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Thrapie Tissulaire

(Dr Guilhem COUDERC)

Les Tissus
LES ETAPES

Le prlvement La conservation en banque La greffe ACTIVITE TRES REGLEMENTEE

Les Tissus
Loi de Biothique Rglementation
Consentement du donneur Gratuit du don Scurit sanitaire

Etablissements autoriss Dossier dautorisation Rgles de bonnes pratiques de prlvement

Banque de Tissus autorises Dossier dautorisation Rgles de bonnes pratiques de conservation et de distribution

La greffe de corne

Indications des greffes de cornes


Dcompensation endothliale secondaire pseudophaque : 27% Kratocone : 25% Squelles de kratites : 14% Squelles de traumatisme : 6% Dystrophie de Fuchs : 9%

La corne
Coupe sagittale de lil, partie antreiure 1. Conjonctive 2. Corne 3. Iris 4. Cristallin 5. Corps vitr 6. Corps ciliaire 7. Sclrotique

Le prlvement de corne

Donneur:
PMOT PPM (dans les 8h, dans les 18h si rfrigration dans les 4h)

Prlvement:
Dcoupage de la sclre Suspension dans le milieu de conservation

Restauration anatomique

Le prlvement de corne
Dcoupe au Katzin sur 360

Fixation dun fil 2 mm du limbe

Le prlvement de corne
Tarsorraphie par suture invisible

Mise en place dun conformateur et de colle

Contre indications

Hmopathies malignes Dmence et pathologies neurologiques Srologies positives Pathologies oculaires Dlai entre prlvement et dcs Absence de sang post mortem

Les cornes

Organoculture 31C pendant 30 jours au maximum 2 valuations de lendothlium Tests srologiques Tests bactriologiques

Evaluation

Evaluation

Evaluation

Evaluation

Remise en culture

Remise en culture

Critres de conformit

Nombre de cellules >2000/mm2 Nombre de cellules mortes <2% Aspect de la mosaque Absence de plis bleus Perte cellulaire < 20%

Arbre dcisionnel
Prlvement Srologie et bactriologie conformes Non conformes destruction Non conforme destruction Non conforme destruction

Premire valuation conforme Dcision de greffe Seconde valuation conforme Mise en dturgescence

Greffe

Bactriologie ngative

Positive destruction

La greffe de corne

Traitement post-opratoire

Corticothrapie locale pendant 1 an dcroissance progressive Antibiothrapie locale Collyre ciclosporine si risque de rejet Ablation slective des points partir du 4me mois

Rsultats

Retour progressif de lAV Rsultats jugs entre 1 et 3 mois, mais la vision dfinitive nest obtenue quaprs 1 an Rejets peu frquents (10 20%), gnralement curables La greffe de corne est une des greffes les plus simples et dote dun taux de succs important 50% AV > 5/10 Concerne 4770 greffes en 2004

La greffe de membrane amniotique

Membrane amniotique
Description Indications et principes Prlvement et contre indications Procd de conservation

Membrane amniotique
Epithlium: sera dtruit par la conglation Membrane basale: favorise la migration, ladhsion et la diffrenciation pithliale Sera le support de la recolonisation Stroma : rservoir de facteurs de croissance avec suppression du signal TGF

Indications

Maladies inflammatoires de la corne et de la conjonctive:


Ulcres (aseptiques, par brlures,post infectieux) ne ragissant pas au traitement classique Destructions svres de la surface de la corne (brlures, maladies bulleuses)

Principes

Linflammation ne laisse pas le temps lpithlium, qui est souvent le seul touch, de se rgnrer et le tissu cicatriciel obscurci la vision Lobjectif est de limiter les phnomnes inflammatoires pour permettre la rgnration de lpithlium partir des cellules limbiques

Prlvement
Slection clinique de la donneuse Consentement de la patiente Absence de CI mdicale Dpistage des marqueurs infectieux/biologiques J0 Absence de CI mdicale au cours de la csarienne Prlvement

Csarienne programme

Conditionnement pour le transport

Contre indications

Csarienne non programme Pathologie infectieuse gnitale Fivre maternelle suprieure 38C Liquide amniotique mconial Ictre dtiologie inconnue vnement mettant en jeu lenfant ou la mre Srologies positives

Procd de conservation

Transport strile Rinage des membranes avec solution ATB Sparation de la membrane du chorion

Procd de conservation

Apposition des membranes de nitrocellulose Dcoupage des fragments Contrle bactriologique et histologique Conglation en RPMI + 50% glycrol Stockage 80C

Procd de conservation
Rception Contrle microbiologique du milieu de transport Sparation amnios chorion Contrle histologique du placenta Contrle microbiologique sur un fragment Conditionnement des fragments Contrle histologique sur un fragment

Dcoupage de lamnios

Conservation 80C pendant 1 an

Dpistage des marqueurs infectieux/biologiques J120

Greffe de membrane amniotique


Aprs scurisation J120 Dconglation temprature ambiante Rinage Greffe

Greffe de membrane amniotique

Positionnement de la membrane sur la corne receveuse

Suture par surjet monofilament 10/0

Rsultats

Pas alternative thrapeutique Effet trophique et antalgique rapide Technique chirurgicale simple > 1300 greffes en 2004

Les cellules souches limbiques

Cellules souches limbiques


Rgnration de la corne partir de cellules souches limbiques

Marqueurs de diffrenciation
Cx43 p75 Cx50

Corne
Progniteur K3-K12 K5-K14 TrkA, p63 Couche basale Cx43 TrkA p75 Couche superficielle

K5-K14

Couche suprabasale Cx50 K3-p75

SCL

Limbe
K5-K14 p63 TrkA p75

Facteurs de croissance et diffrenciation


Composition de la mb basale
Molcules dadhsion

Rle du stroma
Composants MEC et molcules membranaires

Cytokines

NGF KGF (stroma limbique) HGF (stroma cornen)

Syndrome dinsuffisance en cellules souches limbiques


Association :
Conjonctivalisation, vascularisation, inflammation chronique, rosions rcurrentes et ulcres persistants, destruction de la membrane basale et fibrose

Indications de la greffe de cellules souches limbiques


Mcanisme:
Destruction des SCL et/ou altration du stroma limbique

Causes :
Hrditaires ou acquises Brlures oculaires (chimique ou thermique) Maladies bulleuses Radiation ou les anti-mtabolites

Greffe de cellules souches limbiques


Autogreffe : il controlatral Donneur apparent Allogreffe : donneur DCD Expansion ex vivo de SCL sur AMN

Expansion ex vivo de SCL sur AMN


AMN sans pithlium: couche basale cornenne (K3+, Cx 50+/- et Cx 43+) AMN sans pithlium + fibro 3T3 irradis: pithlium plutt cornenne (K3+, Cx 50+ et Cx 43+) AMN complte: couche basale limbique (K3-, Cx 50+/- et Cx 43-)

Rle de la membrane amniotique


Composition de la mb basale
Molcules dadhsion communes

Rle du stroma
Composant MEC et molcules membranaires Protines anti-inflammatoires, anti-angiogniques et inhibiteurs des protases Cytokines

NGF en grande quantit KGF HGF

Rsultats dexpansion ex vivo de SCL sur AMN


Tsai et al (NEJM 2000):


6 patients, greffe autologue, AMN seule, rpithalisation sans revascularisation, 83% amlioration de lacuit visuelle

Schwab et al (Cornea 2000) :


14 patients, greffe autologue (10) et allognique (4), sur 3T3 et AMN, rpithalisation stable 10/14 avec amlioration de lacuit visuelle, 4/14 conjonctivalisation

Koizumi et al (IOVS 2002) :


13 patients, greffe allognique, sur 3T3 et AMN, rpithalisation stable, 10/13 amlioration de lacuit visuelle

Reconstruction in vitro de la corne


Reconstitution dpithlium partir de limbe sur une membrane basale support Utilisation de matrice comme support pour lpithlium et dans lesquelles on injecte des kratinocytes puis des cellules endothliales

Reconstruction in vitro de la corne


Difficults:
Difficult de culture de lendothlium Association des 3 composants Donner la forme Maintenir les capacits optiques