INFORME FINAL DE PROYECTO: INFLUENCIA DEL TIPO DE REGULADOR DE CRECIMIENTO (ANA Y BAP) EN LA MICRO PROPAGACIN, A PARTIR DE SEGMENTOS NODALES

EN PAPA (SOLANUM TUBEROSUM L) VAR. DIACOL CAPIRA

INVESTIGADORAS: JULIANA ARISTIZABAL YURLEY CARDONA ANA MARA SUAREZ YERALDIN RESTREPO YURENY GONZLEZ

INSTITUCIN EDUCATIVA COLEGIO LOYOLA PARA LA CIENCI Y LA INNOVACIN GRADO: 111 MEDELLN 2012-2013

INFORME FINAL DE PROYECTO: Influencia del tipo de regulador de crecimiento (ANA y BAP) en la micro propagacin, a partir de segmentos nodales en papa (Solanum Tuberosum L) var. Diacol Capira TTULO DEL PROYECTO Influencia del tipo de regulador de crecimiento (ANA y BAP) en la micro propagacin, a partir de segmentos nodales en papa (Solanum Tuberosum L) var. Diacol Capira. RESUMEN Utilizando el cultivo in vitro, se medir la influencia que tiene los reguladores de crecimiento (ANA y BAP) en los segmentos nodales de papa (Solanum Tuberosum L.) var. Diacol Capira. Esta tcnica se realizara en distintas fases que sern la desinfeccin, induccin de brotes, proceso de multiplicacin, y enraizamiento; en las cuales se tendrn una base de datos para evaluar diferentes concentraciones de las hormonas en cada una de las etapas, excepto en desinfeccin, ya que all se va a evaluar las concentraciones de hipoclorito de sodio. Al final, se espera una micro-planta, libre de patgenos, en un menor tiempo y con unas caractersticas muy buenas. ABSTRACT Using the "In Vitro" system. It will measure the influence of growth regulators ( "ANA" & "BAP" ) In Nodal potato segments ( "Solanum Tuberosum L." ). "Diacol Capira". So this technique will take place in different phases which are disinfection, shoot induction, a process of multiplication and rooting. Where they have a database to evaluate various concentrations of hormones in each of the stages except disinfection because there will be evaluate the concentrations of sodium hypochlorite. At least, we expect a micro-plant, free of pathogens, in less time and with very good features." INTRODUCCIN La papa es una planta originaria de los Andes suramericanos, cuya produccin comercial en Colombia se concentra en paisajes y ecosistemas de montaa de clima fro, mientras que en alturas inferiores o superiores a dichos niveles sobre el nivel del mar se consideran marginales para el cultivo. Los programas de produccin de tubrculos para semilla de forma convencional presentan una baja tasa de multiplicacin y son altamente susceptibles a las enfermedades, la cual se puede transferir a la descendencia a travs de los tubrculos. El cultivo de tejidos in vitro es una herramienta muy til en la obtencin de material sano en un corto perodo de tiempo y en un espacio pequeo. La utilizacin de tubrculos como semilla tiene grandes ventajas, existen antecedentes de que los microtubrculos que se obtienen de los tubrculos de la papa aguantan condiciones adversas de plantacin y producen plantas ms vigorosas en las generaciones sucesivas, tambin existen reportes de que es posible obtener mayor nmero de minitubrculos de plantas procedentes de

tubrculos de plntulas cultivadas in vitro. Con el establecimiento de un sistema de produccin de tubrculos in vitro, se puede iniciar un proyecto de produccin de semilla bsica que les permita a los productores de papa de un pas tener mayor disposicin de esta, asegurando con ello un buen rendimiento de este cultivo. El objetivo principal de esta investigacin es evaluar las concentraciones de los reguladores de crecimiento (ANA y BAP) en el establecimiento in vitro de papa (Solanum Tuberosum L.) var. Diacol Capira, en la micropropagacin a travs de segmentos nodales. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA Descripcin del problema En Colombia la mayor parte de la poblacin habita en la regin andina, y uno de los alimentos base de su alimentacin es la papa, la produccin comercial se realiza entre los 2.000 y 3.000 m.s.n.m(metros sobre el nivel del mar), dndose una mejor calidad y cantidad del producto si se cosecha entre los 2.500 y los 3.000 m.s.n.m. Existen pocas zonas de produccin y en estas los principales factores limitantes son: enfermedades y plagas en el clima templado y heladas en las zonas altas entre 3.500 y 4.000 de altitud. El 90% de la produccin comercial de papa se realiza en terrenos de ladera y el 10% en suelos planos mecanizables1. Las principales enfermedades a las que est expuesto el cultivo de papa son Tizn tardo, Tizn temprano, Sarna negra, Fusariosis, Sarna polvorienta, Gangrena, Sarna plateada, Carbn de la papa; para cada enfermedad los agricultores tienen un control y prevencin. Las principales plagas son los Nemtodos del nudo, Nematodos del quiste, Polilla de la papa, Moscas minadoras, Gusanos cortadores; para las plagas los agricultores tienen diferentes formas de manejo, tratamiento y eliminacin. Esta excesiva aplicacin de agro txicos en aplicaciones tipo calendario de productos en mezclas sin conocer sus ingredientes activos, se traduce en mayores costos y en una mayor contaminacin de los suelos y aguas por los residuos de sustancias txicas2. Las pocas de siembra estn determinadas por las condiciones climticas, es decir, por las pocas de lluvias y ocurrencia de heladas. En el primer semestre se realiza la siembra de Ao Grande entre los meses de enero a marzo, y en el segundo semestre, la siembra de Mitaca (mitad del ao), en los meses de junio a agosto. En el resto del ao se realizan siembras escalonadas en microclimas favorables. La siembra se realiza antes de iniciarse la poca de lluvias con el fin de aprovechar las aguas lluvia para la germinacin y desarrollo del cultivo 3. Hay algunas pocas en la cuales la semilla de papa es muy escasa sumando los estragos de las actuales temporadas invernales que vive el pas, esto hace que la semilla de papa no sea de buena calidad para sembrar. Antecedentes del problema

Segn el Ministerio de Agricultura y Desarrollo Rural la papa se siembra en 14 departamentos de Colombia pero 4 de ellos, Cundinamarca, Boyac, Nario y Antioquia, concentran el 92% del rea y de la produccin. En el 2011el total de reas sembradas en Colombia fueron 137.840h y la produccin fue 2.778.900 ton4. En el cultivo de la papa en Colombia por limitaciones de mercado e incremento progresivo de los rendimientos del cultivo, el rea sembrada tiende a disminuir por el aumento y la mala calidad de la papa. La produccin se mantiene relativamente estable con algunas variaciones influenciadas por los ciclos de precios5. Las tcnicas biotecnolgicas de cultivo de tejidos tienen como objetivo fundamental la produccin de grandes cantidades de plantas sanas y la conservacin en condiciones controladas de diferentes genotipos. El cultivo in vitro ofrece una solucin econmica al problema de la presencia de patgenos en la papa. Las plntulas se pueden multiplicar un nmero ilimitado de veces cortndolas en fracciones y sembrando estos cortes. Con las plntulas se pueden producir pequeos tubrculos en almcigos o trasplantarse al terreno, donde crecen y producen papas semilla econmicas y sin enfermedades. Esta tcnica es muy popular y se utiliza comercialmente en muchos pases en desarrollo y pases en transicin6. Segn Gmez, et al; el cultivo de papa es sometido a una fuerte presin por plagas y enfermedades, siendo la Gota una enfermedad causada por el hongo Phytophthora infestans, la ms limitante, dado que estas variedades se han vuelto susceptibles por la siembra de una sola variedad en grandes reas (monocultivo). Mediante la manipulacin gentica "in vitro" es posible introducir genes de resistencia ms rpido y eficientemente6. PREGUNTA Qu influencia tiene la concentracin de reguladores de crecimiento (ANA y BAP) en la propagacin in vitro de la papa (Solanum tuberosum L.) var. Diacol Capira? MARCO TERICO O CONCEPTUAL 1. TUBERCULOS: Los tubrculos son un tipo de tallos engrosados. Ciertas plantas acumulan sustancias de reserva en sus tallos, generalmente subterrneos, formadas principalmente por almidn, de manera que estos aumentan de tamao constituyendo lo que conocemos por tubrculos. Estos tallos subterrneos contienen una serie de escamas que producen yemas. A partir de estas yemas se desarrollan nuevos brotes o tallos que originan plantas nuevas. Los brotes subterrneos, cuando salen al exterior, se hacen verdes produciendo tallos y hojas verdes. Los tallos subterrneos desarrollan nuevas races. Mientras las plantas estn en crecimiento van alimentndose del tubrculo original hasta que lo agotan completamente y lo descomponen. 7

1.1 TIPOS DE TUBERCULOS 1.1.1. Rizomas: Son tallos subterrneos, generalmente de crecimiento horizontal, que pueden ramificarse simpodial o monopodialmente (con menos frecuencia). Crecen indefinidamente, en el curso de los aos mueren las partes ms viejas pero cada ao producen nuevos brotes, pueden cubrir grandes reas. 1.1.2. Tubrculos caulinares: Tienen crecimiento limitado, son epgeos o subterrneos, pueden originarse por fuerte engrosamiento primario o secundario del hipoctilo, o de uno o varios entrenudos. La papa, Solanum tuberosum, es un tubrculo caulinar hipgeo formado en los entrenudos apicales de estolones con crecimiento plagitropo subterrneo, presenta cicatrices de las escamas membranceas fugaces y "ojos" o yemas. 1.1.3. Tubrculos radicales: Son anlogos a los caulinares, pero se reconoce que son rganos homlogos a races porque poseen caliptra, carecen de primordios o cicatrices foliares y por su estructura anatmica. Algunas dicotiledneas alorrizas presentan races axonomorfas. Ejs.: Daucus carota, zanahoria; Brassica rapa, nabo orqudeas como Orchis militaris. 1.1.4. Bulbos: La funcin reservante es ejercida principalmente por hojas engrosadas y carnosas. El tallo generalmente es subterrneo, muy intensamente acortado, con hojas engrosadas y carnosas. En la cebolla Allium cepa, planta bienal, cuando la semilla germina se forma un tallo corto llamado platillo que lleva las hojas cilndricas dispuestas en forma concntrica 8 2. Generalidades de LA PAPA Nombre comn: Patata, Patatas, Papa, Papas Nombre Cientfico: Solanum tuberosum Familia: Solanceas (Solanaceae). Origen: cordillera andina. Bajo condiciones de cultivo, la papa es una especie anual, herbcea, que por ser su semilla altamente heterocigoto se reproduce agmicamente a partir de tubrculos (tallos subterrneos modificados). 2.1Uso de las papas: Los usos de la papa son mltiples, tanto como producto fresco como industrializado, transformndola en uno de los alimentos ms verstiles y generalizados. Su consumo, despus de un proceso de coccin, puede ser como papa asada, cocida, frita, ensalada, pur, sopa, suffl, chapalele, milcao, etc., dando fe de la variedad de usos. La papa tambin se utiliza para la obtencin industrial de almidn, dextrinas, glucosa, y otros productos.9

2.2 VARIEDADES DE PAPA: En Colombia existen ms de 30 variedades de papa entre las ms comunes tenemos: Diacol capiro Tuquerrea o Sabanera Criolla Parda Pastusa ICA Purac ICA nica 2.3 SIEMBRA: Seleccin de Semilla, Preparacin de los Tubrculos-Semilla, Cosecha de Brotes, Corte de los Esquejes, La siembra, Post Siembra, Cosecha, Recursos electrnicos relacionados: Conservacin de Semilla de Papa 10 2.4 ENFERMEDADES: Las principales enfermedades de la papa son: 2.4.1 Tizn tardo Nombre cientfico: phytophthora infestans Nombre comn: tizn tardo, gota, chamusca o serenada. Descripcin de la enfermedad: La infeccin en campo se produce en condiciones de baja temperatura, alta humedad y cielos cubiertos. En las hojas aparecen manchas de color castao si estn secas y de color negro, cuando estn hmedas. En condiciones de alta humedad se desarrolla en las manchas un moho velloso blanco, especialmente en el envs de las hojas. En los tallos tambin aparecen lesiones y stos se vuelven quebradizos. Los tubrculos tambin pueden verse afectados tanto en campo como durante la recoleccin, mostrando los sntomas en el almacn. En ellos se observan manchas pardas en la superficie de las papas. 2.4.2 Tizn temprano: Nombre cientfico: alternaria solani. Nombre comn: tizn temprano, negrn de la patata, hierrillo. Descripcin de la enfermedad: Esta enfermedad se desarrolla con mayor rapidez durante los perodos en que se producen condiciones de humedad y sequa alternativamente, como puede ser cuando hay varios das con roco. Se trata de una enfermedad frecuente durante el perodo final del cultivo. Los sntomas consisten en la aparicin de manchas circulares de color marrn oscuro en las hojas, comenzando por las hojas ms viejas. Las manchas estn limitadas por los nervios principales de la hoja y a menudo tienen forma de anillos concntricos que le dan aspecto de diana. Cuando la enfermedad

aparece en cultivos jvenes, puede llegar a matar las hojas y por tanto disminuye el rendimiento de la planta. 2.4.3 Contra negra Nombre cientfico: rhizoctonia solani Nombre comn: rizoctoniosis, costra negra. Descripcin de la enfermedad: La enfermedad afecta a los brotes de la papa semilla. Los brotes afectados muestran en la base lesiones de color marrn, y en ataques intensos no llegan a emerger. Cuando las plantas llegan a ser adultas, dan lugar a la formacin de tubrculos areos en la base de las hojas, enrollamientos de las hojas hacia arriba, coloracin purprea de las hojas y a menudo amarilleamiento. En la superficie de los tubrculos afectados se observa la presencia de pequeas costras negras que son las estructuras de conservacin del hongo. Al lavar la papa, estas costras no se eliminan con facilidad, mientras que la tierra adherida a la piel de la papa si se lava. Esta enfermedad se ve favorecida por suelos hmedos y fros, buena fertilidad del suelo y pH del suelo neutro o ligeramente cido. 11 2.5 PLAGAS: Las principales plagas de la papa son: 2.5.1 Polillas: Nombre cientfico: phtorimaea operculella. Nombre comn: polilla de la papa. Nombre cientfico: tecia solanivora. Nombre comn: Polilla guatemalteca de la papa. En Canarias existen dos especies de polillas o trazas: Phtorimaea operculella (polilla de siempre) y la recientemente introducida Tecia solanivora o polilla guatemalteca. sta ltima produce daos ms severos ya que no existen medidas de control eficaces contra esta plaga. Las medidas de control se basan en la aplicacin conjunta de medidas preventivas. Aunque las larvas de ambas polillas daan los tubrculos excavando galeras en los mismos, la polilla de siempre adems puede perforar los brotes. 2.5.2 Pulgones: Nombre cientfico: Aphis gossypii, Macrosiphum euphorbiae, Myzus persicae, Aulocartum solani. Los pulgones son pequeos insectos normalmente de color verde o negro y cuerpo redondeado que pueden ser alados o sin alas. Estos insectos chupan la savia de la planta, debilitndola. Se localizan en el envs de las hojas y partes tiernas de la planta.

Adems de los daos que pueden producir sobre la planta al succionar la savia, estos insectos tiene la capacidad de transmitir enfermedades producidas por virus, de una planta enferma a una planta sana. El principal sntoma de las enfermedades provocadas por los virus es enanismo y el enrollamiento de las hojas hacia arriba (enfarolado o enrollado). 2.5.3 Nematodos: Nombre cientfico: Meloidogyne spp., Globodera rostochiensis, Globodera pallida. Los nematodos son animales microscpicos con forma de gusano delgado. Las plantas afectadas presentan sntomas parecidos a los causados por deficiencias de agua o elementos nutritivos. En las races y dependiendo de la especie se forman agallas o ndulos, o bien se observan diminutos quistes esfricos de color blanquecino a marrn. 11 2.6 PARTES DE LA PLANTA: Races, tallos, estolones, tubrculos, brotes, hojas, flor, fruto-semilla. 12 2.7 VENTAJAS DE EL CULTIVO IN VITRO DE PAPA: -Permite obtener plantas libres de enfermedades (hongos, bacterias, microplasmas, virus y tiroides). -La micropropagacin vegetal nos permite propagar masivamente material vegetal en cualquier poca del ao y en corto tiempo conservando su potencial gentico y calidad sanitaria. -Permite optimizar el uso de factores ambientales y nutricionales. -Puede conservar material biolgico por periodo de tiempo prolongados. -Adems mediante este mtodo de propagacin se puede e puede incluir aspectos de fitomejoramiento. 13 3. PROCESO FISIOLGICO: Las condiciones fisiolgicas de los tubrculos- semillas de papa afectan la emergencia y el crecimiento de un cultivo de papa. Escogiendo tubrculossemillas de edad fisiolgica determinada, el agricultor puede variar el momento de maduracin de su cultivo. En casos extremos el cultivo entero puede fracasar si los tubrculos- semillas son sembradas sin que tengan el estado adecuado de desarrollo fisiolgico. Tanto las condiciones de crecimiento como las prcticas de almacenamiento influyen en las condiciones fisiolgicas de los tubrculos- semillas de papa.14 4. QUE ES MICROPROPAGACIN: La propagacin de plantas in vitro es una tcnica muy utilizada en cultivos de importancia econmica. Permite cultivar clulas, tejidos, rganos, semillas, embriones y obtener individuos selectos en forma rpida. Los cultivos son realizados por personal especializado en medios especficos (hormonas, minerales, vitaminas, fuente de carbono, agente gelificante, agua, etc.) y condiciones ambientales controladas (temperatura, humedad y luz) 15

5. FACTORES DE CRECIMIENTO: 5.1 SACAROSA: Es el trmino adecuado para denominar al azcar, la sacarosa (azcar) es un disacrido que se forma por el compuesto de la glucosa y la fructosa, que a su vez es catalogada como un carbohidrato complejo, es el educolorante ms utilizado para endulzar los alimentos.16 5.2 FOTO PERIODO: Es el tiempo de exposicin de la luz solar diaria, las respuestas a la duracin diarias de la luz de diversos fenmenos del crecimiento y desarrollo de la plata (germinacin, estolonizacin, bulbacin, elongacin de tallos, floracin, etc.) estn ya claramente establecidas 17 5.3 ACIDO NAFTALENACTICO (ANA): Es un tipo de auxina que Promueve el crecimiento y diferenciacin celular, y por lo tanto en el crecimiento en longitud de la planta, Estimulan el crecimiento y maduracin de frutas, floracin, geotropismo, esta auxina se dirige a la zona oscura de la planta, produciendo que las clulas de esa zona crezcan ms que las correspondientes clulas que se encuentran en la zona clara de la planta. Esto produce una curvatura de la punta de la planta hacia la luz, movimiento que se conoce como fototropismo.
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5.4 BENCILAMINOPURINA (BAP) La citocinina BAP promueve la acumulacin de hexosas e incrementa la actividad de fosfoenolpiruvato carboxilasa y fosfoenlopiruvato carboxicinasa durante el retraso de la senescencia foliar de trigo, retrasa el proceso de la senescencia foliar lo cual puede tener aplicaciones en el control de la senescencia de pastos forrajeros, ornamentales de follaje y hortalizas verdes.19 OBJETIVOS OBJETIVO GENERAL Evaluar las concentraciones de los reguladores de crecimiento (ANA y BAP) para cultivo in vitro de papa (Solanum Tuberosum L.) var. Diacol Capira a partir de segmentos nodales

OBJETIVOS ESPECFICOS Interpretar los efectos que tiene las diferentes concentraciones de hipoclorito de sodio en el proceso de desinfeccin de explantes. Comparar las diferentes concentraciones del regulador de crecimiento (BAP) en la induccin de brotes. Deducir los efectos de las diferentes concentraciones de los reguladores de crecimiento (ANA y BAP) en el proceso de multiplicacin. Determinar las diferentes concentraciones del regulador de crecimiento (ANA) en la etapa de enraizamiento.

METODOLOGA Fase 0: PREPARACION DE LA PLANTA MADRE. Para establecer un proceso in vitro se necesita unos explanes con un nivel nutricional muy alto. Para obtener la planta Madre de la cual se sacaran los segmentos nodales, se debe cultivar la papa en al ambiente con las condiciones sanitarias optimas, adems un de un control de riego, para obtenerlas ms vigorosas y libre de enfermedades. Se toma la papa (Variedad Diacol Capira L.) trada de la plaza minorista, aproximadamente de 100 grados; y se lava con detergente y se enjuaga con agua corriente, mezcla en la cual se va a sembrar la papa es de tierra abonada, arena y cisco o cascarilla de arroz que se auto clavan y quedan libres de patgenos, para depositarlas en bolsas de 1 kilogramo (Aproximadamente) y sembrar la papa. Se riega aproximadamente cada 3 das y es visitada y monitoreada diariamente. Fase 1: DESINFECCIN

Alcohol

Hipoclorito de Sodio (%)

ENSAYOS O REPETICIONES

0.0 0.5 70% 1.0 1.5 2.0

* * * * *

* * * * *

* * * * *

* * * * * Tabla # 1

Tiempo: 1 minuto V1 = C2.V2/C1 V1= 0.5% x 200 ml / 3.5% V1= 28.57 ml V1= 1.0 % x 200ml / 3.5% V1=57.14 ml V1= 1.5% x 200 ml / 3.5% V1= 85.71 ml V1= 2.0% x 200 ml / 3.5%

V1= 114.28 ml Los lavados se harn con agua destilada estril. PROTOCOLO DE DESINFECCIN

Cortar explantes (segmentos nodales)

Agua corriente

Lavar con agua jabonosa

Enjuagar con H2O corriente

CMARA DE FLUJO LAMINAR

Alcohol 70%, durante un minuto

Lavar con H2O des-ionizada estril, durante un minuto

NaOCl (Hipoclorito de Sodio), durante un minuto (Ver tabla # 1)

Enjuagar 3 veces con agua des-ionizada estril

Secado en servilletas

Cortar nuevamente el segmento, para eliminar las partes quemadas

Siembra PROTOCOLO DE ESTERILIZACIN

Cada uno de los materiales a utilizar se cubren con papel craf, estos se marcan y se procede a inducirlos al auto-clave, se espera aproximadamente una hora y diez minutos que ocurra el proceso y despus de deja reposar por algunos minutos, para que obtengan una temperatura media.

MATERIALES A ESTERILIZAR: 2 Pinzas 2 mangos de bistur 30 frascos de compota 10 frascos de caf 1 recipiente para 5 litros de agua des-ionizada 2 ele Meyer, cada uno con 250 ml de medio de cultivo (MS) 70 cuadros de aluminio de 10x10 (se incluyen en este nmero, los cuadritos puestos como tapas en los frascos) Servilletas Cuadros de papel craf de 20x20

MEDIO DE CULTIVO

500 ml 100 ml H2O de agua des-ionizada

Sales MS (4.4 g/L) 2.2 g/ 500 ml

Sacarosa (30 g/L) 15 g/ 500 ml

Completar el volumen necesario Con H2O Des-ionizada 500

Medir pH (5,7 5,8) Aproximadamente

Agar (8 g/L) 4 g/ 500 ml

Se pone a hervir entre 300 y 500 C

Se sirve el medio en los frascos Y se pone a esterilizar

Fase 2: INDUCCIN Despus de realizarse la fase de desinfeccin y tener unos resultados, se realizara un lavado con la solucin que produzca mejores resultados y despus se realiza el medio de cultivo (MS) como en la etapa anterior, pero en este

caso, ya se le adicionara el regulador de crecimiento Benziladenina (BAP) en diferentes concentraciones y para evaluar los diferentes resultados.
INDUCCION BAP 0 1,5 mg/L 3,0 mg/L 4,5 mg/L

Fase 3: MULTIPLICACIN DE BROTES Estos nuevos brotes se deben sub-cultivar en recipientes de vidrio. Por medio de micro propagacin las plantas sern multiplicadas en un medio con todas las condiciones aptas para ello. En esta fase tomaremos los mejores resultados que se obtengan en la etapa de induccin con (BAP) para as mezclarlo con el regulador de crecimiento cido Naftilactico (ANA) y se medi de cultivo a utilizar es el (MS). Estos procesos se realizan en la cabina de flujo laminar para evitar la contaminacin de los explantes.
Regulador de crecimiento ANA 0 0.5 mg/L 1 mg/L 1,5 mg/L

Fase 4: ENRAIZAMIENTO Los brotes obtenidos en la fase de multiplicacin son transferidos al medio de cultivo (MS) en el cual se encuentra el regulador de crecimiento cido Naftilactico (ANA) para que de esta forma se obtengan las races.
ENRAIZAMIENTO ANA 0 0,5 mg 1 mg 1,5 mg

DISEO EXPERIMENTAL Los experimentos se realizaran de la siguiente manera: Al tener los segmentos nodales se pasaran por un proceso de desinfeccin donde utilizaremos diferentes concentraciones de Hipoclorito de Sodio, 70% de alcohol durante 1 minuto; se enjuagara varias veces en agua destilada estril y se colocaran en servilletas estriles en la cabina de flujo laminar para el secado. En la fase de induccin se sembraran los explantes en medio de cultivo (MS) y se le adicionara las diferentes cantidades del regulador de crecimiento Benziladenina (BAP) realizando de tres ensayos por cada composicin. En la siguiente fase que es la multiplicacin se combinaran los factores de crecimiento (ANA-BAP) con diferentes cantidades y con tres repeticiones por cada una. Este procedimiento se realizara en la cmara de flujo laminar, para evitar la contaminacin. Por ultimo en la fase de enraizamiento los brotes obtenidos sern trasferidos al medio de cultivo (MS) y se le adicionara diferentes cantidades de cido Naftilactico (ANA) y con combinacin se harn tres repeticiones para escoger la que presente mejores resultados. Para todo el diseo experimental se utilizara el mismo fotoperiodo el cual 16 horas luz por 15 das. ANLISIS ESTADSTICO Para seleccionar el mejor resultado de cada fase se tendrn en cuenta lo que pase con cada una de las combinaciones y de las repeticiones que se realicen por medio de una observacin cualitativa y su calidad. RESULTADOS RESULTADOS DE DESINFECCIN
120 100

Porcentaje de contaminacin

80 60 40

Porcentaje de contaminacin Hongos Bacterias

20 0 0%. 0,5%. 1%. 1,5%. 2%.

Concetaracin de Hipoclorito de sodio

CONCLUSIONES: -Las condiciones de oscuridad disminuyeron el tiempo de brotacin de los tubrculos. -La concentracin de hipoclorito al 2.0% present los mejores resultados en la fase de desinfeccin (Grfica 1-2), donde se observ la activacin de yemas laterales sin necesidad de un regulador de crecimiento. -El efecto del regulador de crecimiento BAP en el material vegetal no se ha observado hasta el momento. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
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ASPECTOS DE SEGURIDAD Y CONSIDERACIONES AMBIENTALES Aspectos de seguridad: Seguir las normas diseadas para la proteccin de la comunidad, medio ambiente, e individuos. Aspectos ticos: Tener la suficiente tica para respetar y seguir parmetros asignados para que no haya ningn tipo de riesgo. Cumplir todas las reglas que son necesarias para hacer procesos de manipulacin de biotecnologa. Consideraciones ambientales: Una forma de ayudar al medio ambiente; se estara generando ms produccin de dicho tubrculo sin tener que exponer la tierra (medio ambiente) a contaminaciones con qumicos, herbicidas y otras sustancias. AGRADECIMIENTOS: Agradecemos principalmente a nuestro asesor William Prez por su incansable insistencia por el proyecto, por no rendirse y estar presente siempre que lo necesitamos, por las sugerencias, las explicaciones y por llevarnos siempre por el camino ms factible para la realizacin del proyecto, por las correcciones realizadas al proyecto y adems por ser mediador con el consejo de evaluacin, por ltimo le agradecemos a ONDAS, por la ayuda econmica y por darnos la oportunidad de presentarnos en ferias para mostrar nuestra idea, y sobre todo por el asesor que nos brind, Yerson, ya que nos apoy en esta idea, por ser tan comprometido con nuestro proyecto y por las debidas revisiones, sugerencias y asesoramientos. CMO HAN DIVULGADO LA INFORMACIN La informacin de este proyecto se ha ido divulgando a travs de las ferias en que se ha expuesto, adems de las pginas personales que cada uno de los miembros de este tiene, sin olvidarnos de las pginas que hay propiamente del proyecto, tanto del ao 2012 como el actual.