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CROMATOGRAFIA GASOSA
1. INTRODUO

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A cromatografia gasosa um processo no qual se divide uma mistura nos seus constituintes

graas passagem de uma fase gasosa mvel sobre um sorvente estacionrio. A tcnica semelhante cromatografia lquido-lquido, mas a fase lquida mvel substituda por uma fase gasosa mvel. Esta tcnica divide-se em duas categorias principais: cromatografia gslquido (CGL), na qual ocorre a partio de uma amostra entre uma fase gasosa mvel e uma delgada camada de lquido no-voltil que recobre um suporte inerte, e a cromatografia gsslido (CGS), que emprega um slido com grande rea superficial como a fase estacionria. Uma outra a CS, cromatografia supercrtica. Enquanto o processo de separao numa CGL a partio (Processo dependente da diferena de solubilidade do soluto na fase estacionria lquida (sobre a superfcie de um suporte slido e inerte ou nas paredes do tupo) e na fase mvel), na CGS a adsoro (Processo interfacial reversvel que ocorre entre grupos ativos presentes na superfcie da fase estacionria slida e da fase mvel lquida ou gasosa. Esse processo resultado de foras atrativas (ou repulsivas) entre soluto e a superfcie do adsorvente. As foras envolvidas podem ser fortes (ligaes de H) ou fracas (Van der Waals). Esta se baseia nas diferentes afinidades adsorventes da superfcie da fase estacionria pelas molculas da substncia a separar). Aplicada em Geoqumica, Polmeros, Dopagem, etc. Antes da CGAR, a CG reinava. A CGAR possibilitou a construo de cromatogramas com picos muito mais finos, indicando aumento de resoluo no menor tempo possvel.

2. Aparelhagem Um cromatgrafo a gs constitudo essencialmente das seguintes partes:

(a) diagrama de bloco de um cromatgrafo a gs; (b) cromatograma tpico a. Uma fonte de gs de arraste num cilindro de alta presso. 1. O gs de arraste usado o hlio, o nitrognio, o hidrognio ou o argnio. A escolha depende de fatores como a disponibilidade, a pureza exigida, o consumo e o tipo de detector empregado. Qualquer alterao que no seja ideal para anlise poder originar algum tipo de sinal ou rudo no cromatograma. Associados a esta fonte de gs de arraste em alta presso esto os reguladores de presso e os medidores de vazo, que permitem controlar e monitorar o escoamento do gs de arraste; a eficincia da operao do aparelho depende muito da manuteno de uma vazo constante do gs de arraste. O gs no deve interagir nem com a amostra, nem com a FE. 2. Aps as balas de gs, h um regulador de presso, que possui duas vlvulas. Uma delas mede a presso interna do cilindro. A outra me a presso imposta ao sistema. 3. Antes de chegar no injetor, o gs passa por filtros, capazes de reter hidrocarbonetos, umidade, N2. Possuem indicadores colorimtricos para impurezas e facilmente conseguem detectar se as condies de anlise esto adequadas ou no. Gs de arraste -> peneira molecular -> filtro HC -> filtro O2 -> filtro indicador de O2 -> injetor. Um sistema fica mais caro com filtros, mas melhor por aumentar o tempo de vida da coluna. 4. Oxignio no pode ser usado como gs de arraste por atacar a estrutura do cromatgrafo. 5. H geradores de gases de alta pureza, mas no para Helio.

AS PARTES SEGUINTES ESTO INSERIDAS NO FORNO CROMATORFICO: INJETOR, COLUNA E DETECTOR. O forno controla a temperatura do sistema, chegando at 450C. b. Sistema de injeo da amostra e de derivatizao. 1. Amostras lquidas so introduzidas atravs de uma microsseringa com agulha hipodrmica (formato pontiagudo, diferente do HPLC). A agulha inserida num septo auto-selante, de borracha de silicone, e a amostra injetada suavemente num bloco metlico aquecido, na cabea da coluna. A manipulao da seringa quase uma arte que se desenvolve com a prtica e cujo objetivo introduzir a amostra de maneira reprodutvel. A temperatura da entrada da amostra deve ser tal que o lquido seja rapidamente vaporizado sem haver decomposio ou fracionamento da amostra; uma regra prtica til a de regular a temperatura da entrada da amostra no ponto de ebulio, aproximado, do componente menos voltil. Para se ter a maior eficincia, deve ser empregado o menor volume possvel da amostra (1 a 10 L), compatvel com a sensibilidade do detector. 2. Muitas amostras so, no entanto, inapropriadas para a injeo direta num cromatgrafo de gs, em virtude, por exemplo, da polaridade alta, ou da volatilidade baixa, ou da instabilidade trmica. A este respeito, a versatilidade e a aplicao da cromatografia gasosa foram expandidas pela formao de derivados volteis. Com compostos de massa molecular elevada, no entanto, a formao de derivados no ajuda a resolver o problema da involatilidade. Essa dificuldade pode ser contornada mediante a diviso das molculas grandes em fragmentos menores e mais volteis, que podero ser analisados (cromatografia gasosa com pirlise CGP). 3. Todo injetor tem mais ou menos o mesmo molde. Eles possuem 5 entradas: 1) entrada do gs de arraste (entra com a seringa e perfura o septo); 2) controle da purga do septo (purga de resduos do prprio septo para que no haja deposio no bloco de injeo; Liner um encamisamento de vidro do bloco de injeo aonde so depositadas as amostras antes da vaporizao. A ausncia dele evita a mistura entre gs carreador e amostra, alm de diminuir a superfcie de contato do injetor com a amostra, limitando reaes potenciais de decomposio trmica); 3)Divisor de fluxo (diluidor da amostra. Quando aberto, elimina boa parte da amostra. Quando fechado, faz com que tudo seja transferido direto para coluna); 4) Sada para coluna; 5) Entrada da amostra. A temperatura no interior do bloco de injeo maior do que a da coluna, sendo que a temperatura da coluna cerca de 10 a 40 graus menor do

que o PE do solvente. J a presso na coluna maior do que a dentro do injetor, com o intuito de se criar um vcuo que sugue a amostra do injetor para a coluna. 4. A tcnica de injeo selecionada de acordo com a natureza e a concentrao da amostra. Basicamente, a injeo a quente indicada para compostos termoestveis e frio para os termolbeis. Para as injees a quente, se a amostra estiver concentrada ou impura, deve-se analisa-l com diviso de fluxo. Se estiverem diludas, sem diviso de fluxo. 1) Injeo da amostra na cmara de vaporizao por meio de uma seringa. 2) Transferncia da amostra vaporizada para o interior da coluna pelo fluxo de gs carreador.

a. Com divisor de fluxo (split): sistema reprodutvel e regulvel de descarte da maior parte da amostra injetada aps vaporizao antes da penetrao na coluna. Para anlises concentradas. No h necessidade de interveno operacional quanto ao processo de injeo e suas variveis (volume injetado, velocidade de injeo, natureza de solvente). A nica varivel ajustada a taxa de diviso de fluxo. Processo rpido. A diviso de fluxo permanece fechada nos primeiros 0,5 segundos aps uma injeo. H uma parte imediatamente anterior coluna que pode acumular material de anlise por conta de condensao. A soluo cortar a coluna, pois limp-la seria um trabalho rduo e demorado. b. Sem divisor de fluxo (splitless): a vlvula do divisor de fluxo fica fechada. Amostras diludas. Cria-se um contra fluxo de gs de arraste na direo da purga do septo devido expanso geral de vapores, e isso faz com que parte da amostra saia pela purga do septo. Fluxo de gs diminudo => tempo de transferncia da amostra do injetor para coluna maiores => mecanismos de reconcentrao da amostra para que no haja alargamento de picos. Um mecanismo de reconcentrao consiste na concentrao da amostra num segmento anterior coluna. Para isso, necessrio um trecho desprovido de FE na coluna, conhecido como lacuna de reteno*. Existe tambm a necessidade de controlar as condies de condensao do material: 1) EFEITO DE SOLVENTE: forno com temperaturas abaixo do PE do solvente. Assim, a presso na lacuna aumenta, formando um vcuo pontual. O restante da amostra sugado para lacuna. Quando toda ela passa, a vlvula de divisor de fluxo abre e o efeito cessa-se; 2) EFEITO DE CAPTURA A FRIO: substratos pouco volteis. No h condensao do solvente, mas s da amostra, o que requer diferena de volatilidade entre amostra e solvente.

*Lacuna de reteno: garante a resoluo cromatogrfica nas injees sem diviso de fluxo e na coluna a frio, viabilizando o efeito solvente. Resguarda a FE de impurezas, atuando como pr-coluna. Assegura reteno de solutos de baixa volatilidade. Facilita recuperao das caractersticas de sistemas contaminados por amostras sujas, prolongando a vida til das colunas. Permite acoplamento CLAE-CGAR. Facilita o uso de injetores automticos para injees no interior da coluna. Permite a introduo de volumes razoveis de amostras em colunas de pequeno dimetro. c. Injeo a frio: amostra injetada diretamente na coluna, j dentro do forno cromatogrfico.solues diludas, termosensveis. Tcnica com boa

reprodutibilidade, substratos pouco volteis, sem uso do septo, efeito de matriz presente desgastando rapidamente a coluna. O que se pretende evitar a segregao de componentes pesados que se observa durante a injeo om agulha quente, o que leva a uma transferncia incompleta dos vrios componentes da amostra para o interior da coluna. Alm disso, o choque trmico produzido por vaporizadores convencionais causa fcil degradao de substratos termo-lbeis, o que s pode ser evitado pela deposio da amostra dentro de supercies frias, especialmente desativadas.

c. A coluna. A separao efetiva dos componentes da amostra efetuada na coluna, onde a natureza do suporte slido, o tipo e a quantidade da fase lquida, o mtodo de recheio, o comprimento e a temperatura so fatores importantes para se ter a resoluo desejada. A coluna est numa estufa com controle termosttico, de modo que a sua temperatura se mantm constante com a aproximao de 0,5C, o que assegura condies reprodutveis. A temperatura operacional pode ir da ambiente at mais de 400C; na operao isotrmica, a temperatura se mantm constante durante o processo de separao.

As colunas dividem-se em dois grupos principais: colunas recheadas preparadas com tubo de vidro de dimetro interno de 2 a 6 mm, ou tubo metlico com dimetro externo de 3 a 10 mm, em geral bobinado, para ficar mais compacto. As colunas de vidro devem ser usadas se qualquer componente da amostra for decomposto pelo contato com o metal. colunas tubulares abertas de dimetro interno menor que 1 mm, esto sendo crescentemente adotadas na CGL graas ao poder superior de resoluo de misturas complexas. Este poder a conseqncia do grande nmero de pratos tericos que pode ser atingido em colunas longas deste tipo, com uma queda de presso relativamente pequena. As colunas capilares so feitas em tubo de ao, ou de vidro, ou de slica fundida de alta pureza (material preferido pela sua inrcia) de paredes delgadas. As dimenses tpicas das colunas, que so bobinadas, s de 25 a 200 m de comprimento e de 0,2 a 0,5 mm de dimetro interno. O surgimento das colunas capilares foi muito importante para a aplicao da Cromatografia Gasosa: resultou no aumento da eficincia das separaes cromatogrficas (maior resoluo por pssuir maior nmero de pratos tericos) e, ao mesmo tempo, concorreu para o desenvolvimento de novas fases estacionrias, termicamente mais resistentes e seletivas.

Essas colunas possuem alta resistncia fsica, baixa reatividade e flexibilidade. A maioria de vidro ou slica fundida e so desativadas com agentes silanizantes.O recheio dessas colunas capilares abertas pode ser feito de forma entrecruzada (as cadeias polimricas so quimicamente ligadas entre si) ou quimicamente ligadas (as cadeias polimricas so presas a um suporte por ligaes qumicas). Ordem de eficincia: FSOT (nica flexvel) = WCOT > SCOT > Empacotada (nica lenta). PLOT: til para separao de espcies que no so retidas pela coluna gs-lquido, como os componentes do ar, sulfetos, xidos gasosos e gases raros. No requerem fase lquida. A adsoro em FE de colunas capilares feita da mesma forma que com os silanos na CL. Escolha da FE: lembrar que similar dissolve similar; pensar na faixa de ebulio (a fase lquida possui um limite de temperatura de trabalho) e na polaridade. Existem as FEs quirais, especficas para separao de ismeros ticos (frmacos, por exemplo). d. O detector. Localizado na sada da coluna de separao, sensoria e mede as pequenas quantidades dos componentes separados, presentes na corrente de gs de arraste que eflui da coluna. O sinal de sada do detector entra num registrador que traa um grfico denominado cromatograma.

A seguir, algumas propriedades importantes do detector na cromatografia gasosa:

1. Sensibilidade: definida usualmente como a resposta do detector (em mV) por unidade de concentrao do analisado (em mg . mL -1). Est relacionada ao limite de deteco mnimo (LDM), pois uma sensibilidade elevada corresponde a um baixo limite de deteco. 2. Linearidade: intervalo de concentrao sobre o qual o detector tem um sinal diretamente proporcional concentrao do analisado. A linearidade da resposta do detector proporcionar a retilineidade da curva de calibrao e permite o traado mais exato desta curva. 3. Estabilidade: o grau de constncia, com o tempo do seu sinal de sada, admitindo-se um sinal de entrada constante. A falta de estabilidade pode aparecer na forma de rudo da linha da base (provocado por variaes rpidas e aleatrias da sada do detector, cnt) ou no arraste da linha de base (variao sistemtica da resposta, devida a fatores externos ao detector, como modificaes da temperatura ou vazamento na coluna, e por isso controlvel). 4. Resposta universal ou seletiva: um detector universal responde a todos os componentes presentes na mistura; j um seletivo sensoria somente certos componentes numa amostra.

No existe um que apresente todas as propriedades para que ele seja ideal para CLAE. Podem ser universais (quando faz varredura) ou seletivos (quando l num comprimento de onda especfico). A seletividade do mtodo pode ser afetada por: composio ou troca de solvente, troca de coluna e temperatura (aumenta T, diminui a viscosidade, aumenta a fluidez, diminui a interao).

Tipos de detectores Idealmente, sua temperatura deve ser maior ou igual a 10C da temperatura final da corrida cromatogrfica para que a amostra no condense no detector. (a) Detector de condutividade trmica (DCT): um detector universal, no-destrutivo e sensvel concentrao. Empregam um filamento metlico aquecido, para perceber modificaes da condutividade trmica da corrente de gs de arraste.

No detector, dois pares de filamentos equalizados constituem os braos de uma ponte de Wheatstone; dois filamentos, em braos opostos da ponte, ficam imersos no gs de arraste puro, enquanto os outros dois filamentos ficam imersos no efluente da coluna cromatogrfica. Quando o gs de arraste puro passa pelos filamentos de referncia e pelos filamentos da amostra, a ponte est equilibrada, mas quando um vapor eflui da coluna, a taxa de resfriamento dos filamentos da amostra se altera e a ponte se desequilibra. O grau desse desequilbrio uma medida da concentrao do vapor no gs de arraste, nesse instante, e o sinal do desequilbrio entra no registrador para gerar o cromatograma.

(a) Detector de condutividade trmic (b) Detector de ionizao de chama

(b) Detectores de ionizao: uma importante caracterstica dos gases de arraste comuns a de serem isoladores perfeitos, nas temperaturas e presses normais. O aumento de condutividade, devido presena de algumas molculas carregadas no efluente da coluna, proporciona, por isso, uma elevada sensibilidade que uma caracterstica dos detectores baseados na ionizao. Temos o detector de ionizao de chama (DIC), o detector de ionizao termoinica (DIT), o detector de fotoionizao (DFI) e o detector de captura de eltron (DCE). Veremos as caractersticas do DIC e do DCE: b.1) detector de ionizao de chama: o efluente da coluna, misturado com o hidrognio e queimado ao ar, produz uma chama que tem energia suficiente para ionizar as molculas do soluto que tenham potenciais de ionizao baixos. Os ons assim produzidos so coletados por eletrodos e se mede a corrente inica resultante. b.2) detector de captura de eltron: explora o fenmeno da recombinao baseado na captura de eltrons pelos compostos que tem afinidade por eltrons livres; o detector mede ento a diminuio, e no o aumento da corrente.

Para gerar eltrons lentos pela ionizao do gs de arraste que flui atravs do detector, emprega-se uma fonte de raios beta (comumente uma lamnula com 3H ou
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Ni). Quando um gs capturador de eltrons eflui da coluna e reage com um eltrons, o

resultado lquido a substituio de um eltrons por um on negativo com massa muito maior, o que corresponde reduo da corrente eltrica.

Em comparao com o DIC, o DCE mais especializado e tende a ser escolhido em virtude da sua seletividade, que pode simplificar os cromatogramas. O DCE exige uma ateno cuidadosa para se obterem resultados confiveis. A limpeza essencial e os gases de arraste devem ser muito puros e secos. As duas impurezas mais provveis nesses gases so a gua e o oxignio, que so suficientemente eletronegativos para induzir resposta no detector e contribuir par uma corrente de base com muito rudo.

(c) Detectores seletivos a elementos: Muitas amostras, por exemplo as que se originam de estudos ambientais, contm tantos compostos constitutivos que o cromatograma de gs que delas se obtm uma seqncia complicada de picos. Para o qumico analtico, que pode estar interessado em apenas alguns dos compostos presentes, a substituio de um detector de tipo essencialmente no-seletivo por um sistema que responda seletivamente a alguma propriedade de certas espcies eludas pode resolver o problema. 3. Anlise quantitativa pela CGL A determinao quantitativa de um componente na cromatografia gasosa, com um detector diferencial do tipo que se descreveu, est baseada na medida da rea e da altura do pico registrado; a altura mais apropriada no caso de picos pequenos, ou de picos com largura pequena. A fim de que estas grandezas possam ser relacionadas quantidade do soluto na amostra, devem prevalecer duas condies:

a) A resposta do sistema detector-registrador deve ser linear em relao concentrao do soluto; b) Limite de deteco: menor quantidade detectvel manetendo uma razo sinal rudo de 3 para 1. c) Limite de quantificao: sinal/rudo >=10 b) Devem permanecer constantes, ou ter o efeito da respectiva variao, fatores como vazo do gs de arraste, temperatura da coluna, etc.

A rea do pico pode ser medida por uma das seguintes tcnicas:

1. Planimetria; 2. Mtodos geomtricos; 3. Integrao pelo peso; 4. Integrao automtica 5. Tratamento dos dados Como mtodo analtico Alto poder de resoluo. Dezenas de substncias em uma pnica amostra. Alta sensibilidade. Pequena quantidade de amostra. Limitaes: s para volteis e termicamente estveis. Uso de derivados para obteno de volteis.

Saturao do detector: diluir a amostra, usar divisor de fluxo, menor volume de amostra, aumentar razo split.

Equao de Van Deemter h = A + B/u + Cu u = velocidade do gs de arraste A = alargamento de picos por caminhos preferenciais B = difuso do soluto na FM C = difuso do soluto na FE Existe um valor de h mnimo para o qual h uma velocidade ideal Obs: Espectrometria de massa

Um espectrmetro de massa um detector potente para as anlises qualitativa e quantitativa de constituintes em cromatografia gasosa ou lquida. Nesta tcnica, o material examinado vaporizado em alto vcuo e o vapor bombardeado por um feixe de eltrons de alta energia. Muitas molculas do vapor sofrem fragmentao e formam ons de tamanhos diferentes. Esses ons podem ser identificados mediante a acelerao num campo eltrico,

seguido pela deflexo num campo magntico, onde percorre trajetrias determinadas pela razo entre a massa e a carga (m/e), e atingem o equipamento de deteco e registro; cada espcie de on provoca um pico no espectro de massa (grfico que mostra a abundncia relativa de cada fragmento que atinge o detector). os materiais inorgnicos involteis podem ser examinados mediante a vaporizao provocada por uma centelha eltrica de alta tenso. A espectrometria de massa pode ser usada na anlise de gases, na anlise de produtos de petrleo e no exame de impurezas de semicondutores. tambm um instrumento muito til para estabelecer a estrutura de compostos orgnicos.