntas especies se mencionan en el articulo? Menciona la especie que se esta analizando, Nitzschia pungens forma multiseries(es un tipo de fitoplancton), menciona los mejillones que contamin, Mytilus edulis, tambin menciona otra alga del mismo tipo que se encontr, tambin produce el cido domeico, Nitzschia pseudodelicatissima, tambin menciona Alexandrium fundyense que es un dinoflagelo.

h.- Cul fue la primera especie que se describi como productora de (AD) cido domeico? En 1987 justamente la alga que se describe se estudi en este trabajo, Nitzschia pungens forma multiseries.

j.- Describan cmo obtuvieron el cultivo de N. pungens f. multiseries? La metodologa utilizada para la cosecha N. culturas pungens es decir, por filtracin de membrana de policarbonato proporciona una adecuada manera de particin cido domeico celular y extracelular. Esta distincin no siempre es necesaria, en cuyo caso la medicin de cido domeico en todo el cultivo es ms fcil medir por sonicacin del cido domeico en las clulas ms el cido del medio de crecimiento filtrado. Cuando se tom la muestra de algas en la baha, las clulas se mantuvieron en medio f / 2 hecho con filtrado de agua de mar. Los cultivos se desarrollaron en frascos de vidrio borosilicato, pero se utilizaron frascos de policarbonato cuando se requiere tener el control de silice. Los distintos en los nutrientes en el cultivo como el nitrgeno o la misma slice dependen de cada experimento.

k.- Describan la metodologa empleada para la determinacin del crecimiento? Para obtener el crecimiento del cido domeico necesitas tener varios parmetros en cuenta, como la cantidad de clula adicionada en todos los experimentos, y en

especfico, cada experimento tenia distintas condiciones, como la adicin de diferentes concentraciones de nitrgeno, el medio con slice, la cantidad de luz, y la inhibicin fotosinttica, todos estos parmetros deben ser medidos por el tiempo, y asi podemos conocer la concentracin de cido domeico, en estos experimentos a mayor tiempo mayor crecimiento de cido domeico(mayor concentracin) exceptuando el de la inhibicin fotosinttica, en ese no hay crecimiento. La concentracin de cido domeico en las clulas (picogramos por ml de clula) se calcul dividiendo la concentracin de domeico cido en el extracto celular que hizo a 10 ml con agua de mar (microgramos por mililitro) por la concentracin de clulas (clulas por mililitro). El cido domeico producido por todo el cultivo" ( es decir, clulas con el medio de crecimiento ) se obtuvo despus de la sonicacin ,como anteriormente se mencion. cido domeico celular del cultivo (picogramos por clula) se calcul mediante la asignacin del total de cido domeico producido en el cultivo.

l.- Cmo controlaron los factores de nutrientes, temperatura y luz? Por qu? Un experimento analiz la produccin de cido domeico y el rendimiento final de clulas alcanza en fase estacionaria como una funcin de la concentracin de silice inicial. se cultiv a 15 C con 16 h luz y 8 h oscuridad en policarbonato. Otros experimentos se llevaron a cabo a 15 C con 16 h luz y 8 h oscuridad sin la concentracin inicial de slice para examinar los efectos de la presencia o ausencia de los nutrientes principales en la produccin de cido domeico en la fase estacionaria.

Otros experimentos analizaron los efectos del nitrgeno, en la produccin de cido domeico. Se cultivaron a 17 C con 16 h luz y 8 h oscuridad en frascos que contienen 300 ml de medio f / 2 con nitrgeno inicialmente a aproximadamente 1 mM , 0,05 mM , o sin nitrato . En el da 14 ( 9 d despus del comienzo de la fase estacionaria) , el nitrato se hizo indetectable en el cultivo crecido inicialmente con 0,05 mM de nitrgeno, En ese punto , el nitrgeno(aproximadamente 1 mM de concentracin final ) se aadi al cultivo para determinar si la adicin de nitrgeno estimula el crecimiento cido domeico. m.- Describan la metodologa empleada para el anlisis de AD?

Ya que se obtuvieron los datos del crecimiento del cido domeico en cada uno de los experimentos, se debe analizar el cido domeico, las razones por las cuales se dio una mayor o menor concentracin en cada uno de ellos. Para determinar la concentracin de cido domeico en cada uno de los experimentos. La concentracin de cido domeico en las clulas (picogramos por ml de celula) se calcul dividiendo la concentracin de domeico cido en el extracto celular que hizo a 10 ml con agua de mar (microgramos por mililitro) por la concentracin de clulas (clulas por mililitro). El cido domeico producido por todo el cultivo" (es decir, clulas con el medio de crecimiento) se obtuvo despus de la sonicacin, como anteriormente se mencion. cido domeico celular del cultivo (picogramos por clula) se calcul mediante la asignacin del total cido domeico producido en el cultivo. As puede analizarse los resultados, las condiciones ms favorables para la produccin de cido domeico, las menos favorables, las consecuencias de la adicin de ciertos reactivos as como la variacin en la temperatura que puedes generar. n.- Describan los experimentos de secrecin de AD y los de Irradiancia y fotosntesis. Un experimento se llev a cabo para determinar los efectos de los el inhibidor de la fotosntesis 3 - (3,4-diclorofenil) -1 I-dimetilurea (DCMU) en la produccin de cido domeico en todo el cultivo.se cultiv (15 C, 100j.LE m-2 s-l; 16 h de luz y 8h sin luz) en matraces duplicados que contenan 250 ml off / 2 . En la mitad de la fase exponencial, DCMU (10 - 5 M concentracin final a partir de una10 - solucin de reserva etanlica de 3 M) fue aadido a los frascos y etanol (1% de concentracin final. La divisin celular dej de darse dentro de la adicin de una solucin etanol e inhibidor de la fotosntesis DCMU (fig. 6). La divisin del cultivo tambin se desaceler despus de la adicin de etanol (l% de concentracin final), pero fue mayor que con DCMU-inhibido (Fig. 6). El cido domeico fue producido por el cultivo de control que contena etanol. No se produce cido domeico en el cultivo al que se aadi DCMU. Secrecin En este experimento se describe como se modifica la produccin de cido domeico en un cultivo discontinuo, el fue producido slo durante la fase estacionaria. El mximo de cido domeico producido se alcanza los 7 das despus de la fase estacionaria y poco a poco disminuye. El cido domeico

extracelular en el filtrado se retrasa, la aparicin de cido domeico celular no se da desde el comienzo se dio a los 3 das pero sigui aumentando con el tiempo en el medio de crecimiento, La concentracin de cido domeico celular y extracelular es igual a la concentracin de cido domeico en todo el cultivo, lo que indica que los resultados representan adecuadamente el cido domeico en las dos fracciones. Radiacin La incubacin a un alto nivel de radiacin result en una tasa de crecimiento ms rpida (0,64 divisiones d - I ) que con un nivel de radiacin ms baja( 0,35 divisiones -d -1). Los rendimientos celulares obtenidos durante la fase estacionaria fueron similares en ambos niveles de radiacin, sin embargo, la fase estacionaria fue alcanzada alrededor de 10 das antes en el alto que en el de baja irradiacin en el cultivo. Al igual que en el experimento anterior, el cido domeico en el cultivo entero se detect slo despus del comienzo de la fase estacionaria. Para el cultivo de alta radiacin, se trataba de 10 das antes que en la cultura de baja irradiacin. Las tasas iniciales de la produccin de cido domeico no fueron significativamente diferentes en los dos niveles de irradiacin. La produccin de cido domeico ces cuando un cultivo en fase estacionaria ( 5 dias despus del comienzo de la fase estacionaria ) fue colocado en la oscuridad. Del mismo modo, no hubo produccin de cido domeico cido durante el perodo oscuro cuando se cultiv con un 16 h luz : 8 h oscuridad. La produccin de cido domeico se detuvo rpidamente (dentro de 2 horas) despus de la transicin de la luz al el periodo de oscuridad, Por qu disearon esos 3 experimentos? Qu buscaban? Los nutrientes que se usaron para el cultivo son la slice y el nitrgeno. La slice es el compuesto ms abundante de la tierra, es la arena misma, entonces pudieron pensar que esta influenciaba en la reproduccin del cido domeico en Nitzschia pungens f. multiseries, as tambin el nitrgeno, es un elemento abundante en el ocano en forma de nitratos, la parte fotosinttica es tambin importante ya que es su forma de obtener energa, si inhibes la parte fotosinttica de la alga no obtiene la energa necesaria para sintetizar el cido domeico. Lo que se busca es la manera ms sencilla de detener la produccin del cido domeico por su nivel de toxicidad. .- Describan los resultados ms sobresalientes del estudio? Tienen alguna implicacin? Todos los resultados son sobresalientes, ya que fue la primer alga a la que se le adjudico la produccin de cido domeico, el hecho de encontrar el inhibidor

fotosinttico y de conocer que en ausencia de luz la produccin de cido domeico se detiene, nos indica una posible manera de detener una intoxicacin por ejemplo, tambin el hecho de que esta alga crezca en medio noaxenicos implica que puede haber muchos ms factores que produzcan el cido domeico(otras bacterias). El hecho de conocer en cuanto tiempo alcanza su mximo de produccin y como este va disminuyendo poco a poco tambin nos dice el tiempo de produccin del cido, otra cosa importante es el nitrgeno, si en el mar el nitrgeno tiene esa influencia siendo que la cantidad de nitrgeno en el mar no es tan alta en comparacin del aire, implica que al entrar en contacto con una persona y recibir una mayor cantidad de nitrgeno del ambiente, puede tener una mayor tasa de divisin, y produccin de cido domeico. O.- Cul es la importancia de mostrar la Tabla No. 1? Explica La importancia de esta tabla es el hecho de conocer cual mtodo es mejor para la identificacin del cido domeico extracelular y el celular, si observamos un poco la tabla, el mtodo A que corresponde a la concentracin sobre un filtro nucleopore nos da una cantidad de cido y de clula grande en comparacin de los dems mtodos, el mtodo A parece el ms adecuado en el procedimiento, por el tipo de filtro, parece un filtro ms afn a lo que se quiere lograr que el filtro de vidrio, la centrifugacin es el mtodo menos eficaz, seguramente se obtiene menor cantidad de clula y de cido debido a que la centrifugacin puede romper una cierta cantidad de clulas, disminuyendo as la cantidad de las mismas. P.- Escribe al menos 5 puntos importantes de lo que llegaron en la conclusin los investigadores. La divisin celular es crucial para la produccin de cido domeico La ausencia de luz impide la produccin de cido domeico El mximo de produccin de cido domeico se da despus de la fase estacionaria En presencia de nitrgeno la produccin de cido domeico se mayor Existen muchas fuentes posibles de nitrgeno para la clula Concluyan. La primer investigacin sobre cualquier organismo siempre es crucial, en ella se sientan las bases para que en investigaciones posteriores se tenga una referencia directa sobre el organismo, sobre todo como en este caso la alga Nitzschia pungens f. multiseries, cuya produccin de cido domeico repercute directamente en la salud de la poblacin humana, Encontrar el comportamiento de la alga, los factores que determinan la produccin del cido domeico, son los parmetros que servirn como gua para poder controlar y/o erradicar dicha intoxicacin primeramente como en este caso, en los mejillones, y despus al consumirse

estos, en los humanos. La presencia de la luz solar es algo que no se podr evitar, ya que es el mismo sol la fuente de esta, sin embargo en el artculo se menciona que distintos contaminantes provocados en su mayora por el hombre sirven como fuente de nitrgeno para la alga como el amoniaco, quiz una regulacin de las potenciales fuentes de nitrgeno producidas por el humano ayudara a disminuir la cantidad de cido domeico producida por la alga, ya que el nitrgeno siempre estuvo en el agua, seguro el cido domeico se produca desde haca tiempo atrs, solo que en menores cantidades, y en la actualidad de ese artculo se pudo empezar a generar ms fuentes de nitrgeno para la alga produciendo as mayor cantidad de cido domeico.

http://green.kingcounty.gov/marine/IndividualPhoto.aspx?PhotoId=773&SpeciesID=391&TypeID= 1 http://nordicmicroalgae.org/taxon/Pseudo-nitzschia%20pungens?media_id=Pseudonitzschia%20pungens_2.jpg aqu hay varias pero no estn descritas no se